‫الهندسة الوراثية‬

‫ا ل م ح ا ض ر ة ا ال و ل ى‬
 ‫‪ ‬‬

‫مدخل الى الهندسة الوراثية‬

 ‫‪ -I‬آ لياتا لهندسة ا لوراثية ‪:‬‬
‫‪ –l‬الوسائل المستعملة في الهندسة الوراثية ‪:‬‬
‫‪ -1.1‬البكتيريا‪:‬‬
‫يتم اإلعتماد على البكتيريا ‪ E.c‬في الهندسة الوراثية لعدة اعتبارات منها‪:‬‬
‫كائنات حية بسيطة سريعة التكاثر (تنقسم كل ‪ 20‬دقيقة)‪.‬‬
‫تتوفر على صبغي واحد و) عدة بالسميدات يمكن استغاللها كناقالت للمو)رثات‪.‬‬
‫لها سيتوبالزم غني بالجسيمات الريبية و العناصر الضرورية لتركيب البروتينات‪.‬‬
‫‪ -2.1‬أنزيمات القطع أو الفصل‪:‬‬
‫أنزيمات نوعية قادرة على التعرف في مستو)ى جزيئة ‪ ADN‬على تسلسل دقيق من النيكليوتيدات و قطع الجزيئة على مستواها‬
‫كل أنزيم فصل يحمل إسم النو)ع البكتيري الدي يستخلص منه ‪ .‬مثال‪ :‬األنزيم ‪ ، Eco-ri‬و الدي يتم عزله من البكتيريا ‪E.coli‬‬
‫هدا األنزيم يتعرف على التسلسل النيكليوتيدي …‪ ، ..…GAATTC..‬و يقوم بقطع بالقطع بين النيكليو)تيدين ‪ G‬و) ‪ ، A‬فينتج عن دلك تحرير أجزاء من‬
‫‪ ، ADN‬لها أطراف تسمى‪ :‬األطراف الموحدة ‪ ،‬قادرة على اإلرتباط بأطراف مو)حدة أخرى مطابقة و مكملة لها ‪ .‬مثال أنزيم) الفصل النوعي ‪EcoRI‬‬
‫وقد تم عزله من البكتيريا ‪Escherichia coli‬‬
‫‪ ‬‬
‫مثل هده األنزيمات تستعمل لقطع ‪ ADN‬الخاليا إلى مورثات ‪ ،‬ثم عزل المورثة المرغوب فيها من بين القطع المحصل عليها ‪.‬‬
‫تستعمل كدلك لفتح البالسميد كناقل بيو)لو)جي‪.‬‬
‫‪ ‬‬
‫‪ -3.1‬أنزيم الناسخ العكسي ‪.‬‬
‫أنزيم) يعمل على) تركيب جزيئة ‪ ADN‬انطالقا من من جزيئة ‪ ARNm‬المستخلصة من الخلية النشيطة ‪ ،‬و بهدا يتم تركيب المورثة التي ترمز لبروتين‬
‫معين انطالقا من ‪. ARNm‬‬
 ‫‪ -4.1‬أنزيمات الربط‪.‬‬
‫أنزيمات نوعية قادرة على ربط أجزاء ‪ ADN‬مقطوعة للمورثة و للناقل البيولوجي ‪ ،‬و دلك بربط األطراف الموحدة مع‬
‫بعضها البعض حسب تكامل القواعد األزوتية بين األطراف الموحدة للمورثة و األطراف الموحدة للبالسميد المفتوح‪.‬‬
‫‪ -5.1‬ناقل بيولوجي‪.‬‬
‫في أغلب الحاالت ‪ ،‬يستعمل البالسميد كناقل بيولوجي ‪ ،‬حيث يتم فتحه بواسطة نفس أنزيم الفصل ‪ ،‬فتصبح له أطراف‬
‫موحدة مكملة و مطابقة لألطراف الموحدة للمورثة‪.‬‬
‫‪ -2‬مراحل نقل مورثة إلى خلية معينة‪.‬‬
‫المرحلة أ ‪ :‬عزل المورثة المرغوب فيها‪.‬‬
‫‪ -1‬استخالص ‪ADN‬من الخاليا ‪.‬‬
‫‪ -2‬أو استخالص ‪ ARNm‬من الخاليا النشيطة‪.‬‬
‫‪ -3‬تقطيع ‪ ADN‬بواسطة أنزيمات الفصل ‪.‬‬
‫‪ -4‬عزل المورثة المرغوب فيها‪.‬‬
‫‪ -5‬تركيب ‪ ADN‬أحادي اللولب بواسطة انزيم الناسخ العكسي ‪.‬‬
‫‪ -6‬تركيب لولب مضاعف من ‪. ADNc‬‬
‫‪ ‬‬
 ‫المرحلة ب ‪ :‬عزل البالسميد الناقل و فتحه ‪.‬‬
‫‪ -7‬صبغي بكتيري‪.‬‬
‫‪ -8‬بالسميد بكتيري‪.‬‬
‫‪ -9‬عزل البالسميد البكتيري ‪.‬‬
‫‪ -10‬فتح البالسميد بواسطة أنزيم القطع ‪.‬‬
‫‪ ‬‬
‫المرحلة ت ‪ :‬دمج المورثة في البالسميد المفتوح بواسطة أنزيمات الربط‪.‬‬
‫المرحلة ج ‪ :‬دمج البالسميد المغير وراثيا في البكتيريا‪.‬‬
‫‪ -11‬بالسميد مغير وراثيا‪.‬‬
‫‪ -12‬بالسميد غير مغير‪.‬‬
‫المرحلة د ‪ :‬تلميم البكتيريا الحاملة للبالسميد المغير‪.‬‬
‫زرع البكتيريات الحاملة لـ ‪ ADN‬المغير وإعادة الزرع عدة مرات حتى الحصول على لمات تتوفر على‬
‫المورثة المرغوب فيها ‪ ،‬حيث يؤدي التكاثر البكتيري الى تكاثر البالسميدات‪.‬‬
‫المرحلة ه ‪ :‬رصد البكتيريا المغيرة وراثيا و تعبير المورثة إلنتاج البروتين المرغوب فيه‪.‬‬
‫يمكن تلخيص مراحل نقل مورثة خلية إلى بكتيريا في ‪:‬‬
‫‪-‬عزل المورثة المرغوب فيها ‪.‬‬
‫‪-‬عزل البالسميد و فتحه بواسطة أنزيمات الفصل‪.‬‬
‫‪-‬إدماج المورثة في البالسميد بواسطة أنزيمات الربط‪.‬‬
‫‪-‬إعادة البالسميد المغير وراثيا إلى البكتيريا‪.‬‬
‫‪-‬تلميم البكتيريا للحصول على لمات‪.‬‬
‫‪-‬رصد البكتيرا المغيرة وراثيا‪.‬‬
‫‪-‬تعبير المورثة و إنتاج المادة المرغوب فيها‪.‬‬
 ‫‪ -II‬ت طبيقاتا لهندسة ا لوراثية‪.‬‬
‫صيدلي‬
‫‪.‬‬ ‫‪ -l‬ف)))يا))لميدا)نا))لطبيو ا))ل‬
‫مثال‪ :‬اإلنتاج الصناعي لهرمون األنسولين‪.‬‬
‫األنسولين هرمون بيبتيد ‪ ،‬يتم تركيبه من طرف خاليا بنكرياسية تسمى بالخاليا بيتا‪ ،‬و يتدخل هدا الهرمون في تنظيم‬
‫تحلون الدم ( نسبة السكر في الدم)‪ ،‬بحيث يعتبر األنسولين هرمون مخفض لتحلون الدم في حالة ارتفاعه‪.‬‬
‫يتم حاليا إنتاج هرمون األنسولين باستعمال متعضيات مجهرية مثل خاليا الخميرة أو البكتيريا ‪ ،‬و ذلك عبر المراحل‬
‫التالية‪:‬‬
‫‪-‬استخراج المورثتين الخاصتين بالسلسلة ‪ A‬و السلسلة ‪ B‬لألنسولين البشري‪.‬‬
‫‪ -‬عزل بالسميدات ‪ ، E.c‬ثم إدماج المورثة ‪A‬في بالسميد و المورثة ‪ B‬في بالسميد آخر‪.‬‬
‫‪ -‬إدماج البالسميدات المغيرة في بكتيريا ‪.‬‬
‫‪ -‬تلميم البكتيريا و رصد البكتيريا المغيرة وراثيا‪.‬‬
‫‪ -‬توظيف هده البكتيريا إلنتاج السلسلتين ثم إنتاج هرمونات األنسولين‪.‬‬
 ‫‪ -2‬اإلنتاج الصناعي لبروتينات سامة لمحاربة الحشرات الضارة‬
‫مثال ‪ :‬انتاج نباتات التبغ مقاومة لألسروعة ‪Manduca sextaa‬‬
‫تتعرض بعض النباتات للضياع و اإلتالف بفعل تأثير بعض الحشرات ‪ ،‬خصوصا األسروعات ‪،‬مثل‪Manduca :‬‬
‫‪ ، sexta‬التي تستهلك أوراق التبغ‪ .‬بينت تجارب أنجزت حول ظروف عيش الحشرة ‪ Manduca sexta‬أنها ال‬
‫تستطيع العيش بوجود بكتيريا من نوع ‪. Bacillus thuringiensis‬‬
‫قام الباحثون بعزل عدد من مكونات البكتيريا ‪ Bacillus thuringiensis‬ووضعها بوجود الحشرة‬
‫‪ Manduca sexta‬فتوصلو الى عزل مواد سامة تنتجها البكتيريا ‪ Bacillus thuringiensis‬وتقضي على‬
‫هذه الحشرة ‪ :‬هذه المواد هي عبارة عن بروتينات تشكل بلورات داخل البكتيريا وتؤدي الى تحلل خاليا األنبوب الهضمي‬
‫لألسروعة ‪.‬‬
‫تم تحديد المورثة المسؤولة عن تركيب البروتين السام عند ‪ ،Bacillus thuringiensis‬و نقلها لخاليا نباتية لتصبح‬
‫قادرة على مقاومة األسروعات ‪.‬‬
 ‫أمثلة‪:‬‬
‫‪ -‬تغيير النبات وراثيا ليصبح مقاوما لألمراض و الطفيليات أو لمقاومة التجمد‪.‬‬
‫‪ -‬تغيير بعض أنواع الماشية حتى تنتج كميات وافرة من اللحم أو الحليب أو الصوف‪ ( ....‬دجاج ضخم )‬
‫‪ -‬تغيير بعض المتعضيات المجهرية لتنتج أدوية كالمضادات الحيوية و األنسولين ‪..‬‬
‫‪ -‬تغيير النبات وراثيا ليصبح ذو حجم أكبر (اللوبيا ‪ .‬البطيخ‪ ) ...‬أو ليبقى صالحا لمدة أطول ( الطماطم البطيخ ‪.)...‬‬
‫‪ -‬استعمال بعض النباتات و البكتيريات كمعامل بيولوجية إلنتاج مواد بشرية ضرورية لعالج بعض األمراض‬
‫( أدوية معالجة مشاكل تختر الدم ‪.)...‬‬
‫‪ -‬تكوين أصناف جديدة من النباتات و الحيوانات( فهناك مثال أبحاث لجعل لحم الخنازير أقل غنى بالشحوم‬
‫خصوصا الكولسترول و أبحاث أخرى لجعل األبقار تدر الحليب طيلة السنة بدون توقف)‪.‬‬
‫‪ -‬إنتاج خضر و فواكه‪ (.‬موز – بطاطس‪ )...‬تحتوي على لقاحات لبعض األمراض مما سمح بتقليص كبير للتكاليف‬
‫الباهظة إلنتاج اللقاحات ‪.‬‬
‫‪ -‬محاولة إنتاج قطن أكثر متانة من القطن العادي و له ألوان متعددة لتجنب استعمال المواد الصابغة الشديدة التلويث‬
‫للطبيعة‪.‬‬