Міністерство охорони здоров`я України

Національний медичний університет імені О.О. Богомольця

МЕТОДИЧНІ РЕКОМЕНДАЦІЇ
для самостійної студентів
(позааудиторної та аудиторної)

Навчальна дисципліна Біологічна та біоорганічна хімія

Спеціальність 222 «Медицина»
Кафедра медичної біохімії та молекулярної біології

Розглянуто та схвалено: на навчально-методичному засіданні кафедри

30.08.2022 р. протокол № 1

Розглянуто та затверджено: ЦМК з природничих дисциплін

31.08.2022 р. протокол № 1

Методична рекомедація складена: к.х.н., доц. Стеченко О.В.

2022
Тема заняття: Біологічне окиснення, тканинне дихання та окисне
фосфорилювання. Механізм дії інгібіторів та роз'єднувачів окисного
фосфорилювання.

Мета: вивчити особливості біологічного окиснення, тканинного дихання та окисного

фосфорилювання в мітохондріях, їх значення для клітин. Зрозуміти механізми дії
інгібіторів електронного транспорту та роз'єднувачів біологічного окиснення та
окисного фосфорилювання.

Знати:
- основні типи реакцій, ферменти та коферменти біологічного окиснення в
організмі;
- принципи роботи дихального ланцюга;
- біомедичне значення вивченого матеріалу для використання медичній практиці.
Вміти:
- аналізувати локалізацію, склад та енергетичний ефект роботи компонентів
дихального ланцюга мітохондрій;
- складати та аналізувати схему будови ланцюга електронного транспорту;
- пояснювати роль ферментів та коферментів в процесі транспорту протонів та
електронів в дихальному ланцюзі та вплив інгібіторів та роз'єднувачів;
- робити висновки за результатами лабораторно-практичної роботи та пояснювати
біомедичне значення дослідження.

Запишіть та запам’ятайте основні поняття теми:

Термін Визначення
Біологічне окиснення

Тканинне дихання

Окислювальне фосфорилювання

Макроергічні сполуки

Дихальний ланцюг

Редокс-потенціал

Коефіцієнт окисного фосфорилювання

Рекомендована література

Основна:
1. Біологічна хімія: підручник / Ю.І. Губський, І.В. Ніженковська, М.М. Корда [та
ін.]; за ред. І.В. Ніженковської. – Вінниця: Нова Книга, 2021. – с. 138-155.
2. Біологічна і біоорганічна хімія: базовий підручник: у 2 кн. / кол.авт.; за ред. Ю.І.
Губського, І.В. Ніженковської. – Кн. 2: Біологічна хімія, 3-тє (стереотипне) вид.
– К.: ВСВ «Медицина», 2021. – 544 с. 95-112.
3. Біологічна і біоорганічна хімія: у 2 кн.: підручник. Кн.2 Біологічна хімія / Ю.І.
Губський, І.В. Ніженковська, М.М. Корда [та ін.]; за ред. Ю.І. Губського, І.В.
Ніженковської. – Киів: ВСВ «Медицина», 2016. – с. 95-112.
4. Біохімія людини: підручник / Я.І. Гонський, Т.П. Максимчук, за ред. Я.І.
Гонський. – 3-тє вид., випр. і допов. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2019. – с.260-
273.
Додаткова:
1. Biological and Bioorganic Chemistry: textbook. Book 2: Biological Chemistry / Yu.I.
Gubsky, I.V. Nizhenkovska, M.M. Korda et al.; edited by Yu.I.
Gubsky,I.V.Nizhenkovska. –2nd edition – Kyiv: AUS Medicine Publishing, 2021. -
544 p.
2. Biological and Bioorganic Chemistry: textbook. Book 1: Bioorganic Chemistry / B.S.
Zimenkovsky V.A. Muzychenko, I.V. Nizhenkovska, G.O. Syrova. – 3rd edition –
Kyiv: AUS Medicine Publishing, 2020. - 272 p.
3. Gubsky Yu.I. Biological chemistry: textbook / edited by Yu.I. Gubsky. –
Vinnytsia:Nova Knyga, 2018. – 488 p.

Практична робота
Дослід 1. Визначення активності цитохромоксидази – компонента дихального
ланцюга мітохондрій.
Принцип методу. Цитохроми – складні білки гемопротеїни, належать до класу
оксидо-редуктаз, присутні в усіх тваринних та рослинних клітинах. Завдяки тому, що
атоми заліза в цитохромах легко змінюють свою валентність, цитохроми є
компонентами дихального ланцюга мітохондрій та переносниками електронів від
відновленого убіхінону на кисень. В цитохромній системі передавати електрони від
цитохрому с безпосередньо на кисень може лише IV комплекс дихального ланцюга
(цитохромоксидаза, яка містить цитохроми а, а3 та йони міді (ІІ)).
Метод визначення активності цитохромоксидази ґрунтується на здатності
диметилпарафенілендіамінхлориду (ДПФД) бути донором електронів для цитохрому
с. ДПФД неферментативно відновлює цитохром с, а сам, окислюючись,
перетворюється на червоний пігмент, кількісне утворення якого є пропорційним
активності цитохромоксидази мітохондрій. Ланцюжок передачі електронів в цьому
разі виглядає так:
ДПФД →цит с→цитохромоксидаза (цит а, а3 )

Додавання етилового спирту інактивує цитохромоксидазу та ферментативне

перетворення цитохрому с.
 Досліджуваний матеріал, реактиви, обладнання: модельний зразок суспензії
мітохондрій (виділений шляхом ультрацентрифугування зразка м'язової тканини),
розчин цитохрома с, фосфатний буфер (рН = 7,4), 0,5% розчин ДПФД, 70% р-н
етанолу, фізіологічний розчин, пробірки, мірні піпетки, термостат.

Хід роботи. Дві пробірки (контрольну та дослідну) заповнюють реактивами за

таблицею:
Вміст пробірок Пробірка
Контрольна Дослідна
Фосфатний буфер, рН = 7,4 1,0 мл 1,0 мл
Розчин цитохрому с 2 краплі 2 краплі
Суспензія мітохондрій 0,5 мл 0,5 мл
Розчин ДПФД 0,5 мл 0,5 мл
Етиловий спирт 1,0 мл ---
Фізіологічний розчин --- 1,0 мл
о
Інкубація в термостаті 5 хв. при 37 С
Результати: поява червоного забарвлення

Біомедичне значення. Цитохромоксидаза – це останній комплекс дихального

ланцюга, який безпосередньо здійснює передавання пари електронів на
молекулярний кисень. В товщі внутрішньої мембрани мітохондрій цей комплекс
розташовується в безпосередній близькості від АТФ-синтетази, а відтак – є важливою
ланкою процесу трансформації хімічної енергії біологічного окиснення в синтезовані
молекули АТФ.
Функціонування цього комплексу дихального ланцюга порушується в випадку
отруєння ціанідами, чадним газу, сірководнем.

Оцініть отриманий результат. За результатами проведеного дослідження

зробіть висновок:
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________________

Питання для самопідготовки студента до практичного заняття

1. Види реакцій біологічного окиснення в клітинах організму людини. Ферменти,
коферменти та простетичні групи, які забезпечують перебіг реакцій
біологічного окиснення. Антиоксиданти.
2. Окисне фосфорилювання і синтез АТФ в мітохондріях (шляхи утворення АТФ в
клітинах – субстратне та окисне фосфорилювання; спряження клітинного
дихання та окисного фосфорилювання). Коефіцієнт окисного фосфорилювання,
його значення при окисненні різних субстратів у мітохондріях.
 3. Хеміосмотична теорія окисного фосфорилювання, її унікальність та спільність
принципів генерації енергії в різних живих системах.
4. Структурно-функціональні передумови ефективного спряження транспорту
електронів в дихальному ланцюзі та синтезу АТФ:
- асиметрична локалізація компонентів дихального ланцюга у внутрішній
мембрані мітохондрій;
- цілісність спрягаючих мембран мітохондрій;
- генерація електрохімічного потенціалу протонів на мембрані,
функціонування протонних помп дихального ланцюга;
- АТФ-синтетаза – фермент, що використовує енергію електрохімічного
потенціалу протонів для синтезу АТФ. Молекулярна будова та принцип
роботи АТФ-синтетази.
5. Інгібітори транспорту електронів у дихальному ланцюзі мітохондрій та
інгібітори окисного фосфорилювання.
6. Роз'єднувачі транспорту електронів та окисного фосфорилювання в
мітохондріях. Роль роз'єднувачів транспорту електронів та окисного
фосфорилювання у регуляції термогенезу в організмі людини і тварин.

Завдання для самостійного опрацювання теми

Завдання 1. Запишіть та запам’ятайте ферменти та коферменти (простетичні групи),
які забезпечують перебіг різних типів реакцій біологічного окиснення:
Тип Назва Кофермент Функція
біологічного фермента (простетична
окиснення (ферментів) група)
Дегідрогеназне
Оксидазне

Цитохромне
Оксигеназне

Завдання 2. Намалюйте схему молекулярної організації дихального ланцюга

мітохондрій
 Завдання 3. Визначте функції комплексів дихального ланцюга мітохондрій:

Комплекс дихального Функція комплекса

ланцюга
І
ІІ
ІІІ
IV

Завдання 4. Позначте на схемі пункти спряження біологічного окиснення з окисним

фосфорилюванням (синтезом АТФ):

Завдання 5. Виконайте тестові завдання для самоконтролю:

1. Синільна кислота та цiанiди належать до найсильнiших отрут. Залежно вiд дози смерть наступає
через декiлька секунд чи хвилин. Пригнiчення активностi якого ферменту є причиною смертi?
A. АТФ-синтетаза.
B. Ацетилхолiнестераза.
C. Каталаза.
D. Метгемоглобiнредуктаза.
E. Цитохромоксидаза.

2. При отруєннi цiанiдами настає миттєва смерть. В чому полягає механізм дiї цiанiдiв на
молекулярному рiвнi?
A. Зв’язують субстрати ЦТК
B. Iнгiбують цитохромоксидазу
C. Блокують сукцинатдегiдрогеназу
D. Iнактивують кисень
E. Iнгiбують цитохром b
3. До лікарні доставлений хворий з отруєнням інсектицидом - ротеноном. Яка ділянка
мітохондріального ланцюга переносу електронів блокується цією речовиною?
A. АТФ-синтетаза.
B. НАДН-коензим Q-редуктаза.
C. Коензим Q-цитохром С-редуктаза.
D. Сукцинат-коензим Q-редуктаза.
E. Цитохром С-оксидаза.

4. Вiдомо, що ротенон викликає iнгiбування дихального ланцюгу. Який комплекс дихального

ланцюга мiтохондрiй інгібується цією речовиною?
A. Сукцинат-коензимQ-редуктаза
B. Цитохромоксидаза
C. КоензимQ-цитохромс-редуктаза
D. НАДН-коензимQ-редуктаза
E. АТФ-синтетаза

Дата___________
Підпис викладача_________________