UF2: TÈCNIQUES DE MICROSCÒPIA I DIGITALITZACIÓ

D’IMATGES

Conceptes

-Microscòpia: és la tècnica de visualització d’objectes o partícules molt petites gràcies a

la utilització de lents i font de llum.

-Capacitats del microscopi òptic:

 el poder de resolució
 poder de definició
 profunditat de camp
 dissecció òptica
 augment

Poder de resolució de un sistema òptic o microscopi és la capacitat que té per a

distingir dos punts de llum que estan separats per una distància molt petita.
El poder de resolució recau sobre el objecte.

 El límit de resolució (R) és la distància mínima a la que poden estar dos punts
per poder-los visualitzar com dues imatges separades. Poder de resolució i límit
de resolució són inversament proporcionals.

 El poder de resolució és, per tant, diferent per a cada sistema òptic.
- Per a l’ull humà el PR és de 0,1-0,2 mm
- Per la microscòpia òptica és de 0,1-0,2 μm
- Per la microscòpia electrònica és de 2000-2 Å

El poder de definició és la capacitat del sistema per veure la imatge amb contorns
nítids i ben delimitats. També recau sobre l’objectiu

Profunditat de camp: és el gruix de la preparació que es pot observar sense haver de

canviar l’enfoc. És la distància que separa les parts més separades d’un objecte que
podem veure nítidament sense haver d’ajustar l’enfoc .

Dissecció òptica: és una acció ràpida del cargol micromètric per enfocar de manera
alternativa dos plans de la preparació alhora. Es realitza a partir de grans augments.
Aquesta dissecció òptica es realitza quan:

o La mostra preparada és massa gruixuda, és a dir, secció massa gruixuda o

extensió cel·lular que no és monocapa
o Per veure estructures en 3D, tridimensionals
 Augment: és el poder d’amplificació de la imatge observada. És independent del
poder de resolució. L’augment de la imatge depèn dels augments dels OBJECTIUS
amb l’augment dels OCULARS

Components del microscopi òptic convencional

-Peu: part més pesada del microscopi, que serveix per donar estabilitat. Dins el peu es
situa el sistema d’il·luminació. Del peu parteix la columna o braç.

-Braç: Part que surt del peu i s’insereixen tots els altres components. És la part per on
s’agafa el microscopi

-Subplatina: situada sota la platina. Component mecànic que subjecta el sistema del
condensador

-Platina: està situada a un pla perpendicular amb els objectius i a l’eix òptic. És el
suport mecànic de la preparació. Presenta un orifici central pel qual passa la llum
provinent de la font de llum del condensador. Els microscopis moderns tenen un
sistema de carro a la platina, constituït per dues peces que es desplacen en dues
direccions mitjançant un mecanisme de cremallera que permet una localització exacta

-Tub o capçal: És el component del microscopi que té allotjat el sistema de lents de

l’objectiu i dels oculars. Es troba a una distància regulable de la platina. Depenent del
model es pot desplaçar el tub o la platina. Al capçal hi va cargolat el revòlver. L’interior
està pintat de negre mate i te un diafragma per impedir la formació de reflexes i
facilitar l’observació

-Revòlver: component mecànic en forma semiesfèrica en el què van cargolats

habitualment els diversos objectius de què disposa el microscopi. És una peça giratòria
al voltant d’un eix que permet el canvi d’objectiu efectuant només una petita rotació
-Cargol o comandament macromètric: la seva funció consisteix en desplaçar la platina
respecte del tub o capçal i també aconseguir l’enfoc groller de la preparació.
Aquest cargol és per aconseguir l’enfoc fi de la preparació. Cada divisió de la rosca
permet un moviment vertical imperceptible de l’ordre de 0,001 mm. El moviment
màxim d’aquest cargol és d’aproximadament 5 mm

-Tots els sistemes de desplaçament mecànic són sistemes de cremallera

Aberracions

-En general són distorsions de la imatge en la formació del focus produïdes per les lents
quan són travessades pels raigs lluminosos. Fonamentalment són de dos tipus,
geomètriques i cromàtiques.

 Aberracions geomètriques: són degudes a la forma de les lents, la seva

curvatura. Els rajos que corren paral·lels a l’eix òptic o amb un cert angle
respecte del mateix un cop travessada la lent fan el focus a un punt diferent i
com a resultat les vores de la imatge apareixen borroses. Les aberracions
geomètriques poden ser de diversos tipus.

 Aberracions cromàtiques: les aberracions cromàtiques estan relacionades amb

l’índex de refracció (n) , que varia amb cada longitud d’ona (ʎ) (cada color en
la descomposició de la llum té un n i un ʎ diferents). Quan un feix de llum
blanca travessa la lent i es difracta amb els seus colors corresponents, cada
color, és a dir, cada longitud d’ona fa el focus a un punt diferent de l’eix òptic
produint unes irisacions de colors a les vores de la imatge

Sistema d’il·luminació

-Per la bona observació microscòpica necessitem una il·luminació perfecta. Les

característiques d’una il·luminació òptima són que sigui fixa, constant i homogènia

-Està compost per una làmpada, un diafragma de camp, un objectiu (porta filtres), un
interruptor i un potenciòmetre

-La làmpada pot ser:

 Incandescent: té menys potència. S’utilitza només si el microscopi és només

per observació. Proveïdes d’un filament de wolframi o tungstè. Tenen un baix
voltatge (6V) amb 5-15W de potència
 Halògenes: més potència que les incandescents. Es fan servir per l’observació i
per microfotografia
 Alta pressió de xenó: més potent que la halògena. Utilitzades a microfotografia
i microscopi de fluorescència
  Alta pressió de mercuri: mateixa potència i mateixes prestacions que l’anterior
 Alt voltatge: serveix per microfotografia, microfilmació i M.O. De llum
polaritzada i de contrast de fase
 Diafragma de camp: dispositiu d’apertura regulable que el que fa és concentrar
el núvol lumínic que prové de la làmpada cap a l’eix òptic, formant l’eix lumínic.
L’eix òptic passa per tots els dispositius
Quant acciones el diafragma es per regular la quantitat de llum que
necessitem, donat que és un orifici de diàmetre regulable
- Anul·lar: te una placa que té apertures fixes de diferents mides i pots
seleccionar la que més convingui
- Iris: sèrie de làmines encavalcades les unes sobre les altres. La seva
superposició és regulable
 Porta filtres: alguns dels microscopis òptics porten un filtre, que serveix pels camps
clars, donant una llum més blanca a l’observació i a la preparació. De fet el porta
filtres pot estar al sistema d’il·luminació o al sistema de condensador
 Interruptor: situat al peu. Serveix per apagar i encendre la làmpada
 Potenciòmetre: serveix per graduar la intensitat de la llum que prové de la
làmpada. Està situat també al peu. Sempre s’ha d’accionar gradualment tant per
accionar com per apagar