Machine Translated by Google

[Vắc xin cho người 1:2, 70-73; tháng 3/tháng 4 năm 2005]; ©2005 Khoa học sinh học Landes

Bài nghiên cứu

Cơ chế hấp phụ của ba chủng Streptococcus Pneumoniae tái tổ hợp

(Sp) Kháng nguyên vắc xin bằng chất bổ trợ nhôm

Philip M. Levesque TRỪU TƯỢNG

Uditha de Alwis*
Tập đoàn y sinh ID Northborough; Northborough, Massachusetts Hoa Kỳ
*Thư từ: Uditha De Alwis; Tập đoàn y sinh ID Northborough; 30 đường Bearfoot; Northborough,
Massachusetts 01532 Hoa Kỳ; ĐT.: 508.351.1057; Fax: 508.351.9687; Email:
udealwis@idbiomedical.com
Nhận ngày 12/11/04; Đã chấp nhận 02/06/05
Trước đây được xuất bản trực tuyến dưới dạng ấn phẩm điện tử về Vắc
Nghiên cứu khả năng hấp phụ ba kháng nguyên vắc xin Streptococcus pneumoniae (Sp) bằng tá
dược chứa nhôm. Các kháng nguyên thể hiện đường đẳng nhiệt có ái lực liên kết cao với tá dược
nhôm hydroxit được mô tả theo phương trình Langmuir nhưng hầu như không liên kết với tá dược nhôm
photphat. Tác động của cường độ ion và ethylene glycol được đánh giá để xác định xem liệu tương
tác tĩnh điện hay kỵ nước có phải là nguyên nhân gây ra liên kết quan sát được với nhôm hydroxit
hay không, nhưng không có thay đổi đáng kể nào về khả năng hấp phụ được quan sát thấy ở cường độ
ion cao cũng như nồng độ ethylene glycol cao. đối với bất kỳ kháng nguyên nào. Điều này chỉ ra
rằng dường như cả tương tác tĩnh điện và kỵ nước đều không chịu trách nhiệm cho liên kết được

xin cho Người : http://www.landesbioscience.com/journals/vaccines/abstract.php?id=1592

quan sát, điều đó có nghĩa là trao đổi phối tử có thể là cơ chế chính cho tương tác này. Các
nghiên cứu sâu hơn để đánh giá khả năng rửa giải kháng nguyên Sp từ nhôm hydroxit bằng cách sử

TỪ KHÓA dụng fibrinogen (hệ số hấp phụ 2,2 mL/µg) làm protein cạnh tranh đã dẫn đến bằng chứng cho thấy
kháng nguyên Sp đi theo xu hướng các protein có hệ số hấp phụ cao hơn có thể thay thế các protein
tá dược nhôm, hấp phụ kháng nguyên, trao đổi có hệ số hấp phụ thấp hơn. hệ số hấp phụ. Người ta cũng lưu ý rằng kháng nguyên Sp và α-
phối tử lactalbumin (hệ số hấp phụ 1,8 mL/µg) có hệ số hấp phụ tương tự biểu thị các đường đẳng nhiệt
liên kết ái lực cao nhưng không chứa phốt phát, trước đây được sử dụng để giải thích sự trao đổi
SỰ NHÌN NHẬN phối tử cho các protein như α -casein và kháng nguyên bề mặt viêm gan B (HBsAg). Các nghiên cứu
sâu hơn sử dụng α-lactalbumin làm protein mẫu có thể làm sáng tỏ sự tương tác liên kết giữa các
Các tác giả xin cảm ơn John Zeng và Joseph
kháng nguyên trong nghiên cứu này và các chất bổ trợ nhôm.
Makowiecki từ nhóm R&D Quy trình tại ID Biomedical
Corporation of Northborough vì đã cung cấp các
kháng nguyên được sử dụng trong nghiên cứu này.

©2005 KHOA HỌC SINH HỌC LANDES. KHÔNG PHÂN PHỐI.

GIỚI THIỆU

Chất bổ trợ nhôm đã được sử dụng trong công thức vắc xin từ năm 1926 khi Glenny et al.
đã phát hiện ra tác dụng bổ trợ của chúng.1 Mặc dù có lịch sử sử dụng thành công nhưng cơ
sở miễn dịch học cho các đặc tính bổ trợ của chúng cũng như cơ chế mà các kháng nguyên
vắc xin được hấp phụ vào các chất bổ trợ nhôm vẫn chưa được hiểu rõ hoàn toàn. Các nghiên
cứu sử dụng protein mẫu,2-9 kháng nguyên sốt rét10 và kháng nguyên bề mặt viêm gan B
(HBsAg)11 đã chứng minh rằng các tương tác chính chịu trách nhiệm cho sự hấp phụ protein
với các chất bổ trợ nhôm dường như là trao đổi tĩnh điện, kỵ nước và phối tử.12 Trong khi
lực hút tĩnh điện thường xuyên gặp phải và tương tác kỵ nước là một vấn đề quan trọng khi
xem xét cấu trúc protein, trao đổi phối tử đã được chứng minh là cơ chế hấp phụ mạnh
nhất.11 Trở ngại đầu tiên để đánh
giá tương tác kháng nguyên-bổ trợ là hiểu được tính chất vật lý của bề mặt tá dược.
Các nghiên cứu trước đây đã tiết lộ rằng nhôm hydroxit thực chất là nhôm oxyhydroxide kết
tinh, hay boehmite, trong khi nhôm photphat là nhôm hydroxyphosphate vô định hình.13 Do
đó, trong khi chất bổ trợ nhôm hydroxit có cấu trúc tinh thể rõ ràng thì chất bổ trợ nhôm
photphat là sự kết hợp của một số hợp chất với tỷ lệ nhóm hydroxyl và nhóm photphat khác
nhau. Mặc dù không thể xác định một cách rõ ràng cấu trúc của chất bổ trợ nhôm photphat,
nhưng có thể duy trì các điều kiện pH không đổi để giảm thiểu sự đa dạng của tỷ lệ nhóm
hydroxyl và photphat trên bề mặt.

Lý do quan trọng nhất của việc sử dụng tá dược nhôm là để thúc đẩy tăng cường miễn
dịch dựa trên kháng thể (thường là loại Th2).14 Vì mục tiêu của việc bào chế vắc xin bằng
tá dược nhôm thường là để liên kết ổn định kháng nguyên với tá dược nên các điều kiện là
thường được lựa chọn sẽ thiên về ràng buộc. Để đảm bảo tồn tại các điều kiện liên kết
tĩnh điện thuận lợi, vắc xin thường được bào chế ở độ pH nằm giữa điểm đẳng điện của kháng
nguyên và tá dược nhôm. Khi kháng nguyên và tá dược tích điện trái dấu thì có thể hấp phụ
tĩnh điện. Các nghiên cứu trước đây đã thăm dò

70 Vắc xin cho người 2005; Tập. 1 Số 2

Machine Translated by Google
Cơ chế hấp phụ ba kháng nguyên vắc xin Streptococcus pneumoniae (Sp) tái tổ hợp bằng tá chất nhôm

tương tác tĩnh điện-kháng nguyên-bổ trợ bằng

cách đánh giá liên kết khi có nhiều nồng độ
natri clorua (NaCl), do đó thay đổi cường độ
ion.3 Cường độ ion cao hơn làm giảm bất kỳ
tương tác tĩnh điện nào thông qua việc che chắn
và giảm hoạt động của ion kim loại trong dung
dịch. Kết quả là, khi các tương tác tĩnh điện
chủ yếu chịu trách nhiệm liên kết, việc tăng
cường độ ion có tác động mạnh mẽ đến đặc tính
hấp phụ.
Tương tác kỵ nước cũng có thể đóng vai trò
hỗ trợ trong liên kết kháng nguyên, nhưng không
có khả năng vượt qua lực đẩy tĩnh điện nếu kháng
nguyên và tá chất mang điện tích cùng dấu, như
thể hiện trong trường hợp lysozyme với nhôm
hydroxit.3 Các nghiên cứu trước đây đã khám phá
tá dược kháng nguyên kỵ nước tương tác bằng cách Hình 1. Ảnh hưởng của cường độ ion đến đường đẳng nhiệt hấp phụ Langmuir đối với kháng
đánh giá sự liên kết với sự có mặt của ethylene nguyên Sp3 bằng nhôm hydroxit ở pH 7,2 và 25˚C. () NaCl 0,06M; () NaCl 0,25M; () 0,75M NaCl

glycol. Ethylene glycol ổn định lớp hydrat hóa

của kháng nguyên, làm giảm tương tác kỵ nước.
Hiện tượng này được sử dụng thường xuyên nhất trong sắc ký tương
tác kỵ nước để làm giảm sự tương tác giữa kháng nguyên và chất hấp thụ.15
Các kháng nguyên đã được sử dụng để minh họa sự trao đổi phối
tử như kháng nguyên bề mặt viêm gan B11 và alpha-casein16 đã được
xác định là liên kết với bề mặt của tá dược nhôm bằng cách trao
đổi phối tử giữa nhóm photphat trên kháng nguyên và nhóm hydroxyl
bề mặt trên tá dược. Trao đổi phối tử đã được chứng minh là tương
tác liên kết mạnh đến mức nó có thể vượt qua lực đẩy tĩnh điện
Đường đẳng nhiệt hấp phụ. Sự hấp phụ kháng nguyên Sp của tá chất ở pH 7,2
và 25˚C được nghiên cứu ở huyền phù 5mL chứa 0,35 mg Al/0,5 mL.
Nồng độ chất bổ trợ này được chọn là lượng nhôm cuối cùng trong vắc xin thành
phẩm vì nó đáp ứng yêu cầu của FDA là < 0,85 mg nhôm cho mỗi liều vắc xin.18
Đường đẳng nhiệt hấp phụ được điều chế bằng cách pha loãng kháng nguyên vắc-
xin đã thẩm tách đến nồng độ từ 12,5 đến 500 µg/mL trong NaCl 5M để thu được
nồng độ NaCl cuối cùng là 0,06, 0,25 và 0,75 M và ethylene glycol để thu được
nồng độ cuối cùng là 0, 20 và 40% . Sau đó, chất bổ trợ nhôm hydroxit được thêm

giữa kháng nguyên và tá chất như trong trường hợp của ovalbumin.4
Trong các trường hợp mà liên kết được thể hiện chủ yếu thông qua
trao đổi phối tử, kháng nguyên chứa ít nhất một nhóm photphat.
Các nghiên cứu trước đây đã kết luận rằng sự hấp phụ của protein
sợi là tuần tự và cạnh tranh dựa trên ái lực. ở bề mặt17 Ví dụ,
rinogen (hệ số hấp phụ 2215 mL/mg) đã được chứng minh là thay thế
lysozyme (hệ số hấp phụ 6 mL/mg) khỏi nhôm photphat bất chấp lực
đẩy tĩnh điện ở pH 7,4 do ái lực liên kết cao của fibrinogen.7
vào và các mẫu đã lập công thức được điều chỉnh đến độ pH 7,2 bằng HCl 0,1 M
hoặc NaOH 0,1 M và nâng lên thể tích bằng nước pha tiêm (WFI). Quy trình tương
tự được thực hiện đối với các công thức nhôm photphat ngoại trừ nồng độ NaCl
được điều chỉnh thành 0,06, 0,15 và 0,25 M. Các công thức được bào chế trong
điều kiện vô trùng bằng kỹ thuật vô trùng.
Dữ liệu trước đây cho thấy các công thức đạt đến trạng thái cân bằng bằng
cách trộn trong vòng chưa đầy 10 phút. Phần nổi phía trên của các mẫu đã cân
bằng thu được bằng cách ly tâm ở tốc độ 13.000 g trong 10 phút. Nồng độ kháng

Streptococcus pneumoniae (Sp ) các nguyên trong chất nổi phía trên được xác định bằng cách sử dụng phân tích nitơ

kháng nguyên đang được điều tra được xác định là Sp1, Sp2 và
Sp3. Sp1 là protein tái tổ hợp gồm 633 gốc axit amin có trọng
lượng phân tử 69.900 D và điểm đẳng điện (iep) là 4,92. Sp2 chứa
272 gốc axit amin có trọng lượng phân tử là 30.100 D và iep là
4,43. Sp3 là protein tổng hợp của Sp1 và Sp2 chứa 900 gốc axit
amin có trọng lượng phân tử 99.500 D và iep là 4,67. Mục tiêu của
nghiên cứu này là thiết lập cơ chế có khả năng hấp phụ các kháng
nguyên trên chất bổ trợ nhôm.
phát quang19 được thực hiện bằng Máy phân tích nguyên tố TN-110 bao gồm các
thành phần sau: Bộ điều khiển thuyền tự động (ABC), mô-đun chính TN-110 và Máy
dò nitơ (COSA Instrument Corporation, Norwood, NJ , HOA KỲ).
Lượng kháng nguyên hấp phụ được xác định bằng cân bằng khối lượng. Khả năng hấp
phụ và hệ số hấp phụ của kháng nguyên Sp được tính toán bằng dạng tuyến tính
của phương trình Langmuir.20
Nghiên cứu rửa giải. Một nghiên cứu có thiết kế tương tự như sự dịch chuyển
lysozyme bằng fibrinogen7 đã được tiến hành để xác định xem fibrinogen, một
protein kẽ, có thể thay thế kháng nguyên Sp3 khỏi tá dược hydroxit nhôm hay không.
Fibrinogen được chọn vì hệ số hấp phụ cao cũng như ái lực của nó với nhôm
hydroxit.

NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
Hai chất bổ trợ chứa nhôm có bán trên thị trường đã được đánh giá: nhôm
hydroxit (Alhydrogel, Brenntag Biosector, Frederikssund, Đan Mạch) và nhôm
photphat (Adju-Phos, Brenntag Biosector).
Các kháng nguyên vắc xin Sp tái tổ hợp đã được tinh chế (Sp1, Sp2 và Sp3)
được lấy từ nhóm R&D Quy trình tại Tập đoàn Y sinh ID của Northborough trong
dung dịch đệm phốt phát. Dung dịch đệm phosphat được loại bỏ bằng cách thẩm
tách trong nước sử dụng băng thẩm tách (Slide-A-Lyzer, Pierce, Rockford, IL)
qua đêm ở nhiệt độ 25˚C chỉ bằng một lần thay thế môi trường thẩm tách. Nồng
độ của các kháng nguyên đã thẩm tách được xác định bằng độ hấp thụ ở bước sóng
280 nm. Các giá trị nồng độ thu được bằng độ hấp thụ ở bước sóng 280nm được sử
dụng để tạo đường chuẩn cho phân tích nitơ phát quang hóa, do đó giá trị nồng
độ của cả hai phương pháp là tương đương nhau.
Công thức kháng nguyên Sp3 5 mL được điều chế với kháng nguyên 400 µg Sp3/
mL và nhôm hydroxit 0,70 mg/mL ở độ pH 7,2. Các mẫu sau đây được loại bỏ để
nghiên cứu sâu hơn: Mẫu A: 1 mL để phân
tích phần nổi phía trên nhằm xác định % hấp phụ của kháng nguyên Sp3.
Mẫu B: 1 mL pha loãng thành 10 mL với nước để tạo huyền phù
chứa 40 µg kháng nguyên Sp3 /mL.
Mẫu C: 1 mL pha loãng thành 10 mL bằng dung dịch fibrinogen để tạo huyền
phù chứa 40 µg Sp3 kháng nguyên/mL và 100 µg fibrin-gen/mL.
Các mẫu B và C được pha loãng theo quy định và trộn trong 30 phút trước khi
loại bỏ phần nổi phía trên. Các dung dịch protein được phân tích ba lần bằng
HPLC (Mô-đun phân tách 2690 với máy dò mảng điốt quang 996, Waters, Milford,
MA). Mẫu chuẩn của kháng nguyên Sp và

www.landesbioscience.com Vắc xin cho người 71

Machine Translated by Google
Cơ chế hấp phụ ba kháng nguyên vắc xin Streptococcus pneumoniae (Sp) tái tổ hợp bằng tá chất nhôm

Bảng 1 Ảnh hưởng của cường độ ion và nồng độ ethylene glycol đến khả năng hấp phụ của kháng nguyên Sp

bằng tá dược chứa nhôm ở pH 7,2 và 25˚C

Chất bổ trợ Chất đạm Giải pháp hấp phụ Khả năng hấp phụ (mg/mg Langmuir

Al) 0,13 phương trình (R2)

Nhôm hydroxit Kháng nguyên Sp1 NaCl 0,06M 0,99

NaCl 0,25M 0,14 0,99

NaCl 0,75M 0,14 0,99

Nhôm photphat kháng nguyên Sp1 NaCl 0,06M < 0,01 0,24

Nhôm hydroxit Kháng nguyên Sp2 NaCl 0,06M 0,55 0,99

NaCl 0,25M 0,54 0,99

NaCl 0,75M 0,54 0,99

Nhôm photphat Kháng nguyên Sp2 NaCl 0,06M < 0,01 0,74

Nhôm hydroxit Kháng nguyên Sp3 NaCl 0,06M 0,51 0,99

NaCl 0,25M 0,52 0,99

NaCl 0,75M 0,52 0,99

Nhôm photphat kháng nguyên sp3 NaCl 0,06M < 0,01 0,85

Nhôm hydroxit Kháng nguyên Sp1 0% Ethylene glycol trong 0,06 M NaCl 0,13 0,99

20% Ethylene glycol trong 0,06 M NaCl 0,13 0,99

40% Ethylene glycol trong 0,06 M NaCl 0,13 0,99

Nhôm hydroxit Kháng nguyên Sp2 0% Ethylene glycol trong 0,06 M NaCl 0,55 0,99

20% Ethylene glycol trong 0,06 M NaCl 0,55 0,99

40% Ethylene glycol trong 0,06 M NaCl 0,53 0,99

Nhôm hydroxit Kháng nguyên Sp3 0% Ethylene glycol trong NaCl 0,06 M 0,51 0,99

20% Ethylene glycol trong NaCl 0,06 M 0,53 0,99

40% Ethylene glycol trong NaCl 0,06 M 0,53 0,99

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Đường đẳng nhiệt hấp phụ. Sự hấp phụ tiêu cực

kháng nguyên Sp1, Sp2 và Sp3 tích điện dương
chất bổ trợ nhôm hydroxit tích điện ở pH 7,2
tuân theo phương trình Langmuir ở cường độ ion của
0,06, 0,25 và 0,75 M, là giá trị R2 cho tuyến tính

dạng của phương trình Langmuir là 0,99 (Bảng 1). Các

khả năng hấp phụ ở cường độ ion được đánh giá là
không khác biệt về mặt thống kê với nhau (Hình 1 và
Bảng 1), cho biết lực tĩnh điện là

dường như không góp phần vào sự hấp phụ.

Sự hấp phụ của kháng nguyên Sp tích điện âm
bằng chất bổ trợ nhôm photphat tích điện âm ở
pH 7.2 không phù hợp với dạng tuyến tính của Langmuir
phương trình được thể hiện bằng các giá trị R2 (Bảng 1). Cái này

hành vi chỉ ra rằng lực đẩy tĩnh điện là

Hình 2. Ảnh hưởng của ethylene glycol đến đường đẳng nhiệt hấp phụ Langmuir đối với kháng nguyên Sp3 bằng
nhôm hydroxit ở cường độ ion 0,06M, pH 7,2 và 25˚C. () 0% ethylene glycol () 20%
ethylene glycol; () 40% etylen glycol
fibrinogen được phân tích trên cột pha đảo C4 (Vydac
214TP5405, The Nest Group, Southborough, MA) sử dụng trifluroacetic 0,1%
axit ở dạng pha động A và 95% acetonitril/5% nước/0,1% trifluroacetic
axit ở pha động B có gradient như mô tả trước đây của Heimlich
et al7 Đường chuẩn đã được chuẩn bị để định lượng chất nổi phía trên
các mẫu cũng được phân tích bằng cách sử dụng gradient.
đủ mạnh để ngăn chặn sự hấp phụ của kháng nguyên Sp bởi
các lực lượng khác.
Sự hấp phụ của các kháng nguyên Sp1, Sp2 và Sp3 bằng
chất bổ trợ nhôm hydroxit trong dung dịch chứa
Tiếp theo là 0, 20 hoặc 40% ethylene glycol và 0,06 M NaCl
phương trình Langmuir (Bảng 1) và ethylene
glycol không ảnh hưởng đến khả năng hấp phụ (Hình 2 và Bảng 1). Điều này chỉ
ra rằng các tương tác kỵ nước dường như không đóng góp đáng kể
đến sự hấp phụ kháng nguyên Sp bằng nhôm hydroxit.
Nghiên cứu rửa giải. Vì không có tương tác tĩnh điện hay kỵ nước
góp phần đáng kể vào sự liên kết giữa kháng nguyên Sp và nhôm
chất bổ trợ hydroxit, ưu thế của liên kết quan sát được phải là
giải thích bằng sự trao đổi phối tử. Trong một nghiên cứu trước đây của Iyer và cộng sự,

báo cáo rằng có mối quan hệ tiềm năng tồn tại giữa hệ số hấp phụ
của protein bằng các chất bổ trợ có chứa nhôm và liên kết chính

72 Vắc xin cho người 2005; Tập. 1 Số 2

Machine Translated by Google
Cơ chế hấp phụ ba kháng nguyên vắc xin Streptococcus pneumoniae (Sp) tái tổ hợp bằng tá chất nhôm

bản chất của tương tác trao đổi phối tử quan sát được. Nó có thể có giá trị
Bảng 2 Hệ số hấp phụ của protein được chọn
lưu ý rằng cả kháng nguyên Sp trong nghiên cứu này và α-lactalbumin đều có
bằng chất bổ trợ có chứa nhôm
không liên kết các chất bổ trợ nhôm bằng cách trao đổi nhóm photphat và

Chất đạm cả hai đều có hệ số hấp phụ tương tự nằm trong khoảng đó
Hệ số bổ trợ Chất hấp Thẩm quyền giải quyết

quan sát thấy tương tác tĩnh điện và kỵ nước (ái lực thấp)
phụ (ml/µg)
và trao đổi phối tử photphat (ái lực cao). Các nghiên cứu trong tương lai là
Myoglobin AH 0,002 7
đã lên kế hoạch giải thích hiện tượng này.
Lysozyme AP 0,006 7
Người giới thiệu

Albumin trứng AH 0,086 18 1. Glenny A, Pope C, Waddington H, Wallace U. Giá trị kháng nguyên của độc tố kết tủa

Albumin huyết AH 0,20 7 bằng phèn kali. Vi khuẩn J Pathol 1926; 29:31-40.

thanh bò 2. Seeber SJ, White JL, Hem SL. Dự đoán khả năng hấp phụ protein của tá chất chứa nhôm. Vắc xin 1991;

9:201-3.
AH 1.8 -
Sp1, Sp2 và 3. Al-Shakkshir RH, Regnier FE, White JL, Hem SL. Đóng góp của tĩnh điện và

Kháng nguyên Sp3 tương tác kỵ nước với sự hấp phụ protein bằng các chất bổ trợ có chứa nhôm.
Vắc xin 1995; 13:41-4.
α-Lactalbumin AH 1.8 7
4. Chang MF, White JL, Nail SL, Hem SL. Vai trò của lực hút tĩnh điện trong
α-Casein AH 2.0 18 hấp phụ protein bằng tá dược nhôm hydroxit. PDA Pharm Sci Tech 1997;
51:25-9.
Fibrinogen AH 2.2 7
5. Rinella Jr JV, Workman RF, Hermodson MA, White JL, Hem SL. Khả năng rửa giải của protein
HBsAg AH 6.0 11 từ các chất bổ trợ vắc xin có chứa nhôm bằng cách xử lý bằng chất hoạt động bề mặt. keo J
Interf Khoa học 1998; 197: 48-56.

6. Rinella Jr JV, White JL, Hem SL. Ảnh hưởng của pH đến quá trình rửa giải kháng nguyên mô hình từ các

chất bổ trợ có chứa nhôm. J Colloid Interf Sci 1998; 205:161-5.

Bảng 3 Dữ liệu nghiên cứu rửa giải 7. Heimlich JM, Regnier FE, White JL, Hem SL. Sự dịch chuyển in vitro của chất bị hấp phụ

kháng nguyên mô hình từ các chất bổ trợ có chứa nhôm bằng các protein kẽ. Vắc-xin
1999; 17:2873-81.
Sp3 Đã hấp phụ (ug/mg Al) Fibrinogen Đã hấp phụ (ug/mg Al)
8. Chang MF, Shi Y, Nail SL, HogenEsch H, Adams SB, White JL, Hem SL. Mức độ hấp phụ kháng nguyên trong

vắc xin hoặc dịch kẽ và ảnh hưởng của nó đến phản ứng kháng thể trong
Mẫu A 496 ± 1 thỏ. Vắc xin 2001; 19:2884-9.

Mẫu B 508 ± 2 9. Shi Y, HogenEsch H, Hem SL. Sự thay đổi mức độ hấp phụ của protein bởi các chất bổ trợ có chứa nhôm

sau khi tiếp xúc với dịch kẽ: Các loại thuốc mới được chuẩn bị và
Mẫu C 459 ± 2 1019 ± 3
vắc xin mẫu cũ. Vắc xin 2002; 20:80-5.

10. Callahan PM, AL ngắn hơn, Hem SL. Tầm quan trọng của điện tích bề mặt trong việc tối ưu hóa

của tương tác kháng nguyên-tá chất. Pharm Res 1991; 8:851-8.

cơ chế; Sự tương tác giữa protein và chất bổ trợ đã được 11. Iyer S, Robinett RSR, HogenEsch H, Hem SL. Cơ chế hấp phụ của viêm gan B

kháng nguyên bề mặt bằng tá dược nhôm hydroxit. Vắc xin 2004; 22:1475-9.
về bản chất chủ yếu là tĩnh điện hoặc kỵ nước, tương quan với
12. Vogel FR, Hem SL. Trong: Plotkin SA, Orenstein MD, biên tập. Vắc-xin. tái bản lần thứ 4. Newyork:
hệ số hấp phụ thấp hơn so với hệ số được quan sát đối với trao đổi phối tử.11 A
Sanders, 2003.
Danh sách các protein được chọn được trình bày trong Bảng 2 với chất hấp phụ tương ứng của chúng
13. Shiradkar S, Hutchinson RL, Perry DL, White JL, Hem SL. Hợp chất nhôm được sử dụng
hệ số của chất bổ trợ nhôm hydroxit. Trao đổi phối tử thông qua như chất bổ trợ trong vắc-xin. Pharm Res 1990; 7:1282-8.

nhóm photphat đã được đưa ra như là lời giải thích cho khả năng hấp phụ cao
hệ số cho các protein như alpha-casein và HbsAg.11,21 Không giống như
alpha-casein chứa 8 nhóm photphat và HBsAg chứa
một số lượng lớn các nhóm phốt phát,22 các kháng nguyên Sp đang được nghiên cứu
không chứa bất kỳ nhóm photphat nào. Hệ số hấp phụ của Sp
14. Ellis Ronald W. Technologies cho việc thiết kế, khám phá, xây dựng và quản lý
vắc-xin. Vắc xin 2001; 19:2681-7.
15. Srinivasan R, Ruckenstein E. Vai trò của lực vật lý trong tương tác kỵ nước
matography. Phương pháp Purif tháng 9 năm 1980; 9:267-370.
16. Morefield GL, HogenEsch H, Robinson JP, Hem SL. Phân bố kháng nguyên bị hấp phụ trong
vắc xin đơn giá và vắc xin phối hợp. Vắc xin 2004; 22:1973-84.

kháng nguyên trong nghiên cứu này được tính toán từ dạng tuyến tính của Langmuir 17. Arai T, Norde W. Hoạt động của một số protein mô hình ở bề mặt phân cách rắn-lỏng. 2.

phương trình là 1,8 mL/µg. Giống như α-lactalbumin, hệ số hấp phụ của kháng Hấp phụ tuần tự và cạnh tranh. Chất keo và bề mặt 1990; 51:17-28.

nguyên Sp nằm giữa hệ số hấp phụ của các protein liên kết với nhôm. 18. May JC, Progar JJ, Chin R. Hàm lượng nhôm trong các chế phẩm sinh học có chứa tá chất nhôm-min: Xác

định bằng phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử. J Biol Stand 1984;
các chất bổ trợ bằng tương tác tĩnh điện và kỵ nước và những chất bổ trợ đó
12:175-83.
liên kết thông qua trao đổi phối tử thông qua một nhóm phốt phát. Lý do cho
19. Amari JV, Levesque P, Lian Z, Lowden T, de Alwis U. Xác định nồng độ của a
ái lực cao của cả kháng nguyên α-lactalbumin và Sp với nhôm hydroxit kháng nguyên vắc xin tái tổ hợp được hấp phụ trên chất bổ trợ phèn bằng phương pháp phát hiện nitro-

hiện chưa được biết đến. gen phát quang hóa học. Pharm Res 2005; 22:33-7.

Fibrinogen có hệ số hấp phụ là 2,2 mL/µg so với 20. Adamson AW. Hóa lý của bề mặt. tái bản lần thứ 3. New York: Wiley, 1976:386-9.

21. Iyer S, HogenEsch H, Hem SL. Ảnh hưởng của mức độ thay thế photphat trong nhôm
là 1,8 mL/µg đối với kháng nguyên Sp (Bảng 2). Phân tích mẫu A cho thấy
chất bổ trợ hydroxit vào sự hấp phụ của protein phosphoryl hóa. Pharm Dev Tech 2003;
496 µg kháng nguyên Sp /mg Al ban đầu được hấp phụ ở pH 7,2 (Bảng 3). 8:81-6.

Sau khi pha loãng công thức với nước (Mẫu B), 508 µg Sp
22. VanderMeeren P, VanCriekinge W, Vanderdeelen J, Baert L. Thành phần Phospholipid của
kháng nguyên/mg Al đã bị hấp phụ. Pha loãng bằng dung dịch fibrinogen (Mẫu kháng nguyên bề mặt viêm gan B r-DNA (HBsAg). Mol miễn dịch 1981; 18:237-44.

C) dẫn đến hấp phụ 459 µg kháng nguyên Sp /mg Al. Sự hấp phụ của
fibrinogen cạnh tranh được tính toán là 1.019 µg fibrinogen/mg Al. Cái này
kết quả ủng hộ kết luận rằng protein được hấp phụ vào nhôm
Chất bổ trợ có thể được thay thế khỏi chất bổ trợ bằng cách xử lý với protein có
ái lực cao hơn và sự ràng buộc đó thực sự dựa trên ái lực.

PHẦN KẾT LUẬN

Tóm lại, kháng nguyên Sp liên kết với nhôm chủ yếu bằng phối tử
trao đổi. Vì protein không chứa nhóm photphat
có khả năng trao đổi với hydroxyl bề mặt của nhôm
hydroxit, cần có những nghiên cứu sâu hơn để hiểu rõ hơn về

www.landesbioscience.com Vắc xin cho người 73