2020 年 12 月 第 45 卷第 23 期 Vol. 45，No.

23 December，2020

经典名方竹茹汤的指纹图谱及功效关联物质预测分析
* *
许金国，黄紫炎，沈钱能，李林，王巧晗，王璐，陆兔林 ，毛春芹
（ 南京中医药大学 药学院，江苏 南京 210023）

［摘要］ 基于指纹图谱和网络药理学进行竹茹汤全过程质量控制和功效关联物质预测分析。建立药材、饮片、竹茹汤物质基
准的指纹图谱，标定了 25 个共有峰，指认了 3'-羟基葛根素、葛根素、
3'-甲氧基葛根素、葛根芹菜糖苷、大豆苷、甘草苷、大豆苷
元、甘草酸铵、
6-姜辣素 9 个共有色谱峰，相似度均＞0. 95。主要药效物质群可以从药材-饮片-物质基准逐级较为完整的传递，
且归属关系清晰。基于可测性和可追溯性进行活性成分的筛选，采用网络药理学的方法，对筛选的 9 个化学成分进行“成分-
靶点-通路”网络关系的构建与分析，富集的通路中含能量代谢、酒精中毒、平滑肌的收缩与舒张相关通路； 结果表明竹茹汤的
这 9 个有效成分可能通过作用与这些信号通路达到清热解酒、和胃止呕的作用。基于以上 9 个成分具有传递性和溯源性，且
与竹茹汤功效属性密切相关，可作为潜在功效关联物质，为全面控制竹茹汤的质量提供依据。
［关键词］ 经典名方； 竹茹汤； 指纹图谱； 网络药理学； 功效关联物质； 质量控制

Studies on fingerprints and efficacy-related substance of

classical prescription Zhuru Decoction

XU Jin-guo，HUANG Zi-yan，SHEN Qian-neng，LI Lin，WANG Qiao-han，WANG Lu，LU Tu-lin * ，MAO Chun-qin *

（ School of Pharmacy，Nanjing University of Chinese Medicine，Nanjing 210023，China）

［Abstract］ Based on fingerprint and network pharmacology，the whole process quality control of Zhuru Decoction was conducted and
efficacy-related substances were predicted． The fingerprints of raw materials，decoction pieces and Zhuru Decoction were established，and
25 common peaks were identified，including 9 common chromatographic peaks of 3'-hydroxy puerarin，puerarin，3'-methoxy puerarin，
puerarin，aperioside，daidzin，daidzein，liquiritin，glycyrrhizic acid and 6-gingerol，with similarity all greater than 0． 95． The main groups
of pharmacodynamic substances can be transferred from raw materials，decoction pieces to Zhuru Decoction step by step，with a clear
affiliation relationship． Based on the testability and traceability，the active ingredients were screened，and the network relationship of
" component-target-pathway" was constructed and analyzed for the nine chemical components screened by network pharmacology． The
enriched pathways included energy metabolism，alcoholism，and smooth muscle contraction and relaxation-related pathways． The nine
active components of Zhuru Decoction may achieve the effects of clearing heat，alleviating a hangover，harmonizing stomach and stop-
ping vomiting through these signaling pathways． Based on transitive and traceable properties of the above 9 components as well as their
close relationship to the efficacy of Zhuru Decoction，these 9 components can be identified as potential efficacy-related substances and
provide basis for the overall quality control of Zhuru Decoction．
［Key words］ classical prescription； Zhuru Decoction； fingerprint chromatography； network pharmacology； efficacy related sub-
stance； quality control
doi： 10. 19540 / j． cnki． cjcmm． 20200921. 301

［收稿日期］ 2020-05-21
［基金项目］ 国家重点研发计划项目（ 2018YFC1707000）
*
［通信作者］ 陆兔林，教授，博士生导师，主要从事中药炮制及中药饮片质量标准研究，Tel： （ 025） 85811524，E-mail： lutuling2005 @ 126．
*
com； 毛春芹，正高级实验师，主要从事新药研发及中药质量研究，E-mail： mcq63@ 163． com
［作者简介］ 许金国，高级实验师，主要从事中药炮制及中药饮片质量标准研究，E-mail： xjg12026@ 163． com

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2020 年 12 月 第 45 卷第 23 期
中药经典名方是我国医学宝库中的重要组成部
分。在推动中药经典名方现代化的过程中，关键在
于如何突破质量控制技术及全面研究成分的量值传
递规律。国家药品监督管理局于 2019 年颁布了《古
代经典名方中药物质基准及复方制剂的申报资料要
求（ 征求意见稿） 》，加强了对经典名方的质量管理，
要求建立全链条的质量控制措施，确保药材-饮片-
经典名方物质基准所对应实物-制剂的相关性与临
床药效的相关性。 为建立较全面的质量检测方法，
指纹图谱被列为质量评价的重要指标； 为保障评价
指标的科学性，需要确认影响其品质的功效关联物
［1］
质。竹茹汤来源于许叔微的《普济本事方 》 ，由葛
根、甘草（ 水炙 ） 、半夏 （ 姜炙 ） 、生姜、竹茹和大枣组
成，具有清热解酒、和胃止呕的功效，临床主要用于
胃热呕吐的治疗，目前对其质量控制的现代研究较
为匮乏。本课题从整体性出发建立了竹茹汤原料药
材、饮片及经典名方物质基准的 HPLC 指纹图谱，进
行相关性及传递性研究，并借助网络药理学的方法
综合预测分析竹茹汤治疗胃热呕吐的功效关联物
质，为全面 控 制 和 评 价 竹 茹 汤 的 质 量 提 供 了 方 法
依据。
1 材料
Agilent 1200 高效液相色谱仪，配四元低压梯度
泵 在线脱气装置，自动进样器，DAD 检测器，色谱
， 炮制方法下进行了工艺研究，确定甘草 （ 水炙 ） 为取
工作站（ 美国安捷伦公司 ） ； KQ-500B 型超声波清洗
器（ 昆山市超声仪器有限公司 ） ； AB104-L 分析天平
（ 德国梅特勒公司） ； HH-S 型水浴锅 （ 巩义市英峪予
华仪器厂 ） ； FA1104 型万分之一电子分析天平 （ 上
海天平仪器厂） ； HH-H4 恒温水浴锅（ 巩义市予华仪
器有限公司） ； H1650-W 台式高速离心机 （ 湖南湘仪
实验室仪器开发有限公司 ） ； MS-105D 电子天平 （ 梅
特勒-托利多 ） ； ZYX0071 超纯水系统 （ 南京汉隆实
验器材有限公司） ； 砂锅（ 江西舒雅陶瓷有限公司 ） ；
MG-H21S011 红外炉 （ 广东美的生活电器制造有限
公司） 。
葛根素 （ 批 号 110752-201615，纯 度 ≥ 98%） 购
自中国食品药品检定研究院； 3'-羟基葛根素 （ 批号
180102，纯 度 ≥ 98%） 、3'-甲 氧 基 葛 根 素 （ 批 号
171204，纯 度 ≥ 95. 4%） 、葛 根 芹 菜 糖 苷 （ 批 号
171216，纯度≥98%） 均购自南京森贝伽生物科技有
限公司； 大豆苷（ 批号 20111016，纯度≥98%） 、大豆
苷元（ 批号 YY20101110，纯度 ≥ 98%） 均购自上海
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Vol. 45，No. 23 December，2020
源叶 生 物 技 术 有 限 公 司； 甘 草 苷 （ 批 号 G-009-
181216，纯度≥ 98%） 、甘草酸 （ 批号 G-004-181219，
纯度≥98%） 均购自成都瑞芬思生物科技有限公司 ；
6-姜辣素 （ 批号 B21838，纯度≥ 98%） ） 购自上海源
叶生物有 限 公 司。 乙 腈 （ HPLC 级，德 国 Merck 公
司） ，甲酸 （ HPLC 级，美国 ACS 恩科公司 ） ； 水为娃
哈哈纯净水； 甲醇 （ 山东禹王实业有限公司化工分
公司） 。
竹茹汤原料药材采用道地产区或主产区的药
材 每个药材 2 ～ 3 个产地，每个产地不少于 5 批，总
，
批次不少于 15 批； 且药材基原、药用部位、产地、采
收加工均明确。经南京中医药大学药学院陈建伟教
授 鉴 定 分 别 为 豆 科 植 物 野 葛 Pueraria lobata
（ Willd． ） Ohwi 的干燥根、天南星科植物半夏 Pinel-
lia ternata （ Thunb． ） Breit． 的干燥块茎、豆科植物甘
草 Glycyrrhiza uralensis Fisch． 的干燥根和根茎、禾本
科植物青竿竹 Bambusa tuldoides Munro 的茎秆的干
燥中间层、姜科植物姜 Zingiber officinale Ｒosc． 的干
燥根、鼠李科枣属植物枣 Ziziphus jujuba Mill． 的干燥
成熟果实。 经研究，药材质量 均 符 合《中 国 药 典 》
2015 年版一部规定，本课题组前期已在《中国药典 》
2015 年版一部及全国炮制规范指导下优化炮制工
艺参数，其中甘草 （ 水炙 ） 、半夏 （ 姜炙 ） 在遵循古方
甘草生饮片，除去杂质，大小分档，加入适量水，拌匀
并闷润，炒至黄色至深黄色，取出，晾凉。 半夏 （ 姜
炙） 为取净半夏，大小分档，加水浸泡至内无干心后
弃去全部水液，继续加入清水，反复搓洗，每次均需
弃去全部水液及漂浮物，加姜汁、浆水与半夏共煮，
取出，干燥。本实验在此基础上将其炮制成对应的
饮片，饮片经检测均符合《中国药典 》2015 年版一部
标准，药材及对应饮片来源于批号见表 1。
2 方法与结果
2. 1 供试品溶液的制备
按处方比例称取日服饮片量［葛根 13. 77 g，甘
草（ 水炙） 3. 44 g，半夏（ 姜炙） 3. 44 g，总 20. 65 g，加
生姜、竹茹、大枣各 3. 00 g］。称定后放置于砂锅中，
加入去离子水 400 mL，浸泡 60 min。 先武火煮沸后
再调小火力至 700 W，浓缩至 200 mL 左右，趁热用
60 目筛过滤，放冷定容至 250 mL 量瓶中即得。取上
述液体 30 mL 置蒸发皿中于水浴挥干，用 50% 甲醇复
溶并定容至 10 mL，离心，上清液用于备用检测。
 许金国等： 经典名方竹茹汤的指纹图谱及功效关联物质预测分析

表1 药材及对应饮片来源与批号
Table 1 Source and batch number of medicinal materials and decoction pieces
葛根 半夏 甘草 竹茹 生姜 大枣
No．
来源 批号 来源 批号 来源 批号 来源 批号 来源 批号 来源 批号
S1 陕西 17102011 江苏 20180111 新疆 180311 江西 111707221 山东 201802211 山西 1807261
S2 陕西 17102012 江苏 20180112 新疆 180312 江西 111707222 山东 201802211 山西 1807262
S3 陕西 17102013 江苏 20180113 新疆 180313 江西 111707223 山东 201802211 山西 1807263
S4 陕西 17102014 江苏 20180114 新疆 180314 江西 111707224 山东 201802211 山西 1807264
S5 陕西 17102015 江苏 20180115 新疆 180315 江西 111707225 山东 201802211 山西 1807265
S6 安徽 111708011 甘肃 171211 内蒙古 180321 江西 111707226 山东 201803131 山东 1807161
S7 安徽 111708012 甘肃 171212 内蒙古 180322 江西 111707227 山东 201803131 山东 1807162
S8 安徽 111708013 甘肃 171213 内蒙古 180323 四川 111707261 山东 201803131 山东 1807163
S9 安徽 111708014 甘肃 171214 内蒙古 180324 四川 111707262 山东 201803131 山东 1807164
S10 安徽 111708015 甘肃 171215 内蒙古 180325 四川 111707263 山东 201803131 山东 1807165
S11 河南 20170331 贵州 171201 甘肃 1804191 四川 111707264 云南 201802271 河北 1709061
S12 河南 20170332 贵州 171202 甘肃 1804192 四川 111707265 云南 201802271 河北 1709062
S13 河南 20170333 贵州 171203 甘肃 1804193 四川 111707266 云南 201802271 河北 1709063
S14 河南 20170334 贵州 171204 甘肃 1804194 四川 111707267 云南 201802271 河北 1709064
S15 河南 20170335 贵州 171205 甘肃 1804195 四川 111707268 云南 201802271 河北 1709065

2. 2 对照品溶液的制备 葛根素为参照峰 （ S） ，各个共有峰的相对保留时间

取各对照品适量，加 50% 甲醇配制成含 3'-羟基 ＲSD 均小于 0. 12%，相对峰面积 ＲSD 均小于 4. 8%，
－1 －1
葛根素 0. 088 1 mg·mL 、葛根素 0. 285 1 mg·mL 、 表明供试品溶液在 24 h 内稳定。
3'-甲氧基葛根素 0. 092 6 mg·mL －1 、葛根芹菜糖苷 2. 4. 3 重复性试验 平行制备竹茹汤物质基准供试
0. 115 0 mg·mL －1 、大豆苷 0. 086 7 mg·mL －1 、大豆苷 品 6 份，在上述色谱条件下进样 HPLC 分析，记录指
－1 －1
元 0. 057 5 mg·mL 、甘草苷 0. 083 1 mg·mL 、甘草 纹色谱图谱。以 6 号峰葛根素为参照峰 （ S） ，各个共
－1 －1
酸铵 0. 087 8 mg·mL 、6-姜辣素 0. 041 4 mg·mL 有峰的相对保留时间 ＲSD 均小于 0. 12%，相对峰面
的混合对照品溶液。 积 ＲSD 均小于 5. 0%，
表明该方法有良好的重复性。
2. 3 色谱条件 2. 5 竹茹汤物质基准指纹图谱建立及相似度评价
Kromasil 100-5 C 18 柱 （ 4. 6 mm × 250 mm，5 在《古代经典名方中药复方制剂物质基准的申报
μm） ； 流动 相 0. 1% 甲 酸 （ A） -乙 腈 （ B） ，梯 度 洗 脱 资料要求（ 征求意见稿） 》指导下随机组合 15 批不同
（ 0 ～ 4 min，0. 5% ～ 8% B； 4 ～ 25 min，8% ～ 10% B； 批次饮片及 3 批同批次饮片制备的多批次竹茹汤物
25 ～ 36 min，10% B； 36 ～ 38 min，10% ～ 14% B； 38 ～ 质基准，按优化的色谱条件分别进样分析，以 cdf 格
55 min，
14% ～ 16% B； 55 ～ 60 min，
16% ～ 23% B； 60 ～ 式保存色谱图。将 18 批竹茹汤物质基准的色谱信息
70 min，
23% ～ 30% B； 70 ～ 85 min，
30% ～ 75% B； 85 ～ 以 cdf 格式保存并将其导入“中药色谱指纹图谱相似
－1
75% ～ 100% B） ； 流速 1 mL·min ； 检测波长
89 min， 度评价系统”（ 2012A 版） 软件，以 S1 为参照图谱、以
280 nm； 柱温 25 ℃ ； 进样量 10 μL。 平均数法进行峰匹配并生成对照图谱。18 批竹茹汤
2. 4 方法学考察 物质基准的指纹图谱叠加图见图 1。指纹图谱共有
精密度试验 取同一竹茹汤物质基准供试
2. 4. 1 模式见图 2， 通过对 18 批样品的比较分析，一共标记
品溶液，连续在上述色谱条件下进样 6 针，以 6 号峰 出 25 个共有峰。经与化学对照品的色谱行为进行比
葛根素为参照峰 （ S） ，计算共有峰的相对保留时间 较，
可鉴定出其中 9 个色谱峰，分别是 4 号峰 3'-羟基
和相对保留面积，结果显示各个共有峰的相对保留 葛根素； 6 号峰葛根素； 7 号 3'-甲氧基葛根素； 9 号峰
时间 ＲSD 均小于 0. 13%，相对峰面积 ＲSD 均小于 葛根芹菜糖苷； 11 号峰大豆苷； 15 号峰甘草苷； 23 号
4. 4%，表明仪器有良好的精密度。 峰大豆苷元； 24 号峰甘草酸铵； 25 号峰 6-姜辣素。与
稳定性试验 取同一份竹茹汤物质基准供
2. 4. 2 对照指纹图谱相比，18 批竹茹汤物质基准指纹图谱
试品溶液，分别于 0，
2，4，
8， 24 h 进样，以 6 号峰
12， 的相似度分别为 0. 999，0. 999，0. 999，0. 999，0. 999，
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0. 999，0. 999，0. 999，1. 000，1. 000，0. 999，1. 000，

0. 999，
0. 999， 1. 000，表明物质基
1. 000，1. 000，1. 000，
准的稳定性较好，主要物质群差异性小，制备工艺较
为科学合理，
形成的物质基准对照图谱能够作为衡量
竹茹汤制剂的标准参照物，
结果见表 2。

4. 3'-羟基葛根素； 6． 葛根素； 7. 3'-甲氧基葛根素； 9． 葛根芹菜糖

苷； 11． 大豆苷； 15． 甘草苷； 23． 大豆苷元； 24． 甘草酸铵； 25. 6-姜
辣素（ 图 3 ～ 5 同） 。
图2 竹茹汤物质基准 HPLC 对照指纹图谱（ A） 和混合对照
品（ B）
图1 18 批竹茹汤物质基准 HPLC 指纹图谱 Fig． 2 Chromatogram of reference fingerprint of Zhuru Decoc-
Fig． 1 HPLC fingerprints of 18 Zhuru Decoction tion（ A） and chromatogram of reference substances（ B）

表2 18 批次竹茹汤物质基准 HPLC 指纹图谱相似度

Table 2 HPLC fingerprint similarity of 18 batches of Zhuru Decoction
No． S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 S14 S15 S16 S17 S18
S1 1. 000
S2 0. 999 1. 000
S3 0. 998 0. 998 1. 000
S4 0. 998 0. 998 1. 000 1. 000
S5 0. 998 0. 998 0. 997 0. 997 1. 000
S6 0. 999 0. 998 0. 998 0. 998 0. 997 1. 000
S7 0. 999 0. 999 0. 998 0. 998 0. 999 0. 998 1. 000
S8 0. 998 0. 998 0. 999 0. 999 0. 997 0. 999 0. 998 1. 000
S9 0. 999 0. 998 0. 999 0. 999 0. 998 0. 999 0. 998 1. 000 1. 000
S10 0. 998 0. 998 1. 000 0. 999 0. 997 0. 999 0. 998 1. 000 0. 999 1. 000
S11 0. 998 0. 999 1. 000 1. 000 0. 998 0. 998 0. 998 1. 000 0. 999 0. 999 1. 000
S12 0. 999 0. 998 0. 998 0. 998 0. 997 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 998 0. 998 1. 000
S13 0. 999 0. 998 0. 998 0. 998 0. 999 0. 998 0. 999 0. 998 0. 999 0. 998 0. 998 0. 998 1. 000
S14 1. 000 0. 999 0. 998 0. 998 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 1. 000
S15 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 998 0. 999 0. 999 0. 999 1. 000 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 1. 000
S16 0. 999 0. 998 0. 998 0. 998 0. 997 0. 999 0. 999 0. 999 1. 000 0. 999 0. 999 1. 000 0. 998 0. 999 0. 999 1. 000
S17 0. 999 0. 999 0. 998 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 1. 000 0. 999 0. 999 1. 000
S18 1. 000 0. 998 0. 998 0. 998 0. 998 0. 999 0. 999 0. 999 1. 000 0. 999 0. 999 1. 000 0. 999 0. 999 1. 000 1. 000 0. 999 1. 000
对照 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 0. 999 1. 000 1. 000 0. 999 1. 000 0. 999 0. 999 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000 1. 000

2. 6 竹茹汤物质基准指纹图谱共有峰的归属研究 汤指纹图谱中共有 21 个峰来自葛根，结果见图 3；

按供试品制备方法分别制备单味饮片供试品溶 竹茹汤指纹图谱中共有 3 个峰来自甘草，结果见图
液、缺单味饮片供试品溶液和竹茹汤物质基准供试 4； 竹茹汤指纹图谱中共有 1 个峰来自生姜，结果见
品溶液按指纹图谱的色谱条件进样检测。 分别将 6 图 5； 半夏、竹茹、大枣在此条件下没有色谱信息，结
味单味饮片供试品溶液、缺单味饮片供试品溶液和 果见图 6 ～ 8。
竹茹汤物质基准供试品的图谱进行重叠比较 ，竹茹 对竹茹汤物质基准中各共有峰进行饮片的归属
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 许金国等： 经典名方竹茹汤的指纹图谱及功效关联物质预测分析

图3 葛根饮片、阴性对照及竹茹汤物质基准相关性色谱图 图6 半夏饮片、阴性对照及竹茹汤物质基准相关性色谱图
Fig． 3 Chromatograms of Puerariae Lobatae Ｒadix pieces， Fig． 6 Chromatograms of Pinelliae Ｒhizoma pieces，negative
negative control and standard substance of Zhuru Decoction control and standard substance of Zhuru Decoction

图4 甘草饮片、阴性对照及竹茹汤物质基准相关性色谱图 图7 竹茹饮片、阴性对照及竹茹汤物质基准相关性色谱图
Fig． 4 Chromatograms of Glycyrrhizae Ｒadix et Ｒhizoma Fig． 7 Chromatograms of Bambusae Caulis in Taenias pieces，
pieces，negative control and standard substance of Zhuru Decoc- negative control and standard substance of Zhuru Decoction
tion

图8 大枣饮片、阴性对照及竹茹汤物质基准相关性色谱图
图5 生姜饮片、阴性对照及竹茹汤物质基准相关性色谱图 Fig． 8 Chromatograms of Jujubae Fructus pieces，negative con-
Fig． 5 Chromatograms of Zingiberis Ｒhizoma Ｒecens pieces， trol and standard substance of Zhuru Decoction
negative control and standard substance of Zhuru Decoction

9 个共有峰进行了指认，分别为 4 号峰 3'-羟基葛根
分析，竹茹汤中各特征峰均可在饮片中得到追踪 ，竹 素； 6 号峰葛根素； 7 号 3'-甲氧基葛根素； 9 号峰葛
茹汤指纹图谱中 25 个共有峰，这 25 个峰均可以在 根芹菜糖苷； 11 号峰大豆苷； 15 号峰甘草苷； 23 号
原料饮片中找到明确归属，分别对应 1 ～ 14，17 ～ 23 峰大豆苷元； 24 号峰甘草酸铵； 25 号峰 6-姜辣素，主
号色谱峰归属于葛根饮片，15，16，24 号色谱峰归属 要药效成分的指认率为 36. 0%。 说明竹茹汤物质
于甘草饮片，
25 号色谱峰归属于生姜饮片。 对其中 基准的物质群可清晰的追溯到饮片，且色谱峰归属
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2020 年 12 月 第 45 卷第 23 期 Vol. 45，No. 23 December，2020

明确，指认率较高。 2. 8 基于网络药理学的竹茹汤功效关联物质预测
从色谱峰个数与峰强度看，葛根、甘草对指纹图 分析
谱的贡献最大。生姜主要含挥发油和姜辣素，在本 基于可测性和可追溯性的活性成分筛选
2. 8. 1
指纹图谱条件下只能检出一个色谱峰 。在此组方中 根据文献研究，葛根为竹茹汤君药，其主要活性成分
［2］
半夏、竹茹、大枣用量较少，且半夏主要含淀粉和氨 为异黄酮类成分 ，包含 3'-甲氧基葛根素、葛根素、
基酸，在炮制过程中，由于沸水多次泡洗，成分有不 3'-羟基葛根 素、大 豆 苷、葛 根 芹 菜 糖 苷 等，具 有 解
［3］
同程度的损失； 竹茹主要含多糖； 大枣中主要含多糖 酒 、增强免疫力［4］ 等药理作用； 甘草的主要活性
［5］
和氨基酸，这几类成分水溶性大，含量低，在紫外色 成分为三萜类和黄酮类，甘草苷有清热解毒 的功
［6-7］
谱条件下难以检出色谱峰。 因此，半夏、竹茹、大枣 效，甘草酸有抗炎镇咳、免疫调节 的作用； 生姜的
［8-9］
3 味饮片，对本实验条件下获得的指纹图谱基本没 ，
主要有效成分为姜辣素类 具有止呕 等药理作
有贡献。 用，其中 6-姜酚活性强含量高，较具特征性； 半夏主
2. 7 “药材-饮片-物质基准”传递规律分析 要有效成分为生物碱类及有机酸类； 大枣和竹茹的
按供试品制备方法分别制备 15 批药材、饮片供 有效成分为多糖类。《中国药典 》2015 年版对于组
试品溶液，建立药材、饮片的指纹图谱，并将药材、饮 方药的控制主要为葛根的葛根素、甘草的甘草苷及
片、竹茹汤物质基准的指纹图谱共有模式进行重叠 甘草酸、生姜的 6-姜辣素、8-姜酚及 10-姜酚。 文献
研究，竹茹汤物质基准的整体峰个数与峰型与其来 研究结合竹茹汤的指纹图谱研究，以上类别中 9 个
源的药材及饮片基本一致，见图 9。 活性化合物可以得到指认，并且可以从药材-饮片-
物质基准逐级传递。基于文献研究及指纹图谱的可
测性和可追溯性，将这 9 个活性化合物作为候选化
合物，然后通过 NCBI 中的 Pubchem Compound 化合
物数据库 （ https： / / www． ncbi． nlm． nih． gov / ） 获取 9
个候选化合物的 Canonical SMILES 编号，为后续“成
分-靶点-通路”的构建做准备。
2. 8. 2 竹茹汤主要化学成分的靶蛋白及通路预测
将 个活性化合物的 Canonical SMILES 输入 swiss
9
target prediction 数据库 （ http： / / www． swisstargetpre-
diction． ch / ） 进行对应的靶蛋白预测，将相关的靶蛋
图9 药材-饮片-物质基准 HPLC 指纹图谱共有模式叠加图 白进行整理并记录 Uniprot ID，为相关通路的预测做
Fig． 9 HPLC fingerprint common pattern overlay diagram of 准备。将靶蛋白的 Uniprot ID 导入京都基因与基因
medicinal material-medicinal slices-standard substance 组百科全书 （ https： / / www． kegg． jp / ） 进行相关通路
的预测与富集。
对竹茹汤中主要物质群进行传递性分析，竹茹 2. 8. 3 “成分-靶点-通路”网络的构建 将成分、靶
汤物质基准共有 25 个共有峰，其中 21 个峰可追溯 点蛋白、通路信息导入 Cytoscape 3. 7. 1 软件，建立
到葛根的饮片及药材，3 个峰可追溯到甘草的饮片 竹茹汤“成分-靶点-通路 ”网络关系，结果见图 10。
及药材，
1 个峰可追溯到生姜的饮片与药材，说明竹 网络图显示 9 个化学成分经靶标数据库共预测得到
茹汤物质基准制备工艺未造成饮片主要物质群的丢 相关性较高 273 的蛋白靶点，以富集蛋白数大于 10
失。提示竹茹汤物质基准主要药效物质群可以从药 为条件共筛选获得 71 条代谢通路，这些代谢通路中
材-饮片-物质基准逐级较为完整的传递，且归属关 包括代谢通路、PI3K-Akt 信号通路、cAMP 信 号 通
系清晰。但甘草药材、饮片与竹茹汤中的甘草苷和 路、羟 色 胺 能 神 经 突 触、cGMP-PKG 信 号 通 路、
甘草酸的峰面积有所下降，可能因为与其他成分发 AMPK 信号通路、酒精中毒等。 表明竹茹汤的有效
生了反应导致含量的下降，体现了甘草调和诸药的 成分可能通过这些作用信号通路达道治疗疾病的
作用。 效果。
5604
 许金国等： 经典名方竹茹汤的指纹图谱及功效关联物质预测分析
图 10 竹茹汤“化学成分-靶点-通路”网络关系构建
Fig． 10 " Compound-target-pathway" network of Zhuru Decoc-
tion
整合分析 竹茹汤的主要功效为清热解酒、
2. 8. 4
和胃止呕。通过对通路相关信息的整理，代谢通路、
PI3K-Akt 信号通路、AMPK 信号通路均可调节能量
代谢。其中代谢通路可分为合成代谢途径和分解代
谢途径： 分解代谢伴随着能量的逐步释放 ，合成代谢
这个过程则需要提供能量。PI3K 信号在调节生长
和代谢方面发挥着重要的作用 。AMPK 通路参
与了细胞糖、脂肪、蛋白质代谢等能量代谢过程，能
［11-13］
够调节细胞能量代谢状态
汤可能通过作用于这些信号通路达到清热的作用 。
此外，有 10 个靶点富集到酒精中毒途径，酒精
中毒是由一次性大量摄入酒精引起的，它会导致中
枢神经系统先兴奋后抑制，从而抑制延髓血管运动
中枢和呼吸中枢，严重者可引起呼吸衰竭、呼吸麻痹
而死亡。酒精可调节特定的细胞内信号级联的功
［14］
能 ，这些级联反应的特定成分可能介导了乙醇的
作用，由此可推测，竹茹汤可能通过作用于此信号通
路改变了机体对酒精的反应来达到解酒的作用 。
经富集结果分析，cAMP 信号通路、羟色胺能神
经突触、cGMP-PKG 信号通路参与调解平滑肌的收
缩与舒张，可能是竹茹汤在治疗呕吐反应中起重要
作用的通路。cAMP 是最常见、最普遍的第二信使
之一，可调节关键的生理过程，包括肌肉收缩、代谢、
［15］
钙稳态 。小半夏汤经证实可抑制小肠部位 5-羟
色胺 （ 5-HT） 释放，下调小肠和脑 5-HT3 受体，促进
［16］
胃肠道 的 蠕 动 来 预 防 术 后 恶 心 呕 吐 。 环 GMP
（ cGMP） 是细胞内的第二信使，可调节阳离子通道
［17］
发挥生理作用，从而导致平滑肌松弛 。 由此可推
测，竹茹汤可能通过作用于这些信号通路达到止呕
的作用。
基于指纹图谱和网络药理学研究，这 9 个成分
具有传递性和溯源性，且与功能属性密切相关，可预
测其为影响竹茹汤品质的潜在功效关联物质 。
3 讨论
中药和复方制剂成分复杂，本文以指纹图谱为
指标，全面考察药材-饮片-物质基准的相关性及关
键质量属性的传递性。结果显示主要物质群可以从
药材-饮片-物质基准逐级较为完整的传递，传递过
程中几乎没有造成损失，且归属关系清晰。葛根、甘
草、生姜对此指纹色谱贡献度较高，半夏、竹茹、大枣
用量少，成分含量低，难以检出色谱峰。半夏主要含
淀粉和氨基酸、竹茹主要含多糖和内酯、大枣中主要
含多糖和氨基酸，这几类成分水溶性大，含量低，且
不具备 HPLC-UV 检测的结构特点，致使它们在此
色谱条件下不能检出。指纹图谱作为质量控制的方
法之一，需结合多 指 标 性 成 分 含 量 测 定、pH、出 膏
率、大类成分含量测定、浸出物测定等方法对经典名
方进行全面、多元地的质量控制，后期将可结合其他
［10］
质量控制方法进行全面的质量控制 。
《古代经典名方中药复方制剂简化注册审批管
。 由此可推测，竹茹 理规定的公告》规定对来源于国家公布目录中的古
代经典名方且无上市品种的中药复方制剂申请上
市，实施简化审批，并明确了免药效免临床资料。竹
茹汤具有多成分、多靶点、多途径协同作用的特点，
本文采用现代网络药理学方法，预测获得与经典名
方竹茹汤功能主治密切相关的作用信号通络以及和
竹茹汤的功效关联物质，为进一步实验验证、潜在药
理学机制及临床拓展应用提供参考依据 。
本研究基于中药化学与中药药理学，整合多学
科技术方法，基于可测性、可追溯性、有效性开展竹
茹汤功效关联物质的系统辨识与确认，为后期深入
研究竹茹汤的作用机制提供参考，有助于建立全程
质量控制体系，提高中药产业质量控制水平。
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［责任编辑 孔晶晶］

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