Professional Documents
Culture Documents
A kép ereje abban van, hogy elemeit egyidejűleg látjuk. A képek minőségét különböző
fogalmakkal jellemezzük. A képen egy részletet (foltot) akkor észlelünk, ha az a
környezetétől világosság (vagy szín) tekintetében eltér. Ezt az elkülönülést kontrasztosságnak
nevezzük. A hirtelen átmeneteket nevezzük a kép élességének. A részletek szélei a kontúrok.
A kép kielégítő élességét a kontúr élességből állapítjuk meg. A közeli és távoli tárgyrészletek
élessége a mélységélesség. Fontos szerepe van a plasztikusságnak, amit árnyékhatással
növelhetünk. Mindezen minden mikroszkópi eljárásnál érvényes kifejezéseknek a pásztázó
elektronmikroszkóp esetében különleges tartalma van. Az alábbiakban néhány fogalmat a
pásztázó elektronmikroszkóp szempontjából értelmezünk:
Kontraszt: Két képpont közötti kontrasztot a két képpontból érkező jel intenzitása határozza meg.
Az elektronmikroszkóp felbontóképessége
A mikroszkópok felbontóképessége az Abbe törvény szerint döntően függ az alkalmazott fény
hullámhosszától. A látható fény hullámhossza (400
(400-800
800 nm) határt szab a felbontóképesség
javításának. Ha azonban másfajta sugárzással tudunk képet alkotni, amelynek hullámhossza
lényegesen kisebb a látható
ható fényénél, a felbontás és így a mikroszkóp nagyítása növelhető.
Ezt a sugarat találták meg az elektronsugárban, amely nemcsak elektronokból álló sugárként,
hanem hullámként is viselkedik. A sugár hullámhossza (az általában alkalmazott gyorsító
feszültség
ég mellett) körülbelül öt nagyságrenddel kisebb, mint a látható fényé, és a sugár
elektromágneses „lencsékkel” fókuszolható. Ezekből a lencsékből a harmincas évek elején a
fénymikroszkóp mintájára sikerült olyan optikai rendszert összeállítani, amellyel a
fénymikroszkópét messze meghaladó felbontást értek el. Míg a fénymikroszkóp
felbontóképességének határa 0,2 μm, a modern elektronmikroszkópoké
ópoké 0,1 és 0,2 nm között
van, tehát több mint ezerszer nagyobb.
- a transzmissziós elektr
elektronmikroszkópot
onmikroszkópot (TEM) és a scanning elektronmikroszkópot
(SEM).
- A transzmissziós elektronmikroszkóp a minta átvilágításával, a fénymikroszkópokhoz
hasonló módon működik, de fény helyett gyorsított elektronokat, az optikai lencsék
helyett pedig elektromágneses lencséket használ. A képet az elektronok
becsapódásának hatására fluoreszkáló ernyőn látjuk. A TEM-ben csak nagyon vékony
(kb. 50–100 nm) mintákat vizsgálhatunk, mivel az elektronok áthatolóképessége igen
gyenge. A képet leegyszerűsítve egy árnyképnek kell elképzelni, vagyis ahol a
mintában az elektronokat eltérítő nagy rendszámú elemek vannak, onnan kevés
elektron jut el az ernyőig és sötét lesz a kép, ahol pedig könnyű elemek vannak,
melyek nem tudják olyan mértékben eltéríteni az elektronokat az eredeti irányuktól ott
világos lesz a kép. Ezért festjük (kontrasztozzuk) az elektronmikroszkópos mintákat
nehézfémekkel.
A működés
Elektronszóródás
A kép kialakulása
A preparátumon áthaladó elektronsugár egy része irányváltoztatás nélkül megy át, míg egyes
struktúrákon az elektronok szóródnak. A képalkotásban elsősorban a rugalmasan szórt
elektronokat használjuk fel, amelyeket egy szűk rekesz (objektív-diafragma) segítségével
kirekesztünk a képalkotásból. Az elektronszóró struktúrák tehát hiányoznak a
képalkotásból és így az elektronmikroszkópban árnyékot adnak. Kis rendszámú elemek az
elektronokat kevésbé szórják, ezért a szerves molekulák többsége alig ad árnyékot, ezzel
szemben a magasabb rendszámú elemek (ozmium, ólom, urán, volfrám, arany,ezüststb.) igen
erős árnyékot idéznek elő.Az elektronmikroszkópos preparátumot ilyen nehézfémek sóival
kezeljük, amelyek a minta egyes helyein lerakódva azoknak kontrasztot adnak, és így a
biológiai mintát alkalmassá teszik az elektronmikroszkópos vizsgálatra.
Nomenklatúra
Félvékony metszetek
Elektronmikroszkópos mikrotechnika
Ezek a gridek, erre kerülnek a metszetek és így rakjuk be őket az elektronmikroszkópba. Ezek
átmérője 3 mm.(Digitális Tankönyvtár)
1. A minta felülete mindig tiszta kell, legyen. A SEM a minta felületét vizsgálja ezért
akármilyen módon állítottuk elő a felületet: töréssel, polírozással vagy vágással,
gondoskodnunk kell a felület tisztaságáról. A polírozáshoz vagy vágáshoz célszerű a mintákat
beágyazni.
2. Mindig a minta eredeti állapotának megőrzésére kell, törekedjünk. Figyelembe kell
vennünk a vákuum okozta esetleges zsugorító, szárító hatását is. Ennek kivédésére szilárd
anyagok esetében is alkalmazhatunk gyorsfagyasztást.
Mintaelőkészítés
A víztelenítés után a SEM-es vizsgálatokhoz a mintát egy igen vékony vezetőképes réteggel
kell bevonni, egyébként a belőtt elektronok nem vezetődnének el, és a minta töltődése nagyon
lerontaná a képalkotás lehetőségét.
A mintát legtöbbször arannyal, szénnel, vagy palládiummal (esetleg ezek keverékével) vonjuk
be, úgy, hogy a fémet nagy vákuumban a mintára gőzölögtetjük.
Kriotechnika
Az elektronsugárzás és az elektronoptika
A transzmissziós elektronmikroszkóp
Az ultravékony metszeteket kisméretű, kör alakú rácsos vagy lyukas, hártyával bevont réz-
vagy nikkel-lemezekre (grid) teszik. A griden lévő metszetet nehézfém-vegyületekkel (pl.
uranil-acetát, ólom-citrát) kontrasztozzák, ami fokozza a nukleinsav-, illetve fehérjetartalmú
struktúrák elektronszórását, így ezek „elektrondenzek”, sötétebbek lesznek.
(Digitális Tankönyvtár)
Golgi készülék (wikiwand)
Mitokondrium (wikipédia)