Professional Documents
Culture Documents
PDF 0003592
PDF 0003592
인간의 질병을 가진 동물 모델
이 제 욱
오송첨단의료산업진흥재단 신약개발지원센터
E-mail: jwl@kbiohealth.kr
요약문
목 차
1. 서론
2. 본론
2.1. 동물 모델의 필요성
2.2. 동물 모델에 사용되는 실험 동물
2.2.1. 설치류
2.2.2. 비인간 영장류(Non-human primates, NHPs)
2.2.3. 기타
2.3. 동물 모델 제작 방법
2.3.1. 유전자 조작 모델(GEMs)
2.3.2. 비 유전자 조작 모델(Non-GEMS)
1. 서론
2. 본론
2.2.1. 설치류
2.2.3. 기타
설치류와 비인간 영장류 외에도 토끼, 개, 돼지, 고양이 등 다양한 동물이 특정 질병 모델로
사용된다. 예를 들면, 토끼는 폐기종과 죽상동맥경화증 모델로, 개는 암과 당뇨 그리고 백내장
모델로, 고양이는 안과 질환 모델로 사용된다.
표 1. 인간 질병을 가진 동물 모델.
질병 분류 질병 동물 모델 유발 방법
암세포 이식(피하, 동소, 동종, 이종, 인간화 마우스)
종양 유전적, 비유전적
혈관신생
Carrageenan, Imiquimod
급성, 만성 염증
염증 질환 BSA, KLH, OVA, LPS
피부 염증, 패혈증
Ligation & puncture
HDM, Bet V1/V2
알레르기, 천식, 비염
면역 질환 BSA, OVA, Collagen
류마티스 관절염
CFA, LPS, Antibody
STZ, NA, Alloxan, MSG, High fat diet,
대사 성 질환 당뇨(I/II), 비만
Surgery
호흡기계 질환 천식, 호중구증가증(ARDS), 폐섬유증(CF), COPD OVA, HDM, LPS, Bleomycin, Smoke
죽상 경화증, 심부전, 심근경색
심혈관계 질환 KO, Surgery
혈전증, 당뇨 합병증, 고혈압
Ethanol, Indomethacin, DSS, TNBS/DNBS,
위장 질환 위궤양, 소장 염증, 대장염
OXA
간장 질환 간염, 지방간(NAFLD), 지방 간염(NASH) DIO, CCl4, HBV, WHV
사구체신염, 급성신부전 Antibody, CFA, Gentamicin, Cisplatin,
비뇨기계 질환
만성신장질환(CKD), 방광염 Glycerol, Surgery, Adriamycin, CYP, LPS
근골격계 질환 골관절염, 골절, 골다공증, 뼈 결함 MIA, Surgery
신경계 질환 파킨슨, 동맥 폐색, 척수 손상, 뇌경색, 뇌졸중 6-OHDA, MPTP, Surgery
결핵 Bacteria (Mycobacterium tuberculosis)
감염 질환
Influenza, HIV, MERS, 코로나 Virus (Influenza, HIV, MERS, SARS-CoV-2)
2.4.1. 종양 모델
암세포의 기원에 따른 모델
동종(Syngeneic) 이식 모델은 유전적으로 동일한 동물의 암세포를 이식하는 모델이다.
암세포의 기원이 동일하여 이식에 따른 면역거부반응이 없어 면역시스템이 완전한 동물을 사용할
수 있다. 이 모델은 약물 표적이 인간과 동일하고 표적에 직접 작용하는 약물의 효능 평가에
적합하다. 예를 들어, TGF1의 단백질 서열은 인간과 마우스가 100% 동일하여 인간에 작용하는
약물을 마우스에 그대로 적용할 수 있다. 약물의 표적이나, 약물의 표적 결합 부위가 실험 동물과
동일하다면 syngeneic 모델 적용이 가능하다.
혈관신생(Angiogenesis) 모델
혈관신생 모델은 종양 성장에 따른 새로운 혈관 형성과 이를 억제하는 약물의 효능을
평가하기 위한 모델이다. 종양이 빠르게 성장하기 위해서는 충분한 산소와 영양분 공급을 위한
새로운 혈관 형성이 필수적이다. 혈관 내피세포 성장인자(vascular endothelial growth factor, VEGF)는
새로운 혈관 형성에 필수적인 인자로 혈관 형성 억제제의 주요 표적이다 [12]. Matrigel plug
angiogenesis 모델은 암세포와 Matrigel을 섞은 gel plug를 누드마우스에 이식한 후, gel plug에
형성된 신생 혈관을 면역 화학적(immunohistochemistry, IHC) 염색법이나 혈관 내의
헤모글로빈(hemoglobin)을 분석하여 혈관 신생 억제 효능을 평가한다. 일반적인 종양 이식 모델에
비해 혈관 형성 기간이 짧고, VEGF를 Matrigel에 첨가하여 VEGF에 직접 작용하는 혈관 형성
억제제의 효능을 평가할 수 있다.
2.4.2. 염증 질환 모델
급성 염증 모델
급성 염증은 유발 물질에 노출되면 단시간에 히스타민(histamine), 활성 산소(reactive
oxygen), nitrogen species, proinflammatory/ inflammatory mediators가 분비되어 유발된다.
Carrageenan은 급성 염증 유발이 잘 되고 재현성이 우수하여 모델 제작에 많이 사용된다.
Carrageenan air pouch 모델은 설치류의 견갑골 쪽 피하에 멸균된 공기를 주입하여 공기
주머니(air pouch)를 만들면, 빈 공간의 표면을 따라 macrophage와 fibroblast가 증식하여 synovial
cavity와 유사한 구조가 만들어진다. 여기에 유발 물질(Carrageenan 또는 LPS)을 주입하면 면역 세포
침윤, 삼출물 및 염증 인자 증가를 통해 염증 반응이 유도된다. 이 모델은 일반 관절염 모델에 비해
제작이 쉽고, 분석에 필요한 충분한 시료를 얻을 수 있어, 관절염 유사 모델로 염증 기전 연구와
항염증 약물 평가에 사용된다.
Carrageenan-induced paw edema 모델은 Carrageenan (1%)을 설치류 뒷다리의 한쪽
발바닥(footpad)에 투여하여 발 부종(paw edema)을 유발하는 급성 염증 모델이다 [13, 14]. 발의
부피와 두께 변화를 통해 염증 여부를 쉽게 판단할 수 있고, 조직 병리학적, 생화학적 분석을 통해
염증 평가가 가능해서 항염증 치료제의 효능 평가에 사용된다.
패혈증(Sepsis) 모델
패혈증은 미생물에 의한 혈액 감염으로 짧은 시간 내에 혈액 내 tumor necrosis factor-
(TNF-α), gamma interferon (IFN-γ), IL-1, IL-6와 같은 염증성 인자가 고농도로 증가되고, 심각한 전신
염증 반응과 다중기관부전이 유발되어 사망에 이르는 급성 염증 질환이다. 수술적인 방법이나
미생물 유래 성분을 투여하여 유발할 수 있으며, 패혈증의 발병 기전 및 치료제 연구에 사용된다.
Cecum ligation/puncture (CLP) 유발 패혈증 모델은 맹장 결찰(ligation)과 천공(puncture)을
통해 패혈증을 유발하는 모델이다 [19]. 저체온증(hypothermia), 심계항진(tachycardia),
빈호흡(tachypnea)과 같은 전형적인 패혈증 쇼크 증상을 나타낸다. 인간의 패혈증과 가장 유사하여
널리 사용된다.
LPS 유발 패혈증 모델은 그람 음성 세균의 외막 endotoxin인 Lipopolysaccharide (LPS)로
패혈증을 유발하는 모델이다 [20]. LPS는 Toll-like receptor (TLR)-4의 ligand로 작용하여
proinflammatory cytokine인 TNFα와 IL-1을 대량으로 발현 시켜 전신 염증 및 다중기관부전을
유발한다. 인간의 패혈증과 많은 면에서 유사하지만, cytokine 수준이 훨씬 높고 빠르게 증가하며,
일시적이다. 따라서 이 모델은 패혈증 초기 증상 연구에 유용하다.
2-HIT 패혈증 모델은 CLP를 통한 1차 hit으로 염증을 유발하고, 5일 후에 Pseudomonas
aeruginosa를 사용한 2차 hit으로 폐렴을 유발하는 모델이다 [21]. 초기 proinflammatory cytokine이
감소하고, IL-10과 같은 항염증 인자가 증가한다. 인간의 임상 증상과 유사하게 B, T 세포의 사멸이
증가하고, 면역 활성과 bacterial clearance가 감소하여 감염 상태가 길어진다. 이 모델은 패혈증의
면역 조절 기전과 면역 조절 치료제 연구에 사용된다.
인간의 질병을 가진 동물 모델 이제욱 Page 11 / 31
2.4.3. 면역 질환 모델
2.4.4. 대사성 질환 모델
2.4.5. 호흡기계 질환 모델
2.4.6. 심혈관계 질환 모델
2.4.7. 위장 질환 모델
2.4.8. 간장 질환 모델
2.4.9. 비뇨기계 질환 모델
사구체신염(Glomerulonephritis) 모델
GBM (Anti- Glomerular basement membrane) 신염 모델은 사구체 신염 중에서 가장 심각한
유형 중 하나로, IV형 collagen에 대한 항체가 신장의 GBM에 결합하여 염증을 유발하는
자가면역질환이다. 사구체 신염과, 혈뇨, 단백뇨가 특징이며, 가장 널리 연구된 신염 모델이다.
마우스에 토끼 IgG와 complete Freund’s adjuvant (CFA)를 복강으로 투여하여 감작시키고, 5일 후에
토끼 anti-GBM 혈청을 정맥으로 주사하면 2-3주 이내에 신염이 발병된다. 랫트는 Wistar Kyoto
(WKY), 마우스는 BUB/BnJ, DBA/1J, 129/svJ가 감수성이 높다. 이 모델은 사구체신염의 발병 기전과
치료제 효능 평가에 사용된다 [48].
랫트 Thy-1 신염 모델은 Thy-1 항체를 포함하는 토끼 anti-thymocyte serum (ATS) 이나
마우스 anti-Thy 1 단클론 항체를 꼬리 정맥에 투여하여 유발시킨다. Thy-1 항체는 사구체 간질
세포(glomerular mesangial cells, GMC)에 존재하는 Thy-1 항원에 결합하여 면역반응을 일으킴으로써
신염이 유발된다. 이 모델은 사구체 간질 증식 사구체 신염(MsPGN) 모델로 신염 치료제의 효능
평가에 사용된다 [49].
방광염(Cystitis) 모델
Cyclophosphamide (CYP) 유발 방광염 모델은 CYP를 방광 내에 점적하여 방광염을 유도하는
모델이다. CYP는 간에서 대사되어 세포독성 물질인 acrolein을 형성하여 방광염을 유발한다. 이
모델은 방광염으로 인한 통증과 염증 기전, 치료제 발굴에 사용된다 [56, 57].
Lipopolysaccharides (LPS) 유발 방광염 모델은 LPS를 복강이나 방광 내에 점적하여 방광
염증을 유발하는 모델이다. 마우스는 LPS를 방광 내에 점적하여 유발할 수 있으며, 랫트는
protamine sulfate로 점막 투과성을 변경시킨 후 LPS를 방광 내 주입하여 유발한다. 이 모델은
인간의 간질성 방광염과 병리학적 증상이 유사하여 방광염 비임상 연구에 사용된다 [58].
골관절염 모델은 화학적, 수술적 방법으로 제작할 수 있다. Monosodium Iodoacetate (MIA)-
유발 골관절염 모델은 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase 저해제인 MIA를 관절 내에
투여하여 chondrocyte 사멸과 proteoglycan 손실을 통해 연골을 손상시켜 골관절염을 유발하는
모델이다 [59]. 자연적인 골관절염 진행과는 차이가 있지만, 인간의 골관절염과 유사한 관절 손상을
보여 관절염 통증 기전이나 치료제 효능 평가 모델로 적합하다. 외과적 수술을 통한 골관절염
모델은 관절을 역학적으로 불안정화시켜 연골을 손상시키고 염증을 유발하는 모델로, 수술이 용이한
랫트를 주로 사용한다. 화학적인 방법에 비해 유발 기전이 인간의 골관절염 진행과 보다 유사하다.
전방 십자 인대 절개(Anterior cruciate ligament transection, ACLT) 모델은 관절낭을 열어 ACL을
절개하는 방법으로 관절을 불안정화시켜 시간이 지남에 따라 관절이 손상되어 골관절염이 유발되는
모델이다. 내측 반월판(Medial meniscal tear, MMT) 모델은 무릎 내측 측부의 인대를 절개하여
골관절염을 유도하는 모델이다. 이 모델은 수술 후 7-14일 이내에 관절 불안정과 연골 손상, 연골
proteoglycan 감소, 기질 손실이 유발된다. 인간의 관절염과 유사하여 치료제 평가 모델로 적합하다.
골다공증은 뼈 질량 감소와 뼈 조직 악화로 뼈가 약해져 골절에 취약하게 되는 질병이다.
골다공증 모델은 수술적 방법으로 제작이 가능하다. 정소 적출(Orchiectomy) 골다공증 모델은
수컷의 정소를 수술로 적출하여 골다공증을 유발하는 모델이다. 성선 기능이 저하된 안드로겐 결핍
남성 골다공증을 모방한 모델로 대퇴골 및 요추 골밀도 감소를 보이며, 뼈 손실 속도는 느리다.
골다공증 치료제 효능 평가에 사용된다. 난소 절제(Ovariectomy, OVX) 골다공증 모델은 암컷의
난소를 수술로 적출하여 골다공증을 유발하는 모델이다. 난소 절제 후 약 3개월 후 대퇴골 및 요추
골밀도가 감소하여 골다공증이 유발된다. 이 모델은 폐경기 후 에스트로겐 감소로 인한 여성
골다공증과 매우 유사하며, FDA 승인 골다공증 비임상 모델로 골 손실 예방 및 치료제의 효능
평가에 사용된다.
뼈 치유 모델은 골절 혹은 뼈 결함을 유도하여 뼈 치유에 미칠 수 있는 의약품의 효능과
안전성을 평가하기 위한 모델로 사용된다. 폐쇄 골절 모델은 마취한 동물의 다리뼈에 핀을 삽입하여
고정한 후 다리뼈 중간 지점에 외부 충격을 가하여 단순 횡단 골절을 유도하는 모델이다. 이 모델은
낙상이나 외상성 골절 후 고정 방법과 유사하여 뼈 치유력이나 연골 내 뼈 형성 연구에 사용된다.
임계 크기 결함(Critical size-defect, CSD) 모델은 일생 동안 자연적으로는 치유되지 않는 최소
크기의 결함을 유도한 모델이다. 골절 치유 경로나 골절 치료 강화 연구에 사용되며, 두개골, 대퇴골,
악안면 골 결손 모델이 있다.
2.4.11. 신경계 질환 모델
2.4.12. 감염 질환 모델
표 2. 감염 질환 동물 모델.
Infectious Disease Sensitive/Commonly Used Resistant
Tuberculosis DBA2, C3H BALB/c, C57BL/6
BALB/c, C57BL/6, C3H
Salmonella 129S6, B6129F1, A/J
DBA2 (weak)
Lyme Borreliosis SJL, C3H, C57BL/6
DBA2, C3H most susceptible; BALB/c, C57BL/6 somewhat
Anthrax CBA, DBA2, FVB
susceptible
BALB/c, C57BL/6 (requires adaptation of virus to the mouse);
Influenza
DBA2 is highly sensitive and does not require adaptation
Zika virus SJL C57BL/6
Humanized PBL SCID mouse,
HIV Normal mouse
Humanized BLT SCID mouse
MERS Rhesus Macaque (NHP)
Cats, Ferrets
SARS-CoV-2
Human ACE2 Tg mice
2.4.14. 미래의 인간 질병 모델
고도화된 인간화(Humanized) 동물 모델
이종인 인간의 세포를 도입하기 위해 만든 면역결핍 마우스 모델은 줄기세포의 배양 및
분화 기술의 발달로 인간의 면역시스템을 재구성하는 것이 가능하게 되었다. BLT 인간화 마우스
모델은 태아 조직을 사용하여 T 세포 발달 문제를 어느 정도 해결할 수 있었다. 하지만, ‘이러한
동물 모델을 제작하기 위해 태아 조직을 지속적으로 이용 가능한가’라는 질문에는 부정적이다. HLA
type이 일치하고 자가 항원에 대한 면역 관용을 획득한 T 세포를 가진 인간화 동물 모델을
안정적으로 확보하기 위해서는 아직도 해결해야 할 숙제가 많다.
동물 모델을 대체할 인공 장기 평가 모델
동물 모델, 그 중에서도 유전적으로 가장 가까운 영장류조차도 인간과는 분명한 차이가
있다. 동물 모델을 아무리 인간화한다고 해도 모든 시스템을 인간의 것으로 대체하는 것은
불가능하다. 실험 동물의 인간화 수준을 높이는 것보다 인공 조직으로 구성된 새로운 대체 시험계를
개발하는 것이 보다 빠른 방법이 될 수 있을 것이다.
최근 배아, 중간엽, 역분화 줄기세포의 배양 및 분화 기술이 급속도로 발달하면서 환자의
특성을 가진 세포를 보다 손쉽게 이용할 수 있게 되었다. 3D 프린팅 및 배양 기술을 접목한
오가노이드(Organoid) 제작 기술은 2D 배양 시스템에 비해 훨씬 정교하게 인간의 조직과 장기를
모방할 수 있게 하였다. 인간의 순환계를 모방한 미니 장기 칩은 동물 모델 사용의 필요성을
감소시킬 것이다 [70]. 오가노이드 평가 시스템은 인간의 생리적 특성을 잘 나타내고 유전자 조작도
가능하여 PDX 모델을 대체할 수 있는 차세대 평가 기술이 될 수 있을 것이다.
단순히 동물 윤리 차원이 아니라, 인간의 신체를 좀 더 가깝게 모방할 수 있는 대체
기술로써 오가노이드 평가 시스템에 대한 관심이 증가하고 있다. BT-IT 기술이 결합된 인공 장기
제작 및 배양 기술은, 인체 시스템을 보다 가깝게 모방하여 환자 맞춤형 정밀 의료를 가능하게 할
것이다. ‘인공 장기 제작 기술의 발달로 면역 거부반응 문제가 해결된다면, 문제가 발생한 장기를
기계 부품처럼 교체하는 시대가 도래하지 않을까?’ 2005년에 개봉된 영화 “아일랜드”에는 대체
장기를 사용할 목적으로 만든 복제 인간이 등장한다. 예술가들의 상상력이 과학자들보다 수십 년은
앞서 왔음을 생각하면, 인공 장기 시대의 도래도 머지않았다.
질병의 발병 기전은 유전적, 환경적 또는 복합적 요인으로 구분할 수 있다. 유전적 요인은
발병 기전이 명확하여 유전자 조작을 통해 동물 모델을 쉽게 제작할 수 있다. 반면 환경적 혹은
복합적 요인은 발병 기전이 훨씬 복잡하여 일정한 모델 제작이 쉽지 않다. 특히 환경적 인자는 동물
종에 따라 감수성, 유발 증상과 발병 기전이 다를 수 있다. 약물의 효능을 제대로 평가하기
위해서는 질병의 발병 기전은 약물의 작용 기전과 동일해야 한다.
표 4. 동물 모델 선택 시 고려 사항.
Category Subcategory Conditions
Mouse, Rat; Non-human primate (NHP); Others
Species Susceptibility (Susceptible, Resistant)
Size (Small, Large)
Exp. animal Male (Hormone)
Sex
Female (Pregnant)
Young
Age
Old (Menopause; Degenerative)
Genetically (Natural; Manipulated)
Cause/Mechanism
Environmentally (Surgery; Diet; Chemicals)
Disease
Mild
Progress status
Severe (Tumor size; Tissue damage)
Chemicals; Biopharmaceuticals
Type
Oral; i.v.; i.m.; s.c., etc
In blood; Membrane-bound; Intracellular
Drug Target
Same; Different (Compared to human)
Direct (Cytotoxic; Blocking)
Mechanism
Combined (Blocking/Immune cell effect function)
2.5.4. 동물 윤리
3. 결론
[1] Ding Q et al., A TALEN genome-editing system for generating human stem cell-based disease models. Cell
stem cell, 2013, 12(2): 238-251.
[2] Liu B et al. CRISPR/Cas9: a powerful tool for identification of new targets for cancer treatment. Drug Discov-
ery Today. 2019, 24(4): 955-970.
[3] Ivics Z et al. Transposon-mediated genome manipulation in vertebrates. Nature Methods. 2009, 6(6):415-22.
[4] Manis JP. Knock out, knock in, knock down--genetically manipulated mice and the Nobel Prize. The New
England Jour-nal of Medicine. 357 (24): 2426–2429.
[5] Moore CB et al. Short hairpin RNA (shRNA): Design, Delivery and Assessment of Gene Knockdown. Methods
Mol Biol. 2010, 629: 141-158.
[6] Nagy A. Cre recombinase: the universal reagent for genome tailoring. Genesis. 2000, 26(2): 99–109.
[7] Biliouris K et al. Stochastic simulations of the tetracycline operon. BMC Syst Biol. 2011, 5(9): 1-19
[8] Demeestere I et al. Orthotopic and heterotopic ovarian tissue transplantation. Human Reproduction Update,
2009, 15(6): 649-665.
[9] Morton CL et al. Establishment of human tumor xenografts in immunodeficient mice. Nature Protocols.
2007, 2 (2): 247–50.
[10] Lai Y et al. Current status and perspectives of patient-derived xenograft models in cancer research. Journal
of Hematolo-gy & Oncology. 2017, 10(1): 106.
[11] Denayer T et al. Animal models in translational medicine: Validation and prediction. New Horizons in
Translational Med-icine 2. 2014: 5-11.
[12] Dvorak HF. Vascular Permeability Factor/Vascular Endothelial Growth Factor: A Critical Cytokine in Tumor
Angiogenesis and a Potential Target for Diagnosis and Therapy. Journal of Clinical Oncology, 2002, 20(21):
4368–4380.
[13] Sarika A et al. Anti-inflammatory activity of Lactobacillus on carrageenan-induced paw edema in male
wistar rats. International Journal of Inflammation. 2012, 1: 752015.
[14] Zhang J et al. Autophagy and mitochondrial dysfunction in adjuvant-arthritis rats treatment with resvera-
trol. Sci Rep. 2016, 6: 32928.
[15] Elliott G et al. Defining the antigen determinant for T-cell-mediated contact dermatitis using p-phenylene-
diamine: a gateway to chemical immunology. Journal of Investigative Dermatology. 2010, 130(3): 641-3.
[16] Van der Fits L et al. Imiquimod-Induced Psoriasis-Like Skin Inflammation in Mice Is Mediated via the IL-
23/IL-17 Axis. J. Immunol. 2009, 182(9): 5836-5845.
[17] Xia XC et al. Mycoepoxydiene inhibits antigen-stimulated activation of mast cells and suppresses IgE-medi-
ated anaphy-laxis in mice. International Immunopharmacology. 2013, 17(2): 336-341.
[18] Jackson AR et al. Anandamide attenuates Th-17 cell-mediated delayed-type hypersensitivity response by
triggering IL-10 production and consequent microRNA induction. Plos One. 2014, 9(4): e93954.
[19] Zhang H et al. Role of hydrogen sulfide in cecal ligation and puncture-induced sepsis in the mouse. Amer-
ican Journal of Physiology Lung Cellular & Molecular Physiology. 2006, 290(6): L1193.
[20] Tamara S et al. Marine compounds with therapeutic potential in Gram-negative sepsis. Marine Drugs.
The views and opinions expressed by its writers do not necessarily reflect those of the Biological Research Information Center.
Email: member@ibric.org