물과 음식물내의 병원균 검출용

바이오센서의 진전

전문연구위원 김춘영

1. 기술의 개요

□ 대부분의 미생물은 자연계에서 매우 중요한 역할을 하지만, 일부 해로

운 미생물, 특히 살모넬라균(Salmonella)과 리스테리아 식중독균(Listeria
Monocytogenes) 등은 물과 음식물을 오염시키며 사람과 동물의 전염병
발병원이 되기도 한다.

□ 전통적인 세균 확인과 검출법은 미생물학적 또는 생화학적 특성을 이

용한다. 이 방법은 정확하고 비싸지 않으며 미생물의 수와 상태에 있어
정성, 분석이 가능하지만 물과 음식물 내 낮은 농도의 병원균을 검출하
기 위해서는 일정한 농도가 될 때까지 시간이 필요하다. 또한 생(生)
세균은 일정한 환경에서 휴지기 상태로 있기 때문에 배양이 어려워 나
중에 병원균 수를 오산하거나 오염된 시료에서 병원균을 분리할 수 없
을 때도 있다.

□ PCR(Polymerase chain reaction)법은 낮은 농도의 바이러스, 세균, 원생

동물, 기생충 등의 정확한 검출과 복합반응의 서로 다른 병원균을 검출
해 내지만 시료의 오염, 사멸균, 노출핵산에 의한 거짓 세대배양, 정량
의 난점, 환경오염원에 대한 중합효소의 민감성이 문제가 되어 미생물
오염에 대한 직접 검출법으로 이용하기에 문제가 있다. PCR법과 같이
핵산을 이용한 검출법은 분석할 때 미생물이 독성물질을 생산하거나
독성을 나타내도록 하는 유전적 잠재력을 감지하는 것으로 음식물이나
환경시료에 독성이 있는지에 대한 정보는 전혀 알 수 없다는 면에서
제한적이다.

□ 항체를 이용한 면역학적 검출법은 세포, 세균, 독성, 포자 등을 감지하는

데 이용되며, 유전자 조작을 통한 미생물의 다양한 상업적 면역제재 생
산으로 좀 더 향상된 감도, 특이성, 신뢰성, 재생산성을 가지게 되었다.

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□ 핵산을 이용한 검출법은 항체를 이용한 면역학적 검출법보다 특이적이
고 민감한 반면, 항체를 이용한 면역학적 검출법은 신속하고 건실하며
미생물의 게놈에 영향을 받지 않는 생독성물질과 오염 미생물을 검출
해 낸다. 하지만 이들 방법이 전통적 방법에 비해 분석시간을 많이 감
소시켰다 할지라도 실시간(Real- time) 미생물 검출엔 미흡하다. 따라서
검출하려는 미생물을 보다 적은 비용으로 신속하고, 특이적이고, 감도
가 좋은 검출법에 대해 많은 연구가 진행되고 있다.

２. 기술의 내용

□ 바이오센서는 대부분의 경우, 특정 생물학적 현상에 대한 실시간 관찰

이 가능하도록 항체, 효소, 핵산과 같은 생물요소와 물리․화학적 특성
을 나타내는 변환기로 구성되어 있다. 바이오센서는 복잡한 시료에서의
분석대상물질의 폭넓은 검출이 가능하여 임상분석, 식품, 생물공정, 환
경모니터링 등의 분야에서 큰 기대를 하고 있다.

□ 바이오센서는 4가지 기본 그룹으로 나뉘는데 사용된 변환기에 따라 광학

적, 질량, 전기화학적, 열적 변환기로 분류되며 이 중 광학적 변환기는
세균의 실시간 검출 및 무표식(Label- free) 검출이 가능하여 매우 관심
을 끌고 있다. 또한 최근의 광학적 변환기에 대한 연구는 보다 견고하
며 사용이 쉽고, 이동하기 쉬우며 값싼 분석시스템을 만드는 방향으로
진행되고 있다.

□ 표면 플라스몬 공명형 센서(Surface plasmon resonance- based sensors)

○ 표면 플라스몬 공명(SPR)은 금속표면에서 광학투광이 있을 때 일어

나는 현상이며 이 같은 현상을 생체분자 간 상호작용 분석에 이용한
것이다. 표면에 고정된 특정 항체와 오염물질(세균세포, 독성물질)의
상호작용은 표면에서 질량의 변화를 일으켜 굴절률의 변화를 유도하
고 이어서 공명상태의 변화로 최소반사각의 위치가 이동하게 된다.

○ 표면 플라스몬 공명(SPR)은 단백질과 단백질 또는 단백질과 DNA의

상호작용을 연구하는데 널리 사용되며 이것의 원리는 센서 칩 표면
에 고정화된 리간드(Ligand) 물질에 분석하고자 하는 물질이 결합할
때 질량이 변화하는 것을 감지하는 것으로 분자인식(Molecular

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 recognition)에 의한 결합반응의 속도론적 연구와 미량의 시료에 대
한 반응분석이 가능하다

□ 상업적 SPR형 센서

○ 상업적 SPR 센서들은 기존 SPR 센서를 자동화하거나 조건변수 사양

을 여러 가지로 변화시킨 센서들이다.

○ 기존 SPR 센서의 자동화란 흐름 주입 분석기(Flow- injection

analysis), 온도조절, 자동시료주입기(Autosampler) 등의 기능을 갖
도록 하는 것을 말하며 조건변수의 사양 변화란 공명 거울 배열,
Microfluidies, Refractive index range 등을 말한다.

○ 센서의 성능은 제한 검출값(LOD: Limit of detection)으로 나타내는

데 낮은 LOD는 보통 신호와 노이즈(S/N)비를 증가시킴으로써 얻을
수 있다. SPR 센서는 많은 시료 양에서 병원균의 수를 농축한 적은 양
의 시료를 주로 사용하며 주변 온도 변환에 특히 민감한데 최대 정
확도를 얻으려면 적정 온도를 꼭 맞추어야 한다.

○ 미세 유기물 검출의 핵심은 특정 항체의 선택, 최적의 고정화, 올바

른 시료의 준비이다. 적절한 특정 항체의 선택으로 대장균(Escherichia
coli), 살모넬라 엔테라이티디스(Salmonella enteritidis), 식중독균의 검
출이 보고된 경우가 있다. 세포간 상호작용에 덱스트란에 기초한 하
이드로겔은 보다 큰 세포의 확산을 방해하고 세포들의 활동을 제한
하여 민감도를 낮추는 효과가 나타난다.

□ 음파형 센서(Acoustic wave- based biosensors)

○ 음파형 센서는 생물요소와 분석대상물질이 결합하여 질량변화가 생

길 때 발생하는 주파수변화를 측정하는 장치이며, 압전성 물질은 음
파형 센서의 가장 중요한 변환기로서 이용하며 주파수에 따라 음파
를 발생시키고 전달할 수 있기 때문에 이 용도에 적합하다.

- 압전성 재료로서 SiO2와 LiTaO3가 주로 쓰이며 표면은 화학적으로

안정하며 생물요소의 고정화가 용이해야 한다.

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 ○ 음파형 센서는 무표식 검출과 항원- 항체의 온라인 분석이 가능하고
면역분석물 구성을 선택적으로 설정하여 검출의 선택성과 특이성을
향상시킬 수 있으며 간편한 사용과 가격의 효율성의 이점이 있다.

○ 고도의 선택성을 지니도록 음파형 센서에 생물요소를 고정화하는 방

법으로는 Precoating된 결정에 고정화는 방법, Acryamide polymer
내로의 포괄법, Glutaraldehyde 가교화에 의한 고정화 방법, DNA
grafting의 경우와 같이 광조사에 의한 고정화 방법 등이 보고되고
있으며, 이 때 고정화에 사용되는 물질로는 Nyebar C, Polyethlyenimine,
Υ- aminopropyltriethoxysilane, Protein A poly(Butyl methacrylate) 등
이 있다.

○ 음파형 센서는 크게 벌크 파(Bulk wave) 장치와 표면 음파 장치

(Surface acoustic wave devices)로 분류할 수 있다.

□ 전류차식 센서(Amperometric sensor)

○ 미세- 유기물의 전류차적 검출은 작용전극의 표면에서 생친화성 반응

과 연관되거나 효소에 의해 촉매된 전기적 산화와 환원을 통해 유도
된 전류의 측정으로 알 수 있다.

○ 작용전극의 전위는 보통 평형을 이룬 Ag/AgCl을 참조극(Reference

electrode)으로 삼아 유지된다. 이때 가장 일반적인 작용 전극은 전도체
고분자, 귀금속, 탄소 변형물이다.

○ 전류차식 센서는 매우 민감하며, 작고 견고하고 경제적이지만 선택도가

낮아 투과선택성 막과 매개체를 이용하여 극복하기도 한다.

○ 전기화학적 검출에 있어 간략성과 신속성을 나타내는 면역 반응 센서

는 선택성은 크지만 본래의 신호 증폭은 부족하여 평판 지질 2중층에
항체를 꽂아 이온 채널을 향상시킴으로써 이를 보완한 전류차식 면역센
서를 개발하였다.

○ 또한 기존의 전류차식 센서의 선택성을 높이기 위해 면역자석 비드를

사용하기도 한다.

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 ○ 주사 흐름(Flow- injection)은 분석자동화에 많이 기여하며, 주사 흐름
면역여과(Flow- injection immunofilteration)는 시료의 면역용매 표면적
비를 증가시켜서 항원- 항체의 접촉을 늘리고 결합속도를 가속시킨다.
이러한 센서 형태는 결합력, 높은 감도, 분석시간의 단축, 조작의 간편
성을 제공한다.

□ 전위차식 센서(Potentiometric sensor)

○ 전위차식 센서는 효소와 같은 생체활성물질과 반투과성 외층으로 구

성된다. 효소반응에 의해 생성되거나 소모된 전위는 이온 선택 전극
에 의해 감지되며 이때 나타난 전위차는 농도의 대수값에 비례한 측
정값으로 나타난다.

○ 최근 개발된 광 지시 전위차식 센서(LAPS: Light addressable potentiometric

sensor)는 미생물 오염 검출에 적당하며, 이것은 면역반응이 일어나
는 수용액과 접해 있는 절연층과 n형 실리콘 반도체 센서로 이루어
져 있다.

○ 미 국방부가 공기로 전파되는 생물학적 위협을 검출하기 위해 생물 통합

검출 시스템을 제안하였다. 이 시스템은 15분 이내에 동시에 8가지를
검출할 수 있다.

３. 결론

□ 전통적인 미생물 오염물에 대한 검출과 동정이 매우 민감하고 값싸며

질․양적인 면에서 우수할지라도 그 결과를 얻기까지는 시간이 많이
걸린다. 이에 바이오센서는 식품에서의 세균검출이 신속한 실시간 분석
과 동시다발 분석이 가능하다는 면에서 매우 흥미롭다. 이 논고에서 살
펴본 바와 같이 센서 시스템의 민감도는 변환기의 특성, 생물요소, 세
포흐름 장치의 개량, 변환기 민감도, 소형화, 항체의 설계 및 생산 등의
영향을 고려한다면 더욱 더 감도가 향상될 것이며 실험실에서나 실용
분야에서 사용하기에 적합하도록 자동화되고 값싼 바이오센서가 될 것
이다.

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 ◁전문가제언▷

□ 바이오센서의 기법은 주요성분에 대한 계측을 저농도에서 정확하고 특

이적으로 행할 수 있게 하며 비전문요원에 의해서도 취급이 가능하고
현장성이 뛰어난 장점이 있다.

□ 바이오센서의 적용분야로는 의료분야, 식품 및 위생분석, 환경검정, 국

방, 공정조절 등을 들 수 있다.

□ 향후에는 생물요소의 안정화기술, 측정저해물질의 영향배제기술, 재현

성 있는 바이오센서 제조기술개발 등에 연구역량이 집중될 것으로 예
상된다. 또한 산업적 측면에서는 일회용 바이오센서의 경우에서 보듯
이 재현성 있는 측정결과를 나타내는 바이오센서를 저렴하게 생산할
수 있을 것으로 예상된다.

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