第 3 6 卷 ,第 9 期 光 谱 学 与 光 谱 分 析 Vol.3 6 ,No.

9 ,pp2 7 6 6-2 7 7 3
2 0 1 6 年 9 月 Spectroscopy and Spectral Analysis September ,2 0 1 6

20 种氨基酸近红外光谱及其分子结构的相关性

陶琳丽 1 ,黄 伟 1 ,杨秀娟 1 ,曹志勇 2 ,邓君明 1 ,王姗姗 1 ,梅凤艳 1 ,张名伟 1 ,张 曦1∗

1 .云南农业大学动物科学技术学院,云南省动物营养与饲料重点实验室,云南 昆明 650201
2 .云南农业大学基础与信息工程学院,云南 昆明 650201

摘 要 旨在研究 2 0 种氨基酸的分子结构与其近红外光谱的相关性,为 氨 基 酸 近 红 外 光 谱 在 动 物 科 学、食

品和医药等方面的推广应用奠定一定的理论基础。应 用 岛 津 傅 里 叶 变 换 红 外 光 谱 仪 IRPrestige-2 1 及 其 近 红
外附件 FlexIRTM Near-Infrared Fiber Optics module ,采集 2 0 种氨基酸标准物质在 1 000 ~2 5 0 2 nm 波长范
围内的近红外光谱,分辨率 8 cm - 1 ,每个样品扫描 3 次,每次扫 描 5 0 遍,取 其 平 均 值 为 氨 基 酸 标 准 品 的 近
红外光谱。根据氨基酸侧链基团的不同,分别比较脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸和杂环氨基酸中各氨基酸分
子 结构与其近红外光谱的相关性。研究表明,2 0 种氨基酸在 1 000 ~2 5 0 2 nm 区域有非常明显的近红外光谱
吸收且差异显著。分子量较大的脂肪族氨基酸 其 近 红 外 光 谱 受 侧 链 基 团 的 影 响 较 大,而 甘 氨 酸 近 红 外 光 谱
受羧基和氨基的影响较大;两种芳香族氨基酸近红外光谱的差异主要来自于苯环,酪氨酸苯环上的— OH 基
团降低了苯分子的对称性,导致更多振动吸收峰的出现;杂环氨基酸因其侧链上杂环分子基团构成不同,其
近红外光谱在 1 6 00 ~ 1 800 nm 区域差异较大。综上,2 0 种氨基酸主要存在 4 个特征光谱区:第 1 特征光 谱
区 为 1 0 5 0 ~ 1 2 00 nm 主要由 C — H 基团的二级倍频构成;第 2 特征光谱区为 1 3 00 ~ 1 5 00 nm 主要由 C — H
基团的组合频构成;因侧链基团分子构成不同,在第 3 特征光谱区 1 6 00 ~ 1 8 5 0 nm 和第 4 特征光谱区 2 000
~2 5 0 2 nm 表现出差异较大的特征吸收峰。因此,可以利 用 此 4 个 近 红 外 光 谱 特 征 区 域 对 氨 基 酸 进 行 定 量
和定性分析,提高氨基酸近红外光谱模型预测的准确性。

关键词 近红外光谱;氨基酸;分子结构;标准物质
中图分类号:O4 3 4.3 文献标识码:A DOI :1 0.3 9 6 4/.
j issn.1 000-0 5 9 3 (2 0 1 6 )0 9-2 7 6 6-0 8

N — H ,O — H 等)在波长 7 80 ~ 2 5 00 nm 区 域 跃 迁 时 产 生 的
引 言 光谱变化,结合计算机学与化学计量学测 定 样 品 中 多 种 化 学
成分 含 量 [2 ]。构 成 生 命 体 的 2 0 种 氨 基 酸 主 要 是 由 C — H ,
氨基酸是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合 N — H 和 O — H 等基团构成,这些基 团 在 近 红 外 区 域 会 产 生
物,在生物分子的结构和功能 研 究 中 有 重 要 的 作 用。从 细 菌 明显的倍频和组合频吸收峰。研 究 表 明,应 用 近 红 外 光 谱 可
到 人类,所有蛋白质都由 2 0 种标准氨基酸组成,根据其侧链 以定量检测饲 料、肉 与 肉 制 品、谷 物、茶 叶、中 草 药 等 [3-5 ],
基团的性质,可分为脂肪族氨 基 酸、芳 香 族 氨 基 酸 和 杂 环 氨 但不同氨基酸预测的准确率存在一定差 距,这 是 由 于 不 同 氨
基酸。 基酸的侧链基团存在一定差异,其近红外 光 谱 也 会 因 分 子 构
氨基酸常用的检测方法有离子交换 色 谱 法、高 效 液 相 色 成的不同表现出光谱差异,如果单纯从数 学 模 型 的 角 度 解 决
谱法、气相色谱法等紫外检测 方 法 ,需 要 对 样 品 进 行 衍 生
[1 ]
此问题,则效果不明显。因此,研究 2 0 种氨基酸标准物 质 近
化和显色反应,样品预处理过 程 较 为 繁 琐。现 代 近 红 外 光 谱 红外光谱,找出氨基 酸 化 学 结 构 与 其 近 红 外 光 谱 的 关 联 性,
分析技术,可充分利用全谱或多波长下的 光 谱 数 据 进 行 定 性 对今后氨基酸近红外光谱的定量定性检测具有十分重要的意
或定量 分 析,其 原 理 是 利 用 有 机 物 质 的 含 氢 基 团 (C — H , 义。

收稿日期:2 0 1 5-1 1-0 5 ,修订日期:2 0 1 6-0 3-2 3

基金项目:国家高技术研究发展专项(8 6 3 计划)项目(2 0 1 1 AA1 0 0 3 0 5 ),云南省科技创新工 程 项 目(2 0 0 8 LA0 2 0 )和 云 南 省 应 用 基 础 研 究 计 划
面上项目(2 0 1 1 FB0 5 6 )资助
作者简介:陶琳丽,1 9 7 4 年生,云南农业大学动物科学技术学院副教授 e-mail :tllkm@qq.com
∗ 通讯联系人 e-mail :9 4 3 7 2 7 4 9 0 @qq.com
第9 期 光谱学与光谱分析 2767

态,Asn 纯度为 9 9.3 8 % ,Gln 纯度为 9 9.5 % 。

1 实验部分
1.1 试验材料
1 8 种氨基酸标准物质(甘氨酸 Gly 、丙 氨 酸 Ala 、缬 氨 酸
Val 、亮氨酸 Leu 、异亮氨酸 Ile 、丝氨酸 Ser 、苏氨酸 Thr 、甲
硫氨酸 Met 、半 胱 氨 酸 Cys 、天 门 冬 氨 酸 Asp 、谷 氨 酸 Glu 、
精氨酸 Arg 、赖氨酸 Lys 、苯 丙 氨 酸 Phe 、酪 氨 酸 Tyr 、色 氨
酸 Trp 、组氨酸 His 、脯 氨 酸 Pro )购 自 中 国 药 品 生 物 制 品 检
定所,每瓶含 量 1 00mg ,固 态,除 Met 纯 度 为 9 9.7 % 、Glu
纯度为 9 9.5 % 以外,其余十六种氨基酸纯度均为 1 00 % 。
剩余两 种 氨 基 酸 标 准 物 质 (天 冬 酰 胺 Asn 、谷 氨 酰 胺
Gln)购自上海安 谱 科 学 仪 器 有 限 公 司,每 瓶 含 量 2 0mg ,固
1.2 近红外光谱采集
近红外光 谱 采 集 使 用 岛 津 傅 里 叶 变 换 红 外 光 谱 仪 IR-
Prestige-2 1 及其配 套 近 红 外 附 件 FlexIR TM Near-Infrared Fi-
ber Optics module ,光谱采集软件为岛津 IRsolution 1.5 0 ,光
谱室温度恒定 2 5 ℃ ,湿 度 3 8 % 。将 每 个 氨 基 酸 标 准 品 放 入
4 5 ×2 5 规格容量瓶中,使用微量样品勺将样品聚集为直径为
5 mm ,厚度为 3 mm 以上的圆柱体,将光纤探头 直 接 置 于 待
测氨基酸样 品 上,进 行 光 谱 扫 描。光 谱 扫 描 的 波 长 范 围 为
1 000 ~2 5 0 2 nm ,分辨率 8 cm - 1 ,每个样品扫描 3 次,每 次
扫描 5 0 遍,取三次扫 描 数 据 平 均 值 为 氨 基 酸 标 准 品 的 近 红
外光谱。

图1 侧链为烃基脂肪族氨基酸的 1 000~2 502 nm 近红外光谱图及其分子结构

Fi g.1 1 000~2 502 nm near-infrared spectra and molecular structures
of aliphatic group amino acids with hydrocarbon side chains
 2768 光谱学与光谱分析
2 结果与讨论
2.1 脂肪族氨基酸
脂 肪族氨基酸共有 1 5 种,按其侧链的不同,又可分为侧
链为烃链的脂肪族 氨 基 酸,侧 链 含 有 羟 基 的 脂 肪 族 氨 基 酸、
侧链含硫原子的脂肪族氨基酸、侧链含有 羧 基 的 脂 肪 族 氨 基
酸、侧链含有酰胺基的脂肪族氨基酸和侧 链 显 碱 性 的 脂 肪 族
氨基酸。
2.1.1 侧链为烃链的脂肪族氨基酸
侧链只有烃链的脂肪族氨基酸有 Gly ,Ala ,Val ,Leu 和
Ile 五 种, 分 子 量 为 7 5.0 7 , 8 9.0 9 , 1 1 7.1 5 , 1 3 1.1 7 和
1 3 1.1 7 ,其近红外图谱见图 1 。
如图 1 所示,随 着 氨 基 酸 分 子 量 的 增 大 和 烷 基 的 增 多,
Gly 在 1 1 6 5 nm 处的吸收峰 Ala 移至 1 1 7 6 nm ,而 Val 移至
1 1 8 8 nm ,Leu 移至 1 1 8 9 nm ,Ile 也在 1 1 8 8 nm 处;Gly 的
第二个吸 收 峰 出 现 在 1 3 9 1 nm 、Ala 在 1 3 7 0 nm ,Val 在
1 3 7 6 nm ,Leu 和 Ile 均在 1 3 8 6 nm ;Gly 的第 三 个 吸 收 峰 出
现在 1 6 2 0 ~ 1 8 1 2 nm 区域,且波形较平整无明显尖峰出现。
相 对于 Gly ,主链上增加了一个甲基的 Ala ,在此区域内峰形
明显较 Gly 收紧,吸收峰区域处于 1 6 7 2 ~ 1 7 5 6 nm 。对于含
有 一 个 甲 基 支 链 且 主 链 含 有 更 多 碳 原 子 数 的 Val ,Leu 和
Ile ,在此区域内的吸收峰波段 明 显 较 短,且 有 尖 锐 的 峰 形 出
现。第四个吸收峰范围出现在 2 1 00 ~2 5 0 2 nm ,此范围内的
吸收峰较为复杂,Gly ,Ala 的 峰 形 与 Val ,Leu 和 Ile 的 峰 形
相比差异较 大。Gly 因 结 构 简 单,其 光 谱 受 COOH 和 N H 3
基团 的 影 响 较 大,而 Ala 因 为 侧 链 基 团 上 出 现 了 一 个 甲 基,
明显影响了 2 1 00 ~2 5 0 2 nm 的 近 红 外 光 谱 吸 收,可 以 看 到
Gly 在 2 1 5 0 和 2 2 5 8 nm 有 两 个 明 显 的 吸 收 峰,而 Ala 的 强
吸收峰则出现在 2 3 2 9 和 2 44 1 nm 。Val ,Leu 和 Ile 近 红 外
光谱从峰形来看较为相似,推测可能三者 都 含 有 一 个 甲 基 支
链,且 Val 和 Leu 的甲基取代基均连接在倒 数 第 2 位 的 亚 甲
基上,所以两者的峰形更为相似。Val 的侧链较 Leu 和 Ile 少
了一个碳原子,则此范围的波峰相对平缓,吸光度值低 于 Ile
和 Leu 。Ile 和 Leu 分子量相同,但因其侧链中— CH 3 支链的
图2 侧链含有羟基的脂肪族氨基酸 1 000~2 502 nm 近红外光谱图及其分子结构
Fi g.2 1 000~2 502 nm near-infrared spectra and molecular structures
of aliphatic group amino acids with hydroxyl side chains
第 36 卷
结合位点 不 同,Leu 结 合 在 第 4 位 碳 原 子 上,Ile 结 合 在 第 3
位碳原 子 上,通 常 端 甲 基 的 吸 收 性 要 高 于 内 甲 基 或 支 甲
基 [6 ],所以两者 的 近 红 外 光 谱 存 在 一 定 差 异,Leu 在 1 7 0 9
nm 处吸收峰相 对 较 尖;有 研 究 表 明,烷 烃 C — H 振 动 的 一
级倍频出现在 1 7 00 ~ 1 800 nm ,二 级 倍 频 出 现 在 1 1 5 0 ~
1 2 1 0 nm ,最重要的组合频发生在 1 3 00 ~ 1 5 00 和 2 2 00 ~ 2
5 00 nm 处 6 ,本分析结果亦相同。侧链为烃链的脂肪族氨基
[]
酸 C — H 振动的 一 级 倍 频 出 现 在 1 6 2 0 ~ 1 8 1 2 nm ,二 级 倍
频 出现在 1 1 6 5 ~ 1 1 8 9 nm ,组合频出现在 1 3 7 0 ~ 1 3 9 1 及 2
1 5 0 ~2 5 0 2 nm 。在 2 1 5 0 ~ 2 5 0 2 nm 峰 形 较 为 复 杂,这 是 由
于此区域除了是 C — H 振动组合频的 区 域 外,已 有 研 究 表 明
2 1 6 8 ~2 1 80 nm 区 域 为 蛋 白 质 N — H 弯 曲 的 二 级 倍 频 与
C— O 伸 缩/N — H 面 内 弯 曲/C — N 伸 缩 振 动 的 组 合 频,
COOH 中 OH 伸缩 振 动 和 CH 弯 曲 振 动 的 组 合 频 出 现 在 2
0 2 0 ~2 0 80 nm 区域,更复杂碳氢结构的羧酸在 2 2 00 ~2 5 0 2
nm 会有更多的 组 合 频,使 其 光 谱 变 得 更 为 复 杂 6 。因 没 有
[]
继续对分子 基 团 进 行 更 深 入 的 近 红 外 光 谱 吸 收 峰 探 讨,因
此,将 2 1 5 0 ~ 2 5 0 2 nm 复 杂 的 峰 形 归 结 为 C — H ,N — H ,
C— O 基团在此区间组合频共同作用的表现。
2.1.2 侧链含有羟基的脂肪族氨基酸
侧链含有羟基的 脂 肪 族 氨 基 酸 是 Ser 和 Thr ,分 子 量 为
1 0 5.0 9 和 1 1 9.1 2 。图 2 显示,Thr 相 对 于 Ser 在 侧 链 主 链 上
增加一个端甲 基,其 近 红 外 光 谱 也 表 现 出 明 显 差 异。Ser 在
1 000 ~ 2 5 0 2 nm 处 的 近 红 外 光 谱 有 四 个 光 谱 吸 收 区,分 别
为 1 1 9 2 ,1 4 5 1 ,1 6 6 6 ~ 1 7 2 2 和 2 0 8 2 ~2 5 0 2 nm 。Thr 的近
红外光谱与其相比,吸收峰明显提前,且在 1 3 7 7 nm 处的吸
收峰明显小于 Ser 在 1 4 5 1 nm 处 的 吸 收 峰,这 可 能 是 因 为
Thr 侧 链 中 多 增 加 了 一 个 端 甲 基,影 响 了 OH 基 团 在 1 400
nm 左右波长范围 内 的 吸 收 峰 的 出 现,转 而 表 现 为 C — H 的
组合频。研究表明,OH 基团的一级倍频吸收大致位于 1 4 1 0
nm 处,且 会 随 着 醇 分 子 结 构 的 不 同 出 现 在 不 同 的 位 置 6 ,
[]
这也间接的说明了 Ser 和 Thr 在 1 4 5 1 和 1 3 7 7 nm 存在差异
的原因。Ser 在 1 6 6 6 ~ 1 7 2 2 nm 处,可以看到有两个明显的
吸收小峰,而 Thr 在 1 6 3 5 nm 后整体基线抬高至 2 000 nm ,
两者在此范围内的吸收有明显的差异。
第9 期 光谱学与光谱分析 2769

2.1.3 侧链含有硫原子的脂肪族氨基酸 苯硫酚和 1-丁硫醇的 S — H 一 级 倍 频 弱 吸 收 峰 出 现 在 1 9 7 0

侧链含有硫原子的脂肪族氨基 酸 是 Met 和 Cys ,分 子 量 ~1 9 80 nm 6 ,Cys 在 1 7 4 3 nm 附近 出 现 的 多 点 吸 收 峰,推
[]

为 1 4 9.2 1 和 1 2 1.1 6 。由图 3 可 知,Met 近 红 外 光 谱 在 1 1 8 5 测与 S — H 一级倍频 相 关。两 种 氨 基 酸 在 2 1 6 0 ~ 2 1 9 0 nm

和 1 42 0 nm 的吸收峰均高于 Cys 的 1 1 9 1 和 1 40 8 nm 处 的 处均有一个宽吸收 峰,除 此 之 外 Met 在 2 1 0 2 nm 处 有 一 较
吸收峰,这与其侧链 中 多 出 一 个 亚 甲 基 和 一 个 端 甲 基 有 关。 小的吸收峰,而 Cys 此处无吸收,Cys 在 2 400 nm 处 的 吸 收
Met 在 1 6 9 8 和 1 7 40 nm 处有两个明显的吸收峰,且此区 域 峰 明显高于 Met 。与图 1 相比可知,在 1 6 00 ~ 1 800 nm 范围
的峰宽 明 显 宽 于 Cys 在 1 7 4 3 nm 左 右 的 吸 收 峰。研 究 发 现 内近红外光谱的差异与硫原子相关。

图3 侧链含有硫原子的脂肪族氨基酸 1 000~2 502 nm 近红外光谱图及其分子结构

Fi g.3 1 000~2 502 nm near-infrared spectra and molecular structures
of aliphatic group amino acids with sulfur atoms side chains

2.1.4 侧链含有羧基的脂肪族氨基酸 内有明显的吸收峰。Glu 在四 个 波 段 范 围 内 的 吸 收 峰 明 显 提

侧链含有羧基 的 脂 肪 族 氨 基 酸 是 Asp 和 Glu ,显 酸 性,
分 子量为 1 3 3.1 0 和 1 4 7.1 3 。由图 4 可知,Glu 的侧链相对于
Asp ,增加了一个亚甲 基,两 者 的 近 红 外 光 谱 从 形 状 上 来 看
非常的相似。和前面的脂肪族氨基酸相同,在 1 1 6 5 ~ 1 1 7 0 ,
1 3 7 8 左右,1 6 9 1 ~ 1 7 3 3 和 2 1 48 ~2 5 0 2 nm 四个波段范围
前于 Asp ,且在 1 6 9 1 nm 处的吸收峰明显高于 Asp 在 1 7 3 3
nm 处的吸收峰,这可 能 与 其 侧 链 中 多 增 加 的 一 个 亚 甲 基 有
关。2 1 40 nm 处气相甲酸出现 OH 伸缩振动和 CO 伸 缩 振 动
的组合频吸收峰 [6 ],Glu 和 Asp 在 2 1 5 0 ~ 2 1 7 5 nm 附 近 的
强吸收峰推测与此有关。

图4 侧链含有羧基的脂肪族氨基酸 1 000~2 502 nm 近红外光谱图及其分子结构

Fi g.4 1 000~2 502 nm near-infrared spectra and molecular structures of
aliphatic group amino acids with carboxyl side chains

2.1.5 侧链含有酰胺基的脂肪族氨基酸 只有 几 个 较 弱 的 吸 收 峰,而 谷 酰 胺 则 分 别 在 1 5 2 7 nm 左 右

侧链含有酰胺基的脂肪族 氨 基 酸 是 Asn 和 Gln ,分 子 量
为 1 3 2.1 2 和 1 4 6.1 5 。由图 4 和 图 5 可 知,当 Asp 和 Glu 侧
链中的— OH 基团被— N H 2 基团取代后,本来光谱 差 异 不 明
显的天门冬酸和 Glu ,转 变 为 Asn 和 Gln 后 近 红 外 光 谱 发 生
了非常明显的改变。除与烷基相关的 1 1 6 5 和 1 1 7 8 nm 吸收
峰与 Asp 和 Glu 相似外,其余的吸收峰 均 差 异 较 大。天 冬 酰
氨在 1 5 5 6 ~ 1 5 6 0 nm 内有较高的吸收峰,在 1 7 00 nm 附近
和 1 7 2 2 nm 左 右 有 两 个 明 显 的 吸 收 区 域。两 者 光 谱 差 异 最
大的是在 2 000 ~2 5 0 2 nm ,天 冬 酰 氨 在 1 9 7 9 nm 处 有 一 个
大的吸收峰,从 2 0 84 nm 区域 开 始 直 到 2 5 00 nm 吸 收 峰 呈
现 多个峰值不高的小峰。而 Glu 除在 1 9 9 4 nm 处有一个大的
吸收峰外,在 2 2 2 5 nm 处出现了一个更 大 的 吸 收 峰。由 图 5
可知,对于含有酰氨基的氨基酸,受 侧 链 上— CH 2 基 团 的 影
响较大,其差异主要表现在 N — H 的一级倍频 1 400 ~ 1 800
 2770 光谱学与光谱分析 第 36 卷

图5 侧链含有酰胺基的脂肪族氨基酸 1 000~2 502 nm 近红外光谱图及其分子结构

Fi g.5 1 000~2 502 nm near-infrared spectra and molecular structures
of aliphatic group amino acids with amide group side chains

nm 和组合频 1 9 00 ~2 5 0 2 nm 区域。 二 级倍频吸收峰位移到此处。Arg 在 1 5 3 8 nm 处有一明显的

2.1.6 侧链显碱性的脂肪族氨基酸
侧链 显 碱 性 的 脂 肪 族 氨 基 酸 是 Arg 和 Lys ,分 子 量 为
1 7 4.2 0 和 1 4 6.1 9 。由图 6 可知,Arg 的侧链末端含有一 个 胍
基,Lys 的侧链末端只含有一个 N H 2 基团,因此 Arg 的近红
外 光谱也相对复杂。图 6 中,1 000 ~2 5 0 2 nm 范围也出现了
四 个近红外吸收谱区,分别为 1 2 04 ,1 42 1 ,1 7 2 2 和 2 1 2 0 ~
2 5 0 2 nm 区域。Arg 在 1 000 ~ 2 5 0 2 nm 处 的 近 红 外 光 谱 吸
收谱区较多,除 1 2 0 2 nm 的 吸 收 峰 外,在 1 0 5 2 nm 处 也 有
一个明 显 的 吸 收。研 究 表 明, N H 2 的 二 级 倍 频 吸 收 位 于
1 0 3 5 nm ,则 Arg 在 1 0 5 2 nm 的吸收 峰 有 可 能 是 N H 2 的
[6 ]
吸收 峰,而 后 直 到 1 8 1 7 nm 范 围 内 都 是 一 些 弱 的 吸 收,而
Lys 谆在 1 7 2 2 nm 处有一强的吸收峰。研究 表 明,以 四 氯 化
碳为溶剂的二异丁胺在 1 6 6 7 ~ 1 8 2 0 nm 处 呈 现 6 个 锯 齿 状
的吸收峰 [6 ],Lys 在此范 围 内 也 出 现 类 似 吸 收 峰,因 为 二 异
丁胺也有和两个碳元素相 连 接 的— N H 基 团,因 此 推 测 此 吸
收峰的出现与 Arg 的— N H 基 团 有 关。Arg 和 Lys 在 2 000
~2 5 0 2 nm 范围内的吸收峰也差异明显,Arg 有 两 个 较 强 的
吸收峰 区 域,而 Lys 从 2 1 2 0 nm 后 表 现 为 多 个 高 度 相 似 的
吸收峰。

图6 侧链显碱性的脂肪族氨基酸 1 000~2 502 nm 近红外光谱图及其分子结构

Fi g.6 1 000~2 502 nm near-infrared spectra and molecular structures
of aliphatic group amino acids with basicity side chains

2.2 芳香族氨基酸 频吸收的双峰 [6 ],Tyr 在此区域内的两个吸收峰分别 为 1 6 0 1

芳香 族 氨 基 酸 有 Phe 和 Tyr , 分 子 量 为 1 6 5.1 9 和
1 8 1.1 9 。由图 7 可知,Tyr 侧链上 的 苯 环 连 有 一 个— OH ,其
近红外光谱也相对复杂的 多,这 是 因 为— OH 基 团 降 低 了 苯
分子的对称性,导 致 更 多 振 动 吸 收 峰 的 出 现
[6 ]
Phe 和 Tyr 在 1 1 3 8 和 1 1 3 7 nm 处有一明显吸收峰,此 吸 收
峰可能是烷基的二级倍频,在 1 400 nm 左右,有轻微的基线
抬高,可能是烷基在此处的组合频受到侧 链 上 苯 环 的 影 响 所
致。Phe 在 1 6 7 5 nm 左 右 有 一 明 显 的 吸 收 峰 和 两 个 弱 吸 收
峰,而 苯 在 1 6 7 0 nm 处 存 在 非 红 外 活 性 伸 缩 振 动 的 一 级 倍
和 1 6 8 2 nm 。从 2 0 8 6 nm 开始,Tyr 在此处有 5 外连续的吸
收峰,呈现一个手掌的形状,除此之外,还在 2 3 3 1 nm 处 有
一尖的吸收峰,Phe 在 此 区 域 内 的 峰 形 则 相 对 变 化 不 大,从
。在 图 7 中,
2 1 6 0 nm 个 开 始 出 现 连 续 的 波 形 吸 收 峰。研 究 发 现,酚 在
1 9 2 0 ~2 1 00 nm 间的一系 列 强 的 组 合 频 吸 收 带 均 为 OH 的
吸收,1 9 2 0 和 1 9 6 8 nm 处的吸收峰是由 OH 伸 缩 振 动 与 芳
环 间的相互作用产生的。2 0 2 0 nm 处的吸收峰是 OH 伸缩振
动和变形振动的组合频,2 0 5 4 和 2 0 9 0 nm 可 能 是 OH 伸 缩
振动和与其 他 振 动 存 在 相 互 作 用 的 C — O 伸 缩 振 动 的 组 合
第9 期 光谱学与光谱分析 2771

频 [6 ]。据此,推测 Tyr 自 2 0 8 7 nm 处开始的手指状吸收峰与 对位上其他基团,因此吸收峰整体后移。

苯环上的 OH 基团相关,因苯环上 除 连 有 OH 基 团 外,还 有

图7 芳香族氨基酸 1 000~2 502 nm 近红外光谱图及其分子结构

Fi g.7 1 000~2 502 nm near-infrared spectra and molecular structures of aromatic amino acids

图8 杂环氨基酸 1 000~2 502 nm 近红外光谱图及其分子结构

Fi g.8 1 000~2 502 nm near-infrared spectra and molecular structures of heterocycle amino acids

2.3 杂环氨基酸 出现的区域不同,通常出现 在 1 000 nm 附 近、1 4 3 0 ~ 1 6 2 0

杂环氨基酸有 Trp ,His 和 Pro 三种,分子量 为 2 04.2 3 ,
1 5 5.1 6 和 1 1 5.1 3 。如图 8 所示,Trp 和 His 都 是 丙 酸,侧 链
基团中的沼环均连接在第 3 碳原子上,吲哚基是 Trp 的 特 有
化学基团,由吡咯与 苯 并 联 去 掉 一 个 氢 原 子 构 成。Trp 的 近
红外光谱因含有苯环,因此和芳香簇氨基酸类似在 1 6 80 nm
也出现了一个明显的吸收峰。除此之外,Trp 在 1 5 0 5 nm 处
有一个较高的吸收 峰,推 测 与 吲 哚 基 的 出 现 有 关。His 的 侧
链杂环基团是咪唑基,显碱性,其 近 红 外 光 谱 吸 光 度 值 明 显
低于其余 1 9 种 氨 基 酸,N — H 基 团 在 不 同 的 物 质 中 吸 收 峰
和 1 9 5 0 ~2 1 00 nm 等区 域 [7 ],且 随 着 结 合 基 团 不 同 出 现 前
后偏移,因此推测 His 在 1 6 00 ~ 1 800 nm 处 出 现 的 吸 收 峰
与咪唑基相关。Pro 是 一 种 α
-亚 氨 基 酸,是 α
-氨 基 酸 的 侧 链
取代了自身氨基上的一个氢原子而形成 的 杂 环 结 构。其 近 红
外吸收光谱与大多数氨基酸相同,也分为 1 1 6 0 ,1 3 6 2 左右,
1 6 5 0 ~ 1 7 00 和 2 1 6 2 ~2 5 0 2 nm 四个区域。有研究表明,环
状烷烃衍生物的 一 级 倍 频 出 现 在 1 6 6 0 nm 附 近 [8-9 ],因 此,
Pro 在 1 1 6 0 和 1 3 6 2 nm 与 C — H 基 团 的 吸 收 峰 相 关,而
1 6 8 6 nm 附近的吸收峰与其杂环结构相关。
 2772 光谱学与光谱分析 第 36 卷

频和组合频构 成。因 侧 链 基 团 的 分 子 构 成 不 同,在 1 5 00 ~

3 结 语 1 8 5 0 和 2 000 ~2 5 0 2 nm 区域表现出各自特 征 吸 收 峰,故 而
可以利用此四个近红外光谱特征区域对氨基酸进行定量和定
综上,2 0 种氨基酸在 1 000 ~2 5 0 2 nm 区 域 有 非 常 明 显 性分析。根据待测样品中的氨 基 酸 构 成,合 理 确 定 氨 基 酸 近
的近红外光谱吸收且差异显 著。在 1 0 5 0 ~ 1 2 00 nm 区 域 和 红外预测模型的光谱区域,提 高 模 型 预 测 的 准 确 性,促 进 近
1 3 00 ~ 1 5 00 nm 区域 的 吸 收 峰 主 要 由 C — H 基 团 的 二 级 倍 红外光谱学在食品、药品、饲料、医学等方面的推广应用。

References

[1 ] BAO Hai-xia ,DAI Xin-hua (暴海霞,戴新华).Chemical Reagents (化学试剂),2 0 1 3 ,3 5 (7 ):5 7 7 .

[2 ] YU Xiao-lan ,XU Ning ,HE Yong (於筱岚,徐 宁,何 勇).Spectroscopy and Spectral Analysis (光 谱 学 与 光 谱 分 析),2 0 1 4 ,3 4 (9 ):
2377.
[3 ] WU Jian-guo ,SHI Chun-hai ,ZHANG Xiao-ming ,et al (吴建国,石 春 海,张 小 明,等).Acta Agronomica Sinica (作 物 学 报),2 0 0 3 ,2 9
(5 ):6 8 8 .
[4 ] REN Ji-ping ,HUANG Su-xi (任继平,黄苏西).China Feed(中国饲料),2 0 0 5 ,5 :2 4 .
[5 ] SHI Yan ,WANG Gang-li ,LIN Rui-chao (石 岩,王钢力,林瑞超).Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis (药物分析杂志),2 0 0 7 ,
2 7 (1 ):9 0 .
[6 ] J erry Workman Jr ,Lois Weyer.Practical Guide to Interpretive Near-Infrared Spectroscopy (近 红 外 光 谱 解 析 实 用 指 南 ).Translated by
CHU Xiao-li ,XU Yu-peng ,TIAN Gao-you (褚小立,许育鹏,田高友,译).Beij ing :Chemical Industry Press (北京:化学工业出版社),
2 0 0 9 .8 .
[7 ] Goddu R F.Advances in Analytical Chemistry and Instrumentation ,1 9 6 0 ,1 :3 4 7 .
[8 ] Gassman P G.Chem Ind (London),1 9 6 2 ,3 :7 40 .
[9 ] Gassman P G ,Zalar F V.Journal of Organic Chemistry ,1 9 6 6 ,3 1 :1 6 6 .

Correlations Between Near Infrared Sp ectra and Molecular Structures of

20 Standard Amino Acids

TAO Lin-li 1 ,HUANG Wei 1 ,YANG Xiu-juan 1 ,CAO Zhi-yong 2 ,DENG Jun-ming 1 , WANG Shan-shan 1 ,MEI Feng-yan 1 ,
ZHANG Ming-wei 1 ,ZHANG Xi 1 ∗
1 .Faculty of Animal Science and Technology ,Key Laboratory of Animal Nutrition and Feed Science of Yunnan Province ,
Yunnan Agricultural University ,Kunming 6 5 0 2 0 1 ,China
2 .College of Basic Science and Information Engineering ,Yunnan Agricultural University ,Kunming 6 5 0 2 0 1 ,China

Abstract The obj ective of the research was to study the correlations between near infrared spectra and molecular structures of 2 0
standard amino acids.It was to establish the theoretical foundation for widely use of the amino acids near infrared spectra in ani-
mal science ,food and medicine.Measurement of the near infrared spectra was performed using a Shimadzu Fourier transform in-
frared spectrophotometer IRPrestige-2 1 ,with FlexIRTM Near-Infrared Fiber Optics module.The spectrometric data acquisitions
were performed by Shimadzu IRsolution 1.5 0 system.The spectrometric room temperature was 2 5 ℃ and humidity was 3 8 %.
Spectra of 2 0 amino acid standard substances were collected by reflectance mode from 1 000 to 2 5 0 2 nm in 8 cm - 1 increment.
Each sample was scanned in three times ,each scan was 5 0 cycles ,and the average value of three times scan result was used for
each sample.Based on the differences of amino acids side chains ,the correlations between near infrared spectra and molecular
structures were compared in the fat family amino acids ,aromatic amino acids and heterocycle amino acids.The result shows that
all 2 0 standard amino acids have very specific absorption line patterns.It is distinctly different in these absorption line patterns.
Near-infrared spectra of high molecular weight fat family amino acids are affected by side chains.Near-infrared spectra of glycine
are affected by carboxyl and amino.The differences of near-infrared spectra between two aromatic amino acids are in benzene
ring.— OH groups on benzene ring of tyrosine lower the symmetry of benzene molecule.It leads to the emergence of more vibra-
tion absorption.Near-infrared spectra of heterocycle amino acids are distinctly different in 1 000 ~ 2 5 0 2 nm because of side
chains.In conclusion ,there are four different characteristic spectral regions.The first one is 1 0 5 0 ~ 1 2 00 nm spectral region
which is composed mainly of second-order frequency doubling of C — H group.The second is 1 3 00 ~ 1 5 00 nm spectral region
which is composed mainly of combination tune of C — H group.Due to side chains of amino acid have different molecular struc-
第9 期 光谱学与光谱分析 2773

ture ,they yield a complete set of near infrared fingerprint spectra between 1 6 00 ~ 1 8 5 0 and 2 000 ~ 2 5 0 2 nm.In another
words ,these four characteristic regions of near infrared spectra can be used to build the model of qualitative analysis and quanti-
tative analysis for amino acid ,and improves the accuracy and reliability of model.

Keywords Near infrared reflectance spectroscopy (NIRS);Amino acids ;Molecular structures ;Standard substance

∗Corresponding author (Received Nov.5 ,2 0 1 5 ;accepted Mar.2 3 ,2 0 1 6 )

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《光谱学 与 光 谱 分 析 》 1 9 8 1 年 创 刊, 国 内 统 一 刊 号: CN 1 1-2 2 00/O4 ,国 际 标 准 刊 号: ISSN 1 000-

0 5 9 3 , CODEN 码: GYGFED ,国内外公开发行,大 1 6 开本, 3 0 6 页,月刊;是中国科协主管,中 国 光 学
学会主办,钢铁研究总院、中国科学院物理研究所、北京大学、清华大 学 共 同 承 办 的 学 术 性 刊 物。北 京 大
学出版社出版,每期售价 5 5.00 元,全年 6 6 0 元。刊 登 主 要 内 容: 激 光 光 谱 测 量、 红 外、 拉 曼、 紫 外、 可
见光谱、发射光谱、吸收光谱、 X 射线荧光光谱、激光 显 微 光 谱、光 谱 化 学 分 析、国 内 外 光 谱 化 学 分 析 领
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