Machine Translated by Google

Tạp chí Khoa học Dược phẩm 105 (2016) 1829e1836

Danh sách nội dung có sẵn tại ScienceDirect

Tạp chí khoa học dược phẩm

trang chủ tạp chí: www.jpharmsci.org

Công nghệ sinh học dược phẩm

Cơ chế hấp phụ kháng nguyên lên nhôm-Hydroxit

Chất bổ trợ được đánh giá bằng sàng lọc thông lượng cao

Vanessa tháng bảy

1, 2
, Fred Eric Mathot 2 , Nicolas Moniotte 2 , Veronique Pr ăn 1, *
,
2
Dominique Lemoine
1
Đại học Catholique de Louvain, Viện nghiên cứu dược phẩm Louvain, Vật liệu sinh học và phân phối thuốc tiên tiến, Brussels 1200, Bỉ
2
Vắc xin GSK, Khám phá và phát triển vắc xin, Rixensart 1330, Bỉ

thông tin bài viết trừu tượng

Lịch sử bài viết: Cơ chế hấp phụ kháng nguyên trên tá dược nhôm có thể ảnh hưởng đến quá trình rửa giải kháng nguyên tại vị
Nhận được ngày 1 tháng 12 năm 2015
trí tiêm và do đó ảnh hưởng đến phản ứng miễn dịch. Mục đích của chúng tôi là đánh giá khả năng hấp phụ lên
Sửa đổi ngày 27 tháng 2 năm 2016
nhôm hydroxit (AH) bằng cách trao đổi phối tử và tương tác tĩnh điện của protein mô hình và kháng nguyên,
Được chấp nhận ngày 22 tháng 3 năm 2016
albumin huyết thanh bò (BSA), b-casein, ovalbumin (OVA), kháng nguyên bề mặt viêm gan B và độc tố uốn ván
(TT). ). Một nền tảng sàng lọc thông lượng cao đã được phát triển để đo các đường đẳng nhiệt hấp phụ khi
có mặt chất điện phân và trao đổi phối tử bằng phương pháp quang phổ huỳnh quang phát hiện sự xúc tác của
Từ khóa: tá
6,8-difluoro-4-methylumbelliferyl photphat bởi các nhóm hydroxyl tự do trên AH. Sự hấp phụ BSA phụ thuộc
dược vắc xin hấp phụ nhôm
vào tương tác tĩnh điện chiếm ưu thế. Trao đổi phối tử góp phần hấp phụ b-casein, OVA, kháng nguyên bề mặt
hydroxit tự

động hóa vắc xin sàng

viêm gan B và TT lên AH. Dựa trên độ phosphophilic bề mặt tương đối và các đường đẳng nhiệt hấp phụ khi
lọc thông có mặt photphat và florua, khả năng tương tác của protein với AH bằng cách trao đổi phối tử theo xu hướng:
lượng cao hấp OVA < b-casein < BSA < TT. Điều này có thể được giải thích bằng cả hàm lượng các phối tử có sẵn trong cấu
phụ cơ chế hấp phụ kháng nguyên trúc protein để trao đổi phối tử và trọng lượng phân tử của kháng nguyên. Nền tảng sàng lọc thông lượng
đẳng nhiệt tính phosphophilic
cao có thể được sử dụng để hiểu rõ hơn về sự đóng góp của trao đổi phối tử và lực hấp dẫn tĩnh điện chi
phối sự tương tác giữa một kháng nguyên được hấp phụ trên chất bổ trợ có chứa nhôm. © 2016 Hiệp hội Dược
sĩ Hoa Kỳ®. Được xuất bản bởi Elsevier
Inc. Mọi quyền được bảo lưu.

Giới thiệu đủ mạnh, liên kết cộng hóa trị có thể xảy ra bằng cách trao đổi phối tử giữa các

anion nằm trên bề mặt nhôm và các nhóm phốt phát.12 Kích thích miễn dịch bằng các

Chất bổ trợ có chứa nhôm được sử dụng trong nhiều loại vắc xin để chủng ngừa chất bổ trợ có chứa nhôm là sự cân bằng giữa việc giữ lại kháng nguyên tại vị trí

cho người hoặc thú y.1-3 Hai chất bổ trợ có chứa nhôm thường được sử dụng trong tiêm13,14 và làm cho kháng nguyên có thể tiếp cận được để hấp thu và xử lý bởi các

công thức bào chế vắc xin hấp phụ kháng nguyên: nhôm hydroxit (AH) và nhôm photphat. tế bào trình diện kháng nguyên.15-19 Tốc độ giải phóng kháng nguyên bị hấp phụ từ

vị trí tiêm có thể phụ thuộc vào cường độ liên kết giữa kháng nguyên và nhôm.20-22

Sự hấp phụ kháng nguyên lên các tá dược chứa nhôm xảy ra thông qua tương tác tĩnh Thật vậy, sự giảm cường độ hấp phụ của kháng nguyên đối với nhôm (ví dụ, bằng cách

điện, tương tác kỵ nước, liên kết hydro, lực van der Waals và trao đổi phối tử, tiền xử lý photphat) được phát hiện là tỷ lệ nghịch với sự xâm nhập của các tế bào

loại sau là dạng tương tác mạnh nhất.4-7 Do đó, các tá dược chứa nhôm tương tác đuôi gai trong ống nghiệm23,24 và với khả năng miễn dịch trong cơ thể. 15,25,26

mạnh với photphat hoặc kháng nguyên chứa nhóm phospho được sử dụng trong vắc-xin Những kết quả này gợi ý về sự hấp thu và/hoặc xử lý kháng nguyên hiệu quả hơn khi

(ví dụ: các hạt giống vi-rút, nội độc tố, DNA và phospholipid).8-11 Nếu tương tác kháng nguyên liên kết kém với tá dược chứa nhôm.26 Với một số loại vắc xin, sự hấp

phụ có thể không cần thiết để tạo miễn dịch. Tuy nhiên, sự gần gũi của kháng

nguyên với tá chất tại vị trí tiêm là rất quan trọng vì tình trạng viêm cục bộ do

tá dược gây ra có thể ảnh hưởng đến sự trưởng thành và kích hoạt của các tế bào

tiền gửi kháng nguyên.13,16,17 Do đó, nên sử dụng kháng nguyên và tá dược. được
Nicolas Moniotte, Fred eric Mathot và Dominique Lemoine là nhân viên của tập đoàn GSK. Dominique Lemoine xây dựng và quản lý cùng nhau để đạt được hiệu quả phù hợp
sở hữu cổ phần của GSK. Các tác giả khác tuyên bố không có xung đột.

* Liên hệ: Veronique Pr eat (Điện thoại: þ32-2-764-7320; Fax: þ32-2-764-7398).

Địa chỉ email: veronique.preat@uclouvain.be (V. Preat).

http://dx.doi.org/10.1016/j.xphs.2016.03.032 0022-3549/

© 2016 Hiệp hội Dược sĩ Hoa Kỳ®. Được xuất bản bởi Elsevier Inc. Mọi quyền được bảo lưu.
Machine Translated by Google

1830 V. Jully và cộng sự. / Tạp chí Khoa học Dược phẩm 105 (2016) 1829e1836

điều chế hoặc tăng cường đáp ứng miễn dịch.14,27-30 Do đó, cần phải có kiến thức và Ba protein chứa số nhóm photphat hoặc thiol khác nhau đã được chọn: b-casein (5

hiểu biết về sự tương tác giữa các kháng nguyên có chứa phospho hoặc thiol và chất phosphoserin, ~26 kDa, điểm đẳng điện (IEP) 4.642,43), ovalbumin (OVA; 0-2 phosphoser-

bổ trợ trong quá trình phát triển một sản phẩm vắc xin mới. ines, ~45 kDa, IEP 4.6), và albumin huyết thanh bò được phosphoryl hóa (BSA; 2

phosphothreonine, 3 phosphoserine và 2 phosphotyr-osine, ~66 kDa, IEP 5.0). Hai kháng

Sự hấp phụ thường được nghiên cứu bằng các đường đẳng nhiệt hấp phụ thông qua nguyên cũng đã được chọn. Hai kháng nguyên đã được chọn: kháng nguyên bề mặt viêm

việc chuẩn độ nồng độ protein theo nồng độ cố định của muối nhôm.5,23,31,32 Đặc tính gan B (HBsAg; ~3500 kDa,44 IEP là 4,545) với hàm lượng phospholipids46-48 cao và độc

hấp phụ có thể được mô tả theo 2 thông số được tính toán từ mô hình Langmuir33; khả tố uốn ván (TT; ~150 kDa, IEP 5.0), một holoprotein, chứa 6 thiol tự do nhóm và 2 cầu

năng hấp phụ, nghĩa là lượng kháng nguyên được hấp phụ trên pha rắn (được coi là disulfua.49

đơn lớp); và hệ số hấp phụ, nghĩa là ái lực của kháng nguyên đối với bề mặt chất hấp

phụ (được biểu thị bằng mL/mg kháng nguyên).23,31,34,35 Hệ số hấp phụ thường không

được xem xét, có lẽ do mức độ biến đổi cao ( một số bậc độ lớn) đã được báo cáo cho

các loại protein khác nhau liên kết với cùng loại tá chất và cơ chế hấp phụ.23,36 Nguyên liệu và phương pháp

Các phương pháp rửa giải bằng cách sử dụng các ion cạnh tranh cũng được sử dụng để

mô tả ái lực giữa kháng nguyên và tá chất chứa nhôm,12 ,15,23,25,35 nhưng các phương Cơ chế hấp phụ của protein mẫu và kháng nguyên

pháp này không cho phép định lượng cụ thể về ái lực.

Bột b-Casein và OVA được lấy từ Sigma-Aldrich (Missouri). BSA được lấy từ Merck

(Darmstadt, Đức).

HBsAg và TT tinh khiết được lấy từ Vắc xin GSK (Rix-ensart, Bỉ). AH (Alhydrogel®)

được lấy từ Brenn-tag (Antwerp, Bỉ) và được hấp khử trùng. Nồng độ AH được biểu

Khả năng của các chất bổ trợ chứa nhôm tương tác với nhóm photphat, nhóm photpho thị bằng 1 mg Al/mL, tương ứng với 2,89 mg AH/mL.

hoặc nhóm thiol của các phân tử hữu cơ (tức là trao đổi phối tử) có thể được đánh

giá bằng cách sử dụng xét nghiệm 6,8-difluoro-4-methylumbelliferyl photphat (DiFMUP),

37 trước đây được sử dụng để đánh giá hoạt động của phosphatase. DiFMUP chứa liên Đường đẳng nhiệt hấp phụ của protein mẫu và kháng nguyên lên AH

kết photphat-oxy (PO), khi tách ra sẽ giải phóng 6,8-difluoro-4-methylumbelliferone Các công thức được chuẩn bị bởi trạm xử lý chất lỏng TECAN Genesis (M€ annedorf,

(DiFMU). Sự phân tách liên kết PO này có thể được xúc tác bởi các chất bổ trợ có Thụy Sĩ) thành các đĩa 96 giếng sâu bằng polypropylen (PP) Nunc (ThermoFisher

chứa nhôm (Hình 1),37 trong đó chất bổ trợ có chứa nhôm đóng vai trò là chất cho điện Scientific, Waltham, MA).

tử ái nhân cho nhóm phosphoryl của liên kết PO trong DiFMUP.37,38 Do đó, tốc độ xúc Máng PP 100 mL và đầu tip PP dùng một lần được mua từ TECAN.

tác của Sự giải phóng DiFMU (đơn vị huỳnh quang/đơn vị thời gian), được biểu thị

bằng thuật ngữ “độ ưa photpho bề mặt”, có thể liên quan đến sự sẵn có của các nhóm Trạm xử lý chất lỏng TECAN Genesis được sử dụng để thực hiện các đường đẳng

hydroxyl tự do trên bề mặt của chất bổ trợ chứa nhôm có liên quan đến trao đổi phối nhiệt hấp phụ với nồng độ nhôm không đổi và nồng độ protein khác nhau trong axit 10-

tử. mM 3-(N-morpholino)pro-panesulfonic (MOPS) và NaCl 150, 250 hoặc 750 mM hoặc 10, 20 ,

hoặc dung dịch đệm phosphat 40 mM (NaHPO4/K2HPO4) hoặc NaF ở thể tích cuối cùng là

500 mL. Độ pH mục tiêu là 7,0 ± 0,1 để cho phép tương tác tĩnh điện như mô tả trước

đây.41 Nước pha tiêm được sử dụng để đạt thể tích cuối cùng. Phạm vi nồng độ nhôm

Việc sản xuất DiFMU có thể được theo dõi bằng phương pháp quang phổ huỳnh và protein được trình bày trong Bảng 1 và dựa trên các nghiên cứu sơ bộ để đề cập

quang, đã được tích hợp vào cài đặt thông lượng cao để xác định đặc tính của các đến nồng độ hấp phụ tối đa của protein đối với muối nhôm (dữ liệu không được hiển

công thức tá dược chứa nhôm.39,40 Có thể tránh được sự can thiệp liên quan đến độ thị). Để đạt đến trạng thái cân bằng, các công thức được khuấy nhẹ nhàng trong các

đục của công thức bằng cách hạn chế phát hiện lên bề mặt trên của huyền phù muối nhôm đĩa 96 giếng sâu có thanh từ tính (VWR, Leuven, Bỉ) trong 2 giờ ở nhiệt độ phòng để

trong giếng vi đĩa. Phương pháp này không yêu cầu tách các hạt nhôm khỏi chất nổi đảm bảo tính đồng nhất của hỗn hợp và tránh lắng đọng bằng cách sử dụng Vortex Lateral

phía trên, có thể được thực hiện tại chỗ (không cần giải hấp kháng nguyên khỏi nhôm), Tumble Máy khuấy VP 708-CON (V&P Scientific, San Diego, CA). Chất nổi không chứa nhôm

có thể tái sản xuất và có thể đo DiFMU được giải phóng trong thời gian thực.37 thu được sau khi ly tâm ở tốc độ 2000 vòng / phút trong 15 phút. Quá trình chuyển

chất lỏng từ giếng sâu 96 giếng sang microtiter acrylic 96 giếng trong suốt UV 200

mL và đĩa 100 mL (Costar #3635 và #3679; Corning, New York, NY) được thực hiện bằng

Liquidator 96. nồng độ protein hoặc kháng nguyên trong phần nổi phía trên được đo từ

Mục tiêu của nghiên cứu này là đánh giá sự hấp phụ của protein mô hình và kháng mật độ quang học ở bước sóng 280 nm (OD280 nm) bằng cách sử dụng đầu đọc đĩa như mô

nguyên lên AH bằng cách trao đổi phối tử và tương tác tĩnh điện. Đối với những đánh tả trước đây.50 Mật độ quang học ở bước sóng 320 nm (OD320 nm) được trừ vào các

giá này, chúng tôi đã phát triển một nền tảng sàng lọc thông lượng cao (HTS) có thể phép đo để hiệu chỉnh sự tán xạ ánh sáng. Việc hiệu chỉnh chiều dài đường đi được

tạo ra các đường đẳng nhiệt hấp phụ và thực hiện quang phổ huỳnh quang dựa trên thực hiện bằng cách theo dõi cường độ của đỉnh hấp thụ nước trong

DiFMUP trên các mẫu được chuẩn độ tự động trong các đĩa vi mô.41 Tác động của pro-

tein/kháng nguyên lên “độ phosphophil bề mặt tương đối ” (RSP) của AH được tính

toán bằng cách so sánh việc sản xuất DiFMU bằng cách sử dụng AH có hoặc không có

protein/kháng nguyên. RSP của AH tỷ lệ nghịch với ái lực của các chất hấp phụ được

thử nghiệm.

Hình 1. Tốc độ xúc tác phân cắt liên kết PO của DiFMUP bằng tá chất chứa nhôm. Chất bổ trợ chứa nhôm xúc tác sự phân cắt liên kết phosphomonoester của DiFMUP để giải phóng DiFMU,
một chất nền có độ huỳnh quang cao (được điều chỉnh từ 21). 202 34mm (96 96DPI).
Machine Translated by Google

V. Jully và cộng sự. / Tạp chí Khoa học Dược phẩm 105 (2016) 1829e1836 1831

Bảng 1
một máy đọc đĩa ở 22C. Bước sóng kích thích được cố định ở 358 nm
Chuẩn bị đường đẳng nhiệt hấp phụ trong NaCl 150 mM và MOPS 10 mM, pH 7,0
và bước sóng phát xạ ở 455 nm37 với bước sóng là 1
Chất đạm Tỷ lệ Ag/Al (w/w) Dung dịch đệm Al (mg/mL) nm, băng thông kích thích là 12 nm và thời gian tích hợp là

BSA 2,0-2,5-2,8-3,0-3,2 170 150-750 mM NaCl

100 mili giây. Để giám sát việc giải phóng DiFMU khỏi DiFMUP,

0,15-0,25-0,5-0,75-1,0
b-Casein 2,0-2,5-3,3-3,6-3,8
2,5-3,5-4,0-4,2-4,4
OVA 1,4-1,75-2,0-2,25-2,5
0,15-0,25-0,5-0,75-1,0
1,0-1,5-1,75-2,0-2,25
HBsAg 0,75-1,25-1,75-2,0-2,25 140
TT 0,5-0,6-0,75-1,0-1,15
170 10-40 mM PO4 hoặc NaF cài đặt chế độ động học là các khoảng thời gian 5 phút trong 60 phút.37
140 150-750 mM NaCl, giữa dữ liệu huỳnh quang theo hàm thời gian được quan sát cho
10-40 mM NaF
tất cả các công thức được thử nghiệm ( giá trị R2 >0,99). Tỷ lệ xúc tác là
140 10-40mM PO4
thu được từ độ dốc như là một hàm của thời gian. Bối cảnh
170 150-750 mM NaCl
170 10-40mM PO4 Quá trình thủy phân DiFMUP (DiFMUP không có AH) đã bị loại bỏ. RSP là
170 10-40 mM NaF được xác định và biểu thị tương đối dựa trên tốc độ xúc tác của
NaCl 150-750 mM hoặc
nguyên liệu bổ trợ có chứa nhôm (bằng 1). Các
10-40 mM PO4 hoặc NaF
kết quả được chuẩn hóa như là một hàm của trọng lượng phân tử của
300 150-750 mM NaCl hoặc
10-40 mM PO4 hoặc NaF các protein hoặc kháng nguyên mẫu (tính bằng mmol).

Ag, kháng nguyên; Al, tá dược chứa nhôm; BSA, albumin huyết thanh bò; HBsAg,
kháng nguyên bề mặt gan B; MOPS, axit propanesulfonic 3-(N-morpholino); OVA, Phương pháp phân tích
albumin hình bầu dục; TT, độc tố uốn ván.

Phép đo pH được thực hiện bằng Cavro Mini Sample

€

vùng cận hồng ngoại ở bước sóng 975 nm, được trừ đi cho số đọc cơ sở
ở bước sóng 900 nm.50 Tín hiệu đệm cũng bị trừ. Đường cong chuẩn
protein mẫu hoặc kháng nguyên được tạo ra trong MOPS 10 mM ở pH 7,0
± 0,1, 150-mM NaCl.
Mô hình Langmuir được sử dụng để ước tính khả năng hấp phụ của AH.33.
Hồi quy tuyến tính của phương trình Langmuir là
được tính bằng cách vẽ đồ thị nồng độ protein thu được từ
chất nổi phía trên (tính bằng mg) chia cho lượng kháng nguyên
đã được hấp phụ (tổng kháng nguyên trừ đi kháng nguyên ở phần nổi phía trên)
trên mỗi mg tá dược (trục y) so với nồng độ protein trong
chất nổi phía trên (trục x). Đường đẳng nhiệt hấp phụ được thống nhất
với mô hình Langmuir khi R2 của hồi quy tuyến tính bằng
cao hơn 0,99. Dung lượng hấp phụ (Cmax) thu được từ
nghịch đảo của độ dốc của đường hồi quy.23
Độ ưa photpho bề mặt tương đối của AH khi có mặt mô hình
Protein và kháng nguyên
DiFMUP (D-22065) được lấy từ Molecular Probes, Inc.
(Eugene, HOẶC). Dung dịch gốc DiFMUP 10 mM trong dimethylsulf-oxide (DMSO)
đã được pha loãng thành DiFMUP 500 mM với MOPS 100 mM
dung dịch đệm (thu được từ Sigma-Aldrich, Missouri), pH 7,0 ±
0.1.37
Vắc xin có protein mẫu và kháng nguyên được bào chế bởi
trạm xử lý chất lỏng TECAN Genesis trong MOPS 10 mM pH 7,0 ±
0,1 ở các điều kiện khác nhau được trình bày trong Bảng 2 ở thể tích cuối cùng là
Bộ xử lý (Mannedorf, Thụy Sĩ) với phần mềm Gemini được tùy chỉnh để đo pH
của các công thức hấp phụ.
Xét nghiệm protein axit bicinchoninic tiêu chuẩn (Pierce, Rockford, IL)
quy trình được sử dụng để định lượng nồng độ protein hoặc kháng nguyên
trong phần nổi phía trên sau khi ly tâm ở tốc độ 2000 vòng/phút trong
15 phút. Không thể sử dụng mật độ quang học ở bước sóng 280 nm vì
nền tín hiệu của DiFMUP.
Để đánh giá tính ổn định của kháng nguyên hoặc protein ở giai đoạn cuối
công thức, công thức không chứa nhôm được sử dụng làm đối chứng.
Mức độ thu hồi kháng nguyên trong công thức không chứa nhôm
ít nhất là 93%. Sự hiện diện của các cốt liệu trong phần nổi phía trên của
các giải pháp không có chất bổ trợ (chỉ có protein) được theo dõi bởi
đo mật độ quang ở bước sóng 320 nm (OD320) ở vùng không hấp thụ của quang
phổ UV, sử dụng vật liệu trong suốt UV
đĩa vi mô và máy đọc vi đĩa Varioskan Flash.51 Đề xuất thu hồi hàm lượng
protein cao và hình thành hạt không đáng kể
rằng không có sự kết tụ/kết tủa lớn nào xảy ra ở protein
nồng độ và điều kiện được thử nghiệm. Tín hiệu trống được trừ đi cho mỗi
công thức protein. Thế zeta là
được đo bằng Zetasizer Nano ZS (Malvern, Malvern, UK). AH
được xử lý với 40 mM dung dịch đệm photphat cho thấy điện thế zeta
là 17,7 mV ở pH 7,0. AH được xử lý bằng 150 hoặc 750 mM NaCl hoặc 40
mM NaF có điện thế zeta là 18,6, 18,8 và 6,61 mV,
tương ứng ở pH 7,0.
Phân tích thống kê

500mL . Sau khi cân bằng bằng 2 giờ khuấy, DiFMUP được
được thêm vào mỗi giếng để đạt nồng độ cuối cùng là 50 mM. Các Tất cả các phân tích được thực hiện bằng SAS, phiên bản 9.2. Các bộ dữ liệu của

chuyển và trộn chất lỏng từ giếng sâu 96 sang giếng 96 Các đường đẳng nhiệt hấp phụ RSP và protein/kháng nguyên của AH đã được phân tích

Tấm Costar đáy phẳng màu đen mờ (#3915) được thực hiện bằng cách sử dụng sử dụng ANOVA 1 chiều với một yếu tố (nhóm) và không đồng nhất

Hệ thống pipet để bàn thủ công Liquidator 96 (Anachem, mô hình phương sai, nghĩa là phương sai giống hệt nhau không được giả định cho

Luton, Bedfordshire, Vương quốc Anh) trước khi thu thập dữ liệu bằng mức độ khác nhau của yếu tố đó. Nhóm kiểm soát được xác định là
Nguyên liệu thô AH để đo RSP và natri clorua 150
đầu đọc đĩa huỳnh quang (Varioskan Flash Mode Reader, Thermo-Fisher
Scientific). Cường độ huỳnh quang được đo từ mM cho đường đẳng nhiệt hấp phụ. Ước tính sự khác biệt trung bình

bề mặt trên của các mẫu trong tấm vi mạch 96 giếng trên giữa các nhóm và 95% CI của họ đã được xác định. Điều chỉnh
với phương pháp của Dunnett được sử dụng để so sánh các nhóm với
nhóm kiểm soát. Điều chỉnh Tukey được sử dụng khi có thể
ban 2
so sánh giữa các nhóm đã được thực hiện. Phân tích xu hướng
Chuẩn bị vắc xin mẫu trong NaCl 150 mM và MOPS 10 mM, pH từ 7,4 đến
(phân tích hồi quy) cũng được thực hiện để đánh giá RSP giảm
Xác định độ ưa phospho bề mặt tương đối của AH khi có mặt kháng nguyên
với tỷ lệ ngày càng tăng.
Chất đạm Tỷ lệ Ag/Al (w/w) Al (mg/mL)

BSA 0-0,5-0,75-1,0-1-1,15-1,25-1,5-1,55-1,65-1,75-2 500

Kết quả
b-Casein 0-0,25-0,5-0,75-1,0-1,5-2,0-2,5-3,5-3,75-4,0 250
OVA 0,75-1,25-1,75- 2-2,25-3,0-3,25-3,5-4,0-4,5 500
TT 0-0,3-0,35-0,4-0,45-0,5-0,75-1-1,5 500 Nghiên cứu cơ chế hấp phụ trên AH, 3 protein mẫu,
OVA, BSA, b-casein và 2 kháng nguyên HBsAg và TT được chọn lọc
Ag, kháng nguyên; AH, nhôm hydroxit; Al, tá dược chứa nhôm; BSA,
albumin huyết thanh bò; MOPS, axit propanesulfonic 3-(N-morpholino); OVA, albumin hình dựa trên sự khác biệt về phối tử của chúng có sẵn để trao đổi phối tử.
bầu dục; TT, độc tố uốn ván. Cả hai đường đẳng nhiệt hấp phụ và xét nghiệm DiFMUP đều được thực hiện để
Machine Translated by Google

1832 V. Jully và cộng sự. / Tạp chí Khoa học Dược phẩm 105 (2016) 1829e1836

nghiên cứu sự đóng góp của tương tác tĩnh điện và phối tử
trao đổi.
Đóng góp của trao đổi phối tử và tương tác tĩnh điện của
Đường đẳng nhiệt hấp phụ
Sự hấp phụ bằng AH tích điện dương trong NaCl 150 mM ở pH
7,0 ± 0,1 BSA, b-Casein, OVA, HBsAg và TT tích điện âm
phù hợp với mô hình Langmuir (R2 > 0,99). Những nghiên cứu sơ bộ
cho thấy sự hấp phụ và cân bằng pH đã đạt được sau khi
2 giờ ủ có khuấy bằng AH (dữ liệu không được hiển thị). Các
khả năng hấp phụ Cmax đối với protein mẫu và kháng nguyên thu được
từ phương trình Langmuir được thể hiện trong Bảng 3 và Hình 2.
ảnh hưởng của chất điện giải đến khả năng hấp phụ và khả năng hấp phụ
các cơ chế được tóm tắt trong Bảng 4.
Cường độ ion cao hơn (ví dụ, bằng cách tăng nồng độ muối)
giảm tương tác tĩnh điện bằng cách che chắn và làm giảm
bàn số 3
Ảnh hưởng của cường độ ion và hàm lượng photphat đến khả năng hấp phụ của mô hình
Protein và Kháng nguyên ở pH 7,0 trong MOPS 10 mM (4 lần lặp lại)
Chất đạm Hấp phụ chất hấp phụ
Giải pháp
Dung tích
hoạt động của ion kim loại trong dung dịch.5 Do đó, tương tác tĩnh điện được
được theo dõi trong phạm vi nồng độ muối từ 150- đến 750-mM
NaCl (Bảng 3). Trong số các protein/kháng nguyên được đánh giá, chỉ có
khả năng hấp phụ của AH đối với BSA giảm đáng kể (p < 0,05) từ 1,25 xuống
1,03 mg BSA/mg Al khi tăng lượng muối
nồng độ (Bảng 4).
Trao đổi phối tử và tương tác tĩnh điện được theo dõi
trong khoảng nồng độ photphat (10-20-40 mM).12 Anion photphat, hoạt động
như các anion cạnh tranh, có thể làm giảm kháng nguyên
hấp phụ bằng cách ảnh hưởng đến cả điện tích bề mặt (bằng cách giảm
điểm điện tích bằng 023) và số lượng vị trí liên kết có sẵn để trao đổi
phối tử trên bề mặt của chất bổ trợ nhôm.52 Trong
trường hợp BSA, OVA và TT, các đường đẳng nhiệt hấp phụ âm
AH được xử lý bằng phốt phát không phù hợp với mô hình Langmuir
(Bảng 3 và 4) do khả năng thu hồi protein cao ở phần nổi phía trên.
Đối với b-casein và HBsAg, ngay cả khi khả năng hấp phụ ở mức
thấp hơn đáng kể so với đối chứng, đường đẳng nhiệt hấp phụ được trang bị
mô hình Langmuir (Bảng 3 và 4).
Để nghiên cứu sự đóng góp của trao đổi phối tử, natri florua
(10-20-40 mM) được sử dụng làm chất điện phân cạnh tranh để thay thế an-
tigen khỏi các tá dược chứa nhôm do tính mạnh của nó
ái lực.26 Các đường đẳng nhiệt hấp phụ của BSA trên điện tích dương
KTC 95% Langmuir
AH được xử lý bằng fluoride không phù hợp với mô hình Langmuir (R2 < 0,99)
Phương trình R2

(mg/mg Al) (Bảng 3 và 4) do khả năng giải hấp của nó. Ngược lại, sự hấp phụ

BSA 0,15 M NaCl 1,25 0,18 >0,99

đường đẳng nhiệt của b-casein, HBsAg, OVA và TT gắn Langmuir
0,25 M NaCl 1,23 0,10 >0,99 mô hình và khả năng hấp phụ thấp hơn đáng kể so với
0,75 M NaCl 1,03 0,17 >0,99 đối chứng (p < 0,05), ngoại trừ HBsAg (Bảng 3 và 4).
0,01 M PO4 d 0,02 M d

0,95
PO4 d 0,04 M PO4 d d

0,76
0,01 M NaF d 0,02 M d

0,27
NaF d d

0,92 Đóng góp của trao đổi phối tử theo bề mặt tương đối
d

0,93 Tính photpho của AH

0,04M NaFd d

0,92
b-Casein 0,15 M NaCl 3,43 0,20 >0,99
Ái lực hấp phụ của TT, BSA, b-casein và OVA lên AH
0,25 M NaCl 3,56 0,43 >0,99
0,75 M NaCl d 0,01 d

0,97
bằng cách trao đổi phối tử cũng được đánh giá bằng cách đo RSP của AH

M PO4 2,61 0,02 M PO4 0,23 >0,99 (Hình 3). Sự hấp phụ của các protein/kháng nguyên này lên AH đạt
2,53 0,04 M PO4 2,36 0,46 >0,99 cân bằng sau 2 giờ ủ có khuấy (dữ liệu không được hiển thị). Các
3,37 2,67 0,49 >0,99
Không thể xác định RSP của AH đối với HBsAg do tồn dư photphat trong dung
0,01M NaF 0,17 >0,99
dịch đệm của HBsAg.
0,02M NaF 0,20 >0,99
0,04M NaF 2,68 0,11 >0,99 RSP của AH được hạ xuống đáng kể (p < 0,05) khi ủ
OVA 0,15 M NaCl 1,79 0,09 >0,99 với OVA, b-casein, TT và BSA theo tỷ lệ protein/nhôm
0,25 M NaCl 1,83 0,26 >0,99 (mg/mg) 2,25 (OVA/AH), 0,25 (b-casein/AH), 1,5 (BSA/AH) và 0,4
0,75 M NaCl 1,78 0,34 >0,99
(TT/AH). Khi các tỷ lệ được chuẩn hóa như một hàm của
0,01 M PO4 d 0,02 M d

0,92
PO4 d 0,04 M PO4 d d

0,88
trọng lượng phân tử của protein mẫu hoặc kháng nguyên (Hình 3),
d

0,53 thu được thứ tự ái lực sau: OVA < b-Casein < BSA
0,01M NaF 1,39 0,12 >0,99 < TT, phù hợp với số lượng và loại phối tử có trong
0,02 M NaF 1,35 0,08 >0,99
cấu trúc của protein và kháng nguyên và có khả năng sẵn có cho phối tử
0,04 M NaF 1,30 0,06 >0,99
trao đổi.
HBsAg 0,15 M NaCl 1,43 0,02 >0,99
0,25 M NaCl 1,45 0,06 >0,99
0,75 M NaCl 1,45 0,07 >0,99
0,01 M PO4 1,31 0,04 >0,99 Cuộc thảo luận
0,02M PO4 1,24 0,10 >0,99
0,04 M PO4 1,15 0,07 >0,99
Sự hiểu biết về cơ chế hấp phụ là cần thiết từ
0,01 M NaF 1,45 0,03 >0,99
0,02 M NaF 1,45 0,03 >0,99 các giai đoạn đầu của quá trình phát triển một sản phẩm vắc xin mới (công
0,04 M NaF 1,47 0,03 >0,99 thức và sản xuất)23,53 vì chúng có liên quan đến tiềm năng đáp ứng miễn
TT 0,15 M NaCl 0,44 0,10 >0,99
dịch.15,54 Bởi vì các đường đẳng nhiệt hấp phụ là
0,25 M NaCl 0,45 0,08 >0,99
được sử dụng rộng rãi để mô tả cơ chế hấp phụ của protein
0,75 M NaCl 0,45 0,19 >0,99
0,01 M PO4 d 0,02 M d

0,96 và kháng nguyên lên các chất bổ trợ có chứa nhôm ,5,23,31,32 chúng tôi
PO4 d 0,04 M PO4 d d

0,95 đã mô tả một nền tảng HTS nhanh chóng, mạnh mẽ và có thể tái tạo có thể
0,01 M NaF 0,28 0,02 d

0,83 tạo ra các đường đẳng nhiệt hấp phụ và thực hiện quang phổ huỳnh quang
M NaF d 0,04 M NaF d 0,03 >0,99
dựa trên DiFMUP trên các mẫu được chuẩn độ tự động trong các tấm vi mạch để
d

0,97
đánh giá cả tương tác tĩnh điện và trao đổi phối tử. HTS
d

0,97
nền tảng được phát triển để giảm lượng vật liệu và công việc
Ag, kháng nguyên; Al, tá dược chứa nhôm; BSA, albumin huyết thanh bò; HBsAg,
tải thường được yêu cầu cho việc đánh giá như vậy
kháng nguyên bề mặt gan B; MOPS, axit propanesulfonic 3-(N-morpholino); OVA,
sử dụng các phương pháp và nguồn lực thông thường có giới hạn
albumin hình bầu dục; TT, giải độc tố uốn ván; d, khả năng hấp phụ không phù hợp với mô hình Langmuir

(R2 <0,99). cung cấp trong giai đoạn đầu phát triển ứng cử viên vắc xin mới.
Machine Translated by Google

V. Jully và cộng sự. / Tạp chí Khoa học Dược phẩm 105 (2016) 1829e1836 1833

Hình 2. Đường đẳng nhiệt hấp phụ của protein và kháng nguyên được hấp phụ trên nhôm hydroxit\nĐẳng nhiệt hấp phụ để hấp phụ BSA (a), b-casein (b), OVA (c), HBsAg (d),
và TT(e) của AH. 211 207mm (96 96DPI).

Trong nghiên cứu của chúng tôi, 3 protein mẫu và 2 kháng nguyên đã được lựa chọn
dựa trên đặc tính hấp phụ khác nhau của chúng với muối nhôm
(tóm tắt trong bảng 4).
BSA, tích điện âm ở pH trung tính, được hấp phụ trên
AH tích điện dương do tương tác tĩnh điện,5,32,55 được biểu thị
bằng việc giảm khả năng hấp phụ khi lượng ion tăng
sức mạnh. Khả năng hấp phụ của AH đối với BSA31,34,56 là
mặc dù trao đổi phối tử ít chiếm ưu thế hơn so với trao đổi tĩnh điện
tương tác. Sự hấp phụ BSA lên AH bằng trao đổi phối tử là
cũng được xác nhận bởi kết quả RSP của AH. Đúng là mức giảm cao nhất
RSP của AH được tìm thấy đối với BSA so với b-casein và
OVA, cho thấy ái lực lớn hơn với AH. Tuy nhiên, tương tác tĩnh điện
là cơ chế hấp phụ chủ yếu của BSA lên
AH.

được xác định trong nghiên cứu của chúng tôi phù hợp với những nghiên cứu trước đây b-casein là một phosphoprotein có chứa 5 photphat
học. Tuy nhiên, sự giải hấp BSA khỏi AH sau khi bổ sung nhóm.42,43 Trong một nghiên cứu trước đây, sự hấp phụ của âm
natri florua minh họa rằng việc trao đổi phối tử cũng góp phần vào b-casein tích điện trên nhôm photphat tích điện âm
sự hấp phụ của BSA lên AH, do 7 nhóm photphat, xảy ra bất chấp lực đẩy tĩnh điện ở pH trung tính.41

Bảng 4

Tác động của các chất điện giải cụ thể đến khả năng hấp phụ của AH (mg/mg Al) đến nghiên cứu cơ chế hấp phụ

Chất đạm Điều khiển Tương tác tĩnh điện Tương tác tĩnh điện và trao đổi phối tử Trao đổi phối tử Cơ chế hấp phụ chiếm ưu thế

Natri clorua Bộ đệm phốt phát Natri Florua

BSA 1,25 1,03a d d

Tĩnh điện

b-Casein 3,43 3,56 2,35a 2,68a Trao đổi phối tử

OVA 1,79 ¼ 1,78 ¼ d

1,30a Trao đổi phối tử

HBsAg 1,43 1,45 ¼ 1,15a 1,47 ¼ Trao đổi phối tử
TT 0,44 0,45 ¼ d

0,25a Trao đổi phối tử

AH, nhôm hydroxit; BSA, albumin huyết thanh bò; HBsAg, kháng nguyên bề mặt gan B; OVA, albumin; TT, giải độc tố uốn ván; a, giảm đáng kể; ¼ thay đổi; d, khả năng hấp , không đáng kể
phụ không phù hợp với mô hình Langmuir (R2 <0,99).
Machine Translated by Google
1834 V. Jully và cộng sự. / Tạp chí Khoa học Dược phẩm 105 (2016) 1829e1836
Hình 3. Độ phosphophilic bề mặt tương đối của nhôm hydroxit khi có mặt kháng nguyên.
Độ phosphophil bề mặt tương đối của chất hấp phụ AH TT (vòng tròn đen), OVA (tam
giác đen), BSA (hình vuông đen) và b-Casein (kim cương đen) xét về tỷ lệ kháng nguyên/
nhôm được chuẩn hóa như là một hàm của trọng lượng phân tử của kháng nguyên (tính
bằng mmol). Các thanh lỗi biểu thị độ lệch chuẩn của giá trị trung bình (6 lần lặp).
143 84mm (96 96DPI).
Thật vậy, khả năng hấp phụ của AH đối với b-casein vẫn không thay đổi sau khi
tăng cường độ ion. Ngược lại với tương tác tĩnh điện, sự trao đổi phối tử
không bị ảnh hưởng bởi mối quan hệ giữa độ pH của vắc xin và IEP của kháng
nguyên hoặc PZC của tá dược chứa nhôm.23 Sự giảm khả năng hấp phụ của b-
casein sau việc xử lý bằng dung dịch đệm photphat và natri florua đã chứng
minh rằng trao đổi phối tử photphat là cơ chế chủ yếu để hấp phụ b-casein vào
AH.
OVA là một holoprotein chứa tới 2 nhóm phos-phoryl gắn với serine.57 Nó
không đồng nhất và chứa các dạng di, mono và không được phosphoryl hóa.57 Sự
hấp phụ của OVA lên cả AH tích điện dương và AH được xử lý phosphat tích
điện âm ở mức trung tính Độ pH phù hợp với các nghiên cứu trước đây,56 mặc dù
khả năng hấp phụ cao hơn khi điện tích bề mặt của AH dương nhất, cho thấy
tương tác tĩnh điện góp phần vào sự hấp phụ. Người ta đã chứng minh rằng OVA
nhanh chóng bị giải hấp khỏi AH khi tiếp xúc với chất lỏng kẽ, phản ánh rằng
sự hấp phụ ban đầu là do lực hút tĩnh điện.53 Tuy nhiên, cơ chế hấp phụ đã
được chứng minh là thay đổi theo thời gian bao gồm sự thay đổi phối tử mạnh
hơn nhiều liên quan đến tất cả các nhóm photphat của OVA.53 Thật vậy, khi OVA
được hấp phụ mạnh ở bề mặt tá dược, sự thay đổi về cấu hình protein cho phép
mỗi photphat trải qua quá trình trao đổi phối tử, có lẽ là do tính linh hoạt
vốn có trong cấu trúc của OVA.53 Hơn nữa, sự gia tăng cường độ ion (bằng cách
tăng nồng độ natri clorua) chứng tỏ rằng tương tác tĩnh điện không phải là
cơ chế duy nhất góp phần hấp phụ OVA lên AH. Ngược lại với b-casein, việc xử
lý bằng dung dịch đệm photphat đã giải hấp hoàn toàn OVA khỏi AH, chứng tỏ
rằng sự hấp phụ của OVA lên AH kém mạnh hơn so với sự hấp phụ của b-casein
vào AH. Hành vi này đã được RSP xác nhận là OVA được hấp phụ với ái lực ít
hơn b-casein trên AH.
Các hạt HBsAg có hàm lượng phospholipid cao.46-48 Ở pH trung tính, HBsAg
tích điện âm được hấp phụ trên AH tích điện dương, bằng cả sự trao đổi phối
tử photphat và lực tĩnh điện, theo các nghiên cứu trước đây.35,58 Khả năng
hấp phụ của AH đối với HBsAg35 phù hợp với các nghiên cứu trước đây. Giống
như b-casein, sự hấp phụ của HBsAg lên AH giảm khi tăng nồng độ đệm photphat.
Tuy nhiên, sự hấp phụ HBsAg không bị ảnh hưởng bởi natri florua và natri
clorua, chứng tỏ rằng sự trao đổi phối tử-photphat đủ mạnh để ngăn chặn sự
dịch chuyển của florua và tăng cường độ ion.
TT bị vô hiệu hóa chứa 6 thiol tự do.49 Tương tác tĩnh điện góp phần hấp
phụ TT lên AH,3 ngay cả khi cường độ ion không làm giảm khả năng hấp phụ.
Hành vi hấp phụ của TT tương tự như hành vi hấp phụ của OVA, minh họa rằng,
ngay cả khi tương tác tĩnh điện có thể xảy ra, thì sự hấp phụ bằng trao đổi
phối tử là cơ chế hấp phụ chính. Tuy nhiên, RSP của AH dường như bị ảnh
hưởng nhiều hơn bởi sự hấp phụ của TT so với OVA, phản ánh rằng TT có ái lực
cao hơn với AH. Cơ chế này có thể được giải thích bằng cả tác động không
gian của kích thước lớn của TT và hàm lượng nhóm thiol của nó, làm giảm xu
hướng AH xúc tác sự phân tách liên kết PO từ DiFMUP.
Dựa trên kết quả AH RSP của chúng tôi, 2 yếu tố dường như ảnh hưởng đến
hoạt động xúc tác của DiFMUP; hàm lượng các phối tử có sẵn để trao đổi phối
tử (nhóm thiol và photphat)12 và trọng lượng phân tử của kháng nguyên34,59
bằng hiệu ứng không gian, như được phản ánh trong bảng xếp hạng sau: TT (6
nhóm thiol, ~150 kDa) > BSA (7 nhóm phospho , ~66 kDa) > b-Casein (5
phosphoserin, ~26 kDa) > OVA (0-2 phosphoserin, ~45 kDa). Theo các nghiên cứu
trước đây, một số yếu tố khác cũng có thể ảnh hưởng đến ái lực của kháng
nguyên đối với bề mặt chất hấp phụ, bao gồm bản chất của chất bổ trợ (tức là
điểm không tích điện), cấu trúc kháng nguyên và IEP, cơ chế hấp phụ,13 và các
điều kiện hấp phụ. (ví dụ: natri clorua, đệm 5 photphat, 23,54 và pH61).
Sức mạnh hấp phụ kháng nguyên của các chất bổ trợ chứa nhôm có thể ảnh
hưởng đến phản ứng miễn dịch.54 Thật vậy, sự hấp phụ kháng nguyên liên quan
đến trao đổi phối tử quá mạnh có thể cản trở phản ứng miễn dịch bằng cách ảnh
hưởng đến quá trình rửa giải kháng nguyên trong dịch kẽ tại vị trí tiêm23 và
kháng nguyên. xử lý trong các tế bào trình diện kháng nguyên.15 Hơn nữa, nền
tảng HTS có thể được sử dụng để dự đoán sự cạnh tranh tiềm ẩn giữa 2 hoặc
nhiều kháng nguyên trong vắc xin đa giá, chẳng hạn như protein có mức giảm
RSP cao hơn có thể thay thế protein được hấp phụ có mức giảm RSP thấp hơn.
RSP.34
Kết luận
Nền tảng HTS (xử lý tự động các tá dược và tá dược gốc nhôm) có thể được
sử dụng để ước tính sự đóng góp của trao đổi phối tử và tương tác tĩnh điện
trong quá trình hấp phụ kháng nguyên lên các tá dược chứa nhôm bằng cách xác
định cả độ phosphophil bề mặt của tá dược AH bằng DiFMUP xét nghiệm và khả
năng hấp phụ sử dụng đường đẳng nhiệt hấp phụ với sự có mặt của chất điện
phân trong các tấm vi mạch. Chúng tôi có thể xác định RSP của AH trên 3 protein
mô hình là BSA, OVA và b-Casein và 2 kháng nguyên HBsAg và TT. Kết hợp với các
đường đẳng nhiệt hấp phụ, các chất bị hấp phụ có thể được phân loại theo ái
lực của chúng với các chất bổ trợ có chứa nhôm như sau: OVA < b-Casein < BSA
< TT. Các tác động tương đối phụ thuộc cả vào tính chất vật lý và hàm lượng
phối tử có sẵn để trao đổi phối tử của các chất bị hấp phụ.
Nền tảng HTS có thể được kết hợp trong quá trình phát triển công thức vắc
xin để hiểu rõ hơn về sự đóng góp của trao đổi phối tử và lực hấp dẫn tĩnh
điện chi phối sự tương tác giữa kháng nguyên được hấp phụ trên tá dược chứa
nhôm, đánh giá tính nhất quán giữa các lô chứa nhôm. chất bổ trợ và tác động
của công thức (ví dụ: muối) và các thông số quy trình có thể có đối với các
đặc tính của chất bổ trợ. Nền tảng HTS tập hợp các ứng dụng khác nhau đã được
phát triển41 thành một đơn vị (xử lý tự động các tá dược, kháng nguyên và tá
dược gốc nhôm, sau đó là mô tả đặc tính của quá trình hấp phụ) để hiểu rõ hơn
về cơ chế hấp phụ của kháng nguyên lên các tá dược chứa nhôm. .
Machine Translated by Google
V. Jully và cộng sự. / Tạp chí Khoa học Dược phẩm 105 (2016) 1829e1836
Sự nhìn nhận
Các tác giả cảm ơn D. Tassin vì đã hỗ trợ kỹ thuật cho hệ thống tự động và phát
triển Lớp chất lỏng, C. Van Loo vì các đường đẳng nhiệt hấp phụ của HBsAg và TT và
M.-P. Ác ý về phân tích thống kê, V. Vande Velde đã đưa ra những gợi ý và lời khuyên.
Các tác giả xin cảm ơn M. Morgan (MG Science Com-munications) đã đánh giá phê bình
bản thảo và U. Krause về quản lý xuất bản.
Công trình này được tài trợ bởi GlaxoSmithKline Sinh học SA, theo
Thỏa thuận hợp tác nghiên cứu và phát triển với Đại học Louvain.
Alhydrogel là nhãn hiệu của Brenntag Nordic A/S.
Tất cả các tác giả đều tham gia vào việc thiết kế hoặc thực hiện
hoặc phân tích và giải thích kết quả nghiên cứu. Tất cả các tác giả
đều tham gia vào việc soạn thảo bản thảo hoặc sửa đổi nó một cách
nghiêm túc để có được nội dung trí tuệ quan trọng. Tất cả các tác giả
đều có toàn quyền truy cập vào dữ liệu và phê duyệt bản thảo trước
khi nó được tác giả tương ứng gửi.
Người giới thiệu
1. Singh M, O'Hagan DT. Những tiến bộ gần đây trong các chất bổ trợ vắc-xin. Pharm Res.
2002;19(6):715-728.
2. Vogel FR, Powell MF, Alving CR. Một bản tóm tắt các tá dược và tá dược của vắc xin.
Trong: Powell MF, Newman MJ, biên tập. Thiết kế vắc xin: Phương pháp tiếp cận tiểu
đơn vị và bổ trợ. New York: Báo chí toàn thể; 1995: 141-228.
3. Gupta RK. Các hợp chất nhôm làm tá dược cho vắc xin. Adv Thuốc Deliv Rev.
1998;32(3):155-172.
4. Hem SL, HogenEsch H. Chất bổ trợ có chứa nhôm: tính chất, công thức và công dụng.
Trong: Singh M, biên tập. Hệ thống phân phối và tá dược vắc xin. New Jersey: J. Wiley
và các con trai; 2007:81-114.
5. al-Shakhshir RH, Regnier FE, White JL, Hem SL. Sự đóng góp của các tương tác tĩnh điện
và kỵ nước vào sự hấp phụ protein bằng các chất bổ trợ có chứa nhôm. Vắc-xin.
1995;13(1):41-44.
6. Stumm W. Hóa học của bề mặt nước rắn: Các quá trình ở bề mặt nước khoáng và nước hạt trong các hệ
thống tự nhiên. New-York: J.Wiley và các con trai; 1992.
7. Peek LJ, Martin TT, Elk Nation C, Pegram SA, Middaugh CR. Ảnh hưởng của chất ổn định
đến sự mất ổn định của protein khi hấp phụ với chất bổ trợ muối nhôm.
J Pharm Khoa học. 2007;96(3):547-557.
8. Shi Y, HogenEsch H, Regnier FE, Hem SL. Giải độc nội độc tố bằng tá dược nhôm hydroxit.
Vắc-xin. 2001;19(13-14):1747-1752.
9. Larson EA, Ash SR, White JL, Hem SL. Gel liên kết phốt phát: cân bằng sự hấp thụ phốt phát và độc tính
của nhôm. Thận Int. 1986;29(6): 1131-1135.
10. Liu JC, Feldkamp JR, White JL, Hem SL. Hấp phụ photphat bằng nhôm hydroxycarbonate. J
Pharm Khoa học. 1984;73(10):1355-1358.
€
11. Laiti E, Ohman LO. Tính chất axit/bazơ và phức hợp axit phenylphosphonic ở bề mặt tiếp
xúc boehmite/nước. J Colloid Giao diện Khoa học. 1996;183(2):441-452.
12. Morefield GL, Jiang D, Romero-Mendez IZ, Geahlen RL, Hogenesch H, Hem SL.
Ảnh hưởng của quá trình phosphoryl hóa ovalbumin đối với sự hấp phụ của các chất bổ
trợ có chứa nhôm và quá trình rửa giải khi tiếp xúc với dịch kẽ. Vắc-xin. 2005;23(12):
1502-1506.
13. Hem SL, Hogenesch H. Mối quan hệ giữa các tính chất vật lý và hóa học của tá dược chứa
nhôm và khả năng miễn dịch. Vắc xin Exp Rev. 2007;6(5):685-698.
14. Khu công nghiệp Romero Mendez, Shi Y, HogenEsch H, Hem SL. Tăng cường đáp ứng miễn dịch
đối với các kháng nguyên không bị hấp phụ bằng các chất bổ trợ có chứa nhôm. Vắc- xin.
2007;25(5):825-833.
15. Hansen B, Sokolovska A, HogenEsch H, Hem SL. Mối quan hệ giữa cường độ hấp phụ kháng
nguyên với chất bổ trợ có chứa nhôm và đáp ứng miễn dịch. Vắc-xin. 2007;25(36):6618-6624.
16. Eisenbarth SC, Colegio OR, O'Connor W, Sutterwala FS, Flavell RA. Vai trò quan trọng của
dòng siêu nhỏ Nalp3 trong đặc tính kích thích miễn dịch của chất bổ trợ nhôm. Thiên
nhiên. 2008;453(7198):1122-1126.
17. Kool M, Soullie T, van Nimwegen M, và cộng sự. Chất bổ trợ phèn tăng cường khả năng
miễn dịch thích ứng bằng cách tạo ra axit uric và kích hoạt các tế bào đuôi gai bị viêm.
J Exp Med. 2008;205(4):869-882.
18. Sokolovska A, Hem SL, HogenEsch H. Kích hoạt tế bào đuôi gai và tạo ra sự biệt hóa tế bào
T CD4(þ) bằng các chất bổ trợ có chứa nhôm. Vắc-xin. 2007;25(23):4575-4585.
19. Holt LB. Sự phát triển trong điều trị dự phòng bệnh bạch hầu. Luân Đôn: W. Heinemann, Ltd;
1950.
20. Weissburg RP, Berman PW, Cleland JL, và cộng sự. Đặc tính của vắc xin MN gp120 HIV-1:
kháng nguyên liên kết với phèn chua. Pharm Res. 1995;12(10):1439-1446.
1835
21. Leeling JL, Muni IA, Helms RJ, Johnson N. Tỷ lệ giải phóng các kháng nguyên được tiêm
dưới da ở chuột: so sánh chế phẩm chứa nước với hai chế phẩm kết tủa bằng phèn. Dị
ứng. 1979;34(5):339-344.
22. Noe SM, MA xanh, HogenEsch H, Hem SL. Cơ chế tăng cường miễn dịch bằng tá dược chứa
nhôm được làm sáng tỏ bằng mối quan hệ giữa việc lưu giữ kháng nguyên tại vị trí tiêm
chủng và đáp ứng miễn dịch. Vắc-xin. 2010;28(20):3588-3594.
23. Iyer S, HogenEsch H, Hem SL. Ảnh hưởng của mức độ thay thế photphat trong tá dược nhôm
hydroxit đến khả năng hấp phụ của protein bị phosphoryl hóa.
Pharm Dev Technol. 2003;8(1):81-86.
24. Morefield GL, Sokolovska A, Jiang D, HogenEsch H, Robinson JP, Hem SL. Vai trò của các
chất bổ trợ có chứa nhôm trong quá trình nội hóa kháng nguyên của các tế bào đuôi gai
trong ống nghiệm. Vắc-xin. 2005;23(13):1588-1595.
25. Hansen B, Belfast M, Soung G, và cộng sự. Ảnh hưởng của khả năng hấp phụ kháng nguyên
bề mặt viêm gan B vào tá dược nhôm hydroxit lên đáp ứng miễn dịch. Vắc-xin.
2009;27(6):888-892.
26. Thủ tướng Egan, MT Belfast, Gimenez JA, Sitrin RD, Mancinelli RJ. Mối quan hệ giữa độ
chặt của liên kết và khả năng miễn dịch trong vắc- xin viêm gan B hấp phụ bổ trợ có
chứa nhôm. Vắc-xin. 2009;27(24):3175-3180.
27. Chang M, Shi Y, Nail SL, và cộng sự. Mức độ hấp phụ kháng nguyên trong vắc xin hoặc dịch
kẽ và ảnh hưởng của nó đến phản ứng kháng thể ở thỏ. Vắc-xin. 2001;19(20-22):2884-2889.
28. Clausi A, Cummiskey J, Merkley S, Thợ mộc JF, Braun LJ, Randolph TW. Ảnh hưởng của
kích thước hạt và khả năng liên kết kháng nguyên đến hiệu quả của chất bổ trợ muối
nhôm trong vắc xin lysozyme mẫu. J Pharm Khoa học. 2008;97(12):5252-5262.
29. Berthold I, Pombo ML, Wagner L, Arciniega JL. Khả năng miễn dịch ở chuột của kháng
nguyên bảo vệ tái tổ hợp bệnh than với sự có mặt của chất bổ trợ nhôm . Vắc-xin.
2005;23(16):1993-1999.
30. Levesque PM, Foster K, de Alwis U. Mối liên quan giữa khả năng sinh miễn dịch và sự hấp
phụ của kháng nguyên vắc xin Streptococcus pneumoniae tái tổ hợp bằng tá chất nhôm.
Vắc xin Hum. 2006;2(2):74-77.
31. Seeber SJ, White JL, Hem SL. Dự đoán khả năng hấp phụ protein của tá chất chứa nhôm. Vắc-
xin. 1991;9(3):201-203.
32. Wittayanukulluk A, Jiang D, Regnier FE, Hem SL. Ảnh hưởng của pH môi trường vi mô của
tá dược nhôm hydroxit đến độ ổn định hóa học của kháng nguyên bị hấp phụ. Vắc-xin.
2004;22(9-10):1172-1176.
33. Martin A. Hiện tượng bề mặt. Trong: Martin A, Swarbrick J, Cammarata A, biên tập.
Dược vật lý. tái bản lần thứ 3 . Philadelphia: Lea và Febiger; 1983:463-464.
34. Heimlich JM, Regnier FE, White JL, Hem SL. Sự dịch chuyển trong ống nghiệm của các kháng
nguyên mô hình được hấp phụ từ các chất bổ trợ có chứa nhôm bằng các protein kẽ. Vắc-
xin. 1999;17(22):2873-2881.
35. Iyer S, Robinett RS, HogenEsch H, Hem SL. Cơ chế hấp phụ kháng nguyên bề mặt viêm gan
B bằng tá dược nhôm hydroxit. Vắc-xin. 2004;22(11-12 ):1475-1479.
36. Clapp T, Siebert P, Chen D, Jones BL. Vắc xin có tá dược chứa nhôm: tối ưu hóa hiệu
quả vắc xin và độ ổn định nhiệt. J Pharm Khoa học. 2011;100(2):388-401.
37. Zhao Q, Sitrin R. Độ phosphophilic bề mặt của các chất bổ trợ có chứa nhôm được nghiên
cứu bằng hiệu quả của chúng trong việc xúc tác sự phân tách liên kết PO với chất nền
tạo màu và phát huỳnh quang. Hóa sinh hậu môn. 2001;295(1):76-81.
38. Shan SO, Yoshida A, Sun S, Piccirilli JA, Herschlag D. Ba ion kim loại tại vị trí hoạt
động của ribozyme nhóm Tetrahymena I. Proc Natl Acad Sci US A. 1999;96(22):12299-12304.
39. Ausar SF, Espina M, Brock J, và cộng sự. Sàng lọc thông lượng cao các chất ổn định đối
với virus hợp bào hô hấp: xác định các chất ổn định và ảnh hưởng của chúng đến khả
năng chịu nhiệt về hình dạng của các hạt virus. Vắc xin Hum. 2007;3(3):
94-103.
40. Ausar SF, Chan J, Hoque W, James O, Jayasundara K, Harper K. Ứng dụng phương pháp quang
phổ huỳnh quang bên ngoài để sàng lọc công thức thông lượng cao của vắc xin có bổ trợ
nhôm. J Pharm Khoa học. 2011;100(2):431-440.
41. Jully V, Moniotte N, Mathot F, Lemoine D, Preat V. Phát triển nền tảng sàng lọc thông
lượng cao để nghiên cứu sự hấp phụ của kháng nguyên lên các chất bổ trợ có chứa nhôm.
J Pharm Khoa học. 2015;104(2):557-565.
42. Eigel WN, Butler JE, Ernstrom CA, và cộng sự. Danh pháp protein của sữa bò: sửa đổi lần
thứ năm. Khoa học sữa J. 1984;67(8):1599-1631.
43. Modler HW. Đánh giá các đặc tính chức năng của nguyên liệu sữa không béo . Sửa đổi sản
phẩm có chứa casein1,2. Khoa học sữa J. 1985;68(9):2195-2205.
44. Chu W, Bi J, Janson JC, và cộng sự. Đặc tính phân tử của kháng nguyên bề mặt viêm gan
B tái tổ hợp từ buồng trứng của chuột đồng Trung Quốc và tế bào đa hình Hansenula bằng
sắc ký loại trừ kích thước hiệu suất cao và tán xạ ánh sáng laser đa góc. J Chromatogr
B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2006;838(2):71-77.
45. Karelin VP, Zhdanov VM. Một glycopeptide chứa yếu tố quyết định kháng nguyên đặc hiệu
nhóm của kháng nguyên bề mặt viêm gan B (HBsAg). Mol miễn dịch. 1981;18(3):237-244.
46. Van der Meeren P, Van Criekinge W, Vanderdeelen J, Baert L. Thành phần Phospholipid của kháng nguyên bề
mặt r-DNA viêm gan B. Int J Pharm. 1994;106(1): 89-92.
47. Diminsky D, Schirmbeck R, Reimann J, Barenholz Y. So sánh giữa các hạt kháng nguyên bề
mặt viêm gan B (HBsAg) có nguồn gốc từ tế bào động vật có vú (CHO) và tế bào nấm men
(Hansenula polymorpha): thành phần, cấu trúc và khả năng miễn dịch. Vắc-xin.
1997;15(6-7):637-647.
48. Gavilanes F, Gonzalez-Ros JM, Peterson DL. Cấu trúc kháng nguyên bề mặt viêm gan B. Đặc
tính của các thành phần lipid và sự liên kết của chúng với protein của virus. J Biol
Chem. 1982;257(13):7770-7777.
Machine Translated by Google
1836 V. Jully và cộng sự. / Tạp chí Khoa học Dược phẩm 105 (2016) 1829e1836
49. Mangalo R, Bizzini B, Turpin A, Raynaud M. Trọng lượng phân tử của độc tố uốn ván. Đạo
luật sinh lý sinh học Biochim. 1968;168(3):583-584.
50. McGown EL, Hafeman DG. Hiệu suất của pipet đa kênh được xác minh bằng cách đo chiều dài
đường đi của thuốc thử được phân phối vào đĩa vi mô. Hóa sinh hậu môn.
1998;258(1):155-157.
51. Dasnoy S, Le Bras V, Preat V, Lemoine D. Đánh giá thông lượng cao về độ ổn định hình dạng của kháng nguyên
bằng phương pháp quang phổ hấp thụ tia cực tím và ứng dụng của nó để sàng lọc tá dược. Công nghệ sinh
học Bioeng. 2012;109(2): 502-516.
52. Jiang D, Johnston CT, Hem SL. Sử dụng tốc độ trung hòa axit để xác định đặc tính của tá
dược nhôm photphat. Pharm Dev Technol. 2003;8(4):349-356.
53. Shi Y, HogenEsch H, Hem SL. Thay đổi mức độ hấp phụ protein của các chất bổ trợ có chứa nhôm sau khi tiếp
xúc với dịch kẽ : vắc xin mẫu mới được chuẩn bị và mẫu đã cũ. Vắc-xin. 2001;20(1-2): 80-85.
54. Watkinson A, Soliakov A, Ganesan A, và cộng sự. Tăng hiệu lực của vắc-xin bệnh
than có công thức alhydrogel bằng cách giảm thiểu tương tác kháng nguyên-tá
dược. Thuốc chủng ngừa miễn dịch lâm sàng. 2013;20(11):1659-1668.
55. al-Shakhshir R, Regnier F, White JL, Hem SL. Ảnh hưởng của sự hấp phụ protein đến đặc
tính điện tích bề mặt của chất bổ trợ có chứa nhôm. Vắc-xin. 1994;12(5):472-474.
56. Jones LS, Peek LJ, Power J, Markham A, Yazzie B, Middaugh CR. Ảnh hưởng của khả năng
hấp phụ của tá chất muối nhôm đến cấu trúc và tính ổn định của kháng nguyên protein
mẫu. J Biol Chem. 2005;280(14):13406-13414.
57. Taborsky G. Phosphoprotein. Trong: Anfinsen CB, Edsall JT, Richards FM, biên tập.
Những tiến bộ trong hóa học protein. Tập. 28. New York: Học thuật; 1974: 1-210.
58. Iyer S, HogenEsch H, Hem SL. Mối liên quan giữa mức độ hấp phụ kháng nguyên với tá dược
nhôm hydroxit trong dịch kẽ và sản xuất kháng thể. Vắc-xin. 2003;21(11-12):1219-1223.
59. Huang M, Wang W. Các yếu tố ảnh hưởng đến tương tác phèn-protein. Int J Pharm.
2014;466:139-146.
60. Gupta RK, Rost BE, Relyveld E, Siber GR. Tính chất bổ trợ của hợp chất nhôm và canxi.
Trong: Powell MF, Newman MJ, biên tập. Thiết kế vắc xin. Công nghệ sinh học dược phẩm.
Tập. 6. New York: Springer; 1995: 229-248.
61. Rinella JV, White JL, Hem SL. Ảnh hưởng của pH đến quá trình rửa giải kháng nguyên mô
hình từ các chất bổ trợ có chứa nhôm. J Colloid Giao diện Khoa học. 1998;205(1):161-165.