OZNACZANIE BAKTERII ESCHERICHIA COLI

* organizm fermentuje laktozę (tworzą się produkty kwaśne i gazowe)

* wytwarza B=glukuronidazę (enzym hydrolizujący glukoronidy)

* posiada zdolność wytwarzaia tryptofanazy (enzym hydrolizujący tryptofan do indolu, pirogronianu

oraz amoniaku)

REFERENCYJNA METODA OZNACZANIA:

 Metoda płytkowa
 Zastosowasnie podłoża z AGAREM TBX
 Podłoże wybiórczo-różnicujące
 Trypton  hydrolizat kazeiny (mieszanina związków będących źródłem
azotu,witamin,aminokwasów)
 Sole żółciowe (hamują bakterie gram+)
 Glukuranoid(5-bromo-4-chloro-indolilo-beta-D-glukuronid; absorbowany jest przez komórki
E. coli i rozkładany, po hydrolizie powstaje barwny kompleks i glukuronid skutkiem jest
niebiesko-zielona kolonia bakterii)

OZNACZANIE GRONKOWCÓW CHOROBOTWÓRCZYCH STAPHYLOCOCCUS AUREUS

 Redukcja tellurynu potasu

 Hydroliza lectyny

REFERENCYJNA METODA OZNACZANIA:

 Metoda płytkowa
 Selektywna pożywka BAIRD-PARKERA (czarna pożywka, kolonie metaliczne; inkubacja24-48h,
37*C)
 Hydrolizat kazeiny
 Ekstrakt wołowy, drożdżowy
 Chlorek litu (hamuje rozwój bakterii gram -)
 Glicyna (hamuje rozwój laseczek gram+)
 Pirogronian sodowy (komponent krytyczny, umożliwia rozwinięcie kom. Uszkodzonych,
słabych które w normalnych warunkach nie zostałyby uwidocznione)
 Telluryn potasu (daje ciemne zabarwienie i wyciąg z żółtka jajka)

Telluryn potasu zostaje zredukowany do wolnego telluru dzięki czemu komórki mają metaliczne
zabarwienie oraz mają lipazę - katalizuje hydrolizę lecytyny i powoduje przezroczyste otoczenie
kolonii Staphylococców.

WYKRYWANIE BEZTLENOWYCH LASECZEK PRZETRWALNIKUJCYCH REDUKUJCYCH SIARCZANY (IV)

- CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

 procedura etapowa (każdy etap powiązany z poprzednim)

 1 etap – próbkę poddaje się szokowi termicznemu (powoduje zabicie form wegetatywnych,
przetrwalniki zostają)
 Skład pożywki: bulion (wyciąg z wątroby zwierzęcej), tioglikolan sodu(składnik pożywek dla
beztlenowców, obniża potencjał redoks, dba o brak tlenu, pozwala na wzrost anaerobow
obligatoryjnych);
 Pożywkę pokrywa się parafiną, ogrzewa się przed posiewem, później schłądza w strumieniu
wody.

Jeśli organizmyu rosną w pożywce – zmętnienie, pęcherzyki gazu (które gromadzą się pod
parafiną)

Barwienie grama żeby sprawdzić czy sa laseczki gram+, po barwieniu prowadzi się hodowle na
podłożu stałym w warunkach tlenowych aby wykluczyć względne beztlenowce.n

Różnicowanie na podłożu Wilson- Blaira w warunkach beztlenowych.

Składniki odżywcze:

 Ekstrakt wołowy
 Hydrolizat tkanek zwierzęcych
 Dekstroza (źródło węgla )
 Fosforan disodowy(czynnik buforujący)
 Siarczan żelaza (uwidacznia zdolność do produkcji siarkowodoru)
 Siarczek bizmutu
 Zieleń brylantowa (związki hamujące wzrost bakterii gram +, hamują wzrost koliform,
pozwalają na wzrost bakterii Salmonella)

Podsumowując etapy:

1) szok termiczny (10 min, 80*C); 2) hodowla w warunkach beztlenowych w namnażajcej,

nieselektywnej pożywce Wrzoska; 3)barwienie Grama - laseczki, gram +

WYKRYWANIE BAKTERII Z RODZAJU SALMONELLA

 zdarza się, że żywność, która jest w stanie wywołać zatrucia pokarmowe zawiera niewielką
liczbę komórek.

REFERENCYJNA METODA WYKRYWANIA:

 przednamnażanie w nieselektywnej pożywce płynnej

 zbuforowana woda peptonowa
 przednamnazanie w wodzie peptonowej (daje dobre efekty)
 namnażanie selektywne – równoległe
 pożywka MKKTTn
 namnażanie selektywne
 2 typy podłoża:
1) bulion Rappaport – Vassiliadis:

- zawiera pepton sojowy (czynnik nieselektywny, zapewnia dostęp bakteriom do węgla,

azotu i innych niezbędnych związków do wzrostu)

- sole chlorku sodu, chlorku magnezu (gwarantują wyższe niż w innych pożywkach
ciśnienie osmotyczne)

- fosforany potasu (buforują medium)

- zieleń malachitowa (czynnik selekcyjny, odpowiedzialny za hamowanie organizmów

jelitowych gram – innych od Salmonelli)

- ma kolor niebieski, podstawowe podłoże do namnażania selektywnego

 2) zmodyfikowane piodłoże Mueller – Kaufman:

- tetratioinian

- nowobiocyna (hamuje rozwój bakterii z rodzaju proteus)

- ektrakt mięsny

- hydrolizat kazeiny (zapewniają bakteriom związki azotowe, dostęp do węgla, witamin i

aminokwasów)

- chlorek sodu (odpowiedzialny za neutralizację i absorbowanie toksycznych metabolitów np.

kwasu siarkowego)

- tiosiarczan sodu (hamuje proliferacje komórek)

- sole żółciowe, zieleń brylantowa (selektywne czynniki hamujące rozwój bakterii z grupy
E.coli i inhibicja gram+)