CAPILLARYS PROTEIN(E) 6

Ref. 2003
Ref. 2023*

2014/06

CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 - 2014/06

NAMENA

Pakovanje CAPILLARYS PROTEIN(E)-a je namenjeno za separaciju humanih seruma i proteina urina u alkalnom puferu (pH 9,9) kapilarnom
elektroforezom sa sistemom CAPILLARYS.
Normalni proteini seruma se separiraju u est glavnih frakcija.
Proteini urina se separiraju u pet zona, nakon pripreme uzoraka urina sa pakovanjem CAPILLARYS / MINICAP URINE (Pogledati uputstvo za
upotrebu u pakovanju CAPILLARYS / MINICAP URINE, SEBIA, PN 2013).
CAPILLARYS je potpuno automatizovan sistem koji priprema proteine za kvalitativne i kvantitativne analize. Proteini, razdvojeni u silicijumskim
kapilarama, direktno se odredjuju merenjem apsorbance na 200 nm. Elektroforegramom se vizuelno moe otkriti svaki oblik abnormalnosti. Direktno
odredjivanje omoguava tano relativno kvantitativno merenje pojedinanih proteinskih frakcija.
Za in vitro dijagnostiku primenu.

NAPOMENA : U ovom uputstvu za upotrebu, naziv "CAPILLARYS" se koristi za automatske instrumente CAPILLARYS, CAPILLARYS 2 i
CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING.

PRINCIP TESTA

Elektroforeza proteina je tehnika koja se rutinski koristi u klinikim laboratorijima za proveravanje prisustva abnormalnih proteina u uzorcima.
CAPILLARYS je proizveden kako bi omoguio potpunu automatizaciju ovog testa s brzom separacijom i dobrom rezolucijom. Metoda se u mnogim
pogledima moe smatrati prelaznom tehnikom izmedju klasine elektroforeze i tene hromatografije.
CAPILLARYS sistem koristi princip kapilarne elektroforeze u slobodnom rastvoru. Pomou ove tehnike naelektrisani molekuli razdvajaju se prema
svojoj elektroforetskoj pokretljivosti u alkalnom puferu specifinog pH. Razdvajanje se, takodje, odvija na osnovu pH vrednosti elektrolita i
elektroosmotskog toka. CAPILLARYS sistem ima 8 kapilara koje rade paralelno i tako omoguavaju 8 istovremenih analiza. Prethodno pripremljeno
razblaenje uzorka s puferom usisa se na anodnom kraju kapilare. Zatim se vri visokonaponska separacija proteina koji se direktno odredjuju na
200 nm na katodnom kraju kapilare. Kapilare se odmah ispiraju rastvorom za ispiranje i pripremaju za sledeu separaciju sa puferom.
Proteini se, u svakoj zoni koja sadri jedan ili vie proteina, odredjuju prema sledeem rasporedu: gama globulini, beta-2 globulini, beta-1 globulini,
alfa2 globulini, alfa-1 globulini i albumin.

REAGENSI I MATERIJAL PRILOEN U PAKOVANJIMA CAPILLARYS PROTEIN(E) 6

UPOZORENJE : Pogledajte listove sa bezbednosnim podacima.
PROIZVODI
Pufer (spreman za upotrebu)
Rastvor za ispiranje (nerazblaen)
Segmenti za razblaivanje
Filteri

KAT. br. 2003

2 boice, 700 mL svaka
1 boica, 75 mL
1 pakovanje od 90 komada
3 filtera

* CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 MAXI-KIT

KAT. br. 2023*

8 boice, 700 mL svaka
4 boice, 75 mL svaka
4 pakovanja od 90 komada
12 filtera

ZA OPTIMALNE REZULTATE :
Svi reagensi iz istog pakovanja moraju se koristiti zajedno i prema uputstvu za upotrebu.
MOLIMO, PALJIVO PROITATI UPUTSTVO ZA UPOTREBU.

UPOZORENJE : Nemojte koristiti dejonizovanu vodu koju moete kupiti na tritu, kao to je na primer voda za peglanje (rizik od velikog
oteenja kapilare). Koristite vodu samo izuzetne istoe, kao to je voda za injekcije.

1. PUFER

Priprema

Pufer je spreman za upotrebu. On sadri : rastvor pufera pH 9,9 0,5 ; aditive, nisu opasni u koncetracijama primenjenim za dobijanje optimalne
performanse.

Namena

Pufer za razdvajanje proteina kapilarnom elektroforezom.

uvanje, stabilnost i znaci propadanja

uvati pufer na sobnoj temperaturi (15 do 30 C) ili u friideru (2 do 8 C). Stabilan je do datuma isteka roka oznaenog na pakovanju ili na etiketi
boice pufera. Izbegavati dranje u blizini prozora ili izvora toplote.
NAPOMENA: Ako se pufer uva na temperaturi 2 8 C, zagrejati ga na sobnu temperaturu pre upotrebe.
NE ZAMRZAVATI!
Kada se boica sa puferom otvori i postavi na instrument CAPILLARYS, pufer je stabilan najvie 2 meseca (ukupno). Ako se planira da se boica sa
puferom koristi vie od 2 meseca, ona mora da se ukloni iz instrumenta nakon svake upotrebe i da se uva na sobnoj temperaturi (na temperaturi od
15 do 30 C) ili u friideru (na temperaturi izmeu 2 i 8 C), onda je stabilan do isteka roka trajanja oznaenog na nalepnici boice sa puferom.
Baciti pufer ukoliko promeni izgled, npr. zamuti se zbog mikrobioloke kontaminacije.

2. RASTVOR ZA ISPIRANJE

Priprema

Boicu sa nerazblaenim rastvorom za pranje treba razblaiti sa do 750 mL destilovane ili dejonizovane vode.
Nakon razblaivanja, rastvor za pranje sadri alkalni rastvor pH 12.

Namena

Za ispiranje kapilara posle elektroforetskog razdvajanja proteina.

VANO: Pre nego to se napuni posuda rastvora za pranje, preporuuje se da se opere otvor posude, konektor i epruveta sa puno destilovane ili
dejonizovane vode da se izbegne taloenje soli.
- 92 -

SEBIA UPUTSTVO ZA UPOTREBU - Srpski

CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 - 2014/06

uvanje, stabilnost i znaci propadanja

Nerazblaen i radni rastvor za ispiranje uvati u zatvorenoj boci na sobnoj temperaturi ili u friideru. Nerazblaen rastvor za ispiranje stabilan je do
roka trajanja naznaenog na pakovanju ili etiketi boice.
Radni rastvor za razblaivanje stabilan je 3 meseca.
Baciti rastvor za ispiranje ukoliko promeni izgled, npr. zamuti se zbog mikrobioloke kontaminacije.

3. SEGMENTI ZA RAZbLAIVANJE

Namena

Segmenti su namenjeni za jednokratnu upotrebu za razblaivanje uzorka na automatskom instrumentu.

UPOZORENJE: Sa segmentima za razblaivanje koji sadre bioloki materijal treba paljivo rukovati.

4. FILTERI

Namena

Potroni filteri za filtraciju pufera za razdvajanje, radnog rastvora za ispiranje i destilovane vode (koriene za ispiranje kapilara).
VANO: Kada se menja pakovanje, izvrite sistematski zamenu svih filtera.
Privrstiti jedan filter na konektor smeten na kraju svakog creva uronjenog u boicu pufera, rastvora za ispiranje i destilovanu ili dejonizovanu vodu.
Kod postavljanja filtera na CAPILLARYS sistem, konektor i creva treba isprati destilovanom ili dejonizovanom vodom.

uvanje

Do upotrebe filtere uvati u njihovom zatvorenom pakovanju na suvom mestu i sobnoj temperaturi ili u friideru.

REAGENSI KOJI SU POTREbNI ALI NISU PRILOENI

UPOZORENJE : Pogledajte listove sa bezbednosnim podacima.

1. DESTILOVANA ILI DEJONIZOVANA VODA

Namena

Za ispiranje kapilara u automatizovanom CAPILLARYS sistemu, SEBIA, za kapilarnu elektroforezu.

Preporuka je da se koristi filtrirana destilovana ili dejonizovana voda (na filteru ija je poroznost 0,45 m) ija otpornost je vea od 10 megaoma x cm.
Svakog dana promeniti vodu kako bi se spreio mikrobioloki rast.
Za optimalan rad, dodajte 35 L/dL CLEAN PROTECT (SEBIA, PN 2059, 1 boica od 5 mL).
VANO: Pre punjenja boce za ispiranje, preporuuje se ispiranje s dosta destilovane ili dejonizovane vode.

2. CAPICLEAN

Sastav

Boica koncentrovanog rastvora CAPICLEAN-a (SEBIA, kat. br. 2058, 25 mL) sadri: proteolitike enzime, povrinski aktivne materije i aditive,
bezbedne pri korienoj koncentraciji, neophodne za optimalna izvodjenja.

Namena

Za nedeljno pranje sonde za uzorkovanje u automatizovanom sistemu CAPILLARYS, SEBIA, za kapilarnu elektroforezu tokom redosleda ienja
CAPICLEAN-om.
VANO :
- Kada se analizira manje od 500 uzoraka u toku jedne nedelje, makar jedanput nedeljno pokrenite CAPICLEAN sekvencu ienja.
- Kada se manje od 500 uzoraka analizira u toku jednog dana, ali vie od 500 uzoraka u toku jedne nedelje, pokrenite CAPICLEAN sekvencu ienja
na svakih 500 analiza.
- Kada se analizira vie od 500 uzoraka u toku dana, pokrenite CAPICLEAN sekvencu ienja jedanput dnevno.
Pogledati uputstvo za upotrebu za CAPICLEAN, SEBIA.
VANO: Nemojte ponovo koristiti razblaeni segment nakon ienja sonde za uzorkovanje.

uvanje, stabilnost i znaci propadanja

CAPICLEAN uvati u friideru (2 8 C). Stabilan je do datuma roka trajanja naznaenog na etiketi boice.
NE ZAMRZAVATI!
U boici CAPICLEAN moe se uoiti talog ili kombinovane estice (flokule) bez neeljenih efekata na njegovu upotrebu.
Nemojte rastvarati ovaj talog ili ove estice. Preporuka je da se sakuplja samo supernatant.

3. RASTVOR NATRIJUM HIPOHLORIDA (za ienje igle za uzorke)

Priprema

Pripremite hlorisani natrijum hipohlorit (2 % do 3 % hlorid) razblaivanjem 250 mL 9,6 % koncentrovanog rastvora hlorida na 1 litar hladne destilovane
ili dejonizovane vode.

Namena

Za ienje igle za uzorke u CAPILLARYS sistemu (nedeljno odravanje kako bi se s igle uklonili apsorbovani proteini).
Pogledati uputstvo za upotrebu za CAPILLARYS, SEBIA.
Uzeti nosa za uzorke (br. 100).
Na poziciju 1 ovog nosaa staviti epruvetu koja sadri 2 mL prethodno pripremljenog razblaenog rastvora hlora.
Staviti nosa za uzorke br. 100 u CAPILLARYS sistem.
Na prozoru "MAINTENANCE" (Odravanje) koji se pojavljuje na ekranu, odaberite "Launch the probe cleaning (chlorinated sodium hypochlorite
solution)" (Pokrenite ienje sonde (hlorisani natrijum hipohlorit rastvor)) i potvrdite.

uvanje, stabilnost i znaci propadanja

uvajte radni hlorisani rastvor na sobnoj temperaturi u zatvorenoj posudi, stabilan je 3 meseca. Izbegavajte da stoji izloen na sunevoj svetlosti, blizu
izvora toplote ili paljenja, kao i kiselina i amonijaka.
- 93 -

CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 - 2014/06

4. CAPILLARYS / MINICAP RASTVOR ZA ISPIRANJE

Priprema

Svaku boicu nerazblaenog CAPILLARYS / MINICAP rastvora za ispiranje (SEBIA, kat. br. 2052, 2 boice, 75 mL) treba razblaiti destilovnom ili
dejonizovanom vodom do zapremine od 750 mL.
Nakon razblaivanja, rastvor za pranje sadri alkalni rastvor pH 12.

Namena

Za ispiranje kapilara u CAPILLARYS-u. Kada je broj testova u seriji manji od 40, neophodna je dodatna koliina reagensa.
VANO: Pre nego to se napuni posuda rastvora za pranje, preporuuje se da se opere otvor posude, konektor i epruveta sa puno destilovane ili
dejonizovane vode da se izbegne taloenje soli.

uvanje, stabilnost i znaci propadanja

Nerazblaen i radni rastvor za ispiranje uvati u zatvorenoj boci na sobnoj temperaturi ili u friideru.
Nerazblaen rastvor za ispiranje stabilan je do roka trajanja naznaenog na pakovanju ili etiketi boice.
Radni rastvor za ispiranje stabilan je 3 meseca. Baciti rastvor za ispiranje ukoliko promeni izgled, npr. zamuti se zbog mikrobioloke kontaminacije.
NAPOMENE :

Probe koje su izvrene za validaciju reagenasa pokazale su da, za razliite rastvore i upotrebom prilagoene opreme za zapreminu rekonstitucije,
varijacija od 5 % na krajnju zapreminu nema neeljenih efekata na analizu.
U destilovanoj ili dejonizovanoj vodi koja je upotrebljena za razblaivanje rastvora, ne sme da rayvijaju bakterije ili bu (upotrebite filter 0,45 m) i
treba da imate otpornost veu od 10 megaoma x cm.

POTREbNA OPREMA I PRIbOR

1. CAPILLARYS System SEBIA : CAPILLARYS PN 1220, CAPILLARYS 2 PN 1222 ili CAPILLARYS 2 FLEX-PIERCING PN 1227.
2. Nosai za uzorke isporueni uz CAPILLARYS.
3. Boce isporuene uz CAPILLARYS: za ispiranje destilovanom ili dejonizovanom vodom i za otpad.

UZORCI ZA ANALIZU

ANALIZA UZORAKA SERUMA

Prikupljanje i uvanje uzoraka

Za analizu se preporuuju svei serumski uzorci. Serum se mora prikupiti prema utvrdjenom postupku korienom u klinikom laboratorijskom
testiranju. Uzorci se mogu uvati do 10 dana na temperaturi izmedju 2 i 8 C. Uzorci koji se uvaju due moraju se zamrznuti najkasnije 8 sati od
prikupljanja. Zamrznuti serum stabilan je mesec dana.
Kod seruma koji se uvaju na temperaturi izmedju 2 i 8 C, raspadanje proteina, a posebno komponenti komplementa, najvie zavisi od samog uzorka.
S raspadanjem progresivno se smanjuje beta-2 frakcija, a moe doi i do njenih promena pojavom malih frakcija u gamma zoni i/ili u beta-1 frakciji.
Alfa-2, takodje moe biti lagano izmenjena.
Posle 10 dana uvanja u friideru (2 8 C) beta-1 frakcija moe se poveati uz odsustvo beta-2 frakcije.

NAPOMENA: Tokom njihovog transporta, uzorci mogu da se dre na sobnoj temperaturi do 5 dana. Posebno se preporuuje da se transportuju na
temperaturi od 2 do 8 C.

Priprema uzorka

Koristiti nerazblaene uzorke seruma.

Posle uvanja na temperaturi 2 8 C ili zamrzavanja, neki serumi (posebno oni koji sadre krioglobulin ili kriogel) mogu postati viskozni ili mogu
stvoriti talog. Na sobnoj temperaturi ti se uzorci mogu direktno analizirati. Uzorci koji sadre polimerizovane imunoglobuline mogu se koristiti bez
prethodne obrade. Pre separacije poeljno je proveriti izgled seruma (hemoliza, krioglobulini ili zamuenje).

Uzorci koje treba izbegavati

Ne koristiti hemolizovani serum. Hemoliza dovodi do pojave dvostruke alfa-2 zone.

Izbegavati stare, nepravilno uvane uzorke seruma jer kod ovih uzoraka moe doi do smanjenja beta-2 frakcije.
Izbegavajte uzorke plazme. Fibrinogen prelazi u poziciju beta-2 (ivica na beta-2 ili pojaan sa zonom beta-2 tako da postoji moguost rasta ove
frakcije). Kada je prisutan u nekim uzorcima (plazma, serum iz koga nije u potpunosti uklonjen fibrinogen ili kod pacijenta sa antikoagualacionim
tretmanom), fibrinogen moe da utie na analizu i na preciznost tumaenja (poveava se sumnja na monoklonalni lanac ili beta-2 frakciju). Kada se
analizira stariji uzorak plazme (nije preporuljivo), C3 dodatak koji vremenom postaje nestabilan delimino degradira, tada uglavnom zona beta-2
odgovara fibrinogenu.

ANALIZA UZORAKA URINA

Pogledati uputstvo za upotrebu u pakovanju CAPILLARYS / MINICAP URINE, SEBIA, PN 2013.

NAPOMENA : Epruvete za sakupljanje biolokih uzoraka opisane su u dostupnoj dokumentaciji za predanalitiku fazu biomedicinske analize (podaci
koje obezbeuju proizvoai epruveta, uputstva i preporuke o sakupljanju biolokih uzoraka). Ukoliko nema nikakvih indikacija o tipu epruveta koje
treba koristiti u uputstvu za upotrebu, pogledajte ovu dokumentaciju, a za dimenzije epruveta koje treba koristiti, pogledajte SEBIA dokument
"Characteristics of tubes to use according to the instrument" (Karakteristike epruveta koje treba koristiti u skladu sa instrumentom). Predanalitika faza
mora da se izvodi u skladu sa najnovijim, razliitim preporukama, ukljuujui one koje obezbeuju proizvoai epruveta, kao i primenjivim propisima.

- 94 -

CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 - 2014/06

POSTUPAK

CAPILLARYS je vieparametarski instrument za analizu serumskih proteina na 8 paralelnih kapilara koja se vri sledeim redosledom:
itanje bar koda s epruveta uzorka (do 8 epruveta) i nosaa za uzorke ;
Razblaivanje uzorka iz primarne epruvete u segmentu za razblaivanje ;
Ispiranje kapilara ;
Ubrizgavanje razblaenih uzoraka ;
Separacija proteina i direktno odredjivanje na kapilarama.
Koraci koji se runo izvode ukljuuju:
Smetanje epruveta uzoraka u nosae za uzorke ;
Smetanje nosaa u CAPILLARYS instrument ;
Uklanjanje nosaa za uzorke posle separacije.

PALJIVO PROITATI UPUTSTVO ZA UPOTREBU ZA CAPILLARYS.

I. PRIPREMA ZA RAD

1. Ukljuiti CAPILLARYS instrument i raunar.

2. Pokrenuti PHORESIS software i aparat je spreman za rad.
3. CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 pakovanje namenjeno je za korienje s "PROTEIN(E) 6" programom separacije u CAPILLARYS instrumentu.
Za "PROTEIN(E) 6" program separacije i smetanje boce s CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 puferom u instrument, paljivo proitati uputstvo za
upotrebu za CAPILLARYS.
4. Nosa za uzorke sadri 8 pozicija za epruvete s uzorkom. Staviti 8 epruveta s uzorkom u svaki nosa ; bar kod svake epruvete mora biti vidljiv
na otvoru nosaa za uzorke.
VANO: Ukoliko je broj uzoraka koje treba obraditi manji od 8, nosa za uzorke treba dopuniti s epruvetama koje sadre destilovanu ili
dejonizovanu vodu.

5. Postavite novi razblaeni segment na svaki nosa uzoraka. Nosa za uzorke e biti izbaen ako segment nedostaje.
6. Kroz otvor u sredini instrumenta staviti nosa(e) u CAPILLARYS sistem. Do 13 nosaa za uzorke moe se uspeno i u kontinuitetu staviti u
sistem. Preporuuje se korienje nosaa br. 0 koji je namenjen za kontrolni serum.
7. Ukloniti nosae s obradjenim uzorcima s podloge na levoj strani instrumenta.
8. Paljivo skloniti korieni segment za razblaivanje s nosaa i baciti ga.
UPOZORENJE: Sa segmentima za razblaivanje koji sadre bioloki materijal treba paljivo rukovati.

RAZbLAIVANJE - MIGRACIJA - OPIS AUTOMATIZOVANIH KORAKA

1. itanje bar koda na epruvetama s uzorcima i na nosaima.

2. Razblaivanje uzoraka u puferu, a igla za razblaivanje ispira se posle svakog uzorka.
3. Ispiranje kapilara.
4. Ubrizgavanje razblaenih uzoraka u kapilare.
5. Migracija traje oko 4 minuta pod stalnim naponom kontrolisanim Peltierovim efektom.
6. Direktno odredjivanje proteina merenjem apsorbance na 200 nm, a elektroforetski profil se pojavljuje na ekranu sistema.
NAPOMENA: Ovi koraci su opisani za prvi stavljeni nosa s uzorcima. Elektroforetske slike rezultata pojavljuju se posle 10 minuta. Za sledee nosae,
prva dva koraka (oitavanje bar koda i razblaivanje uzorka) uinjena su za vreme obrade prethodnog nosaa s uzorcima.

II. REZULTATI ANALIZE

Na kraju analize, relativno kvantitativno odredjivanje pojedinih zona radi se automatski i profili se mogu analizirati. S ukupnom koncentracijom proteina
sistem e izraunati koncentraciju svake frakcije.
Elektroforegrami se vizuelno tumae na abnormalnosti.
Elektroforetski profili se vizuelizuju korienjem re-drawn modu rada: tada je alfa-1 frakcija blia albuminu.
Standardni nain rada (Standard mode) dozvoljava prikaz rezultata dobijenog iz neobradjenih podataka.
PALJIVO PROITATI UPUTSTVO ZA UPOTREBU ZA CAPILLARYS.

III. ZAVRETAK POSTUPKA SEPARACIJE

Na kraju rada operater mora da pokrene "stand by" ili "shut down" proceduru na CAPILLARYS sistemu kako bi se kapilare sauvale u optimalnom
stanju.

IV. PUNJENJE bOCA S REAGENSIMA

CAPILLARYS sistem ima automatsku kontrolu reagensa.

VANO: Pogledati uputstva za zamenu boca s reagensima vodei rauna o boji koda za boice i konektore.
Na ekranu e se pojaviti poruka kada je neophodno izvesti jednu od sledeih radnji:
Staviti novu boicu pufera i/ili ;
Napuniti bocu s radnim rastvorom za ispiranje i/ili ;
Napuniti bocu s filtriranom destilovanom ili dejonizovanom vodom za ispiranje kapilara ;
Isprazniti bocu za otpad.

UPOZORENJE : Nemojte koristiti dejonizovanu vodu koju moete kupiti na tritu, kao to je na primer voda za peglanje (rizik od velikog
oteenja kapilare). Koristite vodu samo izuzetne istoe, kao to je voda za injekcije.

VANO: Pre punjenja bocu za ispiranje isprati s dosta destilovane ili dejonizovane vode.
PALJIVO PROITATI UPUTSTVO ZA UPOTREBU ZA CAPILLARYS.

- 95 -

CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 - 2014/06

KONTROLA KVALITETA

Preporuuje se korienje kontrolnog seruma za svaki postupak separacije.

REZULTATI
Vrednosti

Direktno odredjivanje u kapilarama na 200 nm daje relativne koncentracije (procenat) pojedinanih proteinskih zona.
Normalne vrednosti (srednja 2 SD) za pojedinane glavne elektroforetske serumske proteinske zone u CAPILLARYS sistemu utvrdjene su kod
zdrave populacije od 246 odraslih osoba s normalnim nivoom triglicerida (mukarci i ene):
Albumin
Alfa-1 globulini
Alfa-2 globulini
Beta globulini
Beta-1 globulini
Beta-2 globulini
Gamma globulini

Preporuuje se da svaka laboratorija odredi sopstvene normalne vrednosti.

CAPILLARYS PROTEIN(E) 6
55,8 - 66,1 %
2,9 - 4,9 %
7,1 - 11,8 %
8,4 - 13,1 %
4,7 - 7,2 %
3,2 - 6,5 %
11,1 - 18,8 %

NAPOMENA: Normalne vrednosti ustanovljene su korienjem standardnih parametara CAPILLARYS programa ("smoothing 2" i "automatic drift").

Tumaenje rezultata

C4 komplement migrira izmedju beta-1 i beta-2 zona ; CRP migrira u beta-2 poziciju, pogledati primere ELEKTROFORETSKE SLIKE REZULTATA.
Relativni rast zone beta-2 u poreenju sa zonom beta-1, bez klinikog sadraja inflamatornog oboljenja, mora da bude signal upozorenja da se obave
dodatne analize.
Ako postoji sumnja u vezi sa tumaenjem ablona i / ili pozicioniranja najmanje mogue koliine (posebno kada se analizira spoljna kontrola),
neophodno je preklopiti dobijeni ablon sa ablonom normalnog kontrolnog seruma (SEBIA, PN 4785).
Moe se posumnjati na monoklonalnu komponentu u uzorku seruma kada se pojavi znak upozorenja na ekranu "Upozorenje: Centriranje pomeranja
je van opsega" ili kada postoji zastoj kod elektroforetske eme ili kada je izmenjena. Da bi se potvrdilo prisustvo monoklonalne komponente u uzorku
seruma, potrebno je tretirati uzorak sa beta-merkaptoetanolom i ponoviti analizu na uzorku posle redukcionog tretmana. U tom sluaju (i) pripremite
1 % beta-merkaptoetanola (BME, ili 2-merkaptoetanola, 2 ME) u Fluidil-u (SEBIA, PN 4587, 1 boica 5 mL), (ii) CAPILLARYS sistem koji je spreman
da se u njega postavi nosa, dodajte 100 L ovog redukcionog rastvora u 300 L istog seruma, (iii) promeajte i saekajte maksimalno 15 minuta, a
zatim sledite standardnu proceduru.
VANO : Posle tretmana smanjivanja sa beta-merkaptoetanolom, uzorak mora biti analiziran bez odlaganja ; nosa sa uzorcima koji je unet u sistem
CAPILLARYS, ne sme da eka na analizu.
Identifikacija se preporuuje za utvrivanje monoklonalnih ili oligoklonalnih komponenti :
- imunotipizacija sa SEBIA CAPILLARYS IMMUNOTYPING,
- imunofiksacija sa SEBIA HYDRAGEL.
Za pomo pri tumaenju elektroforegrama serumskih proteina, pogledati LITERATURU.
Alfa-2 zona:
U nekim uzorcima i prema haptoglobinskom fenotipu, alfa-2 zona moe se razdvojiti ; pogledati primere ELEKTROFORETSKE SLIKE REZULTATA.

Smetnje i ogranienja

Vidi poglavlje UZORCI ZA ANALIZU.

Kada su lipoproteini / trigleceridi ili bilijarni pigmenti (sa karakteristinom utozelenom bojom seruma) sa visokim koncetracijama u uzorku mogu da
stvore vizuelni utisak bisalbmunemije na elektroforetskom ablonu.
Ako se posumnja na kontaminaciju (veoma retko) izmeu dva uzorka seruma, zbog prisustva nekih monoklonalnih proteina (npr. sa visokom
koncetracijom), preporuuje se ponavljanje analiza na izloenim uzorcima (kontaminiranim ili potencijalno kontaminiranim) selektovanjem posebnog
pranja probe uzorka izmeu dva uzorka, obuhvaenih programom analize "PROTEIN(E) 6" (opcija "Pranje probe seruma").
Ova opcija omoguava specifino pranje za sve uzorke analizirane tehnikom CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 (Primedba : rezultat analize se deli sa 2).
PALJIVO PROITAJTE UPUTSTVO ZA RUKOVANJE ZA CAPILLARYS-om.
Zbog rezolucije i granica osetljivosti zona elektroforeze, moe se dogoditi da neke monoklonske komponente ne budu otkrivene ovom metodom.
Moda se nee otkriti monoklonalna komponenta (tj. u sluaju polimerizovanog imuglobulina koji je razmazan ili prikriven u poliklonalnoj osnovi). S
druge strane, blago odstupanje elektroforetskog ablona moe da ukae na prisustvo monoklonalnog imunoglobulina. U svim sluajevima mora da se
analizira kliniki sadraj i ako se sumnja na gamopatiju, onda se preporuuje da se izvede analiza imunotipizacije na uzorku. Ako i dalje postoji sumnja,
rezultat potvrdite tehnikom imunofiksacije na agaroza gelu.

Problemi u radu

Ukoliko se pojavi problem s testom, a priprema i uvanje materijala kao i sam postupak testa izvedeni su prema propisu, nazvati SEBIA tehniku
slubu dobavljaa.
Dokumentacija o sigurnosti pakovanja reagensa i informacije o reavanju otpada dostupne su kod nae tehnike slube.

PODACI O IZVODJENJU

Rezultati dobijeni CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 postupkom ukazuju na vrlo dobru reproducibilnost za kvantitativnu analizu sa srednjom vrednou
CV % od 2,0 % za svaku frakciju proteina.
Rezultati prikazani u tabeli koja sledi dobijeni su korienjem standardnih parametara CAPILLARYS softvera ("smoothing 2" i "automatic drift").
- 96 -

CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 - 2014/06

Reproducibilnost u seriji

Pet (5) razliitih uzoraka seruma analizirano je na 8 kapilara postupkom CAPILLARYS PROTEIN(E) 6, korienjem dve razliite serije pufera za
separaciju. Srednja vrednost, SD i CV (n = 8), izraunata je za svaki uzorak, svaku zonu i svaku seriju pufera.
U tabeli su prikazane vrednosti 5 testiranih uzoraka, za 4 glavne frakcije proteina i dve serije pufera.
FRAKCIJA

ALbUMIN

Serum A: serijski broj 1 / serijski broj 2

SREDNJA VREDNOST %
60,8 / 60,6
SD
0,3 / 0,4
CV (%)
0,5 / 0,6
Serum B: serijski broj 1 / serijski broj 2
SREDNJA VREDNOST %
61,8 / 61,9
SD
0,3 / 0,5
CV (%)
0,4 / 0,8
Serum C: serijski broj 1 / serijski broj 2
SREDNJA VREDNOST %
60,6 / 60,9
SD
0,5 / 0,3
CV (%)
0,8 / 0,5
Serum D: serijski broj 1 / serijski broj 2
SREDNJA VREDNOST %
62,6 / 62,5
SD
0,5 / 0,5
CV (%)
0,8 / 0,9
Serum E: serijski broj 1 / serijski broj 2
SREDNJA VREDNOST %
47,6 / 47,0
SD
0,5 / 0,6
CV (%)
1,0 / 1,3
SD MAX
CV (%) MAX

1,2
2,0

ALFA-1

3,8 / 3,7
0,1 / 0,1
2,6 / 1,9

ALFA-2

4,7 / 4,8
0,1 / 0,2
2,6 / 3,4

15,8 / 16,1
0,1 / 0,2
0,9 / 1,2

10,6 / 10,3
0,1 / 0,1
1,3 / 1,3

5,9 / 6,0
0,1 / 0,1
1,5 / 1,8

4,4 / 4,4
0,2 / 0,1
3,6 / 2,9

14,2 / 14,0
0,1 / 0,2
0,9 / 1,3

4,1 / 4,1
0,1 / 0,1
2,1 / 3,5

9,0 / 8,8
0,2 / 0,3
2,1 / 2,9

0,4
7,0

GAMMA

6,1 / 6,3
0,1 / 0,1
1,8 / 2,2

10,7 / 10,4
0,1 / 0,1
1,0 / 1,3

5,2 / 5,2
0,2 / 0,2
4,1 / 3,1

bETA-2

8,8 / 8,5
0,2 / 0,2
2,8 / 1,8

4,5 / 4,4
0,1 / 0,05
2,5 / 1,1
4,4 / 4,4
0,1 / 0,1
3,0 / 3,0

bETA-1

7,5 / 7,3
0,2 / 0,2
2,7 / 2,9
0,7
7,0

5,9 / 6,1
0,1 / 0,1
1,4 / 2,3

6,3 / 6,6
0,1 / 0,2
1,6 / 2,7
5,5 / 5,7
0,1 / 0,1
1,7 / 2,3
0,7
7,0

4,3 / 4,4
0,2 / 0,2
3,7 / 4,0

4,3 / 4,3
0,1 / 0,1
2,8 / 2,4
5,4 / 5,5
0,2 / 0,2
3,7 / 2,8
0,5
7,0

12,9 / 12,9
0,1 / 0,2
1,2 / 1,6

13,6 / 13,7
0,2 / 0,2
1,6 / 1,4
28,8 / 29,3
0,5 / 0,3
1,7 / 1,2
0,5
4,0

NAPOMENA : Maksimalna vrednost za standardno odstupanje i koeficijent varijacije (SD MAX i CV (%) MAX) utvreni su dodatnim analizama
reproduktibilnosti kontrolnih seruma koje su izvrene na seriji instrumenata. One su nezavisne od vrednosti oznaene u gornjoj tabeli sa rezultatima.

Reproducibilnost izmedju serija

Osam (8) razliitih uzoraka seruma testirano je 10 puta na 8 kapilara postupkom CAPILLARYS PROTEIN(E) 6, korienjem tri razliite serije pufera
za separaciju. Srednja vrednost, SD i CV (n = 10), izraunata je za svaki uzorak, svaku zonu i svaku seriju pufera.
U tabeli su prikazane granine vrednosti za 8 testiranih uzoraka i 3 razliite serije pufera kao i srednja vrednost izraunata iz srednjih vrednosti svake
frakcije (n = 24).
FRAKCIJA
Albumin
Alfa-1
Alfa-2
Beta-1
Beta-2
Gamma

SREDNJA VREDNOST (%)

46,5 - 64,6
3,0 - 5,3
7,5 - 11,1
4,6 - 7,0
3,7 - 6,6
9,4 - 29,4

Reproducibilnost izmedju razliitih serija pufera

SD

0,1 - 0,7
0,04 - 0,2
0,1 - 0,3
0,1 - 0,3
0,1 - 0,2
0,1 - 0,3

CV (%)

0,2 - 1,2
1,1 - 4,0
0,6 - 3,0
1,0 - 5,0
1,1 - 3,8
0,6 - 2,1

SREDNJA VREDNOST CV (%)

0,6
2,6
1,7
2,2
2,2
1,0

Osam (8) razliitih uzoraka seruma testirano je 10 puta na 8 kapilara postupkom CAPILLARYS PROTEIN(E) 6, korienjem tri razliite serije pufera
za separaciju. Srednja vrednost, SD i CV (n = 30), izraunata je za svaki uzorak, svaku zonu i svaku seriju pufera.
U tabeli su prikazane granine vrednosti za 8 testiranih uzoraka i 3 razliite serije pufera kao i srednja vrednost izraunata iz srednjih vrednosti svake
frakcije (n = 3).
FRAKCIJA
Albumin
Alfa-1
Alfa-2
Beta-1
Beta-2
Gamma

Tanost

SREDNJA VREDNOST (%)

46,7 - 64,4
3,0 - 5,2
7,7 - 10,8
4,6 - 6,7
3,9 - 6,6
9,5 - 29,2

SD

0,3 - 0,6
0,1 - 0,2
0,1 - 0,3
0,1 - 0,4
0,1
0,1 - 0,3

CV (%)

0,4 - 1,1
2,2 - 3,9
1,2 - 3,3
1,8 - 5,5
1,7 - 3,4
0,7 - 1,6

SREDNJA VREDNOST CV (%)

0,7
3,2
2,2
2,9
2,5
1,2

Patoloki i normalni serumski uzorci (n = 135) testirani su postupkom CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 i drugim komercijalno dostupnim gel agaroznim
sistemima. Dobijeni koeficijenti korelacije izraunati za pojedine zone dobijene CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 postupkom u odnosu na komparativne
gel sisteme (y = CAPILLARYS PROTEIN(E) 6) su sledei:
- 97 -

CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 - 2014/06

Frakcija
Albumin
Alfa-1
Alfa-2
Beta-1
Beta-2
Gamma

Osetljivost

Koeficijent korelacije
0,973
0,975
0,947
0,850
0,969
0,969

Odseak na y osi
-4,539
1,199
0,073
-0,903
0,478
3,724

Nagib
0,972
1,519
1,028
0,932
1,189
0,959

Raspon vrednosti koncentracija

CAPILLARYS PROTEIN(E) 6
32,2 - 74,3
2,9 - 13,9
7,1 - 20,1
4,0 - 18,8
1,2 - 27,4
0,7 - 49,8

Serijska razblaenja jednog serumskog uzorka s monoklonalnim proteinom 0,429 g/dL odredjena su korienjem postupka CAPILLARYS
PROTEIN(E) 6. Najvee razblaenje u kome je mogla da se uoi monoklonalna traka je 1:16 to odgovara koncentraciji od 27 mg/dL monoklonalnog
proteina.
NAPOMENA: Detekcioni limit moe se razlikovati u zavisnosti od poloaja monoklonalne komponente i poliklonalne pozadine u gamma zoni.

Linearnost

Rastvor albumina sa 5,2 g/dL i rastvor gamaglobulina sa 3,1 g/dL (koncentracija proteina odreena je pomou nefelometrije na 280 nm) pomeani su
u razliitim odnosima od 10 do 10 (100 % rastvor albumina + 0 % rastvor gamaglobulina, 90 % + 10 %, itd..., 0 % rastvor albumina + 100 % rastvor
gamaglobulina) i meavine su podvrtnute elektroforezi sa CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 procedurom.
Rezultati su pokazali da je dobijeni procenat svake frakcije u savrenoj korelaciji sa teorijskim procentom svake frakcije u okviru meavine i da bilo
koja varijacija moe da se otkrije sa linearnou pomou CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 procedure.
Utvreno je da je CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 procedura linearna za frakcije albumina i gamaglobulina u okviru kompletnog ispitanog opsega
koncetracija (izmeu 0,0 i 5,2 g/dL albumina i 3,1 g/dL gamaglobulina).

- 98 -

CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 - 2014/06

bIbLIOGRAPHIE / bIbLIOGRAPHY
1.

2.
3.
4.
5.

6.

7.

8.

9.
10.
11.

12.

13.
14.
15.

16.

17.

Clark R et al. Rapid capillary electrophoretic analysis of human serum proteins : qualitative comparison with high-throughput agarose gel
electrophoresis. J. Chromatogr. A, 744, 205-213 (1996).
Henskens Y et al. Detection and identification of monoclonal gammopathies by capillary electrophoresis. Clin. Chem., 44, 1184-1190 (1998).
Jellum E et al. Diagnostic applications of chromatography and capillary electrophoresis. J. Chromatogr. B, 689, 155-164 (1997).
Jenkins MA and Guerin MD. Quantification of serum proteins using capillary electrophoresis. Ann. Clin. Biochem., 32, 493-497 (1995).
Jenkins MA et al. Evaluation of serum protein separation by capillary electrophoresis : prospective analysis of 1000 specimens. J. Chromatogr. B,
672, 241-251 (1995).
Jenkins MA and Guerin MD. Capillary electrophoresis procedures for serum protein analysis : comparison with established techniques.
J. Chromatogr. B, 699, 257-268 (1997).
Jenkins MA and Ratnaike S. Five unusual serum protein presentations found by capillary electrophoresis in the clinical laboratory. J. Biochem.
Biophys. Methods, 41, 31-47 (1999).
Katzmann JA et al. Identification of monoclonal proteins in serum : A quantitative comparison of acetate, agarose gel, and capillary
electrophoresis. Electrophoresis, 18, 1775-1780 (1997).
Landers JP. Clinical Capillary Electrophoresis. Clin. Chem., 41, 495-509 (1995).
Oda RP et al. Capillary electrophoresis as a clinical tool for the analysis of protein in serum and other body fluids. Electrophoresis, 18, 1715-1723
(1997).
Wijnen PA and van Dieijen-Visser M. Capillary Electrophoresis of serum proteins : Reproducibility, comparison with agarose gel electrophoresis
and a review of the literature. Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem., 34, 535-545 (1996).
Wendling A. Procdures de diagnostic ou de dpistage : Justification et validit dun test de diagnostic ou de dpistage-sensibilit-spcificit.
Impact-Internat, 1986 ; Sept : 93-97.
Le Carrer D, Bach-Ngohou K. L'lectrophorse capillaire automatise en biologie clinique. Spectra Biologie, 146 : 47 - 52 (2005).
L. Guis, A. Chaumier, V. Le Gall, S. Havrez (Fvrier 2013) Intgration du Capillarys 2 Flex Piercing (Sebia) dans un laboratoire de biologie
mdicale spcialise. Revue Francophone des Laboratoires, 449, 47 56.
Blancher A., Boulestin A., Abbal M. (2007) Diagnostic biologique des gammapathies monoclonales en 2007 et leur identification immunologique.
Feuillets de biologie, 48, N 279, 29 36.
Blessum C., Jeppsson J.O., Aguzzi F., Bernon H., Bienvenu J. (1999) Llectrophorse capillaire : principe et applications au laboratoire de
biologie clinique. Annales de Biologie Clinique. Volume 57, Numro 6, 643 - 57, Novembre - Dcembre 1999.
Chartier C. et al (2011) Evaluation of two automated capillary electrophoresis systems for human serum protein analysis. Clin. Biochem.,
DOI:10.1016/j.clinbiochem.2011.05.022.

- 176 -

CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 - 2014/06

SCHMAS / FIGURES

PROFILS LECTROPHORTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS

Figure 1

ha

-1

-2

Al
p

Al
p

G
am

ha

a
Be
ta
Be 2
ta
-1

Albumin

Prealbumin

Gammaglobulins

Albumin

C3 Complement

C4 Complement

-lipoproteins

pre-lipoproteins

Transferrin

-lipoproteins

Hemopexin

Alpha-1 acid glycoprotein

2-2 Haptoglobin phenotype

Alpha-1 antitrypsin

Alpha-2 macroglobulin

Figure 2

- 177 -

in
m

Al
bu

ph
a1

Al

ph
a2

Al

am

Be
ta
-2
Be
ta
-1

1-1 Haptoglobin phenotype

CAPILLARYS PROTEIN(E) 6 - 2014/06

SCHMAS / FIGURES

PROFILS LECTROPHORTIQUES - ELECTROPHORETIC PATTERNS

Figure 3

- 178 -

bu
m
in

Al

ph
a1

Al

Al

ph
a2

Be
ta
-2
Be
ta
-1

am
m
a

1-2 Haptoglobin phenotype