SESSIÓ GM

TÈCNIQUES DE MICROSCÒPIA

1
 La microscòpia
L’ull humà no pot discriminar més enllà de 0.1 mm (distància mínima de
resoluió): no pot identificar com a diferents dos elements situats a distàncies
menors que aquestes, o un element inferior a aquesta mida

2
 La microscòpia
Finalitat Augmentar la imatge (X)
Millorar el Poder de resolució (R) de la imatge

ELS AUGMENTS (X)

Relació existent entre la mida real d’un objecte i la mida de la seva
imatge ampliada

EL PODER DE RESOLUCIÓ (R)

Capacitat d’un objectiu per diferenciar dos punts o dues
estructures molt properes entre sí com a dos punts separats
R = 1/d

DISTÀNCIA MÍNIMA DE RESOLUCIÓ (d)

Distància a partir de la qual podem identificar dos detalls com a diferents.
Depèn de la longitud d’ona de la radiació incident (λ), de l’índex de refracció
(n) del medi entre la mostra i la font de radiació i d’aspectes tècnics del
microscopi (θ)
d = 0.61 λ / n sin(θ)

3
 La microscòpia
DISTÀNCIA MÍNIMA DE RESOLUCIÓ (d)

d ull humà: 0.1 mm

Això significa que l’ull humà és incapaç d’apreciar estructures d’una
longitud inferior a 0.1mm (100 µm). Tampoc diferencia dos punts que
es troben a una distància inferior a 0.1 mm.
d microscopi òptic : 200 nm
(estructures més petites no les observem)
Observació de nuclis, nuclèols, cromosomes, cloroplasts,
mitocondris i bacteris

d microscopi electrònic de transmissió : 0.1 nm

(100 vegades més gran que amb MO)
Observació de membranes, ribosomes, microtúbuls, etc.

d microscopi electrònic de rastreig : 10 nm

(menys potent que el TEM però més que el MO)
Observació de superfícies de mostres en 3D

4
 Tipus de microscòpia
Dos grans tipus de microscòpia:
Microscòpia ÒPTICA
La font de radiació són els fotons (llum visible)
Lents de vidre per obtenir la imatge ampliada
Proporciona imatges en color
Unitats d’ús més freqüent: mm, µm
Augment directe: 1000 X Observació de
material biològic: viu o mort

Microscòpia ELECTRÒNICA
La font de radiació són els electrons
Té una elevada resolució
“Lents” electromagnètiques per formar la imatge
Proporciona imatges en blanc i negre
Unitats d’ús més freqüent: µm, nm i Å
Augment directe: 50.000X (SEM) a
500000 X (TEM). Observació de material
biològic: mort
5
 La microscòpia òptica
CARACTERÍSTIQUES GENERALS
L’estereomicroscòpia permet l’observació, manipulació i dissecció de mostres grans i
senceres amb l’ajuda d’agulles emmanegades i bisturí. Un estereomicroscopi de
qualitat òptima permet fins a 500X, tot i que la majoria no superen els 100X. La
mostra es veu tridimensionalment. Generalment no cal contrastar la mostra.
Per fer observacions fins a 1000X cal un microscopi òptic i en aquest cas la llum ha
d’atravessar la mostra per sobre o per sota (m.o. invertit). A no ser que es tracti de
teixits naturalment fins i translúcids o de cèl·lules aïllades cadrà fer seccions molt
primes de la mostra amb un micròtom. La mostra es veu en dues dimensions. A no
ser que es tracti de mostres pigmentades cal fer un contrastat amb colorants o
fluorocroms (m.o. fluorescència).
Tots dos tipus de microscopis es poden acoblar a una càmara.

TIPUS DE MICROSCÒPIA ÒPTICA:

ESTEREOMICROSCÒPIA

MICROSCÒPIA

6
 La microscòpia electrònica
CARACTERÍSTIQUES GENERALS
- Contrastat de la mostra: amb metalls pesants (o les seves sals) que són
opacs als e- i es dipositen, formant precipitats, en major o menor quantitat
segons quina sigui l’estructura cel·lular, de manera que es veuen zones
més o menys electrodenses.
zona més fosca + electrodensa + metall dipositat
zona més clara - electrodensa - metall dipositat

TIPUS DE MICROSCÒPIA ELECTRÒNICA:

MICROSCÒPIA ELECTRÒNICA DE TRANSMISSIÓ

(TEM)

MICROSCÒPIA ELECTRÒNICA DE RASTREIG O

D’ESCÀNNING (SEM)

7
Microscòpia electrònica de transmissió (TEM)

- Un feix d’electrons (estàtic) bombardeja i travessa la mostra i projecta la imatge en

una pantalla fluorescent
- La imatge que s’obté és bidimensional i en blanc i negre
- e- baix poder de penetració en teixits i cèl·lules

Calen talls o seccions molt fines (20-100 nm de gruix)

de mostres reduïdes (1mm3)

Processat complex

talls amb ultramicròtom

- Observació de material biològic mort

- Observació de la ultraestructura de les mostres

-Elevat poder de resolució i molts més augments que el MO

8
Microscòpia electrònica de transmissió (TEM)

!"
Colorejada
digitalment !!

Mitocondris
(cèls. pulmó)
9
 Microscòpia electrònica de rastreig (SEM)
• El feix d’electrons és mòbil i rastreja sistemàticament la mostra (ressegueix la superfície de
la mostra línia a línia)
• La imatge que s’obté té aspecte 3D i en blanc i negre (amb punts brillants i altres més foscos;
la imatge presenta una elevada profunditat de camp)
• Processat menys complexe: no cal fer talls (els e- no travessen la mostra). Es recobreix
amb metalls pesants la superfície de la mostra
• S’observa la superfície de les mostres (organismes, teixits, cèl·lules i orgànuls)

Metal·litzador (Sputtering)
10
 Microscòpia electrònica de rastreig (SEM)
Detall de l’ull de la mosca de la fruita Mosca de la fruita

20 µm
Alga marina Àcar

!"
Colorejades
digitalment !!

14 11
12