4.

Uzgoj patogena
Krompir dekstrozu agar, hranjivu podlogu koja se koristi za uzgoj gljivica koje napadaju žive
biljke i izazivaju odumiranje tkiva tih biljaka, koristili smo za uzgoj patogena. Ona se
priprema na sledeći način:

• Uzmemo 200 gr krompira (otprilike oko 2 krompira) kojeg narendamo, direktno iznad
cijedila i ispiramo ga hladnom vodom oko 30 sec., jer ovim postupkom se odstranuje
iz krompira jedan dio škroba.
• Tako narendani krompir se istrese u posudu napunjenom sa 1 l vode, zatim se ta
posuda sa krompirom stavi na šporet da prokuha. Potrebno vrijeme kuhanja je oko 30
minuta. Zatim se stavi vodopropustljiva tkanina preko lonca koja se sa strana
pričvrsti gumicom kako se tkanina ne bi pomjerala.
• Poslije toga se ocijedi sva vodu kroz vodopropustljivu tkaninu u drugu posudu, a
krompir ostaje u prvoj posudi. U posudu u koju se preljeva tečnost dodaje se 16 gr
agara, 20 gr dekstroze i 1,5 gr prehrambenog kvasca ili ekstrakta kvasca. Napravljena
smjesa se lagano promijesa i stavi da se kuha u periodu od 10 minuta dok se ne dobije
homogena konzistenciju sastojaka.
• Skida se smjesa i u nju sipa voda nakon čeka se dobije 1 l smjese. Tom smjesom se
preliju petri kutije koje su prethodno bile sterilizovane. Petrijevke se zatvaraju i
stavljaju na sterilizaciju u autoklav u trajanju od 20 minuta na 120 C° pri pritisku od
1,2 bara.
• Nakon tog tretmana u autoklavu hranjiva podloga će biti spremna za upotrebu.
• Prije nego što se pristupi izolaciji gljiva iz oboljelog biljnog tkiva prvo se mora obaviti
suha sterilizacija laboratorijskog pribora, zagrijavanjem na temperaturi od 150-160 0C
u periodu od 1 h. Poslije sterilizacije pribor se opere destilovanom vodom. S obzirom
da se spore gljivica Venturia inaequalis nalazile na površini oboljelog tkiva, vrši se
skidanjem spora pomoću kopljaste igle i tačkasto nanošenje na hranjivu podlogu. Na
hranjivoj podlozi se za nekoliko dana razvilo više kolonija, koje se pojedinačno
presijavaju na hranjivu podlogu, kako bi objezbijedili čistoću izolata i razdvojile vrste
gljiva.