儀器分析實驗

試液中鐵的比色定量(SP-20)

班級：化材三甲 組別：第 二
組
組員：陳慕偉 B0523048
張瑋家 B0623011
張湧浩 B0623028
張晉嘉 B0623040

指導老師：林雅芬 老師

日期:108/9/20

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目錄

目的 03

原理與相關知識 03

實驗藥品 05

實驗儀器(含儀器操作) 06

實驗步驟 09

注意事項 12

參考資料 13

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一、 目的
1. 熟悉 SP-20 和 SP-880 分光光度計之構造及基本操作。
2. 熟悉比爾定律(Beer’s Law)於定量分析之應用。
3. 學習定量試樣中的鐵離子。

二、 原理與相關知識
1. 將含有鐵離子的試樣，以羥胺(Hydoxyamine)還原為 Fe+2

4Fe+3 + 2NH2OH →4Fe+2 +NO2 +4H+

再以 1 mole Fe+2 離子與 3 mole 呈色劑二氮菲 (1,10-

phenanthroline)形成橘紅色錯離子，並以分光光度計測定之，分
析試樣中鐵離子之含量。

1.分光光度計乃是利用可見光及紫外光之燈管 (Lamp) 做為光源，通

過濾光鏡調整色調後，經聚焦後通過單色光分光稜鏡，再經過狹縫選
擇波長，形成特定波長之光線
2.光線通過樣品後，部分光線被吸收，最後光線射入光電管中將光能
轉換為電器訊號。
3.以此方式測定試樣溶液在特定波長下的穿透率、吸收度，並進行定
量分析。

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 2. 比爾定律
(1) 當一平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質時,其吸光度 A 和吸
光物的濃度 c 和吸收層的厚度 l 成正比
(2) 常見的比爾定律表示方法為：

A：吸光度
I 0：入射光的強度
I t：透射光的強度
T：透射比，或稱透光度
K：係數，可以是吸收係數或莫耳吸收係數
l：樣品光徑(比色管直徑)，一般以 cm 為單位
c：吸光物質的濃度，單位可以是 g/L 或 mol/L。

三、 實驗藥品
1. 硫酸亞鐵銨鹽( FeS O4 ( N H 4 )2 S O4 ∙ 6 H 2 O)
‧ 分子量：392.13 g/mol
‧ 為藍綠色結晶的無機複鹽，常溫下穩定，見光分
解，於分析滴定時代替硫酸亞鐵，因它相對穩定。
2.檸檬酸鈉( Na3 C 6 H 5 O7 )
‧ 分子量：258.06 g/mol
‧ 為白色結晶，大多作為酸味劑、調味劑及防
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 腐劑使用。在本次的實驗中用於調整 pH 值。
3.氫氯化羥胺( N H 2 OH ∙ HCL)
‧ 分子量：69.49 g/mol
‧ 為無色晶體，易潮解，可做為無機分析還原
劑、顯影劑使用。
4.二氮菲溶液(C 12 H 8 N 2)
‧ 分子量：180.21 g/mol
‧ 鄰二氮菲在 pH 為 2~9 時，會與亞鐵離子（
Fe2+ ¿¿）形成穩定的橘紅色鄰二氮菲亞鐵離子，可通過分光光度計

來定量。

5.蒸餾水
6.鐵未知試液

四、實驗儀器(包含儀器操作)

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1. SP-20

‧ 在穿透度模式下校正儀器
‧ 在吸收度模式測量試樣中的鐵離子
 儀器校正
(1) 將電源打開，暖機 20 分鐘
(2) 確認儀器為偵測穿透度之模式(TRANSMITTANCE)
(3) 將波長調整至實驗所需之波長
(4) 將穿透度調整為 0%
(5) 以拭鏡紙擦拭比色管，確認管身無污漬後。以蒸餾水將其裝至
八分滿。
(6) 打開容槽蓋，將上述試管對準標記放入
(7) 蓋上蓋子，將穿透度調整至 100%
(8) 取出試管，觀察當前穿透度是否為 0%，若非，則調整至 0%
(9) 重複上述校正動作，至少三次。
(10)倒出蒸餾水，並用拭鏡紙擦拭乾淨

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*若校正途中波長有所變動，則需要重新再校正一次。

 樣品測定
(1) 將模式切換為測定吸收度之模式(ABSORBANCE)
(2) 以調配好之樣品將比色管裝至八分滿
(3) 打開蓋子，將比色管依對準標記放入容槽內
(4) 蓋上蓋子，讀取儀錶板所顯示之紀錄

 SP-880
 儀器校正

(1) 將電源打開，暖機 20 分鐘
(2) 確認儀器為偵測穿透度之模式(TRANSMITTANCE)
(3) 按下[𝝀]後輸入所需的波長，輸入完按下[ENTER]
(4) 以拭鏡紙擦拭比色管，確認管身無污漬後，以蒸餾水將其裝至
八分滿。
(5) 打開容槽的蓋子，將裝有蒸餾水的比色管對準標記放入
(6) 關上容槽的蓋子，按[BLANK]進行校正

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 (7) 待畫面出現 100% T(數據若有稍微浮動亦可)
(8) 重複以上校正步驟，至少三次
(9) 倒出蒸餾水並用拭鏡紙擦乾比色管

*若校正途中波長有所變動，則需要重新再校正一次。

 樣品測定

(1) 按下[A/T/C]，將模式切換至吸收度模式(A)

(2) 以調配好之樣品將比色管裝至八分滿

(3) 打開容槽的蓋子，將裝有樣品的比色管對準標記放入

(4) 蓋上蓋子，讀取並記錄數據(紀錄最大值)

五、實驗步驟
1. 樣品配製:
(1)配製鐵標準溶液:
精秤硫酸亞鐵銨鹽(FeSO4(NH4)2SO4 ‧ 6H2O) 0.3000 克
(0.2995~0.3015 克)，並倒入 100mL 燒杯中,加入 1N H2SO4(aq) 20mL，以
玻棒攪拌至溶解後，倒入 500mL 定量瓶中,以蒸餾水清洗燒杯數次，並
倒入定量瓶中, 加入蒸餾水至定量瓶之標線處(需非常精確，以免造成
實驗誤差。

(2)配製還原劑溶液:
取 2g 氫氯化羥胺(NH2OH‧HCl) 溶於 10mL 蒸餾水中, 加入微量之固
體檸檬酸鈉攪拌溶解(約半杓),以廣用試紙(pH 3.2～5.6)的試紙，測試溶
液 pH 值，將溶液之 pH 值調至約 4.5，加入蒸餾水到 20mL。

(3)吸收曲線樣品之配製:

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 以鐵標準溶液潤洗燒杯後，以吸量管吸取 2mL 之鐵標準溶液至燒杯
中，在滴定管中裝入檸檬酸鈉溶液(5g 檸檬酸鈉溶於 100mL 蒸餾水中)。

將檸檬酸鈉溶液逐滴加入鐵標準液之燒杯中，使溶液 pH 值調至約
3.5，並記錄下所需之檸檬酸鈉溶液體積(a mL)

以吸量管分別吸取 0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0mL 之鐵標準液，

置於編號為 1~7 號之 100mL 定量瓶中

分別在編號 1~7 號之定量瓶中加入 1mL 還原劑、2mL 二氮菲溶液

(0.34g 二氮菲溶於 100mL 蒸餾水中)、a mL 檸檬酸鈉溶液，再於編號 1~7
號之定量瓶中，加入蒸餾水至標線處，混合均勻後，靜置 20min 呈色。

2.製作吸收曲線並找出最大吸收波長:

(1)取編號 5 號之溶液，在 460~490nm(間隔

10nm)，490~520nm(5nm)，520~560nm(10nm)，分別測定其吸收度，記錄測
定之「波長」與「吸收度」於數據表格中，並找出最大之吸收波長 λmax

3. 製作校正曲線及未知物測試:
(1)在最大吸收波長下，測試 1 至 7 號量瓶溶液的吸收度，紀錄於表中
吸收度欄，並將 2 至 7 號量瓶溶液的吸收度，減去 1 號量瓶的吸收度，並
記錄於淨吸收度欄。

(2)於最大吸收波長下，測定 1 至 7 號量瓶之吸收度，並以最小平方
法計算鐵濃度與吸收度之關係及相關係數。

(3)將未知物樣品稀釋 5 倍(10ml 未知物樣品至於 50ml 定量瓶中，加

蒸餾水至刻畫處)，分別取適當稀釋樣品(1.0,2.0 毫升)，置於 8、9
號的 100 毫升定量瓶中，同前面步驟加入 1 毫升還原劑，2 毫升二氮
菲溶液，a 毫升檸檬酸鈉溶液，加蒸餾水稀釋至 100 毫升，靜置 20 分
鐘呈色。
(4)於最大吸收波長測其吸收度，並重複 1～2 次實驗，求平均值，並
記錄吸收度及淨吸收度。
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 (5)利用未知物吸收度與校正曲線，即可求得未知物之濃度。

六、注意事項
1. 分光光度計使用前應先熱機 20 分鐘。

2. 比色管之管身為光束通過部分，必須保持潔淨不得以手觸摸，拿取
時應觸碰比色管頂部。

3. 裝填試樣於比色管中時，試樣之體積應於白色橢圓點處之一半。

4. 測試前應將比色管管身以拭鏡紙擦拭。

5. 比色管放入儀器時，比色管上方之白色直槓應對齊儀器上之記號。

6. 比色管使用後，立即用蒸餾水清洗，若無法洗淨，可用 50%的酒精
加上 50% 3N HCl 浸泡後，再以蒸餾水清洗數次，以拭鏡紙擦乾後
再放入盒內。

七、 數據整理(範例供參考)
1. 鐵數據整理標準溶液之配製
硫酸亞鐵銨鹽之精確重量=__0.302_g 鐵標準溶液之濃度
=_86.11_mg/L

2. 實驗得不
同波長下
之吸收度
 吸

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 收度最大者為最大吸收波長
3. 依最大吸收波長製作檢量線

4. 鐵標準溶液檢量曲線之製作
(1) 標準溶液中鐵濃度之計算
EX 第 2 號量瓶

5. 505nm 波長下的鐵標準 溶液吸收度

註：量瓶號碼 #1 為空白實驗
淨吸收度 = 吸收度－空白實驗吸收度
6.檢量線方程式
以最小平方法計算鐵濃度與吸收度之關係及相關係數
鐵濃度(μg/mL)=__4.8915_____×吸收度 -0.0014__

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 R2= ___0.9973_

6. 未知液吸收度
取含鐵試液
_10.00_mL，稀釋至
_50.00_mL，稀釋倍數=
__5_

寫出計算式：

八、 參考資料
1. 王啟川，儀器分析實驗，高立圖書有限公司，1998

2. 高瞻自然科學教學資源平台

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 http://highscope.ch.ntu.edu.tw/wordpress/

3. 維基百科

4. http://m.zzgayq.com/News/446.html

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