Xác định hoạt độ lipase bằng phương pháp định phân acid béo

Hoạt tính lipase được xác định dựa trên phương pháp định phân lượng acid béo tự do được
tạo ra với cơ chất là dầu olive nhũ hóa.
Hỗn hợp phản ứng gồm: 5 ml dầu olive nhũ hóa.
4 ml dung dịch đệm Sorensen 0.05M pH 7.
1 ml dịch enzyme.
Phản ứng diễn ra trong 30 phút ở 30oC trên máy lắc 160 v/p. Sau đó, bổ sung 10 ml
acetone:ethanol (1:1 v/v) để dừng phản ứng. Thêm 10 ml NaOH N/20, lắc đều, định phân
lượng NaOH dư bằng HCl N/20 với chất chỉ thị màu phenolphtalein 1%.
Mẫu đối chứng: 5 ml dầu olive nhũ hóa.
4 ml dung dịch đệm Sorensen 0.05M pH 7.
10 ml acetone:ethanol (1:1 v/v).
1 ml dịch enzyme đã bất hoạt ở 100oC,10 phút.
Ủ 30 phút ở 30oC trên máy lắc 160 v/p. Thêm 10 ml NaOH N/20, lắc đều, định phân lượng
NaOH dư bằng HCl N/20 với chất chỉ thị màu phenolphtalein 1%.
Kết quả
Một đơn vị hoạt tính được định nghĩa là lượng enzyme xúc tác giải phóng 1 µmol acid béo
trong 1 phút.
Hoạt tính lipase (U/ml) được tính theo công thức:

50 .  V
t . v
Trong đó:
50: Số µmol acid béo tương ứng với 1 ml HCl N/20.
∆V= Vtt – Vtk
Vtt: Số ml dung dịch HCl N/20 dùng ở mẫu thử thật.
Vtk: Số ml dung dịch HCl N/20 dùng ở mẫu đối chứng.
t: Thời gian phản ứng (30 phút).
TLTK
Kakugawa K, Shobayashi M, Suzuki O, Miyakawa T. (2002). Purification and
characterization of a lipase from the glycolipid-producing yeast Kurtzmanomyces sp. I-
11. Biosci Biotechnol Biochem. 66(5), 978-85.