6.

세균의 성장곡선(Bacterial Growth Curve and Generation Time)

1. 배경 및 목적
세균의 증식 곡선은 배양 시간의 경과에 따른 생균수 또는 총균수의 변화를 조사하여
그래프로 나타낸 것이다. 보통 회분식으로 배양되는 세균의 증식 곡선은 다음의 네 단계로 구
분된다.
① 유도기(lag phase)
미생물이 새로운 환경에 적응하는 단계로 균수의 증가는 거의 없으며, 세포 구성물질, 효
소, 핵산 등의 합성이 증가한다.
② 대수기(logarithmic phase)
세포가 기하 급수적으로 증가하는 시기로 세포의 생리활성도 높고 최대 속도로 분열하여
균수는 대수적으로 증가한다. 즉 ‘증식속도 > 사멸속도’인 시기. 세대시간(generation time)
측정은 일반적으로 대수기에서 측정한다.
③ 정지기(stationary phase)
새로운 세포의 증가 속도와 사멸속도가 같게 되는 시기로 실질적으로 생균수는 일정하다.
즉 ‘증식속도 = 사멸속도’인 시기. 이는 영양물질의 고갈과 대사산물의 축적에 의해 증식이
저해받기 때문이다.
④ 사멸기(death phase)
영양물질의 고갈과 대사산물의 축적이 진행되어 ‘증식속도 < 사멸속도’인 시기. 생균수의
수는 감소하고 자기용해(autolysis)가 일어나는 시기이다.
세대시간(generation time)은 세균이 한 번 분열하는데 소요되는 시간을 나타내는 것
으로 생균수 측정법 또는 비탁법을 이용하여 일정 배양 시간 전후의 세균수를 측정하여 다음
식에 의하여 세대수(generation number)를 구한 다음 세대시간을 구할 수 있다.
본 실험에서는 세균 성장의 변화를 관찰하고 증식곡선을 그려 세대시간을 계산하는 법
을 배운다.

3. 준비물
① nutrient broth에서 10~12시간 배양한 시험용 세균 배양액
② 멸균 nutrient broth 5 ml 시험관
③ 멸균 피펫
④ 분광광도계(spectrophotometer)
⑤ 진탕배양기(shaking water bath)

4. 방법
① 1ml 대장균 배양액을 멸균 피펫으로 취하여 멸균 nutrient broth 5 ml이 들어 있는 시험관
 에 넣는다.
② 접종 nutrient broth를 37℃에서 100rpm으로 진탕 배양한다.
③ 2시간 간격으로 시료를 취하여(0~24시간 동안 흡광도를 측정한다.)
(예, 2, 4, 6, 12, 18, 24시간 등, 조별 시간 협의하여 6개 샘플링 시간 결정)
④ X축을 시간, Y축을 OD (600 nm)값으로 하여 측정값을 표시하고 그래프를 완성한다.

5. 결과 및 고찰
=> 관찰된 성장곡선과 교과서에서 배운 생육곡선을 비교한 후 차이점과 그 원인 등에
대하여 기술