Міністерство охорони здоров`я України

Національний медичний університет імені О.О. Богомольця

РОБОЧИЙ ЗОШИТ
для самостійної роботи студентів
(аудиторної та поза аудиторної)

Навчальна дисципліна Медична біохімія

Спеціальність 222 «Медицина»
Кафедра медичної біохімії та молекулярної біології

Тема заняття: Будова, фізико-хімічні властивості ензимів. Номенклатура та

класифікація ензимів. Механізм дії ензимів.

Розглянуто та схвалено: на навчально-методичному засіданні кафедри

від 28.08. 2023 р. протокол № 1

Завідувачка кафедри, к.б.н., доцент _______________Л. Яніцька

Розглянуто та затверджено: ЦМК з природничих дисциплін

від 30.08.2023 року, протокол №1

Методична рекомендація складена: к.б.н., асистент Білявський С.М.

2023
Тема 3. Будова, фізико-хімічні властивості ензимів. Номенклатура та
класифікація ензимів. Механізм дії ензимів.

Мета:
Знати:
1. Будову, властивості та функції ензимів як біологічних каталізаторів
реакцій обміну речовин, внутрішньоклітинну локалізацію та
особливості їх просторової і функціональної організації (утворення
мультиферментних комплексів).
2. Специфічність ензимів в залежності від шляху перетворення чи
хімічної будови субстрату (абсолютна, відносна, стереоспецифічність).
3. Особливості механізму дії ензимів при каталітичному перетворенні
субстрату та його етапи.
4. Основні кінетичні властивості ензимів, від яких залежить їх
активність і відповідно швидкість каталітичної реакції (рН середовища,
температура, концентрації с а м о г о ензиму та концентрації субстрату).
5. Загально-прийняту класифікацію ензимів та типи реакцій, що
каталізують окремі їх класи; номенклатуру ензимів (систематичну,
тривіальну).
6. Біомедичне значення вивченого матеріалу у подальшому навчанні та
медичній практиці.
Вміти:
1. Складати та аналізувати схему механізму дії ензимів.
2. Класифікувати ензими за типом реакції.
3. Визначати клас ензимів за алгоритмом побудови назв та способом
розшифровки цифрових їх кодів згідно міжнародної класифікації
(КФ).
4. Робити висновок за результатами практичної роботи та пояснити
біомедичне значення дослідження.

Запишіть та запам’ятайте основні поняття та терміни теми:

Термін Визначення
Ензимологія або
Ферментологія
Ензими (ферменти)

Основні властивості –
ензимів як –
біокаталізаторів: –
–
–
Класифікація 1. Клас
ензимів за типом 2. Клас
реакції, яку вони 3. Клас
каталізують:
4. Клас
5. Клас
6. Клас
7. Клас
Ензими-прості
протеїни
(однокомпонентні)
Ензими-складні
протеїни
(двокомпонентні)
Холоензим

Апоензим

Кофактор

Простетична група

Коензими
(коферменти)

Активний центр

Якірна (або
контактна) ділянка

Каталітична ділянка

Алостеричний
центр
Механізм дії ензиму –
(ефекти): –
–
Фактори, що –
впливають на –
швидкість –
ферментативної
–
реакції:
–
Поліензимні
(мультиензимні)
системи чи
комплекси

Рекомендована література

Основна:
1. Біологічна хімія: підручник / Ю.І. Губський, І.В. Ніженковська, М.М.
Корда [та ін.]; за ред. І.В. Ніженковської. – Вінниця: Нова Книга, 2021. – С.
28-47, 96-126.
2.Біологічна і біоорганічна хімія: базовий підручник: у 2 кн. / кол.авт.; за ред.
Ю.І. Губського, І.В. Ніженковської. – Кн. 2: Біологічна хімія, 3-тє
(стереотипне) вид. – К.: ВСВ «Медицина», 2021. – 544 с.
3. Біологічна і біоорганічна хімія: підручник: у 2 кн. / Ю.І. Губський, І.В.
Ніженковська, М.М. Корда [та ін.]; за ред. Ю.І. Губського. – Кн. 2:
Біологічна хімія.– К.: ВСВ «Медицина», 2016. – С. 23-76.
4.Біологічна і біоорганічна хімія: базовий підручник: у 2 кн. / кол.авт.; за ред.
чл.-кор. НАМН України, проф. Б.С. Зіменковського, проф. І.В.
Ніженковської. – Кн. 1: Біоорганічна хімія, 2-ге вид., випр. – К.: ВСВ
«Медицина», 2017. – С. 205-217, 226-230.

Додаткова:
1.Biological and Bioorganic Chemistry: textbook. Book 2: Biological Chemistry /
Yu.I. Gubsky, I.V. Nizhenkovska, M.M. Korda et al.; edited by Yu.I.
Gubsky,I.V.Nizhenkovska. –2nd edition – Kyiv: AUS Medicine Publishing, 2021.
- 544 p.
2.Biological and Bioorganic Chemistry: textbook. Book 1: Bioorganic Chemistry /
B.S. Zimenkovsky V.A. Muzychenko, I.V. Nizhenkovska, G.O. Syrova. – 3rd
edition – Kyiv: AUS Medicine Publishing, 2020. - 272 p.
3.Gubsky Yu.I. Biological chemistry: textbook / edited by Yu.I. Gubsky. –
Vinnytsia:Nova Knyga, 2018. – 488 p.
 Практична робота

Завдання 1. Виявлення активності амілази слини (реакція з йодом на

крохмаль).

Принцип методу. Ензим амілаза відноситься до класу гідролаз – ензимів, що

каталізують розрив хімічних (глікозидних) зв’язків з приєднанням молекули
води. Амілаза слини каталізує гідроліз крохмалю через стадію утворення
декстринів до дисахариду мальтози (або до моносахариду – глюкози), про що
свідчить якісна реакція на крохмаль з йодом та реакція Тромера на наявність
вільної альдегідної функціональної групи, що наявна у дисахариду - мальтози
(та як і в моносахариду - глюкози).
Полісахарид крохмаль утворює з йодом синє забарвлення, що є якісною
реакцією на нього, і не дає забарвлення в реакції Тромера, оскільки не
містить вільних альдегідних груп. Дисахарид мальтоза (як і моносахарид -
глюкоза) містить вільну альдегідну групу, а тому утворює жовто-червоне
забарвлення з реактивом Тромера.

Схема реакції Тромера:

Реакція Тромера (реакція на відновлювані вуглеводи): при додаванні до

досліджуваного розчину 10 % р-ну NaOH і 5% р-ну CuSО4, він забарвлюється
у синій колір. Після нагрівання пробірки з утвореним розчином до кипіння,
спочатку випадає жовтий осад купрум (І) гідроксиду (СuОН), який потім
переходить до червоного осаду купрум (І) оксиду (Сu2О). Глюкоза (кінцевий
продукт ферментативного гідролізу крохмалю) у лужному середовищі
відновлює купрум (І) гідроксид до купрум (І) оксиду, а сама окиснюється до
глюконової кислоти. При більш глибокому окисненні глюкози утворюються
солі глюконової кислоти (глюконати) та низка інших сполук. Реакція
Тромера для крохмалю та олігосахаридів не відбувається.

Досліджуваний матеріал, реактиви, обладнання: р-н слини; 1%-й р-н

крохмалю; р-н Люголя (або 0,1%-й р-н йоду в 0,2%-му р-ні КІ); реактив
Тромера (10% р-н NaOH, 5 % р-н CuSO4); штатив з пробірками; піпетки;
скляні палички; спиртівка; термостат.

Хід роботи.
1. В пробірку вносять 1,0 мл розведеної в два рази слини, додають 2 мл 1%-го
р-ну крохмалю, добре перемішують і ставлять в термостат при t=37°C на 15
хв.
2. Після інкубації, вміст пробірки ділять на дві частини і проводять реакції:
- з розчином Люголя на наявність крохмалю (додаючи кілька крапель 0,1%-
й розчину йоду в 0,2%-му р-ні КІ). За наявності крохмалю з’являється
синє забарвлення.
- реакцію Тромера на наявність мальтози чи глюкози (5 крапель 10% р-ну
NaOH та кілька крапель 5% р-ну CuSO4) та обережно нагрівають пробірку до
кипіння і кип’ятять 1 хв. Поява жовто-червоного забарвлення свідчить
про позитивну реакцію Тромера на наявність мальтози і глюкози..
3. Результати дослідження заносять в таблицю:

Ензим Об’єкт Субстрат Умови Реакція:

дослідження реакції з йодом Тромера
Амілаза Слина крохмаль 37оС
15 хв.

Висновок:
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________

Біомедичне значення:
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________

Питання для теоретичного опрацювання СРС

1. Ензими як біологічні каталізатори реакцій обміну речовин. Їх загальні
властивості та функції.
2. Внутрішньоклітинна локалізація ензимів.
3. Будова ензимів: прості, складні, (кофактори, коензими, простетичні
групи). Роль іонів металів у функціонуванні ензимів. Ізоензими та
мультиензимні (поліензимні) комплекси.
4. Будова активного центру та його значення, регуляторний
(алостеричний) центр та його значення.
5. Субстратна специфічність ензимів: абсолютна, відносна,
стереоспецифічність.
6. Основні фізико-хімічні властивості ензимів:
6.1. залежність активності ензимів від рН середовища (пояснити і
зобразити графічно);
6.2. залежність активності ензимів від температури (пояснити і зобразити
графічно);
6.3. залежність швидкості реакції від концентрації ензиму;
6.4. залежність швидкості реакції від концентрації субстрату (пояснити і
зобразити графічно); рівняння Міхаеліса-Ментен і Лайнуівера-Берка.
7. Номенклатура та класифікація ензимів. Типи реакцій, що каталізують
окремі класи ензимів.
8. Механізм дії ензимів (етапи перетворення субстрату на продукт):
8.1. ефекти зближення та орієнтаціїї;
8.2. ефекти кислотно-основного каталізу;
8.3. ефекти нуклеофільного та електрофільного каталізу.

Завдання для самостійного опрацювання теми

Завдання 1. Заповніть діаграму Венна «Ензими як біологічні каталізатори

хімічних реакцій організму», вказавши подібні і відмінні властивості ензимів
та хімічних каталізаторів.
Ензими Хімічні каталізатори
Завдання 2. Наведіть схему процесу каталітичного перетворення субстрату
(S) при взаємодії з ензимом (E) на продукт (Р), вказавши всі відповідні етапи
з короткою їх характеристикою.

___ + ___ _______ _______ ___ + ___

__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________

Завдання 3. Доповніть схему «Види специфічності ензимів» (вписавши назви

і визначення) та наведіть кілька прикладів ензимів, що мають той чи інший
вид специфічності.

Приклади:
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
Завдання 4. Заповніть таблицю «Класифікація ензимів за типом реакції, яку
вони каталізують».

Номер Назва Тип реакції Типові Приклади

класу класу (загальна схема) коензими ензимів
1 2 3 4 5

Завдання 5. Дайте відповідь на запитання:

1. Які амінокислоти поліпептидного ланцюга апоензиму найчастіше входять
до складу активних центрів більшості ензимів і чому? Відповідь обгрунтуйте
на прикладі.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
2.Що таке поліензимні (мультиензимні) комплекси та які їх переваги в
порівнянні з окремо діючими ензимами. Які типи поліензимних комплексів
розрізняють? Наведіть приклади таких комплексів.
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________

Завдання 6. Накресліть графіки залежності швидкості ензимної реакції від:

а) концентрації субстрату; б) концентрації ензиму;

в) температури; г) значення рН.

На графіках позначте орієнтовні оптимальні значення рН та

температури, вкажіть значення максимальної активності ензиму.

Завдання 7. Виконайте тестові завдання для самоконтролю:

1.Тільки один фактор може впливати на заряд амінокислотних радикалів в
активному центрі ензиму. Назвіть цей фактор:
A. pH середовища
B. Тиск
C. Температура
D. Наявність конкурентного інгібітора
E. Надлишок продукту
2. Бiологiчне окиснення та знешкодження ксенобiотикiв вiдбувається за
рахунок гемвмiсних ензимiв. Який метал є обов’язковою складовою цих
ензимiв?
A. Fe
B. Zn
C. Co
D. Mg
E. Mn.

3. Оксидаза D-амiнокислот каталiзує дезамiнування тiльки D-амiнокислот.

Яка властивiсть ензимiв виявляється при цьому?
A. Стереохiмiчна специфiчнiсть
B. Термолабiльнiсть
C. Вiдносна специфiчнiсть
D. Залежнiсть вiд рН
E. Абсолютна специфiчнiсть

4. При зниженнi активностi ензимiв антиоксидантного захисту посилюються

процеси перекисного окиснення лiпiдiв клiтинних мембран. При нестачi
якого мiкроелементу знижується активнiсть глутатiонпероксидази?
A. Селен
B. Молiбден
C. Кобальт
D. Марганець
E. Мiдь

5. З сироватки крові людини виділили п’ять ізоензимних форм

лактатдегідрогенази і вивчили їх властивості. Яка властивість доводить, що
виділені ізоензимні форми одного і того ж ензиму?
A. Каталізують одну і ту ж реакцію
B. Однакова молекулярна маса
C. Однакові фізико-хімічні властивості
D. Тканинна локалізація
E. Однакова електрофоретична рухливість

Дата___________
Підпис викладача_________________