You are on page 1of 3

Translated from English to Vietnamese - www.onlinedoctranslator.

com

38 Chèm. Dược phẩm. Bò đực.52(1) 38—40 (2004) Tập 52, số 1

Chuẩn độ điện thế gián tiếp của axit ascorbic trong các chế phẩm
dược phẩm sử dụng điện cực phim thủy ngân gốc đồng
Meeran Mohideen ABDULKMỸNAZER,mộtAbdul Rahman Shahul HAMEED,mộtvà Patel RIYAZUDDIN*,b
mộtKhoa Hóa học, Trường Cao đẳng Mới; Chennai – 600 014, Ấn Độ: vàbKhoa Hóa phân tích, Đại học Madras; Chennai –
600 025, Ấn Độ.Nhận ngày 1 tháng 8 năm 2003; chấp nhận ngày 21 tháng 10 năm 2003

Một phương pháp đo điện thế đơn giản và nhanh chóng để ước tính axit ascorbic trong các dạng bào chế dược phẩm
đã được phát triển. Phương pháp này dựa trên việc xử lý axit ascorbic với iốt và chuẩn độ iốt được tạo ra tương đương với
axit ascorbic bằng bạc nitrat bằng cách sử dụng điện cực màng thủy ngân gốc đồng (CBMFE) làm điện cực chỉ thị. Nghiên
cứu gây nhiễu được thực hiện để kiểm tra khả năng gây nhiễu của các tá dược thông thường và các vitamin khác. Độ chụm
và độ chính xác của phương pháp được đánh giá bằng cách áp dụng thử nghiệm thiếu phù hợp và các phương pháp thống
kê khác. Kết quả của phương pháp đề xuất và phương pháp Dược điển Anh được so sánh bằng cách sử dụngFvàt-các thử
nghiệm thống kê về mức độ ý nghĩa.

Từ khóaaxit ascorbic; bào chế dược phẩm; chuẩn độ điện thế gián tiếp; điện cực màng thủy ngân bằng đồng

Axit ascorbic (vitamin-C) rất cần thiết cho sức khỏe của con mạnh hơn so với phương pháp BP bằng cách áp dụngF- vàt
người. Nó được sử dụng để phòng ngừa và điều trị bệnh còi. -các bài kiểm tra.36)
Nhiều phương pháp đã được báo cáo trong các đánh giá toàn
diện để xác định axit ascorbic.1—5)Các phương pháp này bao Thực nghiệm
gồm phương pháp đo quang phổ sử dụng thuốc thử như CBMFE đã được chuẩn bị như đã báo cáo trong các thông báo trước đó của
chúng tôi.30,31)Một dây đồng bọc nhựa có đường kính 1 mm bán sẵn trên thị
dichlorophenolindophenol,6)Eriochromecyamine,7)
trường được sử dụng để điều chế CBMFE. Khoảng 1 cm của một đầu dây được
Muối xanh nhanh-B,số 8)silicon molypden heteropoly màu xanh lam,9) đánh bóng bằng cách mài mòn bằng giấy nhám mịn và rửa sạch bằng nước sau
đồng sunphat với sự hiện diện của neocuprine,10)vân đó được xử lý bằng Con HNO3trong vài giây và cuối cùng rửa sạch bằng nước.
vân. Các kỹ thuật sắc ký như HPLC với phát hiện điện Một lớp thủy ngân mỏng được phủ trên dây đánh bóng bằng cách nhúng vào
nitrat thủy ngân đã axit hóa (0,02M) giải pháp trong 10 phút. Bề mặt điện cực
hóa,11)sắc ký lỏng với phát hiện điện hóa,12)sắc ký pha
được lau nhẹ bằng giấy lọc và rửa sạch bằng nước.
ngược triệt tiêu ion,13)điện di vùng mao quản,14)vân vân. Dung dịch axit ascorbic (1,0 mg / ml)Dung dịch gốc của axit
cũng đã được áp dụng cho thử nghiệm axit ascorbic. ascorbic được chuẩn bị và chuẩn hóa điện thế bằng cách chuẩn độ với
Một số loại phương pháp đo điện thế khác nhau sử kali hexacyanoferrat (III).37)
dụng nhiều loại điện cực cũng đã được phát triển.15—18) Iốt trong Ethanol (0,1M)Chất này được chuẩn bị mới và đi qua nhựa trao
đổi anion (DOWNEX 1-XB, dạng clorua, 100-200 mesh) được đóng gói trong
Hầu hết các phương pháp được phát triển cho axit
ống nhỏ để loại bỏ dấu vết của iodua.
ascorbic là chất chuẩn độ trực quan và đo điện thế như Dung dịch bạc nitrat (0,1M)Điều này được điều chế bằng cách hòa tan bạc
ceric amoni sulphat,19)N-chlorosuccinimide,20) nitrat trong nước và đựng trong lọ màu hổ phách.
peroxymono sulphat,21)hexacyanoferrate (III),22) Đệm Kali Hydrogen Phthalate – Nitrate (pH 3.0)Điều này được chuẩn
thủy ngân (II) nitrat,23)bạc nitrat,24)đồng (II) sunphat,25) bị bằng cách điều chỉnh độ pH 0,1Mdung dịch kali hydro phthalate đến 3,0
với 0,5Maxit nitric.
cá tuyết26)vàN-bromosuccinimide.27)
Quy trình được khuyến nghị để chuẩn độ gián tiếp axit ascorbic Đối
Phương pháp Dược điển Anh (BP) được sử dụng rộng rãi với một phần nhỏ chứa 1,0—20,0 mg axit ascorbic, 0,1Miốt trong etanol
khuyến nghị chuẩn độ trực quan axit ascorbic28)với xeri (IV).29) được thêm từng giọt cho đến khi dung dịch chuyển sang màu vàng nhạt,
Phương pháp chuẩn độ bằng mắt thường không thể áp dụng sau đó thêm 10,0 ml dung dịch đệm kali hydro phthalate-nitrat (pH 3) và
thành công cho xét nghiệm axit ascorbic trong các dung dịch pha loãng thành 50 ml. Dung dịch được chuẩn độ theo 0,01—0,1MAgNO3
sử dụng CBMFE làm điện cực chỉ thị và điện cực calomel bão hòa (mối
dược phẩm có màu và không trong suốt và cũng yêu cầu cỡ mẫu
nối đôi) làm điện cực so sánh.
lớn. Quy trình khuyến nghị của xét nghiệm axit ascorbic trong các
Trong truyền thông hiện nay, một phương pháp đo điện dạng bào chế dược phẩmCác chế phẩm mẫu dược phẩm sau đây
thế đơn giản, nhanh chóng, chính xác và chính xác sử dụng được chuẩn bị bằng nước khử mùi và tránh ánh sáng.
điện cực màng thủy ngân bằng đồng (CBMFE) làm điện cực Máy tính bảngHai mươi viên nén chứa axit ascorbic đã được cân và
nghiền thành bột. Một lượng mẫu bột thích hợp tương đương với 250 mg
chỉ thị được báo cáo. CBMFE gần đây đã được các tác giả ứng axit ascorbic được hòa tan trong khoảng 50 ml nước và phần cặn nếu có,
dụng như một điện cực chỉ thị cho phép thử chuẩn độ trực được lọc bằng giấy lọc Whatmann số 41 và rửa 5 - 6 lần bằng nước. Dịch lọc
tiếp axit ascorbic bằng đồng sunphat với sự hiện diện của và nước rửa kết hợp được pha loãng thành 250 ml. Lấy chính xác 5,0 ml
amoni thiocyanate30)và cũng để thử nghiệm isoniazid31)và dung dịch này để chuẩn độ.
Mũi tiêmMột thể tích nhất định của dịch tiêm, tương đương với
sulphamethoxazole.32)
khoảng 100 mg axit ascorbic được chuyển vào bình định mức 100 ml
Phương pháp này đã được áp dụng thành công để thử nghiệm và thêm nước đến vạch và 5,0 ml dung dịch được lấy để chuẩn độ.
axit ascorbic ở dạng bào chế dược phẩm và tinh khiết. Dữ liệu
thực nghiệm được phân tích thống kê để xác thực phương pháp Quy trình xét nghiệm axit ascorbic trong các chế phẩm dược phẩm
đề xuất. Một thử nghiệm 'thiếu phù hợp' liên quan đến việc áp Để phân tích viên nén, viên nang, thuốc nhỏ uống và thuốc tiêm đã được
chuẩn bị như mô tả và 5,0 ml dung dịch mẫu được lấy để phân tích.
dụng phân tích phương sai trong phân tích hồi quy đã được
thông qua để đánh giá dữ liệu thu được trong phân tích lặp lại
axit ascorbic tinh khiết.33—35)Các kết quả thu được trong phân tích Kết quả và thảo luận
axit ascorbic ở các dạng bào chế dược phẩm là Iốt oxy hóa axit ascorbic thành axit dehydroascorbic.
∗Thư từ cần được giải quyết cho ai. e-mail: patelriyaz@lycos.com © 2004 Hiệp hội Dược phẩm Nhật Bản
Tháng 1 năm 2004 39

C6Hsố 8O61Tôi2→C6H6O612HI nghiên cứu ảnh hưởng của pH. Axit ascorbic có thể được
xác định chính xác trong khoảng pH 2-4. Độ pH có thể
Phản ứng là tự phát trên một phạm vi rộng của pH. Tuy nhiên,
được duy trì bằng đệm kali hydro phthalate-nitrat. Đường
độ pH từ 2 đến 3 là cần thiết cho quá trình oxy hóa định lượng ở
cong chuẩn độ để chuẩn độ 14,44 mg axit ascorbic được
nồng độ thấp của axit ascorbic.38)
cho trong Hình 1. Một sự phá vỡ điện thế 54 mV được
Chuẩn độ gián tiếp 1,0 đến 20,0 mg axit ascorbic đã được
quan sát ở điểm cuối khi thêm 0,02 ml 0,1MAgNO3. Điểm
khảo sát. Vì CBMFE cho thấy phản ứng điện thế đặc trưng đối
cuối được định vị chính xác từ đường cong đạo hàm đầu
với ion iodua, nên việc chuẩn độ được theo dõi với CBMFE làm
tiên.
điện cực chỉ thị. Trong quá trình chuẩn độ, điện thế cân bằng
Độ chính xác và độ chính xácĐể đánh giá độ chụm và độ
được thiết lập trong vòng vài giây và CBMFE cho thấy phản
chính xác của phương pháp đề xuất, bảy phép chuẩn độ lặp
ứng điện thế ổn định đối với iodua được hình thành, và kết
lại được thực hiện với mỗi một trong số chín dung dịch chuẩn
tủa bạc iodua đông lại ngay khi điểm cuối kết thúc. Để chuẩn
có nồng độ khác nhau. Các kết quả được đưa ra trong Bảng 1.
độ 1,0 - 20,0 mg axit ascorbic, 0,1 đến 1,2 ml 0,1Miốt trong
Độ lệch chuẩn tương đối tổng thể và độ thu hồi phần trăm
etanol là bắt buộc. Độ pH của 20,0 mg axit ascorbic khi có
trung bình cho 63 phép xác định lần lượt là 0,94% và 99,92%
lượng iốt dư là 2,6. Chuẩn độ được thực hiện với nhiều lượng
và sai số phân tích tiêu chuẩn trung bình là 0,03. Sinh viênt
iốt khác nhau trong etanol để nghiên cứu ảnh hưởng của
-giá trị được áp dụng để so sánh lượng được lấy để phân tích
lượng iốt đến quá trình chuẩn độ. Sự hiện diện của gấp đôi
và lượng được tìm thấy bởi bảy lần lặp lại ở mỗi nồng độ vàt
lượng iốt tương đương cần thiết không ảnh hưởng đến kết
-giá trị được tính toán ở mỗi mức nồng độ. Giá trị trung bình
quả. Quá trình chuẩn độ được thực hiện ở các giá trị pH khác
của Student'stthu được đối với chín nồng độ tổng thể là 1,51,
nhau để
thấp hơn nồng độ hai bên tới hạnt-giá trị 2,57 cho sáu bậc tự
do với mức ý nghĩa 5%. Nó chỉ ra rằng không có bất kỳ lỗi hệ
thống nào trong phân tích.

Hơn nữa, một bài kiểm tra ý nghĩa thống kê cụ thể là sự thiếu phù
hợp đã được áp dụng để phân tích dữ liệu thực nghiệm được đưa ra
trong Bảng 1 để kiểm tra bất kỳ lỗi hệ thống nào trong phân tích. Thử
nghiệm này đã được định dạng trước để kiểm tra xem dữ liệu có phù
hợp với mô hình tuyến tính cho thấy sự thống nhất giữa lượng được
lấy và tìm thấy để phân tích hay không. Trong thử nghiệm, giả thuyết
rằng dữ liệu phù hợp với mô hình tuyến tính được xem xét vàF-giá trị
được tính toán. Việc áp dụng thử nghiệm thiếu phù hợp đối với dữ liệu
cho trong Bảng 1 đã củng cố mộtF-giá trị 2,09 nhỏ hơn giá trị tới hạn
2,18 cho (7, 54) bậc tự do ở mức ý nghĩa 5%. Nó chỉ ra rằng dữ liệu
phù hợp với mô hình tuyến tính và không có bất kỳ lỗi hệ thống nào
trong phân tích.
Nghiên cứu giao thoaẢnh hưởng của sự có mặt của tá
dược thông thường và các vitamin khác trong phương pháp
đề xuất được đánh giá bằng cách thực hiện năm phép xác
định lặp lại 5,0 mg axit ascorbic với sự có mặt của tá dược và
các vitamin khác. Sự hiện diện của lượng tương đương
thiamine, gấp ba lần lượng lactose, gấp bốn lần lượng
nicotinamide, canxi panthothenate, riboflavin, axit folic,
Hình 1. Chuẩn độ điện thế gián tiếp của axit ascorbic sucrose và gấp mười lần lượng khoáng chất như kali, kẽm,
Đường cong A - 4,66 mg, B - 9,76 mg, C - 14,44 mg axit ascorbic với 0,025M, 0,049M
magiê và mangan như sulphates hoặc nitrat thường xuất hiện
và 0,10MAgNO3tương ứng. là dạng bào chế cũng không ảnh hưởng đến kết quả của
Bảng 1. Kết quả của bảy lần xác định lặp lại axit Ascorbic bằng phương pháp chuẩn độ gián tiếp với AgNO3và Phân tích Thống kê Dữ liệu

Sinh viên-t
Số tiền đã thực hiện Bần tiện (x̄) % Bần tiện Std. phân tích
Sl. Không.
(mg) (m)
Lượng tìm thấy (mg)
6Std. nhà phát triển. sự hồi phục lỗi [S/ øN] µ2x
S/øN

1 1.19 1.18, 1.18, 1.18, 1.16, 1.16, 1.20, 1.20 1.1860,0163 99,16 0,0062 1.620
2 2,32 2,34, 2,29, 2,34, 2,31, 2,25, 2,29, 2,29 2,3060,0318 99,20 0,0120 1.543
3 4,66 4,66, 4,62, 4,69, 4,62, 4,56, 4,65, 4,67 4,6460,0430 99,54 0,0162 1.319
4 6.16 6.19, 6.19, 6.15, 6.15, 6.11, 6.11, 6.06 6.1460,0471 99,63 0,0178 1.282
5 9,76 9,72, 9,74, 9,67, 9,67, 9,85, 9,76, 9,85 9,7560,0751 99,91 0,0284 0,302
6 12,50 12,48, 12,40, 12,40, 12,57, 12,62, 12,40, 12,44 12,4760,0896 99,78 0,0338 0,802
7 14.44 14,35, 14,44, 14,53, 14,71, 14,44, 14,44, 14,44 14.4860,1145 100,27 0,0433 0,924
số 8 16,80 16,99, 16,86, 16,87, 16,99, 16,74, 17,08, 17,15 16,9560,1406 100,92 0,0531 2.904
9 19,68 20,12, 19,90, 19,68, 19,66, 19,81, 19,96, 19,85 19,8560,1602 100,86 0,0605 2.878
Bần tiện 99,92 0,0300 1.510

Giá trị được tính toán củaFtrong bài kiểm tra thiếu phù hợp là 2,09.
40 Tập 52, số 1

Ban 2. Kết quả xác định axit ascorbic bằng chuẩn độ gián tiếp với AgNO3và bằng Phương pháp BP trong Chế phẩm Dược phẩm và Thống kê
Phân tích dữ liệu

Số tiền được tìm thấy theo đề xuất Số tiền được tìm thấy bởi
tmột)
S. Không. Tên thương hiệu và số tiền đã nêu phương pháp (mg) Phương pháp BP (mg) Fmột)

Bần tiện6Std. nhà phát triển. Bần tiện6Std. nhà phát triển.

1. Máy tính bảng Celin (500 mg) 466.4364,76 465,8664.08 1.11 0,22
2. Succee (500 mg) 451,0063,00 454,0063,27 1.19 1,79
3. Nycee (500 mg) 456,0062,31 455,7162,87 1.54 0,21
4. Vitamin C (500 mg) 477,1465,01 473,1462,48 4.09 1,89
5. Cecon (100 mg mỗi ml)
Thuốc nhỏ miệng 83,2960,49 82,5760,79 2,60 2,04
6. Cebion (100 mg mỗi ml) 94,8662,04 94,0061,29 2,49 0,94
7. Mũi tiêm Tildoxon (100 mg mỗi ống) 96,0060,82 97,0061,00 1,50 2,05

một) Tính toánFvàt-giá trị cho (6,6) và 12 bậc tự do tương ứng ở mức ý nghĩa 5%.

phân tích. Tuy nhiên, sự hiện diện của đồng (II) và iốt dưới dạng 6) Davies SHR, Masten SJ,Hậu môn. Chim. Acta,248, 225—227 (1991).
kali iođua có thể gây cản trở. Nó chỉ ra rằng phương pháp được
7) Kania K., Bhal F.,Chèm. Hậu môn.(Warsaw),35, 775—780 (1990).
đề xuất có thể được áp dụng để thử nghiệm axit ascorbic trong
8) Zang WD, Huang HG,Fenxi Huaxue,21, 597—699 (1993).
các chế phẩm dược phẩm. 9) Li G., Yu R.,Henliang Fenxi,9, 79—82 (1993).
Xác định axit ascorbic trong bào chế dược phẩm 10) Farooqui MI, Anwar JM, Abdullah A., Rozina M., Mahood R.,J. Chèm.
Phương pháp đề xuất đã được áp dụng thành công để Soc. Pak.,12, 333—336 (1990).
kiểm tra axit ascorbic trong các chế phẩm dược phẩm. Bảy 11) Iwase H., Ono I.,J. Chromatogr.,654, 215—220 (1993).
12) Nagy E., Degrtell I.,J. Chromatogr. Sinh học. Hậu môn.,89, 276—281
phép xác định lặp lại được thực hiện trên bốn viên nén, hai
(1989).
giọt uống và một mũi tiêm chứa axit ascorbic, bằng 13) Kenneddy JF, White CA,Chem chép thực phẩm.,28, 257—268 (1988).
phương pháp đề xuất cũng như bằng phương pháp BP. 14) Lin Ling B., Bxeyen WRG, Van Aeler P., Dewalle P.,J. Pharm. Sinh học.
Phương pháp BP liên quan đến việc chuẩn độ trực tiếp Hậu môn.,10, 717—721 (1992).
việc chuẩn bị mẫu dược phẩm với iốt sử dụng tinh bột làm 15) Marian IO, Sandulescu R., Bonciocat N.,J. Pharm. Sinh học. Hậu môn.,
23, 227—230 (2000).
chất chỉ thị. Kết quả thu được được đưa ra trong Bảng 2. 16) Sandulescu R., Mirel S., Oprean R.,J. Pharm. Sinh học. Hậu môn.,23, 77— 87
Ứng dụng của F-kiểm tra để so sánh các phương sai của (2000).
hai phương pháp mang lạiF-giá trị nhỏ hơn giá trị tới hạn 17) Cái CX, Xue KH,Hóa chất vi lượng. J.,61, 183—197 (1999).
hai phía là 5,82 cho (6, 6) bậc tự do ở mức ý nghĩa 5%, đối 18) Shankaran DR, Narayanan SS,Fresenius J. Anal. Chèm.,364, 686—
689 (1999).
với tất cả các chế phẩm dược phẩm được phân tích. Nó
19) Al-Rikabi AMK, Al-Jabri FM, Al-Motheer TM,Hậu môn. Lett.,23, 273
cho thấy không có sự khác biệt đáng kể giữa độ chụm của —280 (1990).
hai phương pháp. Giá trị được tính toán của Student'stđể 20) Gupta A., Bindra S., Sing Sunil SK,Mickrochim. Acta,3, 81—89
so sánh giá trị của bảy phép xác định lặp lại axit ascorbic (1989).
bằng hai phương pháp cũng nhỏ hơn giá trị tới hạn là 2,18 21) Riyazuddin P., Ali Mansoor S., Vasanthi R.,Bò đực. Điện hóa.,4, 295
—297 (1988).
đối với 12 bậc tự do ở mức ý nghĩa 5% đối với mỗi dược
22) Peng WF, Seddon BJ, Zhang XJ, Zhou XY, Zhao ZF,Fenxi Huaxue,20,
phẩm được phân tích. Nó cho thấy không có sự khác biệt 838—840 (1992).
đáng kể về kết quả của hai phương pháp. 23) Ismail IA, Khalifa H., Zaky M.,Hóa chất vi lượng. J.,30, 353—357
Phương pháp được đề xuất là nhanh chóng, đơn giản và (1984).
chọn lọc để xác định axit ascorbic trong các chế phẩm dược 24) Soliman R., Belal SA,Pharmazie,29, 204 (1974).
25) Sichko AI, Skrebtsova NA,Otkrytiya Izobret,5, 123—124 (1991).
phẩm.
26) Petho G.,Dược phẩm. Treo.,52, 228—232 (năm 1982).
27) Channu BCJ, Kalpana HN, Ramesh L., Eregowda GB, Dass C., Thimmaiah
Sự kết luận KN,Hậu môn. Khoa học.,16, 859—863 (2000).
Phương pháp chuẩn độ điện thế gián tiếp được đề xuất rất đơn 28) Bristish Pharmacopoeia, Vol. II, HMSO, Luân Đôn, 1980, tr. 733.
giản và chính xác. Phương pháp này có thể được áp dụng thành công 29) Bristish Pharmacopoeia, Vol. I, HMSO, London, 1980, tr. 39.
30) Riyazuddin P., Abdul Kamal Nazer MM,J. Pharm. Sinh học. Hậu môn., 16,
để xét nghiệm axit ascorbic ngay cả ở các dạng bào chế dược phẩm
545—551 (1997).
màu mà các phương pháp đo quang phổ và chuẩn độ trực quan gặp 31) Riyazuddin P., Abdul Kamal Nazer MM,J. Pharm của Ấn Độ. Khoa học.,60, 158
phải những hạn chế nghiêm trọng. Sự phát hiện sắc nét của điểm cuối —161 (1998).
với khả năng đứt gãy lớn làm cho phương pháp trở nên nhạy và 32) Abdul Kamal Nazer MM, Shabeer TK, Riyazuddin P.,Chèm. Dược phẩm.
Bò đực.,49, 278—281 (2001).
nhanh chóng, và có thể được sử dụng trong phân tích dòng chảy.
33) Zar JH, “Phân tích thống kê sinh học”, Prentice Hall, New Jersey, 1974, trang
278—283.
34) Wallpole RE, Myers RH, “Xác suất cho các nhà khoa học và kỹ sư,” xuất bản lần
Người giới thiệu
thứ 4, Macmillan, New York, 1989, trang 381—385.
1) Hashmi M., “Thử nghiệm Vitamin trong Chế phẩm Dược phẩm,” Wiley-
35) Robert MB, Benjamin SD, Thomas LB, “Các nhà khoa học và kỹ sư phương
Interscience, New York, 1972, tr. 286.
pháp thống kê,” xuất bản lần thứ 3, Marcel Dekker, New York, 1995, trang
2) Al-Meshal IA, Hussan MA, “Hồ sơ qua đường hậu môn của các chất ma
306—309.
túy,” ed. của Florey K., Academic Press, New York, 1982, tr. 45.
36) Miller JC, Miller JN, “Thống kê cho Hóa học Phân tích,” xuất bản lần thứ 2, Ellis
3) Augesten J., Kelein BP, Becker O., Venugopal P., “Phương pháp xét nghiệm
Horwood, Chichester, 1988.
vitamin,” Wiley-Interscience, New York, 1985, tr. 303.
37) Sanchez C., Pedreno., Ortuno JA, Hernandez J.,Hậu môn. Chim. Acta,
4) Washko PW, Welch RW, Dharwal KR, Wang Y., Levine M.,Hậu môn. Hóa
333, 107—113 (1996).
sinh.,204, 1—14 (1992). 38) Erdey L., Siposs G.,Z. Hậu môn. Chèm.,157, 166—177 (1957).
5) Fatibello Fo O., Dos Santos AJMG,Talanta,40, 593—598 (1993).

You might also like