Machine Translated by Google

thực vật

Bài báo

Vi nhân giống và sản xuất sức khỏe

Thúc đẩy Lignans trong Linum usitatissimum

Irfan Khan 1, Mubarak Ali Khan 1, * , Muhammad Amir Shehzad

1 Amir Ali 2
, ,
Sher Mohammad 2 Huma Ali 3 4 và Parvaiz Ahmad 4, *
, , Mohammed Nasser Alyemeni
1
Khoa Công nghệ Sinh học, Khoa Hóa học và Khoa học Đời sống,
Abdul Wali Khan Đại học Mardan (AWKUM), Mardan 23390, Pakistan;
ibnefazalkhanbb2@gmail.com (IK); shehzadaamir946@gmail.com (MAS)
2
Phòng thí nghiệm Công nghệ sinh học. Viện nghiên cứu nông nghiệp (ARI), Tarnab, Peshawar 25000, Pakistan;

amirkhan31530@gmail.com (AA); drshermohammad@gmail.com (SM)

3
Khoa Công nghệ Sinh học, Đại học Bacha Khan Charsadda, Peshawar 24420, Pakistan;
write2humaali@gmail.com
4
Khoa Thực vật học và Vi sinh vật, Trường Đại học Khoa học, Đại học King Saud,
Riyadh 11362, Ả Rập Xê Út; mnyemeni@ksu.edu.sa
* Thư từ: makhan@awkum.edu.pk (MAK); parvaizbot@yahoo.com (PA)

Nhận: 24 tháng 4 năm 2020; Được chấp nhận: ngày 5 tháng 6 năm 2020; Xuất bản: ngày 9 tháng 6 năm 2020

Tóm tắt: Linum usitatissimum thường được gọi là lanh hoặc lanh là một cây thuốc quan trọng,
sản xuất lignans mạnh về mặt y học, được sử dụng trong điều trị một số bệnh ở người. Lignans giới hạn
sản xuất trong tự nhiên không đáp ứng được nhu cầu ngày càng tăng của thị trường. Nghiên cứu này là
được tiến hành để thiết lập một phương pháp dễ dàng và nhanh chóng cho việc sản xuất và vi nhân giống in vitro

của lignans mạnh và các chất chuyển hóa thứ cấp chống oxy hóa trong hạt lanh. Kết quả chỉ ra rằng
mẫu cấy hypocotyl dưới tác dụng của thidiazuron (TDZ: 0,5 mg / L) + kinetin (Kn: 0,5 mg / L) trong
môi trường tăng trưởng cơ bản, dẫn đến các thông số phát sinh cơ quan chồi tối ưu (cảm ứng chồi
tần số: 86,87%, số chồi: 6,3 ± 0,36 và chiều dài chồi: 6,5 ± 0,54 cm), trong 4 tuần.

Hơn nữa, bổ sung TDZ trong môi trường nuôi cấy đã kích hoạt hiệu quả hệ thống chống oxy hóa trong

chồi nuôi trong ống nghiệm , trong đó sản xuất tối đa tổng hàm lượng phenolic, TPC (34,33 ± 0,20 mg
của GAE / g DW); tổng hàm lượng flavonoid, TFC (8,99 ± 0,02 mg QE / g DW); Gốc tự do DPPH
hoạt động nhặt rác (92,7 ± 1,32%); hoạt tính amoniac-lyase của phenylalanin, PAL (8,99 ± 0,02 U / g FW);

và biểu hiện superoxide dismutase, SOD (3,62 ± 0,01 nM / phút / mg FW) được quan sát thấy trong
Cấy chồi được nuôi khi có TDZ: 0,5 mg / L + Kn: 0,5 mg / L. Tuy nhiên, đáng kể
mức độ lignans có hoạt tính dược lý như secoisolariciresinol (SECO: 23,13–37,10 mg / g DW),
secoisolariciresinol diglucoside (SDG: 3,32–3,86 mg / g DW) và anhydrosecoisolariciresinol diglucoside
(ANHSECO: 5,15–7,94 mg / g DW) được tích lũy trong các chồi tái sinh. Giao thức này có thể được
mở rộng quy mô sản xuất hạt lanh thương mại để đáp ứng nhu cầu thị trường về lignans.

Từ khóa: lignans; Linum usitatissimum; thidiazuron; chất chống oxy hóa; nuôi cấy trong ống nghiệm

1. Giới thiệu

Linum usitatissimum thường được gọi là hạt lanh hoặc lanh là một cây thuốc quan trọng thuộc họ
chi Linum và họ Lianaceae [1,2]. Hạt lanh đã được trồng từ 5000 năm trước Công nguyên ở Địa Trung Hải
thắt lưng, bao gồm Châu Âu và Châu Á. Ở Pakistan, hạt lanh có tên địa phương là Alsi, được tìm thấy ở Punjab,

Tỉnh Khyber Pakhtunkhwa và Sindh [3]. Về mặt hình thái, nó là một loại cây thân thảo, có
thân nhẵn, mọc thẳng và hệ thống rễ nông, và có nhiều nhánh thứ cấp khác nhau. Quả nang hạt là
được gọi là quả bông. Hạt có thể có màu vàng (Bionda) hoặc màu nâu (Antares) [4]. Các thành phần chính của

Các nhà máy 2020, 9, 728; doi: 10,3390 / cây9060728 www.mdpi.com/journal/plants

Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, 728 2 trên 18

lớp vỏ hạt lanh hay còn gọi là testa là chất béo, protein, chất nhầy và chất xơ. Thành phần gần đúng
của cây lanh đại diện cho 41% chất béo, 20% protein, 28% TDF (tổng chất xơ), 7,7% độ ẩm và 3,4% tro [5,6].
Dầu hạt lanh là một nguồn giàu các chất chuyển hóa có hoạt tính sinh học chức năng như axit béo omega-3

[7], axit béo omega-6 và axit linoleic, là những axit béo không bão hòa đa và rất hữu ích để phòng ngừa và quản

lý các rối loạn nghiêm trọng và mãn tính như Bệnh Alzheimer, viêm khớp dạng thấp, cao huyết áp, tiểu đường loại

2, bệnh mạch vành và đột quỵ, v.v. [8]. Hạt lanh cũng chứa một số axit phenolic và flavonoid mạnh về mặt y học

[9]. Tuy nhiên, các hợp chất hoạt tính sinh học chính là lignans còn được gọi là phytoestrogen vì chúng điều

chỉnh và duy trì mức nội tiết tố estrogen trong cơ thể con người [ 10]. Lignan là một phyto-polymer có trong mô

xylem dẫn điện của hạt lanh, tạo độ cứng và sức mạnh cho thân cây và làm giảm tính thấm của thành tế bào để ngăn

chặn mầm bệnh tấn công [11].

Hạt lanh là một nguồn giàu lignans và neolignans và chứa nhiều lignans hơn 800 lần so với các cây thuốc khác [11]. SDG

(secoisolariciresinol diglucoside), MAT (matairesinol), SECO (secoisolariciresinol) và LDG (lariciresinol diglucoside) là các

lignans chính được sản xuất trong hạt lanh, được báo cáo về tác dụng có lợi cho sức khỏe của chúng trong việc ngăn ngừa và

chữa các bệnh ung thư khác nhau như vú, ruột kết và ung thư tuyến tiền liệt [11,12]. L. usitatissimum cũng chứa cả nước và

các vitamin tan trong chất béo như vitamin E (tocopherols). Vitamin E có khả năng chống oxy hóa, ngăn chặn quá trình oxy hóa

protein và chất béo của tế bào, tăng bài tiết natri trong nước tiểu, giảm nguy cơ mắc bệnh tim mạch bằng cách hạ huyết áp và

cũng hoạt động như một chất chống ung thư trong việc chữa bệnh Alzheimer [13,14].

L. usitatissimum là một loại cây rabi theo mùa và có thể phát triển hiệu quả ở những vùng nhiệt độ vừa phải.

Sự tăng trưởng và sản lượng của nó bị ảnh hưởng bất lợi bởi sự khan hiếm (hạn hán) và điều kiện môi trường nóng [3].

Kết cấu đất và sự biểu hiện của sâu bệnh là những yếu tố khác có thể hạn chế việc sản xuất hạt lanh trong các quy trình canh

tác thông thường [15]. Tương tự, hạt lanh dễ bị tất cả các tác nhân lây nhiễm như vi khuẩn, nấm và vi rút. Bệnh bạc lá

Alternaria, bệnh phấn trắng rỉ sắt và bệnh héo rũ là những bệnh đáng chú ý lây nhiễm cho cây lanh [10]. Nhu cầu của hạt lanh

trong các ngành công nghiệp thực phẩm đã tăng nhanh chóng gần đây vì triển vọng mới của nó như một loại thực phẩm chức năng

do các ứng dụng dinh dưỡng và y học đáng kể của nó [15].

Nhu cầu thị trường ngày càng tăng có thể được đáp ứng bằng các công nghệ nhân nhanh (RMT) như nảy mầm trong ống nghiệm , vi

nhân giống, nuôi cấy tế bào và mô sẹo trong điều kiện phòng thí nghiệm được kiểm soát [16]. Việc thiết lập các mẫu cấy in

vitro thực vật thông qua việc tối ưu hóa các điều kiện nuôi cấy và môi trường nội tiết tố có thể ảnh hưởng trực tiếp đến khả

năng sống, tăng trưởng, tái sinh và hình thành sinh khối của tế bào thực vật cũng như việc duy trì vô trùng các mầm thực vật

trong thời gian dài hơn [17]. Cytokinin và auxin là các chất điều hòa sinh trưởng thực vật chính (PGRs), được khuyến khích sử

dụng để vi nhân giống khả thi ở các cây thuốc đa dạng [18]. 1-phenyl-3- (1,2,3-thiadiazol-5-yl) -urea, hoặc TDZ, là một trong

những PGR có ảnh hưởng nhất đến sự tái sinh của nhiều loại cây công nghiệp quan trọng. Sự điều hòa hình thái của TDZ ở một số

cây thuốc đã ảnh hưởng đến sự tăng trưởng và phát triển khả thi do chức năng kép của nó là một cytokinin và một hormone auxin

[19].

TDZ được báo cáo là có tác động trực tiếp đến hệ thống chống oxy hóa của tế bào thực vật thông qua việc

kích hoạt các yếu tố chống stress như các thành phần enzym và không phải enzym để giảm thiểu các điều kiện

stress, và do đó chúng giúp tế bào thực vật tiếp tục tăng trưởng và phát triển bình thường. [20,21].

Mục tiêu chính của nghiên cứu này là phân tích tác động của TDZ đến vi nhân giống in vitro , chuyển hóa thứ cấp

và sinh tổng hợp các lignans có hoạt tính sinh học ở L. usitatissimum thông qua phân tích bằng phương pháp sắc

ký khí-khối phổ (GC-MS).

2. Kết quả và thảo luận

2.1. Tối ưu hóa bộ điều chỉnh tăng trưởng thực vật và cấy ghép phù hợp (PGRs) để cảm ứng chụp trong ống nghiệm

Các mục tiêu chính của nghiên cứu này là phát triển một phương pháp nhanh chóng để vi nhân giống và
sản xuất các chất chuyển hóa thứ cấp có hoạt tính sinh học trong Linum usitatissimum. Trong các thí nghiệm
sơ bộ, hạt lanh đã được nảy mầm trong ống nghiệm trên môi trường MS0 để cung cấp liên tục các mẫu cấy vô
trùng, được sử dụng trong các thí nghiệm tiếp theo để vi nhân giống. Tần suất nảy mầm của hạt tối ưu (84%)
Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, 728 3 trên 18

được ghi lại trong các ống nuôi cấy sau bảy ngày nuôi cấy. Để cung cấp liên tục các mẫu khác nhau,

sự nảy mầm trong ống nghiệm của hạt giống đã được chứng minh là một chiến lược hiệu quả để cung cấp một loại mầm vô trùng như

một nguồn mẫu và chắc chắn có thể làm giảm nguy cơ nhiễm bẩn. Thường là các mẫu
có nguồn gốc từ các cây con được nuôi trong ống nghiệm có khả năng chống lại sự ô nhiễm vi sinh vật tốt hơn trong quá trình

nghiên cứu nuôi cấy mô thực vật, so với mẫu cấy lấy từ cây trồng ngoài đồng [22]. Theo thứ tự

để xác định và lựa chọn loại mẫu cấy thích hợp cho vi nhân giống trong nghiên cứu này, bốn
các mẫu cấy bao gồm lá, lá mầm, rễ và hypocotyl được nuôi cấy trên môi trường MS được tăng cường với
nồng độ khác nhau của TDZ và Kn đơn lẻ hoặc kết hợp. Các chồi được tạo ra trong hầu hết các

tất cả các mẫu cấy nhưng với tần số thay đổi. Tần số cảm ứng chồi cao nhất (86,87%) được quan sát thấy trong

các mẫu cấy hypocotyl được ủ trên môi trường MS có chứa TDZ (0,5 mg / L) + Kn (0,5 mg / L). TDZ một mình

cũng dẫn đến cảm ứng chồi tối đa (86,54%) khi được bổ sung ở 0,5 mg / L trong môi trường nuôi cấy.
Các mẫu cấy lá và mẫu cấy tạo ra các tần số cảm ứng chồi lần lượt là 59,43% và 56% từ

môi trường nuôi cấy bổ sung TDZ (1,0 mg / L) + Kn (1,0 mg / L). Tuy nhiên, phản hồi thấp nhất
(45,76%) được quan sát đối với mẫu cấy rễ (Bảng 1).

Bảng 1. Lựa chọn loại mẫu cấy thích hợp và các chất điều hòa sinh trưởng thực vật (PGRs) để vi nhân giống

thông qua sự phát sinh cơ quan chồi ở L. usitatissimum. Giá trị đại diện cho dữ liệu trung bình của mỗi lần xử lý với

± sai số tiêu chuẩn. Dữ liệu được thu thập sau thời gian nuôi cấy bốn tuần. Dữ liệu có (các) chữ cái khác nhau là

có ý nghĩa thống kê ở p ≤ 0,5. TDZ: thidiazuron, Kn: Kinetin.

Tần suất tái tạo chụp (%)

Nồng độ Lá mầm Hypocotyl

PGR Giải thích lá Root Explants
(mg / L) Người giải thích Người giải thích

TDZ 0,5 d 20,54 ± 0,82 d 15,45 ± 0,76 86,54 ± 6,93 một

12,54 ± 0,86 đĩa CD

c ab c
TDZ 1,0 bc 44,87 ± 2,45 30,54 ± 1,17 81,23 ± 6,91 19,59 ± 0,78
c bc c bc
TDZ 1,5 27,68 ± 0,93 41,75 ± 2,12 56 ± 2,66 28,59 ± 0,95
Kn 0,5 57,76 ± 3,74 một
cd 24,36 ± 0,90 bc 64,65 ± 4,47 32,43 ± 1,33 b
bc
Kn 1,0 b 46,12 ± 2,62 cd 26,75 ± 0,92 b 67,23 ± 4,71 28,65 ± 0,95
Kn 1,5 bc 40,43 ± 2,05 c 32,80 ± 1,33 c 57,87 ± 3,75 16,86 ± 0,77 c

TDZ + Kn 0,5: 0,5 ab 50,42 ± 3,01 bc 42,23 ± 2,45 86,87 ± 6,93 một
45,76 ± 2,54 một

ab ab
TDZ + Kn 1,0: 1,0 a 59,43 ± 3,95 56,54 ± 3,62 một
82,54 ± 6,92 ab 38,94 ± 1,84
b
TDZ + Kn 1,5: 1,5 b 48,76 ± 2,85 47,65 ± 2,75 80,83 ± 6,01 44,70 ± 2,44 một

Trong quá trình phát triển in vitro của tế bào thực vật , bản chất của mẫu cấy đóng một vai trò nổi bật và quyết định

kiểu và phương thức tái sinh, ví dụ, cảm ứng mô sẹo, hình thành chồi, cảm ứng
rễ bất định, hoặc phôi xôma. Tuy nhiên, tiềm năng tái sinh ở bất kỳ loài thực vật nào là
phụ thuộc chặt chẽ vào sự sẵn có của các chất điều hòa sinh trưởng, thành phần môi trường, kiểu gen thực vật và

tình trạng sinh lý của mẫu cấy [23,24]. Trong một bài báo khác, các mẫu cấy ghép hypocotyl được báo cáo vì
vai trò thích hợp trong quá trình phát sinh cơ quan chồi của hạt lanh [25].

Trong nghiên cứu này, các PGR như TDZ và Kn khi được sử dụng đơn lẻ trong các phương tiện MS ở các
mức độ được tìm thấy ít hiệu quả hơn đối với cảm ứng chồi so với các phương pháp điều trị kết hợp của chúng

(Bảng 1). Tương tự như vậy, các mẫu cấy hypocotyl của hạt lanh (giống Mikael) tạo ra
chồi (82% và 100%) trong MS0 (đối chứng) hoặc PGRs (2,0 mg / L TDZ + 0,1 mg / L NAA) được bổ sung
phương tiện truyền thông, tương ứng [26]. Tương tự, các mẫu cấy hypocotyl của L. usitatissimum tạo ra khoảng 9,1 chồi trên mỗi

mẫu cấy trong môi trường MS được tăng cường 1,0 ppm Kn [27].

Janowicz và cộng sự. [25] báo cáo rằng 92% chồi được tạo ra từ các mẫu cấy hypocotyl của hạt lanh

trong môi trường MS + 1.0 BAP. Hơn nữa, Akter et al. [28] báo cáo rằng 69% chồi hạt lanh được tạo ra
từ mẫu lóng được nuôi cấy trong môi trường bổ sung 2 mg / L BA + 0,5 mg / L NAA. Dữ liệu của chúng tôi
cho thấy rằng nồng độ thấp hơn của cả TDZ và Kn là do phản ứng tối ưu của chồi
cảm ứng từ mẫu cấy hypocotyl, trong đó, nồng độ cao của PGRs (TDZ và Kn) được chỉ ra
đáp ứng cảm ứng thấp hơn (Bảng 1).
Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, 728 4 trên 18

Các nghiên cứu đã chỉ ra rằng TDZ ở nồng độ cao hơn tạo ra isopentenyl adenine (iP) giúp thúc đẩy quá trình

phân chia tế bào. Sự hình thành iP thông qua mức TDZ cao có thể dẫn đến sự hình thành mô sẹo thay vì hình thành

chồi trong mẫu cấy [29,30]. Hơn nữa, người ta suy ra rằng TDZ có thể làm tăng mức độ cytokinin nội sinh thông qua

việc ức chế enzym cytokinin oxidase, chất này xúc tác sự bất hoạt của các cytokinin [20,31].

2.2. Các thông số tăng trưởng và vi nhân giống qua trung gian TDZ

Các biến đổi đáng kể trong các thông số cảm ứng chồi, nhân lên và tăng trưởng đã được quan sát thấy

trong nghiên cứu này (Bảng 2). Các chồi được tạo ra trực tiếp trong mẫu cấy hypocotyl ở tất cả các nghiệm thức.
Naggar và cộng sự. [27] quan sát thấy sự hình thành chồi trực tiếp trên bề mặt của mẫu cấy hypocotyl được nuôi cấy

trong môi trường MS bổ sung 1,0 ppm Kn mà không có bất kỳ sự hình thành mô sẹo nào ở L. usitatissimum. Trong một

nghiên cứu tương tự, Ali et al. [32] báo cáo sự tái sinh chồi trực tiếp ở Ajuga bracteosa để đáp ứng với TDZ (0,5 ppm).

Trong nghiên cứu của chúng tôi, chồi sớm hoặc chồi đầu tiên được tạo ra vào ngày thứ năm sau khi cấy vào mẫu

cấy hypocotyl trong môi trường nuôi cấy đơn độc được xử lý TDZ (1,0 mg / L) nhưng với sự hiện diện của Kn (0,5 mg /

L), sự cảm ứng chồi mất nhiều thời gian hơn (10 ngày) (Bảng 2). Trong một nghiên cứu tương tự, bổ sung TDZ (7 µM)

trong môi trường nuôi cấy giúp tạo chồi nhanh chóng ở cây Dâu tằm [33]. Trong nghiên cứu này, số lượng chồi tối đa

(6,3 ± 0,36) với chiều dài cao hơn (6,5 ± 0,54 cm) đã được quan sát trong môi trường cơ bản có chứa TDZ (0,5 mg /

L) + Kn (0,5 mg / L) (Bảng 2; Hình 1e ), trong đó số chồi thấp nhất (1 ± 0,11) và chiều dài chồi (3,3 ± 0,28 cm)

được ghi lại trong mẫu cấy được xử lý TDZ (1,0 mg / L) (Hình 1b).

Trong một số nghiên cứu, TDZ đã cho thấy phản ứng tái sinh chồi tốt hơn BA, 2 4-D và NAA [25,34,35]. Ví dụ,

TDZ (2,0 mg / L) kết hợp với NAA (0,1 mg / L) dẫn đến tái sinh nhiều chồi (15,3 ± 0,88) trong mẫu cấy thân của L.

usitatissimum [26]. Tương tự, số lượng chồi đáng kể được tái sinh trong các mẫu hạt lanh được trồng với 2,4-D (2

mg / L) và BAP (1 mg / L) [36].

Trong một nghiên cứu tương tự, Khan et al. [20] báo cáo số chồi tối đa trên mỗi mẫu cấy trong Silybnum

marianum, được nuôi cấy trong môi trường có 11 µM TDZ. Phát hiện của chúng tôi chỉ ra rằng TDZ kết hợp với Kn cho

thấy khả năng tái sinh chồi tối ưu so với các nghiệm thức TDZ riêng lẻ. Tuy nhiên, liều TDZ và Kn thấp hơn cho thấy

phản ứng tái sinh chồi tốt hơn so với nồng độ cao hơn. Tương tự, TDZ với các PGR khác đã được báo cáo là có hiệu

quả và cảm ứng trong quá trình hình thành chồi hơn là ứng dụng TDZ đơn độc trên một số cây thuốc quan trọng [37].

Khi thử nghiệm một mình, TDZ gây ra 80% tái sinh chồi ở rau diếp xoăn. Tuy nhiên, tiềm năng tái sinh chồi được tăng

thêm lên đến 95% khi TDZ (1,0 mg / L) được kết hợp với IAA (1,0 mg / L) trong môi trường nuôi cấy [38]. Tương tự,

chỉ riêng TDZ so với các PGR thông thường như IAA và BA, là chất điều hòa sinh trưởng tương đối hiệu quả hơn trong

quá trình hình thành chồi ở các loài Kigelia pinnata, Cichorium intybus và Phaseolus vulgaris [33,38,39].

TDZ được coi là cung cấp năng lượng cho các cytokinin nội sinh bằng cách kích hoạt quá trình chuyển đổi

các nucleotide cytokinin thành các nucleotide sinh học hiệu quả và hiệu quả hơn [40]. Trong nghiên cứu này,

sự hình thành sinh khối callus cũng được quan sát thấy trong các mẫu cấy hypocotyl ở nồng độ TDZ cao hơn,

trong đó chỉ riêng ở (1,5 mg / L) TDZ đã tạo ra khối lượng callus tối đa (1033 ± 11,01 mg FW) (Bảng 2; Hình 1b, c).

Các báo cáo hiện có đã chỉ ra với quan điểm rõ ràng rằng TDZ và cytokinin có chung một phương thức
hoạt động ở thực vật [20,32]. Mức TDZ thấp (0,0 đến 0,005 µmol / L) gây ra sự hình thành zeatin
riboside (ZR) trong khi ở nồng độ cao hơn (≥0,5 µmol / L), nó tạo ra isopentenyl adenine (iP), chất
điều hòa sự phân chia tế bào. Việc sản xuất ZR ở mức TDZ thấp cuối cùng dẫn đến sự tái sinh và nhân
lên của chồi. Tuy nhiên, sự hình thành iP ở liều TDZ cao hơn tạo điều kiện cho sự hình thành mô sẹo
trong mẫu cấy [29,30]. Tiềm năng nhân chồi của TDZ như được chỉ ra trong nghiên cứu này có thể song
song với hoạt động giống như cytokinin của nó, trong đó chồi được tạo ra trực tiếp theo bên trong mẫu
cấy thân của hạt lanh [41] cũng như ở Ajuga bracteosa [32].
Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, 728 5 trên 18

Bảng 2. Tối ưu hóa sự phát sinh cơ quan chồi ở L. usitatissimum. Giá trị đại diện cho dữ liệu trung bình của mỗi nghiệm thức với ± sai số tiêu chuẩn. Dữ liệu được thu thập sau bốn

thời gian nuôi cấy tuần. Dữ liệu với (các) chữ cái khác nhau có ý nghĩa thống kê ở p ≤ 0,5. TDZ: thidiazuron, Kn: Kinetin, DW: Trọng lượng khô và FW: Trọng lượng tươi.

Trung bình FW của Callus

Nồng độ Ngày quay Tần suất của
PGR Trung bình Không có Shoots Max. Độ dài cảnh quay Tr.bình Độ dài bắn Được phát triển tại FW (Nhà máy đầy đủ) mg DW (Nhà máy đầy đủ) mg
(mg / L) Bắt đầu Bắt đầu bắn
Bazơ (mg)
cd e de
TDZ d 7,1 ± 1,05 86,54 ± 6,93 2,9 ± 0,15 cd 2,76 ± 0,12 d 140 ± 10,32 de 770 ± 7,34 638,8 ± 5,3
một
0,5 1,33 ± 0,38 ngày
ab 1 ± c b
TDZ f 5,2 ± 0,85 81,23 ± 6,91 56 de 3,3 ± 0,28 2,96 ± 0,14 750 ± 7,63 1591 ± 9,25 1336 ± 2,3
một một
1,0 0,11 ngày 1 ±
c e bc b
TDZ 7,8 ± 0,90 ± 2,66 d 3,5 ± 0,39 3,25 ± 0,23 b 1033 ± 11,01 b 1333 ± 9,13 1161,7 ± 4,9
một
1,5 0,11 1,66 ± 0,57
c f f
Kn 10 ± 0,81 d 64,65 ± 4,47 cd 4,2 ± 0,34 3,9 ± 0,26 0 ± 0 189 ± 1,6 128 ± 1,9
một
0,5
c c
TDZ + Kn b 8,6 ± 1,21 86,87 ± 6,93 6,3 ± 0,36 6,5 ± 0,54 4,56 ± 0,25 ab f 40 ± 5,77 858 ± 5,7 742,7 ± 2,5
một một một một
0,5: 0,5
e ab c e e e
TDZ + Kn 1,0: 0,5 6,5 ± 0,55 82,54 ± 6,92 ab bc 2 ± 0,25 4,6 ± 0,44 4,15 ± 0,32 ab 91,4 ± 7,63 422,8 ± 0,013 276 ± 6,4
cd b c d
TDZ + Kn 1,5: 0,5 7,3 ± 0,95 80,83 ± 6,01 b 2,5 ± 0,46 5,5 ± 0,44 4,25 ± 0,42 500 ± 12,58 ngày 789,3 ± 4,6 657,8 ± 2,4
Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, 728 6 trên 18

Các nhà máy 2020, 9, x ĐỂ ĐÁNH GIÁ PEER 6 trên 18

Hình 1. Vi nhân giống invitro ở L. usitatissimum, (a): tái sinh chồi trong mẫu cấy hypocotyl
Hình 1. Vi nhân giống invitro ở L. usitatissimum, (a): tái sinh chồi trong mẫu cấy hypocotyl trong
phản ứng với 0,5 mg / L TDZ, (b): tái sinh chồi trong mẫu cấy hypocotyl đáp ứng 1,0 mg / L
đáp ứng với 0,5 TDZ,
mg (c):
/ L tái
TDZ,
sinh(b): tái mẫu
chồi trong sinh
cấychồi trong
hypocotyl mẫu
để đáp ứngcấy hypocotyl
với 1,5 để(d):
mg / L TDZ, đápchồi
ứng với 1,0 mg / L TDZ,
tái sinh trong mẫu cấy hypocotyl đáp ứng với 0,5 mg / L Kn, (e): tái sinh chồi trong hypocotyl
(c): tái sinh chồi trong mẫu cấy hypocotyl phản ứng với 1,5 mg / L TDZ, (d): mẫu cấy tái sinh chồi phản ứng với 0,5 mg / L TDZ + 0,5 mg /
L Kn, (f): tái sinh chồi trong mẫu cấy hypocotyl trong trong mẫu cấy hypocotyl phản ứng với 0,5 mg / L Kn, (e): tái
sinh chồi trong mẫu cấy hypocotyl
L TDZ phản
+ 0,5 mg / L ứng
Kn, với 1,0
(h): sự mg
ra /rễ
L của
TDZ chồi
+ 0,5vi
mgnhân
/ L giống
Kn, (g):
với tái
0,1 sinh
mg / chồi trong
L IBA mẫu với
đáp ứng cấy 0,5
hypocotyl
mg / L đáp
TDZ ứng 1,5mg
+ 0,5 mg/ /

L Kn, (f): tái sinh chồi trong mẫu cấy hypocotyl để đáp lại
ở một nửa cường độ môi trường MS, mũi tên cho biết sự phát triển của rễ ở gốc chồi, và (i): cứng
1,0 mg / L TDZ + 0,5 mg / L Kn, (g): tái sinh chồi trong mẫu cấy hypocotyl phản ứng với 1,5 mg / L TDZ + 0,5 mg /
và thích nghi của cây vi nhân giống, Bar 2,0 cm.
L Kn, (h): ra rễ của chồi vi nhân giống với 0,1 mg / L IBA bằng một nửa Trong một số nghiên cứu, TDZ đã cho thấy
phản ứng tốt hơn trong quá trình tạo chồi so với môi trường MS cường độ BA, 2 4 ‐ D và NAA, mũi
tên chỉ ra sự phát triển của rễ ở gốc chồi và (i): cứng lại [25,34 , 35]. Ví dụ, TDZ (2,0 mg / L) kết hợp với NAA
(0,1 mg / L) dẫn đến sự tái sinh và thích nghi của cây vi nhân giống, Bar 2,0 cm. của nhiều chồi
(15,3 ± 0,88) các
trong
mẫumẫu
hạtcấy thân
lanh của
được L. usitatissimum
trồng [26].
với 2,4 ‐ D (2 mg /Tương
L) vàtự,
BAPsố(1lượng
mg / chồi đáng kể được tái sinh trong
L) [36].

Ở mức độ cao, TDZ được báo cáo về sự hình thành callogenesis vì nó ngăn chặn sự khởi đầu của chồi và phá vỡ chồi Trong
một nghiên cứu tương tự, Khan et al. [20] báo cáo số chồi tối đa trên mỗi mẫu cấy ở Silybnum marianum,
do đó cuối cùng làm trường
giảm tần số 11
chứa cảmμMứng chồi
TDZ. [41].
Phát hiệnHơn
củanữa, trong
chúng tôi môi
chỉ trường
ra rằngnuôi
TDZ cấy
kết được xử lý
hợp với Kn TDZ, được
hàm lượng nuôi cấy auxin
cao của trong nội
môi

sinh, ethylene và ABA

vớiđãcác
được
nghiệm
chứngthức
kiếnTDZ
trong
riêng
quálẻ.
trình
Tuy hình
nhiên,
thành
liềucallus
TDZ và[42–44].
Kn thấp cho
hơn thấy
cho thấy
khả năng
phản tái
ứng sinh
tái sinh
chồi chồi
tối ưu
tốtso
hơn so với nồng độ cao hơn.
Kết quả của chúng tôi chỉ ra rằng sự tạo callo tối ưu xảy ra ở nồng độ TDZ cao trong khi ở mức thấp ít hơn Tương tự như vậy,
TDZ với các PGR khác đã được báo cáo là quan sát thấy hiệu quả hơn và gây cảm ứng trong quá trình hình
thành mô sẹo. Tuy nhiên,
với ứng
sự dụng
hình TDZ
thành
đơnmôđộc
sẹotrong
nhiềumột
hơnsốđược
cây báo
thuốc
cáoquan
trong
trọng
quá [37].
trình Khi
phátthử
sinh
nghiệm
cơ quan
một Linum
mình, usitatissimum
TDZ gây ra 80%so
tái sinh chồi ở rau diếp xoăn. Tuy nhiên, tiềm năng tái sinh chồi từ mẫu cấy một lá mầm so với mẫu mầm
trong môi trường MS tăng lên với 1,0 mg / L Kn [26]. được tăng thêm lên đến 95% khi TDZ (1,0 mg / L) được kết hợp với IAA (1,0
mg / L) trong môi trường nuôi cấy [38]. Tương tự, chỉ riêng TDZ so với các PGR thông thường như IAA và BA,
là chất điều hòa sinh trưởng tương đối hiệu quả hơn trong quá trình hình thành chồi ở các loài Kigelia
2.3. Sự hình thành pinnata,
và sự ổn Cichorium
định của rễ
intybus và Phaseolus vulgaris [33,38,39].

Sau đó, các chồi nhân giống in vitro được cấy vào môi trường MS có hoặc không có PGR để tạo rễ.
Môi trường MS đã sửa đổi đã được sử dụng để tạo rễ cho chồi vì phản ứng ra rễ rất thấp để đáp ứng với
TDZ ở các nồng độ khác nhau. Như được chỉ ra trong Bảng 3, các kết quả cho thấy rằng sự hình thành rễ
được bắt đầu ở các chồi được trồng trong môi trường MS cường độ một nửa được tăng cường với 0,1 mg / L IBA.

Trong đó, các phản ứng tăng trưởng cao nhất trong quá trình tạo rễ in vitro (tần số cảm ứng: 45,7 ± 2,54%, chiều dài rễ: 3,6

± 0,46 cm) được quan sát tương ứng. Trong khi phản ứng thấp nhất được quan sát ở môi trường MS có cường độ đầy đủ được bổ

sung 1,0 mg / L IBA. Trong các báo cáo khác nhau, IBA hoặc đơn lẻ hoặc kết hợp với các PGR khác, đã ảnh hưởng tích cực đến

sự cảm ứng ra rễ ở nhiều cây thuốc. Cả IBA và NAA đều là PGR tổng hợp được báo cáo cho tần số cảm ứng rễ cao hơn ở

Orthosiphon stamineus [45,46].

Trong quá trình nuôi cấy in vitro thực vật, IBA đã cho thấy một vai trò hiệu quả trong việc sản xuất ethylene, ngăn

chặn quá trình mở chồi để tái sinh chồi và do đó kích hoạt sự hình thành rễ ở chồi [47].

Cuối cùng, những cây khỏe mạnh phát triển tốt được chuyển đồng nhất sang hệ thống nuôi cấy trùn quế và được đặt

trong buồng sinh trưởng cho đến khi thích nghi thành công. Sau đó, sau năm tuần, các nhà máy đã được chuyển sang
Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, 728 7 trên 18

Điều kiện đồng ruộng mà trên 75% số cây sống sót với tốc độ sinh trưởng bình thường và không có kiểu hình
hoặc bất thường về hình thái.

Bảng 3. Sự phát triển của rễ từ các chồi tái sinh trong môi trường MS đầy đủ hoặc nửa cường độ với

nồng độ khác nhau của axit indole butyric (IBA) trong L. usitatissimum. Giá trị đại diện cho dữ liệu trung bình của

mỗi lần xử lý với ± sai số tiêu chuẩn. Dữ liệu được thu thập sau thời gian nuôi cấy bốn tuần. Dữ liệu với
(các) chữ cái khác nhau có ý nghĩa thống kê ở p ≤ 0,5. MS0: Môi trường MS không có chất điều hòa sinh trưởng thực vật.

Phương tiện truyền thông PGR Nồng độ (mg / L) Tần suất cảm ứng rễ (%) Ngày bắt đầu ra rễ Trung bình. Chiều dài rễ

Phương tiện MS cường độ đầy đủ IBA 0,1 27,6 ± 0,95 đĩa CD

10 ± 0,81 b 3,1 ± 0,21 b
Các nhà máy 2020, 9, x ĐỂ ĐÁNH 8 trên 18
IBA GIÁ PEER 0,5 36,9 ± 1,84 b 10 ± 0,81 b 3,1 ± 0,21 b
IBA 1,0 21,5 ± 0,82 d 10 ± 0,81 b 3,1 ± 0,21 b

Phương tiện MS nửa sức mạnh IBA 0,1 45,7 ± 2,54 một
8 ± 0,20 c 3,5 ± 0,46 một

IBA 0,5 42,2

42,2 ±
± 2,45
2,45abab 8 ± 0,20c c 3,5 ± 0,46 a
IBA 0,5 8 ± 0,20 3,5 ± 0,46 một

IBA 1,0 32,43 ± 1,33bc 8 ± 0,20 c 3,5 ± 0,46 một

IBA 1,0 32,43 ± 1,33 bc 8 ± 0,20 c 3,5 ± 0,46 a

MS0 Không có PGR 0 33,16 ± 1,34 c 13 ± 0,95 một
1,3 ± 0,16 c

Không
MS0 0 33,16 ± 1,34 c 13 ± 0,95 a 1,3 ± 0,16 c
PGR
2.4. Sản xuất các chất chuyển hóa thứ cấp chống oxy hóa trong hạt lanh

Các 2.4.
yếu Sản
tố khác nhau
xuất các chẳng
chất hạn
chuyển hóanhư
thứánh
cấp sáng, PGRs
chống oxy hóavà chấthạt
trong chiết
lanh xuất, không chỉ ảnh hưởng đến sự tái sinh chồi và

sự hình thành sinh khối mà còn ảnh hưởng đến việc sản xuất các chất chuyển hóa thứ cấp quan trọng khác nhau trong quá trình
Các yếu tố khác nhau chẳng hạn như ánh sáng, PGRs và chất chiết xuất, không chỉ ảnh hưởng đến sự tái sinh chồi và
nhân giốnghình
vi thành
mô [48]. Tế bào
sinh khối thực
mà còn ảnhvật tổng
hưởng đếnhợp
việccác
sản chất chuyển
xuất các chất hóa thứhóa
chuyển cấp
thứnày
cấp trong điềukhác
quan trọng kiệnnhau
căng thẳng.

Tình trạng căng

trong quá thẳng đượcgiống
trình nhân tạoviramô do sảnTếxuất
[48]. quávật
bào thực mức các
tổng hợplượng oxychuyển
các chất đơn hóa
lẻ thứ
kháccấpnhau, còn
này khi đượcthẳng
bị căng gọi là phản ứng

các loại các

oxyđiều
bênkiện.
trong
Tìnhtếtrạng
bào căng
thực vậtđược
thẳng đôitạo
khi
ra gây hoạisảntửxuất
bởi việc tế quá
bàomức
hoặc chết oxy
các lượng tế đơn
bàolẻ[49]. Các lớp khác nhau
khác nhau,

còn được gọi là các loại oxy phản ứng bên trong tế bào thực vật, đôi khi gây hoại tử tế bào hoặc chết tế bào
của các chất chuyển hóa thứ cấp, ví dụ như flavonoid, hợp chất phenolic, glycoside, alkaloid, terpenoit,
[49]. Các lớp khác nhau của chất chuyển hóa thứ cấp, ví dụ như flavonoid, hợp chất phenolic,
vv, được tạo ra bởi tế bào thực vật để giảm thiểu các điều kiện căng thẳng khắc nghiệt và tiếp tục phát triển bình thường
glycoside, alkaloid, terpenoids, v.v., được tạo ra bởi tế bào thực vật để giảm thiểu căng thẳng khắc nghiệt
và phát triển [50].
điều kiện và tiếp tục tăng trưởng và phát triển bình thường [50].
Trong phân tích
Trong phân của
tích chúng tôi,
của chúng tôi,lượng
lượng TPC tốiđa đa
TPC tối (34,33
(34,33 ± mg
± 0,20 0,20
GAE mg
/ g GAE / TFC
DW) và g DW) và± TFC
(8,99 0,023(8,99 ± 0,023 mg

QE / g DW)mgđược
QE / xác
g DW)định
được trong các
xác định chồicácđược
trong chồitrồng trongtrong
được trồng môi môi
trường MSMScócó bổ
trường bổ sung TDZ(1,0
sung TDZ

(1,0 mg / mg
L)/ +L)Kn
+ Kn (0,5mgmg// L),
(0,5 L), trong
trong khi
khimức TPCTPC
mức thấp nhất nhất
thấp (23,59 ± 0,012± mg
(23,59 GAE /mg
0,012 g DW)
GAE và
/ TFC (2,56
g DW) và
± 0,024 mg QE / g DW) được phát hiện trong các mẫu cấy được xử lý Kn (0,5 mg / L) (Hình 2a). Hơn nữa,
TFC (2,56 ± 0,024 mg QE / g DW) được phát hiện trong các mẫu cấy được xử lý Kn (0,5 mg / L) (Hình 2a).
kết quả cho thấy chồi tái sinh trong môi trường nuôi cấy bổ sung TDZ kết hợp với Kn
Hơn nữa, kết quả cho thấy rằng các chồi được tái sinh trong môi trường nuôi cấy bổ sung TDZ kết hợp
tích lũy mức TPC và TFC cao hơn so với TDZ được thử nghiệm một mình. Trong một nghiên cứu tương tự,
với Kn tích lũy mức TPC và TFC cao hơn so với TDZ được thử nghiệm một mình. Trong một tương tự
TPC tối ưu (5,10 mg GAE / g DW) và TFC (2,72 mg QE / g DW) được tạo ra trong mô sẹo
nghiên cứu, TPC
nuôi cấytối
vớiưu
sự (5,10 mg GAE
hiện diện của /
2,0g mg
DW)/ L
vàTDZ
TFCở (2,72 mg QE / g[51].
L. usitatissimum DW) được tạo ra trong mô sẹo

nuôi cấy với sự hiện diện của 2,0 mg / L TDZ ở L. usitatissimum [51].

Hình 2. Tiếp theo.

Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, x ĐỂ ĐÁNH GIÁ PEER 9 của 18

Các nhà máy 2020, 9, 728 8 trên 18

Hình 2. Tiếp theo.

Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, x ĐỂ ĐÁNH GIÁ PEER 10 của 18

Các nhà máy 2020, 9, 728 9 của 18

Hình 2. Ước tính sự tích lũy các chất chuyển hóa thứ cấp chống oxy hóa trong các chồi vi nhân giống của L. usitatissimum để đáp ứng

với các nghiệm thức PGR khác nhau. (a): tổng hàm lượng phenolic (TPC), tổng hàm lượng flavonoid (TFC) và hoạt tính phenyl alanin amoniac

lyase (PAL), (b): superoxide Hình 2. Ước tính sự tích tụ của các chất chuyển hóa thứ cấp chống oxy hóa trong hoạt động dismutase (SOD) ,
(c): hoạt động peroxidase (POD), và (d): hoạt động thu dọn gốc tự do DPPH. chồi vi nhân giống của L. usitatissimum để đáp ứng
với các nghiệm thức PGR khác nhau. (a): tổng phenol T1: 0,5 mg / L TDZ, T2: 1,0 mg / L TDZ, T3: 1,5 mg / L TDZ, T4: 0,5 mg / L Kn, T5:
TDZ + Kn (0,5 mg / L, hàm lượng ( TPC), tổng hàm lượng flavonoid (TFC) và hoạt tính phenyl alanin amoniac lyase (PAL), (b): mỗi
loại), T6: 1,0 mg / L TDZ + 0,5 mg / L Kn và T7: 1,5 mg / L TDZ + 0,5 mg / L Kn. Các giá trị đại diện cho hoạt động trung bình của
superoxide dismutase (SOD), (c): hoạt động của peroxidase (POD) và (d): dữ liệu gốc tự do DPPH của mỗi nghiệm thức với ± sai

số tiêu chuẩn.
1,5 mg (Các) chữ T4:
/ L TDZ, cái 0,5
khácmgnhau
/ L trên mỗi TDZ
Kn, T5: dữ liệu
+ Kn cột
(mỗilàlần
hoạt
0,5động
mg /thu
L),thập
T6: thống
1,0 mgkê.
/ LT1:
TDZ0,5 mg /mgL /TDZ,
+ 0,5 T2:và1,0
L Kn, T7:mg1,5
/ LmgTDZ,
/ L T3:

TDZ + 0,5 mg / L Kn. có ý nghĩa ở p ≤ 0,5.

Giá trị đại diện cho dữ liệu trung bình của mỗi nghiệm thức với ± sai số tiêu chuẩn. (Các) chữ cái khác nhau trên

PAL là mỗi
mộtdữ liệu cột có ý nghĩa thống kê ở p ≤ 0,5.
enzym nổi bật giúp kích hoạt quá trình chuyển hóa phenylpropanoid ở thực vật [52]. Trong

nghiên cứu này, hoạt động PAL tối ưu (8,99 ± 0,023 mg U / g FW) đã được quan sát để đáp ứng với PAL là một
enzym nổi bật giúp kích hoạt chuyển hóa phenylpropanoid ở TDZ (1,0 mg / L) + Kn (0,5 mg / L ),
trong khi các
động chồi
PAL tốiphát triển±trong
ưu (8,99 0,023môi
mg trường MS có
U / g FW) chứa
được các
quan cây
sát riêng
trong lẻ [52].
phản Trong
ứng TDZ (0,5nghiên cứu
mg / L) này,
dẫn đếnhoạt
hoạt
động PAL
+ thấp nhất
Kn (0,5 mg(3,63
/ L),±trong
0,066khi
mg U / g
các FW)phát
chồi (Hình 2a).trong
triển Trongmôi
nghiên cứuMS
trường của
cóchúng
chứa tôi, đến TDZ
TDZ riêng lẻ (1,0
(0,5 mg / L)
dẫn tối
lượng SOD đến ưu
hoạt động
(3,62 ± PAL thấp
0,015 nM nhất
/ phút(3,63
/ mg± FW)
0,066
và mg
PODU (0,225
/ g FW)
± (Hình
0,021 2a).
nM / Trong
phút /nghiên cứu SOD
mg lượng của tối
chúng
ưu tôi,
(3,62
± 0,015 nM / phút / mg FW) và POD ( 0,225 ± 0,021 nM / phút / mg FW)
FW) đã được ghi nhận trong các mẫu cấy chồi phát triển với (TDZ (1,0 mg / L + Kn 0,5 mg / L) và (TDZ được
ghi nhận trong các mẫu cấy chồi được trồng với (TDZ (1,0 mg / L + Kn 0,5 mg / L) ) và (TDZ (0,5 (0,5
mg / L + Kn 0,5mg / L), tương ứng (Hình 2b, c). Các enzym chống oxy hóa này được sản xuất bởi thực vật
mg / L + Kn 0,5mg / L), tương ứng) (Hình 2b, c). Các enzym chống oxy hóa này được tạo ra bởi tế bào
thực vật trong điều kiện căng thẳng nghiêm trọng để giảm nguy cơ oxy hóa, xúc tác tế bào superoxide (O2 -)
trong điều kiện căng thẳng nghiêm trọng để giảm nguy cơ oxy hóa, xúc tác superoxide (O2 ) bằng phản
ứng khử(O2
và chuyển
) thànhđổi
oxysuperoxide (O2 hoặc
phân tử (O2) -) thành
hydrooxy phân tử(H2O2)
peroxide (O2) hoặc
thôngphản
qua ứng
quá khử hydro
trình và chuyển
chuyển hóa oxysuperoxide
[53,54].
Các nghiên
[53,54].
cứu đã
Các
chỉ
nghiên
ra rằng
cứu trong
đã chỉ
sốra
tất
rằng
cả trong
các PGR,
số tất
TDZ cả
ở peroxide
các PGR, (H2O2)
TDZ ở 1,2
thông
ppm
qua
có chuyển
hiệu quả
hóacao
oxysinh
thái
SOD (4,2 U /đểmgsản xuất SOD
protein) và (4,2 U / mg
POD (2,8 U /protein) và POD
mg protein, (2,8 U /tương
protein), mg 1,2 ppmtrong
ứng, có hiệu
nuôiquả
cấycao để của
chồi sản A.
xuất
bracteosa [32]. tương ứng, trong nuôi cấy chồi của A. bracteosa [32].
Một nghiên cứu khác kết luận rằng mô sẹo tạo ra từ mẫu hạt lanh trong phản ứng Một
nghiên cứu khác kết luận rằng mô sẹo tạo ra từ mẫu hạt lanh phản ứng với TDZ (0,5–5,0 mg / L), cho
thấy mối tương quan nghịch trong các enzym chống oxy hóa hoạt động [55]. Ở TDZ (0,5–5,0 mg / L), cho
thấy mối tương
POD quan
không nghịch
được trong
sản xuất hoạt
hiệu động
quả vào của
đầu các enzymcấy
vụ nuôi chống oxyở hóa
nhưng cây [55].
thông Ởtrắng,
thông mức
trắng miền
POD đông,
không mức
được
sản xuất hiệu
chồi quả Tuy
[56]. vào nhiên,
đầu vụ chất
nuôi chống
nhưng oxy
sau hóa
đó tăng
tăng lên
lên ởở các
các giai
giai đoạn
đoạn sau
sau trong
trong quá
quá trình
trình phát
phát triển
triển
chồi [56]. Tuy nhiên, tiềm năng chống oxy hóa trong các mẫu cấy chồi hạt lanh tái sinh đã được phân tích
bằng cách sử dụng xét nghiệm thu dọn gốc tự do DPPH.
Như được chỉ ra trong Hình 2d, hoạt tính chống oxy hóa tối đa (92,7 ± 1,32%) được ghi lại trong các chồi in vitro được

tái sinh trong môi trường MS được tăng cường (TDZ 1,0 mg / L + Kn 0,5 mg / L). Trong khi hoạt động thấp nhất được quan

sát thấy ở các mẫu nuôi cấy được xử lý TDZ một mình (0,5 mg / L). Tương tự như vậy Anjum et al. [57], hoạt động chống

oxy hóa cao nhất được quan sát thấy (91,51%) trong môi trường nuôi cấy mô sẹo được phát triển từ mẫu lá của hạt lanh

được trồng trong môi trường bổ sung TDZ (2,0 mg / L).

Machine Translated by Google
khảo nghiệm nhặt rác. Như được chỉ ra trong Hình 2d, hoạt tính chống oxy hóa tối đa (92,7 ± 1,32%) được ghi

lại trong các chồi in vitro được tái sinh trong môi trường MS được tăng cường (TDZ 1,0 mg / L + Kn 0,5 mg / L).

Trong khi hoạt động thấp nhất được quan sát thấy ở các mẫu nuôi cấy được xử lý TDZ một mình (0,5 mg / L). Tương tự như vậy Anjum et al. [57], hoạt

động chống oxy hóa cao nhất được quan sát thấy (91,51%) trong môi trường nuôi cấy mô sẹo được phát triển từ lá Cây 2020, 9, 728 mẫu hạt lanh trồng
trong môi trường bổ sung TDZ (2,0 mg / L). 10 của 18

2.5. Sản xuất Lignans có dược tính trong hạt lanh

2.5. Sản xuất Lignans có dược tính trong hạt lanh

Trong nghiên cứu này, mức độ đáng kể của lignans có hoạt tính dược lý như secoisolariciresinol Trong
nghiên cứu này, mức độ đáng kể của lignans có hoạt tính dược lý như secoisolariciresinol (SECO: 23,13–37,10
mg / g DW), secoisolariciresinol diglucoside (SDG: 3,32–3,86 mg / g DW ), và (SECO: 23,13–37,10 mg / g DW),
secoisolariciresinol diglucoside (SDG: 3,32–3,86 mg / g DW), anhydrosecoisolariciresinol diglucoside (ANHSECO:
5,15–7,94 mg / g DW) được tích lũy trong và anhydrosecoisolariciresinol (diglucoside ANHSECO: 5,15–7,94 mg /
g DW) được tích lũy trong các mẫu cấy chồi (Hình 3). Lượng SECO cao hơn (37,10 ± 0,023 mg / g DW) đã được ghi
nhận trong mẫu cấy chồi (Hình 3). Lượng SECO cao hơn (37,10 ± 0,023 mg / g DW) được ghi nhận trong môi trường
MS được trồng trên (TDZ + Kn (0,5 mg / L, mỗi)), trong khi hàm lượng SECO thấp nhất (3,47 chồi phát triển trên
(TDZ + Kn ( 0,5 mg / L, mỗi môi trường MS đã xử lý, trong khi hàm lượng thấp nhất là ± 0,013 mg / g DW) được
phát hiện khi đáp ứng với điều trị TDZ (1,5 mg / L) + Kn (0,5 mg / L) (Hình 3).
SECO (3,47 ± 0,013 mg / g DW) được phát hiện khi đáp ứng với điều trị TDZ (1,5 mg / L) + Kn (0,5 mg /
L) (Hình 3).

Hình 3. Ước tính sự tích tụ lignans hoạt tính sinh học trong các chồi vi nhân giống của L. usitatissimum

để đáp
Hìnhứng
3. với
Ước các
tínhnghiệm thức
sự tích tụ PGR khác hoạt
lignans nhau.tính
T1: sinh
0,5 mg
học/ trong
L TDZ,các
T2:chồi
1,0 vi
mg nhân
/ L TDZ,
giốngT3:
của1,5
L. mg / L TDZ,
usitatissimum

T4: để
0,5đáp
mg ứng
/ L với
Kn, các
T5: nghiệm
TDZ + Kn (mỗi
thức PGRlần 0,5nhau.
khác mg / T1:
L), 0,5
T6: mg
1,0/ mg / L TDZ
L TDZ, T2: +1,0
0,5mgmg/ /L LTDZ,
Kn, T3:
và T7:
1,5 1,5
mg /mgL /TDZ,
L TDZ
T4:+ 0,5
0,5 mg
mg // LL Kn,
Kn. T5:
Giá TDZ
trị +đại
Kn diện
(mỗi cho
lần dữ
0,5liệu
mg /trung bình1,0
L), T6: củamgmỗi
/ Lnghiệm
TDZ + thức với/ ±L sai
0,5 mg Kn, số
và tiêu chuẩn.
T7: 1,5 mg /
(Các) chữ +cái
L TDZ 0,5khác
mg /nhau trên
L Kn. Giámỗi
trịdữđại
liệu cộtcho
diện có dữ
ý nghĩa thống bình
liệu trung kê ở của
p ≤ mỗi
0,5.nghiệm
SDG: (secoisolariciresinol
thức với ± sai số tiêu chuẩn.
diglucoside), SECO:
(Các) chữ cái (secoisolariciresinol)
khác nhau trên mỗi dữ liệuvàcột
ANHSECO (anhydrosecoisolariciresinol
có ý nghĩa thống kê ở p ≤ 0,5. SDG:diglucoside).
(secoisolariciresinol

diglucoside), SECO: (secoisolariciresinol) và ANHSECO (anhydrosecoisolariciresinol diglucoside).

Nhìn chung, chồi L. usitatissimum phát triển để đáp ứng với TDZ và Kn tổng hợp SDG và ANHSECO tối ưu.
Tương tự như vậy, liều lượng thấp hơn của các PGR này khi kết hợp được thấy là phù hợp với Nói chung, chồi L.
usitatissimum phát triển để đáp ứng với TDZ và Kn đã tổng hợp sinh tổng hợp SECO tối ưu tối ưu trong
các của
chồicác
táiPGR
sinh
nàyinkết
vitro
hợp của
với hạt
nhaulanh.
được Một
cho số
là nghiên
phù hợpcứu
vớicóbáo
SDGcáo
và rằng
ANHSECO.
TDZ, Tương tự với
kết hợp như các
vậy,PGR
liều thấp
khác nhưhơn
BA
hoặcMột
NAA,
số đã hoạt cứu
nghiên độngđãhiệu
sản quả
xuấthơn
tốiđểđasinh tổng trong
lignans hợp tối
môiưutrường
SECO trong các mô
nuôi cấy chồi
sẹotái
củasinh
hạt in vitro
lanh của hạt
[57–59]. báolanh.
cáo
rằngchẽ
TDZ,
vớikết
kếthợp
quảvới
củacác PGR et
Aujum khác
al.như BA hoặc
[57], trongNAA, đã hoạt
đó TDZ (1,0 động
mg / hiệu
L) đểquả
sảnhơn Kếttối
xuất quảđacủa chúng trong
lignans tôi phù
môihợp chặt
trường
nuôi
kể, tứccấy
là mô
SDGsẹo của
(0,7 ± hạt lanh
0,0045 mg[57–59].
/ g DW) kết hợpmôi
trong vớitrường
NAA (2,0
nuôimgcấy
/ L)
mô tạo
sẹo ra hàm xuất
chiết lượngtừlignans
lá của quan trọng Trong
hạt lanh. đáng

một nghiên cứu khác, số lượng SECO cao hơn đã được tổng hợp để đáp ứng với sự kích thích nấm của hạt lanh trong

khi không có SDG nào được phát hiện trong kiểm soát hoặc trong nuôi cấy tế bào được kích thích [11]. Trong nghiên

cứu của chúng tôi, quá trình sinh tổng hợp lignans phụ thuộc vào nồng độ PGRs được sử dụng trong quá trình vi

nhân giống. Mức TDZ cao hơn tạo ra thấp hơn

Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, 728 11 của 18

lượng của các chất chuyển hóa này. Đó là do quá trình tổng hợp sản xuất ethylene quá mức ở mức TDZ cao, ngăn chặn việc

sản xuất các chất chuyển hóa thứ cấp [60].

Sinh tổng hợp lignans bao gồm quá trình chuyển hóa pinoresinol (furofuran), được kích hoạt đối
chiếu bằng cách đồng phân hóa hai đơn vị rượu coniferyl với sự hỗ trợ của protein dirigent tạo ra sản
phẩm đầu tiên SDG (một chất ngăn ngừa ung thư) trong Forsythia intermedia [61]. Sau đó, sự khử đồng
thời sản phẩm trung gian này thông qua enzym reductase (secoisolariciresinol dehydrogenase) tạo thành
dibenzoylbutan (secoisolariciresinol), tiếp theo là glycosyl hóa SECO thông qua glycosyl transferase
(một enzym đa nguyên), và cuối cùng dẫn đến sự hình thành SDG (secoisolariciresinol diglucoside) [62] .
Nhiều gen đã được xác định trong hạt lanh mã hóa SECO hoặc SDG. Trong một nghiên cứu, nó đã chỉ ra rằng SDG tối đa

được tích lũy trong vỏ hạt nơi biểu hiện tối ưu của gen UGT74S1 (uridine diphosphate glycosyltransferase (UGTs)) được

phát hiện trong vỏ hạt, cho thấy rằng nó hoạt động như SECO-GTs (Secoisolariciresinol glycosyltransferase) [62 , 63].

Một số nghiên cứu khác cho thấy 2 gen GT (glycosyl transferase), UGT74S1 và UGT94H, được biểu hiện nhiều trong quá

trình sinh trưởng của hạt lanh và gây ra sự biểu hiện của gen PLR (pinoresinol-lariciresinol reductase), đóng một vai

trò quan trọng trong sản xuất SECO. Do đó, gen UGT74S1 có thể tổng hợp chủ yếu cả hai lignans như SECO và SDG [64].

Các nghiên cứu đã báo cáo rằng hai gen của bộ gen hạt lanh, mã hóa protein tương đối kích hoạt tiền chất (pinoresinol)

để hình thành lignans trong quá trình sinh trưởng và phát triển [61,65].

Điều đáng nói là SDG có thể được sử dụng như một chất chống ung thư để điều trị ung thư ruột kết hoặc ung thư

vú. Nó làm giảm sự phát triển ung thư và sự phân chia tế bào của các tế bào khối u thông qua việc kích hoạt quá trình

apoptosis của các tế bào ung thư. SDG cũng được báo cáo về phản ứng chống vi khuẩn nổi bật chống lại nhiều loại mầm

bệnh [66,67]. SDG và SECO có khả năng chống oxy hóa, và được sử dụng để ngăn chặn DNA khỏi bị tổn thương do oxy hóa và

quá trình peroxy hóa lipid. Những lignans này làm giảm nguy cơ mắc hội chứng chuyển hóa bằng cách ngăn ngừa stress oxy

hóa liên quan đến quá trình trao đổi chất [8,68].

Các lignans khác như SDG, ANHSECO và SECO cũng được báo cáo là làm giảm mức cholesterol trong máu (LDL và HDL)

trong quá trình chuyển hóa glucose; do đó, dẫn đến việc ngăn ngừa các bệnh tim mạch [69].

3. Vật liệu và Phương pháp

3.1. Nguyên liệu thực vật, khử trùng và nảy mầm trong ống nghiệm

Đầu tiên, hạt giống của L. usitatissimum được rửa sạch bằng nước cất vô trùng bên trong tủ hút luồng khí, tiếp

theo là ngâm hạt trong 0,5% thủy ngân clorua (HgCl2) trong 5 phút, sau đó rửa bằng etanol 70% (v / v) trong 3 tối

thiểu Cuối cùng, rửa kỹ hạt 3 lần bằng nước cất vô trùng. Sau đó, hạt được làm khô trên giấy lọc vô trùng và được cấy

trên môi trường Murashige và Skoog (MS0) [70] đã được hấp tiệt trùng trong các ống nghiệm chứa sucrose 7,5 g / L và

agar 0,8%. PH của môi trường được điều chỉnh thành 5,8 trước khi hấp tiệt trùng. Cuối cùng, các ống nghiệm được đặt

trong phòng nuôi cấy trong điều kiện quang chu kỳ 16 giờ sáng và 8 giờ tối và nhiệt độ ở 25 ± 2 C.

3.2. Tối ưu hóa các điều kiện trong ống nghiệm để vi nhân giống và phát triển cây con

Ban đầu, các mẫu cấy khác nhau (rễ, lá mầm, lá và lá mầm) được cắt bỏ (kích thước 1 cm) từ chồi
mầm 3 tuần tuổi. Dựa trên phản ứng tối ưu trong quá trình cảm ứng chồi, các mẫu cấy hypocotyl được
chọn cho các thí nghiệm tiếp theo. Các mẫu cấy Hypocotyl được nuôi cấy trong môi trường MS có chứa
TDZ đơn lẻ ở nồng độ 0,5–1,5 mg / L hoặc Kinetin (Kn) ở 0,5 mg / L và kết hợp với TDZ (0,5–1,5 mg /
L) trong các ống nuôi cấy có chứa sucrose 7,5 g / L và thạch 0,8%.
Độ pH của môi trường được điều chỉnh đến 5,8 trước khi hấp tiệt trùng. Cuối cùng, các ống nghiệm được đặt trong phòng

nuôi cấy trong điều kiện quang chu kỳ 16 giờ sáng và 8 giờ tối và nhiệt độ ở 25 ± 2 C.

Mức độ giống nhau của mỗi PGR được thử nghiệm để tạo chồi cũng được chọn để nhân và kéo dài chồi.
Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, 728 12 trên 18

Đối với mỗi nghiệm thức, 50 ống nghiệm được cấy với các mẫu tương ứng và các thí nghiệm được lặp
lại. Các quan sát được thực hiện bằng mắt ở các nền văn hóa sau một tháng nuôi cấy.
Tuy nhiên, sự nhân lên và kéo dài chồi được ghi lại bằng số chồi trên mỗi mẫu cấy (trung bình) và chiều
dài chồi (cm). Các chồi kéo dài được lấy từ môi trường chụp và được nuôi cấy thêm để tạo rễ và sinh sôi
trong môi trường tạo rễ. Môi trường tạo rễ bao gồm một nửa hoặc môi trường MS cường độ cao, được bổ sung
với các nồng độ khác nhau của axit indole butyric (IBA) ở (0,1 mg / L, 0,5 mg / L và 1,0 mg / L).

Đối với quá trình di thực, các cốc nhựa có lỗ nhỏ ở đáy được đổ đầy hỗn hợp cát và đất ruộng theo
tỷ lệ 1-3. Để cung cấp đất ẩm cho cây phát triển tốt hơn, tất cả các cốc được giữ trong bát có chứa nước
trong 24 giờ để hút nước đến một số giới hạn. Các cây đã ra rễ được lấy ra khỏi ống nghiệm và được rửa
cẩn thận bằng nước cất vô trùng để loại bỏ môi trường. Sau đó, cây con được chuyển sang các cốc nhựa
nhỏ và mỗi cốc được phủ một lớp nhựa mỏng để tránh bị khô. Cuối cùng, tất cả các cây được đặt trong điều
kiện có kiểm soát tại phòng sinh trưởng trong 3 tuần và sau đó được chuyển sang nhà kính.

3.3. Phân tích hóa thực vật

Để đánh giá việc sản xuất các chất chuyển hóa thứ cấp trong các mẫu cấy chồi, các mẫu thực vật được
thu hoạch từ các mẫu cấy in vitro được thiết lập với sự hiện diện của các phương pháp xử lý PGR khác nhau.
Các mô thực vật từ mỗi nghiệm thức tăng trưởng được thu hoạch khi các mẫu cấy ở giai đoạn phát triển
hoàn chỉnh. Các mẫu cấy được thu thập để phân tích phytochemical được bốn tuần tuổi. Các mẫu thực vật
được làm khô và nghiền nát để phân tích hóa thực vật. Các chất chiết xuất từ các mẫu thực vật được lựa
chọn đã trải qua các thử nghiệm khác nhau để xác định tổng hàm lượng phenolic (TPC), tổng hàm lượng
flavonoid (TFC) và hoạt tính chống oxy hóa dựa trên PAL.

3.3.1. Tổng nội dung phenolic

Ở bước đầu tiên, mỗi mẫu khô đã chọn được nghiền thành bột bằng máy xay. Bột đã nghiền được
trộn với 10 mL metanol 50% và dung dịch được đặt trên máy lắc ở tốc độ 24 vòng / phút trong 24
giờ ở 25–30 C, sau đó tiến hành trộn hỗn hợp trong 30 phút sau đó là xoáy trong 30 phút. Cuối
cùng, ly tâm dung dịch ở tốc độ 6500 vòng / phút trong 15 phút và loại bỏ phần nổi phía trên.
TPC được phân tích bằng cách sử dụng giao thức của Ali et al. [32], trong đó 20 µL của mỗi mẫu chiết
được thêm vào 90 µL thuốc thử Folin – Ciocalteu pha loãng 10 lần. Sau đó, hỗn hợp này được đổ vào các
giếng của đĩa 96 giếng và ủ trong 5 phút. Để duy trì thể tích cuối cùng của hỗn hợp ở 200 µL, thêm 90 µL
natri cacbonat nữa vào nó.

Đối với điều trị đối chứng, quy trình tương tự được lặp lại, trong đó methanol (20 µL) và axit
gallic (1 mg / mL) được sử dụng làm đối chứng âm tính và dương tính, tương ứng. Sau đó, hỗn hợp được ly
tâm ở tốc độ 10.000 vòng / phút trong 13 phút và được lọc qua màng dày 45 µm trong cuvet quang phổ nhìn
thấy UV (Shimadzu-1650; Nhật Bản). Độ hấp thụ được ghi lại ở bước sóng 630 nm sau 90 phút. Để vẽ biểu
đồ, sử dụng đường cong hiệu chuẩn chuẩn axit gallic (Sigma; 1,0–10 mg / mL; R2 = 0,9878). Kết quả được
biểu thị bằng mg tương đương axit gallic (GAE) trên gam trọng lượng khô của dịch chiết.

3.3.2. Tổng hàm lượng Flavonoid

Để xác định TFC, phương pháp được phát triển bởi Chang et al. [71] đã được sử dụng. Với mục đích
này, 20 µL mẫu từ 10 mg / mL của mỗi mẫu được đổ vào giếng của các tấm vi mô, sau đó 10 µL nhôm clorua
(10 g / L; d-H2O) và 10 µL kali axetat (98,15 g / L; d-H2O) đã được thêm vào dung dịch phản ứng trong
giếng vi phiến. Đối với điều trị đối chứng, methanol (20 µL) và quercetin (1 mg / mL) được sử dụng tương
ứng là đối chứng âm tính và dương tính. Để duy trì thể tích cuối cùng ở 200 µL của hỗn hợp, 160 µL d-H20
đã được thêm vào. Sau 30 phút, độ hấp thụ được ghi lại ở bước sóng 450 nm.

Kết quả được biểu thị bằng mg quercetin tương đương (QE) trên gam trọng lượng khô của dịch chiết.
Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, 728 13 trên 18

3.3.3. Phân tích các hoạt động của enzym chống oxy hóa

Để ước tính hoạt động của enzym chống oxy hóa, chúng tôi sử dụng quy trình của Khan và cộng sự.
[49] với một số sửa đổi. Một cách ngắn gọn, 0,2 g chiết xuất thực vật tươi của mỗi mẫu được nghiền
nát bằng máy nghiền và 2 mL đệm photphat (50 mM, pH 7,8 và 0,1 mM EDTA) được thêm vào dịch chiết để
tạo thành đồng nhất. Sau đó ly tâm hỗn hợp ở 4 C trong 15 phút với tốc độ 12.000 vòng / phút . Sau
đó, phần nổi phía trên được loại bỏ và các hoạt động của enzym chống oxy hóa được thực hiện bằng cách
sử dụng máy quang phổ UV – vis. Hoạt động của Superoxide dismutase được xác định bởi Khan và cộng sự. [49].
Hệ thống xét nghiệm bao gồm riboflavin, methionine và NBT được sử dụng để phân tích SOD trong các mô
nhân giống vi mô. Quy trình đã được sửa đổi để phân tích tốt các hoạt động của enzym trong các mẫu đã
chọn. Một hỗn hợp gồm 1,3 µM riboflavin, 13 mM methionin và 63µM NBT được chuẩn bị, sau đó thêm 20 µL
chiết xuất thực vật vào hỗn hợp, sau đó thêm 0,05 M natri cacbonat (pH10,2) và một ít nước được thêm
vào hỗn hợp. Phản ứng xảy ra trong một buồng được chiếu sáng bằng đèn huỳnh quang 30 W ở 25 C. Phản
ứng được bắt đầu bằng cách bật đèn huỳnh quang và tắt đèn sau 5 phút. Formazan màu xanh lam được tạo
ra bởi quá trình quang hấp thụ NBT được đo khi hoạt độ hấp thụ tăng lên ở bước sóng 560 nm. Hoạt tính
enzym của SOD được ký hiệu là g
1
trọng lượng tươi (FW) min-1 .

3.3.4. Hoạt động của Phenylalanin Amoniac-Lyase (PAL)

Hàm lượng PAL trong chồi nuôi cấy được xác định theo quy trình của Ali et al. [72]. Khoảng 80–
100 mg mỗi mẫu chồi bột được trộn với 100 mM kali borat (đệm đá lạnh có pH 8,8) sau đó thêm 2 nM
mercaptoetanol vào hỗn hợp. Sau khi ly tâm hỗn hợp ở 12.000 vòng / phút trong 10 phút ở 4 C, phần
nổi phía trên được loại bỏ khỏi mẫu và được sử dụng cho xét nghiệm PAL, trong đó 0,5 mL phần nổi phía
trên từ mỗi mẫu được thêm vào ống đã chứa đầy 0,5 mL phenylalanin ( con: 4,0 mM-1 ) và 1,0 mL đệm
kali borat (BK3O3) . Thể tích của hỗn hợp phản ứng được duy trì ở mức 2,0 mL. Hỗn hợp được bổ sung
với 0,2 mL HCl 6 M và sau đó được ủ ở 30 C trong 30 phút. Cuối cùng, độ hấp thụ của hỗn hợp phản
ứng được ghi lại ở bước sóng 290 nm. Sự hấp thụ của hỗn hợp xảy ra sau khi hình thành sản phẩm enzyme
được đề xuất là một đơn vị của hoạt độ phenylalanin amoniac-lyase (U) với giá trị thay đổi độ hấp thụ
là 0,01.

3.3.5. Hoạt động của peroxidase (POD)

Để đo hoạt tính peroxidase của các mẫu đã chọn, hỗn hợp 3,0 mL được chuẩn bị bằng cách thêm
thể tích 10 µL dung dịch enzym vào 2,99 mL dung dịch đệm natri photphat (50 mM, pH 6,0) chứa
18,2 mM guaiacol và 4,4 mM hydro peroxit (H2O2) làm chất nền. Hoạt độ POD được đo bằng cách tính
toán độ lệch trong độ hấp thụ ở bước sóng 470 nm ở 25 C. Hoạt độ POD được định nghĩa là lượng
enzyme gây ra sự gia tăng độ hấp thụ ở bước sóng 470 nm là 0,001 mỗi phút [73].

3.3.6. Xác định Hoạt động Nhặt Radicle Miễn phí

Xét nghiệm DPPH (2, 2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl) được thực hiện bằng phương pháp được phát triển
bởi Abbasi et al. [74]. Một cách ngắn gọn, một hỗn hợp gồm 180 µL DPPH (3,2 mg / 100 mL metanol) và
20 µL mẫu chiết được chuẩn bị và sau đó ủ trong 30 phút ở nhiệt độ phòng (25 ± 2 C).
Dịch chiết metanol của mỗi mẫu trong dung dịch DPPH (0,5 mL) được phân tích qua máy quang phổ nhìn thấy được tia

cực tím . Độ hấp thụ của hỗn hợp phản ứng được đo ở bước sóng 517. Cuối cùng, hoạt động loại bỏ tận gốc được tính

bằng% của sự đổi màu DPPH bằng cách sử dụng công thức sau.

% Hoạt động thu gom gốc tự do (% FRSA) = 100 × (1 - AC / AS)

Trong đó AC là độ hấp thụ của dung dịch khi thêm dịch chiết mẫu ở một nồng độ cụ thể và AS là độ hấp thụ của dung
dịch DPPH (tiêu chuẩn).
Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, 728 14 của 18

3.4. Phân tích Lignans trong chồi nhân giống vi mô của L. Usitatissimum

Các chiết xuất được chọn từ chồi L. usitatissimum nuôi trong ống nghiệm được trộn với 1 mL (4: 1 v / v) hỗn hợp

pyridine và BSTFA và được thêm 1% trimethylchlorosilane ở 70 C trong 60 phút để tổng hợp các dẫn xuất trimethylsilyl

của lignans . Để hiệu chuẩn chính xác, các chất chuẩn của SECO và ANHSECO được dẫn xuất theo cùng một mẫu theo phương

pháp của Sarajlija et al. [75].

Hệ thống máy phân tích bao gồm sắc ký khí Shimadzu 2010 được kết nối với bộ lấy mẫu tự động
(AOC-20i) và QP-2010 cộng với máy dò chọn lọc khối lượng để phân tích GC / MS. Cột mao quản 30 m
HP-5 ms có id 0,25 mm và độ dày màng 0,25 µm được sử dụng. Sau khi làm khô hỗn hợp pyridine-BTSFA-
trimethylchlorosilan, các chất chiết xuất muối được hòa tan bằng hexan. Sau đó, 1 µL mẫu đã chiết
được tiêm qua cổng tiêm hoạt động ở chế độ đồng nhất ở 285 C, trong 30 s.
Nhiệt độ ban đầu của cột được giữ ở 175 ° C. Sau 6 phút, nó được nâng lên đến 270 C ở tốc độ 15
C / phút và giữ trong 15,6 phút (tổng thời gian chạy là 28 phút). Nhiệt độ bề mặt là 285 C.
Phương thức tổng dòng ion (TIC) và / hoặc chế độ giám sát ion (SIM) đã chọn được sử dụng để phân
tích. Để xác định chính xác và xác thực các lignans, việc phân tích so sánh các lignans chiết
xuất được với các chất chuẩn đối chiếu đã đo đã biết được thực hiện bằng cách kết hợp thời gian
lưu sắc ký của chúng và tỷ lệ giữa các ion khối lượng [75].

3.5. Phân tích thống kê

Tất cả các thí nghiệm được thực hiện bằng cách sử dụng một thiết kế hoàn toàn ngẫu nhiên (CRD) với ba lần lặp lại.

Dữ liệu cuối cùng được phân tích thống kê bằng phương pháp phân tích một chiều bằng phần mềm SPSS. Sự khác biệt đáng kể

trong việc so sánh các phương tiện đã được chỉ ra với thử nghiệm nhiều phạm vi (DMRT) của Duncan.

4.Kết luận

Đây là báo cáo đầu tiên về vi nhân giống đơn giản, nhanh chóng và khả thi của L. usitatissimum
và sinh tổng hợp lignans có hiệu lực y học Sự tái sinh chồi tối ưu được thực hiện trong mẫu cấy
hypocotyl so với các mẫu cấy khác. Sự kết hợp giữa TDZ và Kn có hiệu quả hơn trong việc tái sinh
chồi trực tiếp. Số lượng phenolics, flavonoid, enzym chống oxy hóa và lignans cao hơn được tìm
thấy trong các mẫu cấy chồi được xử lý với mức TDZ cao hơn. Nghiên cứu này có tiềm năng sản xuất
đầy hứa hẹn các chất chuyển hóa chống oxy hóa hoạt tính sinh học và lignans.

Đóng góp của tác giả: Chúng tôi, các tác giả đồng ý rằng tác phẩm này là kết quả của những nỗ lực chung của chúng tôi. Tất
cả các tác giả đã đọc và đồng ý với phiên bản bản thảo đã được xuất bản.

Kinh phí: Nghiên cứu này được tài trợ bởi Trưởng khoa Nghiên cứu Khoa học tại Đại học King Saud, tài trợ số (RG-1438-039).

Lời cảm ơn: Các tác giả gửi lời cảm ơn chân thành đến Chủ nhiệm Khoa Nghiên cứu Khoa học tại Đại học King Saud đã tài trợ
cho nhóm nghiên cứu này số (RG-1438-039).

Xung đột lợi ích: Các tác giả tuyên bố không có xung đột lợi ích.

Người giới thiệu

1. Barozai, MYK Insilico xác định microRNA và mục tiêu của chúng trong cây lanh sản xuất sợi và dầu (Linum usitatissimum

L.). Pak. J.Bốt. 2012, 44, 1357–1362.

2. Jhala, AJ; Hall, LM Flax (Linum usitatissimum L.): Các ứng dụng hiện tại và các ứng dụng trong tương lai. Áo J. Cơ bản

Appl. Khoa học. 2010, 4, 4304–4312.

3. Akhtar, K .; Dickinson, M.; Shah, T.; Sarwar, N. Sự xuất hiện tự nhiên, xác định và lây truyền của phytoplasma liên quan

đến thân cây lanh và bệnh mê hoặc thân cây ở Pakistan. Phytoparasitica 2013, 41, 383–389.

[CrossRef]

4. Halligudi, N. Các đặc tính dược lý của hạt lanh: Đánh giá. Hygeia J. Thuốc Med. 2012, 4, 70–77.

5. Ủy ban, CG Hồ sơ dinh dưỡng của hạt lanh phương Tây số 1 Canada và của các mẫu hạt lanh vàng.
Có thể. Hạt Commun. Winn. Manit. 2001, 3, 63–67.
Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, 728 15 của 18

6. Clarence-Smith, WG Cacao và Sô cô la, 1765–1914. Routledge: Abingdon-on-Thames, Anh, Vương quốc Anh, 2003.

7. Das, UN Các axit béo thiết yếu — Một đánh giá. Curr. Dược phẩm. Công nghệ sinh học. 2006, 7, 467–482. [CrossRef]

8. Katare, C.; Saxena, S.; Agrawal, S .; Prasad, G.; Bisen, P. Hạt lanh: Một loại thực phẩm có tiềm năng làm thuốc. J. Nutr.

Khoa học thực phẩm. 2012, 2, 1–8. [CrossRef]

9. Kasote, D. Phenol hạt lanh làm chất chống oxy hóa tự nhiên. Int. Thực phẩm Res. J. 2013, 20, 27.

10. Perryman, S.; Gladders, P.; Barrow, A.; Simons, B.; Fitt, BD Các bệnh của Hạt lanh mùa đông: Sự xuất hiện, Ảnh hưởng và Tầm quan trọng.

Có sẵn trực tuyến: uhra.herts.ac.uk (truy cập ngày 13 tháng 1 năm 2020).

11. Hano, C.; Addi, M.; Bensaddek, L.; Crônier, D.; Baltora-Rosset, S.; Doussot, J .; Maury, S.; Mesnard, F.; Chabbert, B.; Hawkins, S. Sự

tích tụ khác biệt của các hợp chất có nguồn gốc từ monolignol trong nuôi cấy huyền phù tế bào hạt lanh (Linum usitatissimum). Planta

2006, 223, 975–989. [CrossRef]

12. Szewczyk, M.; Abarzua, S.; Schlichting, A.; Nebe, B.; Piechulla, B.; Briese, V .; Richter, DU Ảnh hưởng của chiết xuất từ Linum

usitatissimum lên sức sống, tăng sinh và độc tế bào của tế bào trong các dòng tế bào ung thư vú ở người.

J. Med. Thực vật Res. 2014, 8, 237–245.

13. Sen, CK; Khanna, S .; Roy, S. Tocotrienols: Vitamin E ngoài tocopherols. Khoa học đời sống. 2006, 78, 2088–2098.

[CrossRef] [PubMed]

14. Morris, MC; Evans, DA; Tangney, CC; Bienias, JL; Wilson, RS; Aggarwal, NT; Scherr, PA Mối liên quan của các dạng tocopherol với bệnh

Alzheimer và thay đổi nhận thức. Là. J. Clin. Nutr. 2005, 81, 508–514. [CrossRef] [PubMed]

15. Ruột, KB; Sahoo, A. .; Ranveer, RC Các thành phần hoạt tính sinh học của hạt lanh và lợi ích sức khỏe của nó. Int. J. Pharma.

Khoa học. Rev. Res 2015, 31, 42–51.

16. Yildiz, M. Điều kiện tiên quyết của sự thành công trong nuôi cấy mô thực vật: Tái sinh chồi tần số cao.

Trong những tiến bộ gần đây trong nuôi cấy in vitro thực vật; Intech Mở: London, Vương quốc Anh, 2012.

17. Ling, APK; Tân, KP; Hussein, S. So sánh ảnh hưởng của các chất điều hòa sinh trưởng thực vật trên mẫu lá và thân của Labisia pumila

var. alata. J. Đại học Chiết Giang. Khoa học. B 2013, 14, 621–631. [CrossRef]

18. Wannakrairoj, S.; Tefera, W. Thidiazuron và các chất điều hòa sinh học thực vật khác để nuôi cấy Axenic của cây Bạch đậu khấu (Amomum

krervanh Pierre ex Gangnep). Kasetsart J. 2012, 46, 335–345.

19. Matand, K.; Prakash, C. Đánh giá kiểu gen lạc để tái sinh cây in vitro bằng thidiazuron.

J. Biotechnol. 2007, 130, 202–207. [CrossRef]

20. Khan, MA; Abbasi, BH; Shinwari, ZK Thidiazuron tăng cường khả năng tái sinh và hàm lượng silymarin trong Silybum marianum L. Pak.

J.Bốt. 2014, 46, 185–190.

21. Khan, T.; Abbasi, BH; Khan, MA; Shinwari, ZK Tác dụng khác biệt của thidiazuron đối với việc sản xuất các hợp chất phenolic chống ung

thư trong môi trường nuôi cấy mô sẹo của Fagonia indica. Appl. Hóa sinh. Công nghệ sinh học. 2016, 179, 46–58. [CrossRef]

22. Torres, GRC; Houllou, LM Kiểm soát các chất gây ô nhiễm trong quá trình giới thiệu và thiết lập Bambusa vulgaris trong ống nghiệm.

Res. Công nghệ sinh học. 2016, 7. [CrossRef]

23. Luciani, GF; Mary, AK; Pellegrini, C.; Curvetto, N. Ảnh hưởng của mẫu cấy và chất điều hòa sinh trưởng trong quá trình hình thành mô

sẹo tỏi và tái sinh cây. Nuôi cấy mô cơ quan tế bào thực vật. 2006, 87, 139–143. [CrossRef]

24. Takashina, T.; Suzuki, T.; Egashira, H.; Imanishi, S. Các chỉ thị phân tử mới liên quan đến khả năng tái sinh chồi cao của loài cà

chua dại Lycopersicon chilense. Jpn. J. Giống. 1998, 48, 109–113.

[CrossRef]

25. Janowicz, J.; Niemann, J.; Wojciechowski, A. Ảnh hưởng của chất điều hòa sinh trưởng đến khả năng tái sinh của mẫu cấy hypocotyl lanh

(Linum usitatissimum L.) trong nuôi cấy in vitro . Công nghệ sinh học. J. Biotechnol. Tính toán.

Biol. Bionanotechnol. 2012, 93, 135–138. [CrossRef]

26. Burbulis, N.; Blinstrubiene, A.; Kupriene, R. Tái sinh các chồi bất định của hạt lanh (Linum usitatissimum L.) từ mẫu cấy giả cành.

Zemdirbyste-nông nghiệp 2009, 96, 168–175.

27. Naggar, A.; Kadi, D.; Mcrughen, A. Tái sinh trực tiếp trong ống nghiệm của cây lanh ai cập và cây canada (Linum usitatissimum L.). PJB

2009, 2, 412–415.

28. Akter, F.; Parvez, M.; Hồi giáo, M.; Mondol, P.; Alam, M. Nuôi cấy mô sẹo và tái sinh thực vật trong hạt lanh

(Linum usitatissimum L.). Môi trường thực vật. Nhà phát triển. 2008, 2, 101.

29. Hutchinson, MJ; Axit Saxena, PK Acetylsalicylic tăng cường và đồng bộ hóa quá trình hình thành phôi soma do thidiazuron gây ra trong

nuôi cấy mô phong lữ (Pelargonium x hortorum Bailey). Đại diện Tế bào Thực vật 1996, 15, 512–515. [CrossRef]
Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, 728 16 trên 18

30. Victor, J .; Murthy, B.; Chạng vạng, S.; KrishnaRaj, S .; Saxena, P. Vai trò của chuyển hóa purin nội sinh trong quá trình hình

thành phôi soma do thidiazuron của lạc (Arachis hypogaea L.). Điều chỉnh tăng trưởng thực vật. 1999, 28, 41–47. [CrossRef]

31. Nikoli´c, R .; Miti´c, N.; Mileti´c, R .; Neškovi´c, M. Ảnh hưởng của cytokinin đến sự nảy mầm của hạt trong ống nghiệm và sự

hình thành sớm của cây con ở Lotus corniculatus LJ Plant Growth Regul. 2006, 25, 187. [CrossRef]

32. Ali, H.; Khan, MA; Kayani, WK; Khan, T.; Khan, RS Thidiazuron điều chỉnh tăng trưởng, trao đổi chất thứ cấp và

cấu hình tinh dầu trong nuôi cấy chồi của Ajuga bracteosa. Ind. Crop. Sản phẩm. 2018, 121, 418–427. [CrossRef]
33. Thomas, TD; Puthur, JT Thidiazuron đã tạo ra cơ quan sinh chồi tần số cao trong mô sẹo từ

Kigelia pinnata L. Bot. Bò đực. Acad. Tội. 2004, 45, 307–313.

34. Gairi, A.; Rashid, A. Sự khác biệt trực tiếp của phôi soma trên các vùng khác nhau của cây con nguyên vẹn của Azadirachta để đáp

ứng với thidiazuron. J. Thực vật Physiol. 2004, 161, 1073–1077. [CrossRef] [PubMed]

35. Burbulis, N.; Blinstrubiene, A.; Kupriene, R.; Sliesaravicius, A.; Venskutoniene, E. Tối ưu hóa cây lanh hạt lanh (Linum

usitatissimum L.) trong nuôi cấy in vitro. Zemdirbyste-nông nghiệp 2007, 94, 120–128.

36. Chen, J.; Vương, L.; Thompson, LU Flaxseed và các thành phần của nó làm giảm di căn sau khi phẫu thuật cắt bỏ khối u vú rắn ở

người ở chuột khỏa thân. Chữ cái ung thư. 2006, 234, 168–175. [CrossRef] [PubMed]

37. Lincy, A.; Sasikumar, B. Nâng cao khả năng tái sinh chồi ngẫu nhiên từ các mẫu gừng cấy trên không bằng cách sử dụng

TDZ và các nghiên cứu mô học của nó. Thổ Nhĩ Kỳ. J.Bốt. 2010, 34, 21–29.

38. Yucesan, B.; Máy quay, AU; Tái sinh cây bằng tần số cao do Gurel, E. TDZ tạo ra thông qua hình thành nhiều chồi ở cây rau diếp xoăn (Cichorium

intybus L.). Nuôi cấy mô cơ quan tế bào thực vật. 2007, 91, 243–250. [CrossRef]

39. Malik, KA; Saxena, PK Tái sinh ở Phaseolus vulgaris L.: Cảm ứng tần số cao của sự hình thành chồi trực tiếp ở cây con nguyên vẹn

bởi N 6-benzylaminopurine và thidiazuron. Planta 1992, 186, 384–389. [CrossRef]

40. Thomas, JC; Katterman, FR hoạt động Cytokinin gây ra bởi thidiazuron. Thực vật Physiol. 1986, 81, 681–683.

[CrossRef]

41. Ahmed, ÔNG; Anis, M. Vai trò của TDZ trong việc tái sinh nhanh chóng nhiều chồi từ mẫu nốt của cây Vitex trifolia L. — Một cây

thuốc quan trọng. Appl. Hóa sinh. Công nghệ sinh học. 2012, 168, 957–966. [CrossRef]

42. Murthy, B.; Chạng vạng, S.; Saxena, PK Thidiazuron: Một chất điều chỉnh mạnh mẽ sự phát sinh hình thái thực vật trong ống nghiệm . Vitr. Tế bào.

Nhà phát triển. Biol. Plant 1998, 34, 267. [CrossRef]

43. Murthy, B.; Victor, J .; Singh, RP; Fletcher, R .; Saxena, PK Tái sinh trong ống nghiệm của đậu xanh (Cicer arietinum L.): Kích

thích hình thành cơ quan trực tiếp và hình thành phôi soma nhờ thidiazuron. Điều chỉnh tăng trưởng thực vật. 1996, 19, 233–

240. [CrossRef]

44. Guo, B.; Abbasi, BH; Zeb, A.; Xu, L.; Wei, Y. Thidiazuron: Một chất điều hòa sinh trưởng thực vật đa chiều.

Afr. J. Biotechnol. 2011, 10, 8984–9000.

45. Aytekin Polat, A.; Caliskan, O. Ảnh hưởng của axit indolebutyric (IBA) đến sự ra rễ của quá trình cắt ở các kiểu gen lựu khác

nhau. Trong Kỷ yếu Hội nghị Quốc tế I về Lựu và Trái cây Nhỏ Địa Trung Hải 818, Adana, Thổ Nhĩ Kỳ, 3–6 tháng 5 năm 2016; trang

187–192.

46. Ling, APK; Kok, KM; Hussein, S.; Ong, SL Ảnh hưởng của các chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến cảm ứng ra rễ nhanh chóng từ

các mẫu cấy Orthosiphon stamineus khác nhau. Là. Âu-Á J. Sustain. Nông nghiệp. 2009, 3, 493–501.

47. Mặt trời, WQ; Bassuk, NL Tổng hợp Ethylene do Auxin tạo ra trong quá trình ra rễ và ức chế sự bùng phát chồi của cành giâm cành.

Mứt. Soc. Làm vườn. Khoa học. 1993, 118, 638–643. [CrossRef]

48. Đấu trường, C.; Tsonev, T.; Doneva, D.; De Micco, V .; Michelozzi, M.; Brunetti, C.; Centritto, M.; Fineschi, S.; Velikova, V .;

Loreto, F. Ảnh hưởng của chất lượng ánh sáng đến sinh trưởng, quang hợp, giải phẫu lá và isoprenoids bay hơi của loài thân

thảo phát ra monoterpene (Solanum lycopersicum L.) và cây phát ra isoprene (Platanus orientalis L.). Môi trường. Hết hạn.

Người máy. 2016, 130, 122–132. [CrossRef]

49. Khan, MA; Abbasi, BH; Ahmed, N.; Ali, H. Ảnh hưởng của chế độ ánh sáng đến sự nảy mầm của hạt trong ống nghiệm và hàm lượng

silymarin trong Silybum marianum. Ind. Crop. Sản phẩm. 2013, 46, 105–110. [CrossRef]

50. Bakar, M.; Karim, FA; Perisamy, E. So sánh các chất hóa thực vật và đặc tính chống oxy hóa của các bộ phận quả khác nhau của các

loài Artocarpus được chọn từ Sabah, Malaysia. Có được người Mã Lai. 2015, 44, 355–363. [CrossRef]

51. Anjum, S.; Abbasi, BH Thidiazuron tăng cường sinh tổng hợp và hiệu quả kháng khuẩn của các hạt nano bạc thông qua cải thiện khả

năng khử hóa thực vật trong nuôi cấy mô sẹo của Linum usitatissimum L. Int. J. Nanomed. 2016, 11, 715.

52. KÖksal, E.; Gülçin, ˙I .; Beyza, S.; Sarikaya, Ö .; Bursal, E. Hoạt động chống oxy hóa in vitro của silymarin. J. Enzim.

Ức chế. Med. Chèm. 2009, 24, 395–405. [CrossRef]

Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, 728 17 trên 18

53. Hayyan, M.; Hashim, MA; AlNashef, IM Superoxide ion: Ý nghĩa thế hệ và hóa học. Chèm. Rev.

2016, 116, 3029–3085. [CrossRef] [PubMed]

54. Vatankhah, E.; Niknam, V .; Ebrahimzadeh, H. Hoạt động của enzym chống oxy hóa trong quá trình hình thành cơ quan in vitro

trong Crocus sativus. Biol. Thực vật. 2010, 54, 509–514. [CrossRef]

55. Mathur, M.; Ramawat, K. Sản xuất Guggulsterone trong nuôi cấy huyền phù tế bào của cây guggul, Commiphora wightii, được trồng trong bình

lắc và lò phản ứng sinh học. Công nghệ sinh học. Lett. 2007, 29, 979–982. [CrossRef]

[PubMed]
56. Tang, W .; Các hoạt động của Newton, RJ Peroxidase và catalase tham gia vào quá trình hình thành chồi bất định trực tiếp do thidiazuron

gây ra trong phôi hợp tử thông trắng phía đông (Pinus strobus L.). Thực vật Physiol. Hóa sinh.

2005, 43, 760–769. [CrossRef] [PubMed]

57. Anjum, S.; Abbasi, BH; Hano, C. Xu hướng tích lũy các chất chuyển hóa thứ cấp chống oxy hóa quan trọng về mặt dược lý trong nuôi cấy mô

sẹo của Linum usitatissimum L. Nuôi cấy mô cơ quan tế bào thực vật. 2017, 129, 73–87. [CrossRef]

58. Danya, U. Udhayasankar, M.; Punitha, D.; Arumugasamy, K .; Suresh, S. Tái sinh trong ống nghiệm của Tecomella undulata (Sm.) Dường như là

một cây thuốc có nguy cơ tuyệt chủng. Int. J. Động thực vật. Môi trường. Khoa học. 2012, 2, 44–49.

59. Fazal, H.; Abbasi, BH; Ahmad, N. Tối ưu hóa quá trình nuôi cấy gốc tự do để sản xuất sinh khối và các chất chuyển hóa thứ cấp ở Prunella

vulgaris L. Appl. Hóa sinh. Công nghệ sinh học. 2014, 174, 2086–2095. [CrossRef]

60. Shibli, RA; Smith, M.; Kushad, M. Headspace tích lũy ethylene ảnh hưởng đến sản xuất chất chuyển hóa thứ cấp trong nuôi cấy tế bào

Vaccinium pahalae. Điều chỉnh tăng trưởng thực vật. 1997, 23, 201–205. [CrossRef]

61. Ford, JD; Hoàng, KS; Wang, HB; Davin, LB; Lewis, NG Con đường tổng hợp sinh học dẫn đến ung thư Hóa chất ngăn ngừa ung thư

Secoisolariciresinol Diglucoside Hydroxymethyl Glutaryl Ester-Linked Lignan Oligomers trong Hạt lanh (Linum usitatissimum). J. Nat.

Sản phẩm. 2001, 64, 1388–1397. [CrossRef]

62. Barvkar, VT; Pardeshi, VC; Cải xoăn, SM; Kadoo, NY; Gupta, VS Phân tích hệ gen của họ đa gen UDP glycosyltransferase 1 ở Linum usitatissimum

đã xác định các gen có các kiểu biểu hiện khác nhau . BMC Genom. 2012, 13, 175. [CrossRef]

63. Hano, C.; Martin, tôi; Fliniaux, O.; Legrand, B.; Gutierrez, L.; Arroo, R .; Mesnard, F.; Lamblin, F.; Lainé, E.

Biểu hiện gen reductase Pinoresinol – lariciresinol và tích tụ secoisolariciresinol diglucoside trong hạt lanh đang phát triển (Linum

usitatissimum). Planta 2006, 224, 1291–1301. [CrossRef]

64. Ghose, K.; Selvaraj, K .; McCallum, J .; Kirby, CW; Sweeney-Nixon, M.; Cloutier, SJ; Deyholos, M.; Datla, R.; Fofana, B. Nhận dạng và đặc

điểm chức năng của hạt lanh UDP-glycosyltransferase glucosyl hóa secoisolariciresinol (SECO) thành secoisolariciresinol monoglucoside

(SMG) và diglucoside (SDG). BMC Plant Biol. 2014, 14, 82. [CrossRef]

65. Touré, A.; Xueming, X. lignans hạt lanh: Nguồn, sinh tổng hợp, trao đổi chất, hoạt động chống oxy hóa, các thành phần hoạt tính sinh học

và lợi ích cho sức khỏe. Soạn thảo Rev. Khoa học thực phẩm. Két thực phẩm. 2010, 9, 261–269. [CrossRef]

66. Qu, H.; Madl, RL; Takemoto, DJ; Baybutt, RC; Wang, W. Lignans tham gia vào hoạt động chống khối u của cám lúa mì trong các tế bào SW480

ung thư ruột kết. J. Nutr. 2005, 135, 598–602. [CrossRef] [PubMed]

67. Rajesha, J.; Rao, AR; Madhusudhan, B.; Karunakumar, M. Đặc tính kháng khuẩn của secoisolariciresinol diglucoside được phân lập từ các

giống hạt lanh của Ấn Độ. Curr. Xu hướng Biotechnol. Dược phẩm. 2010, 4, 551–560.

68. Pilar, B.; Güllich, A. .; Oliveira, P.; Ströher, D. .; Piccoli, J .; Manfredini, V. Vai trò bảo vệ của dầu hạt lanh và lignan

secoisolariciresinol diglucoside trong hạt lanh chống lại stress oxy hóa ở chuột mắc hội chứng chuyển hóa.

J. Khoa học thực phẩm. 2017, 82, 3029–3036. [CrossRef]

69. Kezimana, P.; Dmitriev, AA; Kudryavtseva, AV; Romanova, EV; Melnikova, NV Secoisolariciresinol Diglucoside của Hạt lanh và các chất chuyển

hóa của nó: Sinh tổng hợp và Tiềm năng cho Nutraceuticals. Đổi diện. Genet.

2018, 9, 641. [CrossRef]

70. Murashige, T.; Skoog, F. Một môi trường đã được sửa đổi để tăng trưởng nhanh và thử nghiệm sinh học với nuôi cấy mô thuốc lá.

Physiol. Thực vật. Năm 1962, 15, 473–497. [CrossRef]

71. Chang, CC; Dương, MH; Ôn, HM; Chern, JC Ước tính tổng hàm lượng flavonoid trong keo ong bằng hai

phương pháp so màu bổ sung. J. Hậu môn Thuốc Thực phẩm. 2002, 10, 178–182.

72. Ali, A.; Mohammad, S.; Khan, MA; Raja, NI; Arif, M.; Kamil, A. .; Các hạt nano bạc Mashwani, ZUR đã tạo ra các mô nuôi cấy trong ống nghiệm

để tích lũy sinh khối và các chất chuyển hóa thứ cấp trong Caralluma lao tố.

Nghệ sĩ. Tế bào Nanomed. Công nghệ sinh học. 2019, 47, 715–724. [CrossRef]

73. Liu, N.; Lin, Z .; Quan, L.; Gaughan, G.; Lin, G. Các enzym chống oxy hóa điều chỉnh các loại oxy phản ứng trong quá trình kéo dài vỏ quả

ở Pisum sativum và Brassica chinensis. PLoS ONE 2014, 9, e87588. [CrossRef]

Machine Translated by Google

Các nhà máy 2020, 9, 728 18 trên 18

74. Abbasi, BH; Khan, MA; Mahmood, T.; Ahmad, M.; Chaudhary, MF; Khan, MA Bắn phục hồi

và hoạt động nhặt rác gốc tự do trong Silybum marianum L. Nuôi cấy mô cơ quan tế bào thực vật. 2010, 101, 371–376.

[CrossRef]
ˇ
75. Sarajlija, H.; CukelJ, N.; Mrši´c, GND; Brnˇci´c, M.; Curi´c, ´D. Điều chế hạt lanh để xác định lignan bằng phương pháp sắc ký

khí-khối phổ. Khoa học thực phẩm của Séc J. 2012, 30, 45–52. [CrossRef]

© 2020 bởi các tác giả. Đơn vị được cấp phép MDPI, Basel, Thụy Sĩ. Bài viết này là một quyền truy cập mở

bài viết được phân phối theo các điều khoản và điều kiện của Creative Commons Attribution

(CC BY) giấy phép (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).