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Kci Fi002409273
Kci Fi002409273
Effects of Green Tea Extract on the p53 Pathway in the MCF-7 Breast Cancer
Cell Line
Inseok Kwak*
Department of Biological Science, Silla University, Busan 617-738, Korea
Received October 12, 2018 /Revised October 24, 2018 /Accepted October 29, 2018
The effects of a green tea extract (GTE) were examined using the MCF-7 human breast cancer cell
line. Cell viability assays using 3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) as-
says revealed that GTE had a significant cytotoxic effect on MCF-7 cells, depending on the concen-
tration of GTE. Western blotting of p53 and its related proteins, p21/cip1 and CDK2, after GTE treat-
ment revealed that a significant and concentration dependent increase in p53 protein in response to
GTE. The levels of p21/cip1 proteins were also increased at low GTE concentrations were significantly
increased even at the highest GTE concentrations. However, the level of CDK2 was significantly de-
creased by treatment with high concentrations of GTE. These results indicate that treatment with GTE
increased the p53 level in MCF-7 cells, and this activation of p53 markedly elevated the levels of
p21/cip1proteins, which, in turn, inhibited CDK2 expression in the MCF-7 cells. The inhibition of
CDK2 expression might then affect cell cycle progression. Subsequent FACS analysis indicated that
GTE treatment the gradually increased progression of the MCF-7 to the G1 phase. These results clear-
ly demonstrate that the anti-tumor effect of GTE in MCF-7 cells is regulated by p53 arrest of the
MCF-7 cells at the G1 stage of cell cycle.
Key words : Breast cancer, green tea extract, MCF-7, p53, p21
세포 생존율 측정
유방암 유래 MCF-7 세포는 3×104 cells/well 농도로 분주하
여 , 37℃ CO2 배양기에서 20시간 이상 안정화된 세포를 사용
하였다 . GT추출물을 50%의 DMSO에 주어진 농도에 따라 희
석한 후 처리하고 16시간 동안 배양한 후 MCF-7 세포의 세포
생존율(Cell viability)을 MTT분석법으로 측정하였다. CellTiter
96Ⓡ Cell Proliferation Assay kit (Promega, Madison, WI,
Fig. 1. Cytotoxicity of MCF-7 cells by different concentrations
USA)의 염색 액을 첨가한 후 4시간 동안 상온에서 반응시킨
of green tea extract. MCF-7 cells were treated with GT
후 , 반응정지 용액을 넣고 1시간 반응 후 570 nm에서 ELISA extract (3, 6, 9, 12, and 20 ug/ml) and 50% of DMSO
Reader (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)에서 흡광 was used as control (Ct: 0) for 16 hr and cell viability
도를 측정하였다 . was measured by the MTT assay.
1318 생명과학회지 2018, Vol. 28. No. 11
Fig. 2. Effect of green tea extracts on the level of p53, p21/cip1 GT추출물 처리에 의한 세포 주기 분석(FACS)
and CDK2 in MCF-7 cells. MCF-7 cells were treated with
녹차추출물이 세포의 세포주기에 어떤 영향을 미치는지 확
GT extract (0, 3, 9 and 20 ug/ml) for 16 hr and the ex-
pression of p53, p21/cip1 and CDK2 protein was ana- 인하기 위하여 GT추출물을 16시간 처리한 후 FACS 분석을
lyzed by Western blot. 통하여 관찰하였다(Fig. 3, Table 1). MCF-7 세포에서 GT추출
물에 의한 세포 생존율 결과를 (Fig. 1) 참고하여 0, 3. 9 및 20
보였으나, 9 ug/ml 처리한 경우에는 p53 단백질의 양이 현저 ug/ml의 GT추출물을 처리한 후, 세포주기인 G0, G1, S과 G2
하게 증가함이 관찰되었다 . 그러나 세포 생존율 실험에서 높 를 비교하였다 , 그 결과를 control 그룹과 과 비교 하였을 때 ,
은 세포 독성을 보였던 고농도(20 ug/ml)의 GT추출물을 처리 세포주기의 G0단계가 감소됨이 관찰되었고 , 다음 단계인 G1
하였을 때는 9 ug/ml 처리한 시료보다는 약간 감소함을 보였 단계는 현저하게 증가됨이 관찰되었다 (Table 1). G1 다음의
다(Fig. 2). 이와 같은 결과는 GT추출물에 의해 세포가 손상되 단계인 S단계나 G2단계는 감소됨이 관찰되었다(Fig. 3). 이 결
었을 경우 유전적 변화를 방지하기 위해 p53 단백질이 활성화 과는 MCF-7 세포에 미치는 GT추출물의 영향은 유방암 세포
되었음을 나타내며, p53의 발현이 현저히 증가한 결과, p53의 를 세포주기의 G1단계에서 정지 (arrest)하여 , 세포 주기의 진
target 유전자인 p21/cip1 단백질 발현을 유도한 것으로 나타 행을 중단하는 작용을 함을 확인할 수 있었다 .
났다 [19]. GT추출물에 의한 p21/cip1 단백질의 발현은 낮은
농도 (3 ug/ml)의 GT추출물에서 약간 증가하였고 , 고농도 (20 Discussion
ug/ml)에서도 증가하는 양상을 나타내어, p53 단백질과는 다
른 패턴이 관찰되었다 . 그러나 GT추출물에 의한 CDK2 단백 p53는 Tumor suppressor (종양 억제 인자 )로 알려진 단백
질의 발현 양상은 p 53나 p21/cip1 과는 다른 패턴이 관찰되었 질로, p53은 세포의 성장과 분열을 조절하는 세포주기에서 중
다. 즉 CDK2의 단백질의 양은 낮은 농도의 GT추출물 처리에 요한 역할을 수행한다[13, 16]. Cyclin은 세포주기를 조절하는
structural and functional aspects of the p53 protein. Onco- 16. Salnikow, K., Costa, M., Figg, W. D. and Blagosklonny, M.
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녹차 (GT) 추출물의 효과를 인간 유방암 유래 세포인 MCF-7 세포를 사용하여 조사 하였다 . GT추출물의 세포
독성 효과를 MTT 방법을 사용하여 관찰한 결과 , MCF-7 세포는 현저한 세포 독성 효과를 보였고 , 이 독성 효과는
GT추출물 농도 의존적으로 증가하였다 . p53과 관련 단백질인 p21/cip1과 CDK2의 연관성을 조사하기 위해 GT추
출물 처리 후 웨스턴 분석법을 통해 이들 단백질의 발현을 조사하였다 . GT추출물 처리 후 , MCF-7 세포에서 p53
단백질의 양은 농도에 따라 현저하게 증가 하였다 . p21/cip1 단백질의 발현은 낮은 농도의 GT추출물에서 증가되
며 , 고농도에서도 감소하지 않았다 . 그러나 CDK2의 단백질의 양은 높은 농도의 GT추출물에서 CDK2 발현의 급
격한 감소가 관찰되었다 . 이 결과는 GT추출물의 처리는 MCF-7 세포에서 p53와 p21/cip1를 증가시켜 , 그 결과로
활성화 된 p21/cip1는 CDK2의 발현을 억제 함을 나타내고 있다 . GT추출물이 MCF-7 세포의 세포주기에 어떤
영향을 미치는지 확인하기 위하여 FACS 분석으로 관찰한 결과 , MCF-7 세포에서 세포주기의 G1 단계가 점차 증
가하는 결과를 보였다 . 이 결과는 GT추출물의 유방암 세포에서의 항암 효과는 세포주기의 G1 단계에서 MCF-7
세포를 정지시키는 p53에 의해 조절된다는 사실을 명확하게 보여 주고 있다 .