‫د‪ .

‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫المصادر‬
‫‪ .1‬أساسٌات زراعة الخبلٌا واالنسجة النباتٌة ‪/‬المإلؾ ‪ :‬أ‪.‬د‪ .‬محمد عباس سلمان ‪/‬كلٌة الزراعة ‪ /‬جامعة بؽداد ‪1988‬م‬
‫‪ .2‬المفاهٌم الرئٌسٌة لزراعة الخبلٌا واالنسجة النباتٌة ‪/‬المإلؾ ‪:‬أ‪.‬د‪ .‬عبد المطلب سٌد محمد و د‪ .‬مبشر صالح عمر ‪/‬كلٌة‬
‫العلوم ‪ /‬جامعة الموصل ‪1991‬م‬
‫‪ .3‬زراعة االنسجة والخبلٌا النباتٌة د‪ .‬فٌصل ‪/‬كلٌة الزراعة ‪/‬جامعة الموصل ‪1989‬م‬

‫**************************************************‬
‫س‪/‬ماهً زراعة االنسجة والخبلٌا ؟‬
‫‪-‬هً عملٌة استئصال خلٌة او نسٌج او عضو او جزء من عضو من النبات وتعقٌمه وزراعته على اوساط ؼذائٌة صناعٌة معقمة‬

‫*تعود بداٌات زراعة االنسجة والخبلٌا النباتٌة الى محاوالت العالم ‪ Haberlandt‬فً عام ‪ 1911‬والذي ذكر عدد من افتراضات من‬
‫بحثه الذي نشر فً عام ‪ 1912‬وتضمن نتائج محاولته فً زراعة الخبلٌا المفردة خارج الجسم الحً ‪( in vitro‬داخل الزجاج) من‬
‫‪Un‬‬

‫هذه الفرضٌات ان توقؾ نمو الخبلٌا النباتٌة ال ٌعود الى فقدانها القابلٌة على النمو وانما سبب محفز معٌن فً انسجة النبات االخرى‬
‫‪ive‬‬

‫او بجزء منها وافترض نفس الباحث وجود هرمونات النمو والتً اطلق علٌها انزٌمات النمو مفترضة انها تتحرر من نوع معٌن من‬
‫الخبلٌا وتحفز نمو وتطور الخبلٌا االخرى‪.‬‬
‫‪rs‬‬
‫‪ity‬‬

‫وبناء على المبلحظات التً ذكرها العالم عام ‪ 1911‬حول تحفٌز االنبوب اللقاحً لحبة اللقاح لنمو البوٌضة والجنٌن وقد اقترح اٌضا‬
‫‪of‬‬

‫هابرالنت زراعة خبلٌا خضرٌة م انبوب اللقاح م قطرة من محلول ؼذائً واشار أٌضا الى امكانٌة استخدام مستخلصات الخبلٌا‬
‫‪Di‬‬

‫الخضرٌة من النبات او ؼٌرها لزراعة الخبلٌا المفصولة‪.‬‬

‫‪ya‬‬
‫‪la‬‬

‫*ومنذ نشر البحث منذ ‪ 1912‬وحتى عام ‪ 1934‬لم ٌحصل اي تطور فً زراعة االنسجة النباتٌة ‪ ,‬فً عام ‪ 1922‬حقق كل من‬
‫‪-‬‬‫‪Co‬‬

‫‪ Robini‬فً الوالٌات المتحدة االمرٌكٌة و ‪ Kott‬فً برٌطانٌا كل على أنفراد نجاح محدود فً تنمٌة أطراؾ الجذور المفصولة خارج‬
‫الجسم الحً ‪.‬‬
‫‪lle‬‬
‫‪ge‬‬

‫*فً عام ‪ 1934‬نشر العالم ‪ White‬أول تقرٌر ناجح عن تنمٌة أطراؾ الجذور لنبات الطماطة بصورة مستمرة وإلزالة جذور هذا‬
‫‪of‬‬

‫النبات تنمى من قبل طبلبه فً مختبرات المملكة المتحدة ‪.‬‬

‫‪A‬‬ ‫‪gr‬‬

‫**من أهم االكتشافات التً حدثت فً منتصؾ الثبلثٌنٌات من القرن الماضً والتً دفعت علم زراعة األنسجة النباتٌة بخطوات‬
‫‪icu‬‬

‫كبٌرة‪-:‬‬
‫‪ltu‬‬

‫‪.1‬أكتشاؾ األوكسٌن كمنظم نمو طبٌعً فً النبات‪.‬‬

‫‪re‬‬

‫‪.2‬معرفة أهمٌة فٌتامٌن ‪ B‬فً نمو النبات‪.‬‬

‫*فً عام ‪ 1951‬قام العالم ‪ Winkler‬ومساعدوه بؤنشاء مزرعة أجنة نبات الداتورة وفً عام ‪ 1957‬وض ‪Miller & Skoog‬‬
‫فرضٌة التحكم الهرمونً لتكوٌن االعضاء حٌث أوضحى أن تماٌز األفرع والجذور فً مزارع الكالس لنبات التبػ ٌمكن التحكم به من‬
‫خبلل تؽٌر النسبة بٌن األوكسٌن والساٌتوكاٌنٌن فً الوسط الؽذائً وال تخلو أطروحة دكتوراه أو رسالة ماجستٌر فً مجال زراعة‬
‫األنسجة النباتٌة من اإلشارة الى هذان العالمان‪.‬‬

‫*فً التطورات األخرى من خبلل القرن الماضً النجاح الذي حققه العالم ‪ Skoog‬عام ‪ 1961‬فً زراعة البروتوببلست فً وسط‬
‫زراعً صناعً ‪ ,‬ثم استخدمت هذه التقنٌة فً نطاق تجاري من خبلل زراعة أطراؾ الفروع المفصولة من بعض النباتات‪.‬‬

‫*ثم نجح باحثان ‪ Martin & Moreland‬عام ‪ 1952‬تمكنا من أنتاج نباتات خالٌة من األمراض الفاٌروسٌة ‪ ,‬ثم قام‬
‫‪ Murashing‬بتكثٌؾ العمل والجهود فً أكثار النباتات الراقٌة السٌما بعد أن قام بتثبٌت المكونات األساسٌة للوسط الؽذائً‬

‫‪1‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬
‫وبالتعاون م العالم ‪ Skoog‬فً عام ‪ 1962‬أذ سمٌه هذا الوسط بوسط ‪ ) Murashing & Skoog( MS‬أذ ٌعتبر وما زال الوسط‬
‫األساسً المستخدم ألكثار النباتات نسٌجٌآ أذ ٌوجد العشرات من األوساط الؽذائٌة األخرى المحورة فً هذا المجال‪.‬‬

‫س‪ /‬ماهً التطبٌقات العملٌة المختلفة لزراعة أنسجة النبات خارج الجسم الحً ‪ in vitro‬؟‬

‫ج‪ .1/‬تربٌة النبات وحفظ المصادر الوراثٌة‪ٌ -:‬تم هذا التطبٌق من خبلل ‪-:‬‬

‫أ‪ .‬زراعة الخلٌة ‪Cell Culture‬‬

‫ب‪ .‬دمج البروتوببلست ‪Protoplast Fusion‬‬

‫ج‪ .‬زراعة حبة اللقاح والمتك ‪Microspor and anther culture‬‬

‫د‪ .‬زراعة األجنة والبوٌضات والمباٌض‬

‫‪Un‬‬

‫‪ .2‬أنتاج نباتات سلٌمة من األصابات المرضٌة‪ -:‬وتوجد هناك عدة طرق للتخلص من هذه األمراض والفٌروسات‬
‫‪ive‬‬
‫‪rs‬‬

‫أ‪ .‬زراعة قمة الساق ‪Shoot tip culture‬‬

‫‪ity‬‬

‫ب‪ .‬تطعٌم القمة النامٌة خارج الجسم الحً ‪Shoot tip crafting culture‬‬
‫‪of‬‬
‫‪Di‬‬

‫ج‪ .‬زراعة المرستٌم القمً للساق ‪Shoot Apical Meristem Culture‬‬

‫‪ya‬‬

‫‪ .3‬أنتاج العقاقٌر الطبٌة والمركبات الثانوٌة‪ -:‬تتم هذه الطرٌقة بعدة وسائل منها‬
‫‪la‬‬
‫‪-‬‬‫‪Co‬‬

‫أ‪ .‬زراعة الجذور ‪Root Culture‬‬

‫‪lle‬‬

‫ب‪ .‬زراعة المستنبتات الخلوٌة ‪Cell Suspotion Culture‬‬

‫‪ge‬‬

‫ج‪ .‬زراعة الكالس ‪Callus Culture‬‬

‫‪of‬‬
‫‪A‬‬

‫‪ .4‬األكثار السبللً السرٌ ‪ Micro propagation‬وهناك ثبلث طرق رئٌسٌة لؤلكثار‬

‫‪gr‬‬
‫‪icu‬‬

‫أ‪ .‬تكوٌن البراعم العرضٌة ‪Adventitions Bud Formation‬‬

‫‪ltu‬‬

‫ب‪ .‬تكوٌن التفرعات الجانبٌة ‪Axillary Branches‬‬

‫‪re‬‬

‫ج‪ .‬تحفٌز األجنة البلجنسٌة (الجسمٌة) ‪Somatic Embrygenesis‬‬

‫‪2‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫العوامل المإثرة فً نجاح الزراعة النسٌجٌة‬

‫‪ ./‬مكونات الوسط الؽذائً ‪ -:‬وتشمل‬

‫أ‪ .‬األمبلح المعدنٌة‬

‫ب‪ .‬الفٌتامٌنات‬
‫ت‪ .‬األحماض األمٌنٌة‬
‫ث‪ pH .‬الوسط الؽذائً وتتراوح بٌن ‪5.8-5.7‬‬
‫ج‪ .‬مصدر الكاربون ‪/‬أستخدم السكروز بشكل أساسً وأحٌانآ الكلوكوز أو الفركتوز ‪,‬ألن النبات رمً التؽذٌة فٌحتاج الى‬
‫الكاربون الجاهز‪.‬‬
‫ح‪ .‬الماء ‪.‬‬

‫‪ .2‬ظروؾ الحضن (الخزن) ‪-:‬وتشمل‬

‫‪Un‬‬

‫أ‪ .‬درجة الحرارة وتكون ‪25‬م ‪ 2 - +‬م ‪.‬‬

‫‪ive‬‬

‫ب‪ .‬األضاءة ‪/‬وتستخدم مصادر صناعٌة لؤلضاءة (النٌون) باللون األبٌض على األؼلب شدة أضاءة ‪ 2111_1111‬لوكس‬
‫‪rs‬‬
‫‪ity‬‬

‫ولمدة أضاءة ‪ 16‬ساعة ثم ‪ 8‬ساعات ظبلم وبالتناوب‪.‬‬

‫‪of‬‬

‫ج‪ .‬التهوٌة والرطوبة ‪.‬‬

‫‪Di‬‬
‫‪ya‬‬

‫‪ .3‬نوع النبات ‪/‬تختلؾ األنواع النباتٌة بؤستجابتها للزراعة النسٌجٌة فمنها من ٌستجٌب بصورة سرٌعة ومنها من ال‬
‫‪la‬‬

‫ٌستجٌب أطبلقآ وبٌن ذلك تختلؾ األنواع فٌما بٌنها وهً تعتبر صفة وراثٌة فً النبات ‪.‬‬
‫‪-‬‬
‫‪Co‬‬

‫‪ .4‬الحالة الفسٌولوجٌة للنبات األم ‪/‬تإثر بشكل كبٌر فالنباتات النامٌة بظروؾ صعبة وقاسٌة تقل أستجابته للنمو نسٌجٌآ‬
‫‪lle‬‬

‫قٌاسآ بالنبات النامً بظروؾ مثالٌة ‪.‬‬

‫‪ge‬‬

‫‪ .5‬نوع المنفصل النباتً ‪ٌ/‬إثر فً أستجابة نسٌج النمو وٌتم أختٌار نوع النسٌج حسب أهداؾ الزراعة ‪.‬‬
‫‪of‬‬
‫‪A‬‬ ‫‪gr‬‬
‫‪icu‬‬
‫‪ltu‬‬
‫‪re‬‬

‫‪3‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫م‪ /‬األكثار الدقٌقً للنبات ‪Plant Micropropagation‬‬

‫أو أكثار النبات بالزراعة النسٌجة ‪Propagation Of Plant By tissue Culture‬‬

‫* أن أكثر أستعماالت زراعة األنسجة بالوقت الحاضر هو أكثار النبات خضرٌآ على نطاق تجاري بؤستخدام أنسجة من‬
‫النبات كؤطراؾ الفروع‪ ,‬البراعم الجانبٌة الساكنة‪ ,‬األوراق‪ ,‬الدرنات وؼٌرها من األعضاء النباتٌة واألنسجة‪.‬‬

‫وبنٌت هذه التقنٌة على األسس األتٌة‪-:‬‬

‫‪ .1‬ظاهرة أعادة التكوٌن فً الخبلٌا النباتٌة ‪ / Totipotency‬وهً أن كل خلٌة تمتلك المعلومات الوراثٌة وعوامل النمو‬
‫األخرى والتً تإهلها بؤن تعطً نبات كامل ‪.‬‬
‫‪ .2‬أمكانٌة الحصول على نباتات عدٌدة بزراعة أجزاء صؽٌرة من النبات‪.‬‬

‫وهناك أربعة مراحل رئٌسٌة تتب عادة عند أكثار النباتات بهذه الطرٌقة وقد تكون خمسة مراحل فً بعض النباتات وهً‪-:‬‬
‫‪Un‬‬

‫مرحلة النشوء ‪/ Initiation stage‬وهً مرحلة تهدؾ الى أنشاء مزرعة نسٌجٌة معقمة باقٌة على قٌد الحٌاة‪.‬‬ ‫أ‪.‬‬
‫‪ive‬‬

‫مرحلة التضاعؾ ‪/ Multiplication stage‬تهدؾ هذه المرحلة الى اخبلؾ األفرع بؤعداد كبٌرة‪.‬‬ ‫ب‪.‬‬
‫‪rs‬‬

‫مرحلة األستطالة ‪/ Elongation stage‬هذه المرحلة تقتصر على بعض النباتات كالنخٌل أذ ٌتم من خبلله تحفٌز األفرع‬ ‫ت‪.‬‬
‫‪ity‬‬

‫الناتجة الى األستطالة قبل التجذٌر‪.‬‬

‫‪of‬‬

‫مرحلة التجذٌر ‪. Rooting stage‬‬ ‫ث‪.‬‬

‫‪Di‬‬

‫مرحلة األقلمة ‪Acclamitezation stage‬‬ ‫ج‪.‬‬

‫‪ya‬‬
‫‪la‬‬

‫أوآل ‪/‬مرحلة أنشاء الزراعة النسٌجٌة‪-:‬‬

‫‪-‬‬‫‪Co‬‬

‫تهدؾ هذه المرحلة الى أختٌار الجزء النباتً أو المنفصل النباتً ‪ explant‬ومن ثم ٌعقم وٌزرع على أوساط ؼذائٌة‬
‫‪lle‬‬

‫معقمة وٌحضن فً وقت النمو وبذلكٌمكن الحصول على مزرعة نسٌجٌة معقمة ومستجٌبة للنمو‪.‬‬
‫‪ge‬‬

‫*أن أهم متطلبات أختٌار النبتة ٌعتمد بدرجة رئٌسٌة على طرٌقة األكثار وألجل زٌادة عدد األفرع الجانبٌة المتضاعفة‬
‫‪of‬‬

‫ٌفضل زراعة أجزاء نباتٌة تحتوي على براعم خضرٌة كاملة فؤذا كان الهدؾ أنشاء نباتات خالٌة من األمراض الفاٌروسٌة‬
‫‪A‬‬

‫نختار الطرؾ المرستٌمً بحٌث الٌزٌد طول الجزء النباتً عن ‪ 4‬ملم وعند خٌار الجزء النباتً ٌتم تعقٌمه سطحٌآ بؤستخدام‬
‫‪gr‬‬
‫‪icu‬‬

‫المحالٌل المطهرة مثل هاٌبوكلورات الصودٌوم ‪ NaOcl‬بعد تخفٌفه بالماء أوكلورٌد الزئبق ‪ HgCl2‬أو الكحول بعد تخفٌفه‬
‫أوبٌروكسٌد الهٌدروجٌن ‪ H2O2‬بتركٌز ٌصل أحٌانآ الى ‪ %0.5‬أو الحرارة ‪,‬وٌعتمد تركٌز المحلول المعقم ومدة بقاء‬
‫‪ltu‬‬

‫النسٌج فٌه على نوع المنفصل النباتً ومصدر النبات األم وتؽسل النبٌتات المعقمة بالماء المقطر المعقم عدة مرات ألزالة‬
‫‪re‬‬

‫المادة المعقمة قبل زراعة الجزء النباتً على األوساط الؽذائٌة والتً تكون صلبة أو سائلة وأن درجة ؼمر الجزء النباتً‬
‫لؤلوساط الؽذائً ٌعد عامآل مإثر فً موازنة المواد الؽذائٌة واألوكسجٌن الذي ٌحصل علٌه الجزء النباتً المزروع كما أن‬
‫نوع الؽطاء الزجاجً ٌإثر فً عملٌة التبادل الؽازي بٌن محٌط الزراعة وخارجه‪.‬‬

‫ثانٌآ ‪/‬مرحلة التضاعؾ‪-:‬‬

‫تعتبر هذه المرحلة األكثر اهمٌة وحرجآ أذ ٌتقرر فٌها عملٌة األكثار كما ٌعتمد علٌها عدد النباتات الكلٌة الناتجة كذلك‬
‫نوعٌتها وفً هذه المرحلة ٌتم أكثا ر الجزء النباتً الذي تتم زراعته فً المرحلة األولى النشوء‪ .‬وهناك ثبلث مسارات‬
‫رئٌسٌة لؤلكثار لهذه المرحلة‪.‬‬

‫أ‪ .‬تشجٌ نمو الكالس على الجزء المزروع وأنتاج األفرع من خبلل تحفٌز البراعم العرضٌة أو أنتاج األجنة الجسمٌة من‬
‫الكالس أذ ٌمكن انتاج الكالس من خبلل استخدام منظمات النمو النباتٌة واضافتها الى الوسط الؽذائً السٌما االوكسٌنات‬
‫والساٌتوكانٌنات اذ ان لها دور كبٌر فً تحفٌز نشوء الكالس ومن ثم زراعة الكالس المستحث على اوساط ؼذائٌة مجهزة‬

‫‪4‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬
‫باألوكسٌن أو الساٌتوكانٌن أو كبلهما بنسب معٌنة (فً نشوء الكالس عادة تكون نسبة األوكسٌن أعلى من الساٌتوكانٌن‬
‫فً حٌن تخصص الكالس الى براعم عرضٌة أو أجنة جسمٌة تكون نسبة الساٌتوكانٌن أعلى من األوكسٌن) وبعد زراعتها‬
‫على هذه األوساط تحفز نشوء البراعم العرضٌة وتفصل وتزرع على أوساط ؼذائٌة جدٌدة لتتطور الى أفرع وٌتم تجذٌرها‬
‫بصورة مفردة أو ٌنقل الكالس الى أوساط تشج تكوٌن األجنة الجسمٌة ‪ Somatic embryo‬أو ‪Embrygenesis‬‬
‫والتً تدخل الى مرحلة األقلمة بعد نموها‪.‬‬

‫**من ممٌزات هذا المسار‪-:‬‬

‫هو األنتاج الواس للنباتات بؤعداد كبٌرة وٌعاب علٌها هو أن النباتات الناتجة قد تكون متؽاٌرة وراثٌآ عن النبات األم‬
‫بسبب أن الكالس معرض لحدوث ظاهرة التضاعؾ الكروموسومً وبذلك تحتاج النباتات الناتجة من هذه الطرٌقة الى‬
‫فحص جٌنً للتؤكد من السبلمة الوراثٌة لهذه النباتات ومشابهتها للنبات األم‪.‬‬
‫*وقد أستؽلت هذه الصفة من قبل مربو النبات أذ تم أنتاج نباتات جدٌدة من خبلل زراعة الكالس هذه النباتات مقاومة‬
‫للملوحة أو لظروؾ األجهاد أو ذات أنتاج عالً لبعض األنواع النباتٌة‪.‬‬
‫‪Un‬‬

‫م‪/‬مراحل األكثار المختلفة للنباتات الناتجة من الزراعة النسٌجٌة‬

‫‪ive‬‬
‫‪rs‬‬
‫‪ity‬‬
‫‪of‬‬
‫‪Di‬‬
‫‪ya‬‬
‫‪la‬‬
‫‪-‬‬
‫‪Co‬‬
‫‪lle‬‬
‫‪ge‬‬
‫‪of‬‬
‫‪A‬‬ ‫‪gr‬‬
‫‪icu‬‬
‫‪ltu‬‬
‫‪re‬‬

‫‪5‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫م‪/‬تكوٌن البراعم العرضٌة ‪Advantions Buds‬‬

‫هً البراعم التً تتكون من أي مكان عدا أطراؾ األفرع وأباط األوراق كما تطلق هذه التسمٌة على البراعم التً تنشؤ من‬
‫نسٌج الكالس وهنا تتم األشارة الى البرعم العرضً الذي ٌتكون فً أي جزء نباتً عدا نسٌج الكالس (الطرٌقة المباشرة)‬
‫مثل األةراق والسٌقان والجذور وتعتمد ه ذه الطرٌقة أساسآ على البراعم العرضٌة التً تتكون على األجزاء النباتٌة والتً‬
‫تكون أفرع الحقآ ومن خبلل زراعتها على أوساط ؼذائٌة مبلئمة فً الظروؾ المثالٌة وأن هذه الطرٌقة تعد مفضلة فً‬
‫أكثار النباتات قٌاسآ بالطرٌقة األولى (زراعة الكالس) وذلك لوجود الثبات الوراثً والنباتات تكون متجانسة وراثٌآ م‬
‫مراعاة أحتمالٌة أن ٌكون األنقسام الخلوي المرافق لعملٌة تكون البراعم قد حفز نشوء الكالس ثم تكون البرعم من الكالس‬
‫ولٌس من الخبلٌا النباتٌة وفً هذه الحالة ٌحتاج البرعم أو النبات الناتج الى فحص جٌنً‪.‬‬

‫م‪ /‬تكوٌن األفرع الجانبٌة ‪Axillary Buds‬‬

‫تعتمد هذه الطرٌقة أساسآ على القضاء على ظاهرة السٌادة القمٌة وذلك لتحفٌز نمو البراعم الجانبٌة من خبلل اضافة‬
‫‪Un‬‬

‫تراكٌز معٌنة من الساٌتوكانٌن الى الوسط الؽذائً مما ٌإدي الى تفتح البراعم الجانبٌة وتكوٌن األفرع‪.‬‬
‫‪ive‬‬

‫ثالثآ ‪/‬مرحلة التجذٌر ‪-: Rooting stage‬‬

‫‪rs‬‬

‫تحتوي األجنة الجسمٌة التً تكونت من خبلل الكالس أو من خبلٌا القطعة النباتٌة مباشرةآ على جذٌر وتتطور الى نبٌتات‬
‫‪ity‬‬

‫صؽٌرة بعد زراعتها مباشرةآ فً الوسط المبلئم ونادرآ ما تدخل األجنة الجسمٌة فً سكون بعد البلوغ والتحتاج معامبلت‬
‫‪of‬‬

‫خاصة فً أنباتها ونموها وٌمكن أن تدخل بعد نموها فً المرحلة األخٌرة من األكثار (التقسٌة واألقلمة) فً حٌن تفتقر‬
‫‪Di‬‬

‫األفرع الناتجة من البراعم العرضٌة أو البراعم األبطٌة النامٌة على أوساط التضاعؾ تفتقر الى الجذور ولذلك تنقل هذه‬
‫‪ya‬‬

‫االفرع بعد فصلها وتجزئتها الى أوساط ؼذائٌة أخرى جدٌدة مجهزة باألوكسٌن بتراكٌز معٌنة (فً أؼلب األحٌان) وذلك‬
‫‪la‬‬

‫لتشجٌ نشوء الجذور العرضٌة ونموها على هذه األفرع وٌمكن فً بعض الحاالت تجذٌر هذه االفرع فً ظروؾ الظلة أو‬
‫‪-‬‬
‫‪Co‬‬

‫البٌت الزجاجً المكٌؾ‪.‬‬

‫‪lle‬‬

‫رابعآ ‪ /‬مرحلة األستطالة ‪-: Elanation stage‬‬

‫‪ge‬‬
‫‪of‬‬

‫هً مرحلة تسبق مرحلة التجذٌر لؤلفرع أذ تكون النبٌتات الناتجة من مرحلة التضاعؾ قصٌرة وؼٌر صالحة للتجذٌر أذ‬
‫‪A‬‬

‫تنقل الى أوساط جدٌدة مجهزة بمنظمات النمو كالجبرلٌن لتحسٌن أطوال هذه الفروع‪.‬‬
‫‪gr‬‬
‫‪icu‬‬
‫‪ltu‬‬
‫‪re‬‬

‫‪6‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫‪Un‬‬
‫‪ive‬‬
‫‪rs‬‬
‫‪ity‬‬
‫‪of‬‬

‫خامسآ ‪/‬مرحلة األقلمة ‪ Acclamitezation stage‬تقسم هذه المرحلة الى مرحلتٌن ‪-:‬‬
‫‪Di‬‬

‫‪ .1‬مرحلة التقسٌة ‪ /‬تكون النبٌتات النسٌجٌة الناتجة من مرحلة التجذٌر أو األجنة التمتلك طبقة كٌوتكل أو تكون هذه الطبقة‬
‫‪ya‬‬

‫ضعٌفة جدآ أو مخلخلة أن وجدت وٌكون النبات رمً التؽذٌة والٌقوم بعملٌة التركٌب الضوئً وحتى أن قام بذلك فؤن‬
‫‪la‬‬

‫نواتج هذه العملٌة ضعٌفة جدآ تكاد تكو ن معدومة لذلك ٌحتاج النبٌت الى أعادة تئهٌله لٌكون قادرآ على النمو طبٌعٌآ فً‬
‫‪-‬‬‫‪Co‬‬

‫ظروؾ الحقل من خبلل أعادة بناء طبقة الكٌوتكل وترشٌح عملٌة التركٌب الضوئً ولكً تتم عملٌة التقسٌة نقوم برف‬
‫‪lle‬‬

‫النبٌتات من االوساط الؽذائٌة وؼسلها بالماء الجاري ألزالة بقاٌا الوسط الؽذائً واألكار وأزالة النموات الخضرٌة الزائدة‬
‫‪ge‬‬

‫عن الحاجة ووض جذور النبات فً محلول مطهر (مبٌد فطري) لوقاٌة الجذور من الفطرٌات ثم تزرع هذه النبٌتات فً‬
‫أصص ببلستٌكٌة أو فخارٌة تحوي على أوساط زراعٌة معقمة (التربة النهرٌة‪ ,‬الرمل‪ ,‬البتموس‪ ,‬البرالٌت‪ ,‬الفرمٌكٌوالٌت‬
‫‪of‬‬

‫وؼٌ رها) ثم نقوم بتؽطٌة األصص بعد رٌها بؤؼطٌة ببلستٌكٌة لحفظ المحتوى الرطوبً وتوض تحت أضاءة أعلى من‬
‫‪A‬‬ ‫‪gr‬‬

‫األضاءة السابقة لتصل الى ‪ 11111‬لوكس وذلك لتنشٌط التركٌب الضوئً بعد مرور أسبوع تقرٌبآ نقوم بتثقٌب األؼطٌة‬
‫‪icu‬‬

‫الببلستٌكٌة بثقوب صؽٌرة ومتباعدة وبعد مرور أسبوع أخر ٌتم زٌادة عدد الثقوب تدرٌجٌآ كل ٌومٌن الى أن ٌتم رف‬
‫‪ltu‬‬

‫األؼطٌة الببلستٌكٌة تمامآ بعد مرور ‪ 4-3‬أسابٌ وتحتاج النبٌتات خبلل هذه الفترة ال سقً حسب الحاجة وقد تسقى خبلل‬
‫‪re‬‬

‫األسبوع الثانً أو الثالث بمٌاه تحتوي على أمبلح الوسط الؽذائً بنصؾ أو رب القوة‪.‬‬
‫*النباتات الناتجة والباقٌة على قٌد الحٌاة تحتاج الى عملٌة أقلمٌة‪.‬‬
‫‪ .2‬مرحلة األقلمة ‪ /‬تنقل النباتات الناتجة من مرحلة التقسٌة الى البٌت الزجاجً وٌتم رٌها وتسمٌدها بؤنتظام وتحسٌن نموها‬
‫وتبقى لمدة شهرٌن ثم تنقل الى الضلة الخشبٌة لتستكمل عملٌة األقلمة أٌضآ لمدة شهرٌن لتصبح جاهزة للنمو فً ظروؾ‬
‫الحقل المكشوؾ‪.‬‬

‫‪7‬‬
‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫‪Un‬‬
‫‪ive‬‬
‫‪rs‬‬
‫‪ity‬‬
‫‪of‬‬
‫‪Di‬‬
‫‪ya‬‬
‫‪la‬‬
‫‪-‬‬
‫‪Co‬‬
‫‪lle‬‬
‫‪ge‬‬
‫‪of‬‬
‫‪A‬‬ ‫‪gr‬‬
‫‪icu‬‬
‫‪ltu‬‬
‫‪re‬‬

‫‪8‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫م‪/‬أستحثاث نمو الكالس وزراعته ‪Initation and Growth of Callus‬‬

‫ٌطلق على الخبلٌا البر نكٌمٌة ؼٌر منتظمة الشكل السائبة مصطلح الكالس وهو ٌختلؾ عن الكالوس ‪ Callos‬والذي هو‬
‫مواد كاربوهٌدراتٌة متصلبة تقوم بؤفرازها بعض أنواع النباتات كاألشجار‪ ,‬والكالس ٌنشؤ عادة من الخبلٌا المرستٌمٌة‬
‫وٌمكن تحفٌز الخبلٌا ؼٌر المرستٌمٌة (المتخصصة) على األنقسام والؽاء التخصص لتكوٌن الكالس‪.‬‬

‫من الناحٌة النظرٌة ٌمكن القول بؤن النسٌج الحً ذي الخبلٌا المتعددة له القدرة على أعطاء الكالس ؼٌر المتخصص وذلك‬
‫عند وض الجزء المقطوع منالنبات على وسط ؼذائً مناسب مجهز بمنظمات النمو عادة السٌاتوكانٌن واألوكسٌن‪.‬‬

‫س‪ /‬ماهً العوامل المإثرة فً أستحثاث الكالس ونموه ؟‬

‫‪Un‬‬

‫ج‪ٌ/‬عتمد بدرجة كبٌرة على نوع النبات ونوع المنفصل النباتً ومكونات الوسط الؽذائً والمؽذٌات والهرمونات وروؾ‬
‫‪ive‬‬

‫الحضن (الحرارة والضوء) والحالة الفسٌولوجٌة للنبات األم وهذه العوامل نفسها تإثر فً لون وقوام الكالسالناتج‪.‬‬
‫‪rs‬‬
‫‪ity‬‬

‫*تعد نباتات ذوات الفلقتٌن أسهل من ذوات الفلقة الواحدة زأكثر أستجابة ألستحثاث الكالس ونموه وقد حققت نجاحات‬
‫كبٌرة فً أستحثاث الكالس من أجزاء مختلفة ونباتات عدٌدة وكذلك تمكن الباحثون من تنمٌة خبلٌا مفردة أو مجامٌ‬
‫‪of‬‬

‫خلوٌة من الكالس وقد أستخدمت هذه التقنٌة بشكل واس فً مجاالت عدٌدة منها أكثار النباتات تجارٌآ لقابلٌة الكالس على‬
‫‪Di‬‬

‫أنتاج براعم عرضٌة وأجنة بؤعداد كبٌرة كذلك ٌستخدم فً مجال تطفٌر النباتات خارج الجسم الحً ألنتاج نباتات ذات‬
‫‪ya‬‬

‫صفات وراثٌة جدٌدة ٌستخدم فً مجال أنتاج العقاقٌر الطبٌة والمركبات الصناعٌة تجارٌآ كما ٌمكن تضمٌن الكالس فً‬
‫‪la‬‬
‫‪-‬‬

‫‪ DNA‬والبكترٌا والفاٌر وسات فً أبحاث الهندسة الوراثٌة وؼٌرها من الدراسات العلمٌة المهمة المتعلقة فً األنقسام‬
‫‪Co‬‬

‫الخلوي والتماٌز واألمتصاص والتمثٌل الؽذائً‪.‬‬

‫‪lle‬‬
‫‪ge‬‬

‫م‪ /‬المظهر الخارجً والتركٌب الخلوي ألنسجة الكالس‬

‫‪of‬‬

‫ٌختلؾ الكالس المتكون فً لونه ومظهره الخارجً وصبلبته على نوعٌة القطعة النباتٌة ونوع النبات وٌتؤثر ذلك بمكونات‬
‫‪A‬‬

‫الوسط الؽذائً وٌكون الكالس أما مفكك هشآ كما فً كالس نبات زهرة الشمس ومعظم النباتات العشبٌة أو ٌكون صلبآ ذا‬
‫‪gr‬‬

‫قوام متماسك كما فً كالس نبات البنجر‪ ,‬أما عن لون الكالس فٌكون عدٌم اللون أو أخضر فاتح بؤحتوائه على صبؽات‬
‫‪icu‬‬

‫أشباه الكلوروف ٌل أو ذو لون أصفر ألحتوائه على صبؽة الكاروتٌن والفبلٌفونٌن ولون الكالس ٌعتمد أساسآ على نوع‬
‫‪ltu‬‬

‫القطعة النباتٌة وعوامل أخرى ذكرت سابقآ‪.‬‬

‫‪re‬‬

‫وٌشٌر التشرٌح الداخلً بؤنسجة الكالس على أنه مكون من خبلٌا مختلفة فً الشكل أما تكون صؽٌرة متماسكة عدٌمة‬
‫المسافات البٌنٌة أو تك ون متوسطة مفككة بوجود مسافات بٌنٌة كبٌرة وٌحتوي الكالس النشط فً نموه على خبلٌا كبٌرة‬
‫ذات فجوات وخبلٌا صؽٌرة عدٌمة الفجوات تكون موزعة فً مناطق معٌنة وظٌفتها األنقسام وزٌادة نمو الكالس‪.‬‬

‫‪9‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫س‪ /‬ماهً العوامل التً تجعل خبلٌا الكالس تعانً من تؽاٌرات وراثٌة وفسلجٌة مهمة؟‬

‫ج‪ .1 /‬طول عمر الكالس ‪,‬بزٌادة عمر الكالس ٌزداد أحتمال التؽٌر الوراثً والفسلجً‪.‬‬
‫‪Un‬‬
‫‪ive‬‬

‫‪ .2‬عدم أمكانٌة زراعة الكالس وتؤخٌر نقله الى أوساط جدٌدة ٌزٌد من فر صة حصول التؽاٌر الوراثً‪.‬‬
‫‪rs‬‬

‫‪.3‬مكونات الوسط الؽذائً ‪,‬السٌما منظمات النمو أذ أن النمو السرٌ جدآ للكالس ممكن أن ٌحفز التضاعؾ الكروموسومً‬
‫‪ity‬‬
‫‪of‬‬

‫‪ .4‬العامل الوراثً ‪,‬أذ أن بعض النباتات لها القابلٌةعلى التضاعؾ الكروموسومً ‪ diploid‬وأنواع أخر أكثر ثباتٌة‪.‬‬
‫‪Di‬‬

‫**أن وجود ظاهرة التضاعؾ الكروموسومً فً أنسجة الكالس تعد مشكلة تواجه مربً النبات ؟ وللتخلص من هذه‬
‫‪ya‬‬

‫الظاهرة ٌمكن زراعة الخبلٌا المعلقة ألنتخاب الخبلٌا األكثر ثباتٌة وراثٌآ‪.‬‬
‫‪la‬‬
‫‪-‬‬
‫‪Co‬‬

‫س‪ /‬ماهً الطرق التقنٌة فً زراعة الكالس؟‬

‫‪lle‬‬

‫ج‪ .1/‬الوسط الؽذائً الصلب ‪Solid Culture Medium‬‬

‫‪ge‬‬

‫ٌعد الوسط الصلب من أول األوساط المستخدمة فً أستحثاث الكالس ومن أكثر المواد المستعملة فً تصلٌب الوسط‬
‫‪of‬‬

‫الؽذائً هو األكار ‪ Agar‬وهو مستخلص من بعض أنواع الطحالب البحرٌة ٌضاؾ الى الوسط الؽذائً بمعدل ‪ 8-6‬ؼم‪/‬لتر‬
‫‪A‬‬ ‫‪gr‬‬

‫وهناك أنواع عدٌدة من األكار تختلؾ فً درجة نقاوتها أذ ٌحتوي على بعض الشوائب والتً قد تإثر على أنتقال المواد‬
‫‪icu‬‬

‫الؽذائٌة وٌمكن التخلص من هذه الشوائب بؽسل األكار بمادة الكلوروفورم وٌمكن أستخدام مواد أخرى لتصلٌب الوسط مثل‬
‫الجٌبلتٌن ‪ ,‬أن أضافة األكار الى الوسط الؽذائً هو لجعله قادرآ على حمل الجزء النباتً كً الٌؽرق فً الوسط الؽذائً‬
‫‪ltu‬‬

‫وٌموت ولٌس له أي فائدة أخرى‪.‬‬

‫‪re‬‬

‫**من عٌوب هذه الطرٌقة‪-:‬‬

‫وجود الشوائب فً األكار والتً قد تإثر سلبآ فً نمو النبات‪.‬‬ ‫‪.1‬‬

‫أنتقال المواد الؽذائٌة الى الجزء النباتً ٌكون ؼٌر متساوي أذ أن الجزء المبلمس للوسط تكون له فرصة األستفادة من‬ ‫‪.2‬‬
‫المواد الؽذائٌة مقارنة باألجزاء الب ‪ٌ8‬دة عن الوسط الؽذائً‪.‬‬
‫ؼمر القطعة النباتٌة فً الوسط الصلب تإدي الى توزٌ ؼٌر متساوي للؽازات (‪ )Co2,O2‬بٌن الوسط والكالس المتكون‬ ‫‪.3‬‬
‫علٌه‪.‬‬
‫تتعرض الكالس الى ظاهرة األستقطاب بفعل الجاذبٌة األرضٌة وكذلك بالتعرض الى الضوء‪.‬‬ ‫‪.4‬‬
‫صعوبة نقل الكالس واألجزاء النباتٌة المزروعة علٌه الى وسط آخر دون حدوث بعض األضرار‪.‬‬ ‫‪.5‬‬

‫‪11‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫‪.2‬الوسط الؽذائً السائل ‪Lequid Culture Medium‬‬

‫أن مكونات الوسط الؽذائً السائل هً نفسها مكونات الوسط الؽذائً الصلب ماعدا خلوها من األكار‪ .‬هناك طرٌقتان‬
‫للزراعة فً الوسط السائل‪-:‬‬
‫أ‪ .‬الوسط الؽذائً السائل الثابت‪ /‬تعد هذه الطرٌقة ؼٌر شائعة األستعمال قٌاسآ بالطرق األخرى وأستخدمت ألول مرة فً عام‬
‫‪1949‬م من قبل الباحثان ‪ Heller & Coutheret‬أذ ٌتم فٌها زراعة الكالس فوق قطعة من ورقة الترشٌح الموضوعة‬
‫فوق الوسط السائل أذ تعمل كموصل للمواد الؽذائٌة بٌن الكالس والوسط الؽذائً وكذلك تعمل على تثبٌت األنسجة النباتٌة‬
‫م بقاء الجزء النباتً معرض للهواء بصورة مباشرة‪.‬‬

‫**من ممٌزات هذه الطرٌقة‪-:‬‬

‫‪ .1‬عدم وجود األكار للتخلص من الشوائب المحتملة م األكار‪.‬‬
‫‪ٌ .2‬مكن قٌاس عملٌة التنفس وتبادل المواد الؽذائٌة بٌن النسٌج والوسط الؽذائً وعملٌات البناء التً تحدث داخل النسٌج‬
‫‪Un‬‬

‫بسهولة مقارنة بالزراعة على الوسط الصلب‪.‬‬

‫ب‪ .‬الوسط الؽذائً السائل المتحرك‪ /‬مكونات الوسط فً هذه الطرٌقة مشابهة للسابق (السائل الثابت) والمختلؾ هنا أن القطعة‬
‫‪ive‬‬

‫النباتٌة داخل الوسط الؽذائً والذي ٌتم تحرٌكه بواسطة أجهزة هزازه خاصة وعملٌة التحرٌك ٌسٌطر علٌه آلٌآ وتعد هذه‬
‫‪rs‬‬

‫الطرٌقة مثلى لتنمٌة الكالس وذلك لتجنب المساوى للطرٌقة الثابتة أذ ٌتم التبادل الؽازي والحصول على المواد الؽذائٌة‬
‫‪ity‬‬

‫بصورة مثلى نتٌجة تحرٌك الوسط الؽذائً وكذلك القضاء على ظاهرة األستقطاب بفعل الجاذبٌة األرضٌة وتسمى خبلٌا‬
‫‪of‬‬

‫الكالس المزروعة على وسط سائل بالخبلٌا المعلقة ‪ Cell Suspension‬كونها تعلق فً الوسط الؽذائً أثناء عملٌة‬
‫‪Di‬‬

‫التحرٌك وقد طورت هذه التقنٌة من قبل شركات صناعة األدوٌة وؼٌرها أذ صنعت منها أجهزة تحكم متطورة متحكمة‬
‫‪ya‬‬

‫بالكمبٌوتر سمٌت بالمفاعل الحٌوي ‪ Biorectorc‬أذ ٌتم فٌها السٌطرة على مكونات الوسط الؽذائً والتبادل الؽازي بشكل‬
‫‪la‬‬

‫آلً لتكون الخبلٌا المزروعة دائمآ فً طور النمو األسً‪.‬‬

‫‪-‬‬
‫‪Co‬‬
‫‪lle‬‬

‫م‪ /‬فسٌولوجٌا أستحثاث الكالس‬

‫‪ge‬‬

‫أستحثاث الكالس من القطعة النباتٌة من العملٌات المهمة فً تقانات النبات الحدٌثة وتمر قطعة النبات بثبلثة مراحل‬
‫‪of‬‬

‫رئٌسٌة للوصول الى األعضاء المتخصصة من خبلل تحفٌز نشوء الكالس‪.‬‬

‫‪A‬‬

‫‪ .1‬مرحلة التحفٌز ‪/ Induction stage‬تمر قطعة المنفصل النباتً بتؽٌرات معٌنة بعد زراعته على الوسط الؽذائً المبلئم‬
‫‪gr‬‬

‫لنشوء الكالس أذ ٌحدث تؽٌر فً تركٌب الخبلٌا وزٌادة كبٌرة فً بعض العملٌات البنائٌة المهمة مثل بناء البروتٌن‬
‫‪icu‬‬

‫والحوامض النووٌة وٌبقى عدد الخبلٌا وحجمها ثابت‪ .‬وأن مدة هذه المرحلة تعتمد على عدة عوامل أهمها‪ -:‬نوع النبات‪,‬‬
‫‪ltu‬‬

‫نوع المنف صل النباتً‪ ,‬مكونات الوسط الؽذائً والحالة الفسٌولوجٌة للنبات األم هذه العوامل تإثر فً الحالة التً ٌصل الى‬
‫‪re‬‬

‫التحفٌز‪.‬‬

‫‪ .2‬مرحلة األنقسام ‪/ Divisio stage‬تؤتً هذه المرحلة بعد مرحلة التحفٌز أذ ٌحدث تؽٌر متتاب فً الفعالٌات الحٌوٌة للخبلٌا‬
‫فً مرحلة التحفٌز لتنتهً بعم لٌة أنقسام الخبلٌا وتكوٌن كتل من خبلٌا الكالس على القطعة النباتٌة م مبلحظة أن لٌست‬
‫جمٌ خبلٌا القطعة النباتٌة تعطً نفس األستجابة فالخبلٌا الخارجٌة للنسٌج فقط هً التً تتحفز وتنقسم مكونة كتلة من‬
‫الخبلٌا البارنكٌمٌة التً تحٌط بالخبلٌا ؼٌر المنقسمة وخاصة فً مناطق الجروح على القطعة النباتٌة‪.‬‬

‫س‪ /‬ماهً العوامل المحفزة ألنقسام الخبلٌا المحٌطٌة للقطعة النباتٌة السٌما فً مناطق الجروح ؟‬
‫ج‪ٌ/‬نشؤ الكالس من مناطق الجروح بسبب تحرر عوامل األنقسام فً المناطق المجروحة للقطعة النباتٌة وأن أنقسام الخبلٌا‬
‫فً محٌط القطعة النباتٌة المبلمسة للوسط الػ‪ 1‬ائً فؤن هذه الخبلٌا تحصل على الؽذاء من الوسط الؽذائً واألوكسجٌن من‬
‫الهواء المحٌط بالقطعة النباتٌة‪.‬‬

‫‪11‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬
‫*هناك بعض النباتات تفرز المركبات الفٌنولٌة بمستوٌات عالٌة عند فصل األنسجة منها وأن هذه المركبات الفٌنولٌة‬
‫تفرز من المنفصل النباتً سوؾ تتؤكسد وٌحصل األسوداد البنً ‪ Browning‬والذي ٌإدي الى تقلٌل األستجابة النسٌجٌة‬
‫للنمو وحتى موت النسٌج ولذلك نلجئ الى معالجة الجزء النباتً وذلك بنقعه بمحلول حامضً السترٌك واألسكوربك بتركٌز‬
‫‪111‬ؼم‪/‬لتر لكل منهما فً ماء بارد بدرجة حرارة الثبلجة ولمدة ‪ 15‬دقٌقة فور فصل األجزاء النباتٌة من النبات األم‬
‫كماٌمكن أضافة الفحم المنشط الى الوسط الؽذائً بنسبة‪ %3-2‬أذ ٌقوم الفحم بؤدمصاص األفرازات الفٌنولٌة الناتجة من‬
‫القطعة النباتٌة ومنعها من التؤكسد‪.‬‬

‫‪ .3‬مرحلة التخصص‪/ Deferentia stage‬تتحول الخبلٌا المرستٌمٌة للكالس الى خبلٌا متماٌزة أذ تبدء بتوس خبلٌا معٌنة‬
‫وتماٌز آخر ٌنتهً بتكوٌن مبادئ نشوء األجنة أو األعضاء والٌوجد هناك مإشر ٌفصل ربٌن المراحل المختلفة فً عملٌة‬
‫أستحثاث الكالس ونموه وتخصصه‪.‬‬

‫م‪ /‬أعادة زراعة الكالس ‪Reclture Callus‬‬

‫‪Un‬‬

‫ٌحتاج الكالس بعد أستحثاثه لٌنمو لٌصل الى الحجم المناسب وٌحتاج هذا الكالس النامً الى أعادة زراعة بعد مرور مدة‬
‫‪ive‬‬

‫معٌنة (‪ 6-2‬أسابٌ ) وأن عدم أعادة زراعة الكالس ٌإدي الى أضرار فسٌولوجٌة فً نمو وتطور الخبلٌا مما ٌإدي الى‬
‫توقؾ نمو الكالس أو حتى موتهبسبب أستنزاؾ المواد الؽذائٌة فً الوسط الؽذائً وجفافه وتراكم النواتج النهائٌة‬
‫‪rs‬‬
‫‪ity‬‬

‫للفعالٌات الحٌوٌة للخبلٌا حتى تصل الى مستوٌات سامة وبذلك ٌجب أعادة زراعة الكالس على أوساط جدٌدة أو تقسٌمه‬
‫الى أجزاء صؽٌرة (‪ 1.5‬ؼم) وزراعته على أوساط جدٌدة ‪. Subculture‬‬
‫‪of‬‬
‫‪Di‬‬

‫كما موضح بالشكل اآلتً‪-:‬‬

‫‪ya‬‬
‫‪la‬‬
‫‪-‬‬‫‪Co‬‬
‫‪lle‬‬
‫‪ge‬‬
‫‪of‬‬
‫‪A‬‬ ‫‪gr‬‬
‫‪icu‬‬
‫‪ltu‬‬
‫‪re‬‬

‫وٌمكن قٌاس الز ٌادة الحاصلة بنمو الكالس من خبلل زٌادة حجم الكالس وزٌادة الوزن الطري والوزن الجاؾ وكذلك ممكن‬
‫قٌاس زٌادة معدل النمو من خبلل قٌاس الزٌادة فً األخماض النووٌة ‪ DNA‬و ‪. RNA‬‬

‫‪12‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫م‪ /‬أنتاج مركبات األٌض الثانوي ‪Secondary Metabolities Production‬‬

‫هً أحدى نواتج الخلٌة ؼٌر األساسٌة والتً ال تدخل ضمن الفعالٌات األٌضٌة األساسٌة والضرورٌة لنمو وتطور الخلٌة‬
‫نفسها والنبات وعماٌة التركٌب الضوئً والتنفس وبناء البروتٌنات والدهون وؼٌرها‪ .‬من هذه المركبات (الفٌنوالت‪,‬‬
‫القلوٌدات‪ ,‬الكلوكوساٌد‪ ,‬التربٌنات‪ ,‬الفبلفٌنات والعطور وؼٌرها‪. )...‬‬
‫ٌنتج النبات هذه المركبات ألؼراض متعددة منها كوسٌلة دفاعٌة بحماٌة النبات من الظروؾ القاسٌة والملوحة ومهاجمت‬
‫اآلفات كالحشرات وتؽذٌة الحٌوانات علٌها أو ألنتاج العطور أو ألنتاج عطور جذب الحشرات وؼٌرها من األهداؾ األخرى‪.‬‬
‫تعد النباتات المص در الرئٌسً ألنتاج العدٌد من المركبات ذات األستخدامات الطبٌة وأن بعض هذه النباتات عند زراعتها‬
‫خارج الجسم الحً فً أوساط زراعٌة معٌنة (ٌتم تحوٌر الوسط الؽذائً حسب نوع المادة المستخرجة ونوع النبات) تنتج‬
‫هذه المواد وٌتم جمعها وتنقٌتها واألستفادة منها‪.‬‬
‫*النباتات النامٌة فً ظروؾ الحقل ‪ in vivo‬تكون منتجة لهذه المواد لكن أستخبلصها ٌكون صعب وأن أنتاج هذه‬
‫النباتات نسٌجٌآ وأستخبلص هذ المركبات منها ٌكون أسهل من الناحٌة التقنٌة‪.‬‬
‫‪Un‬‬

‫س‪ /‬ماهً مزاٌا أنتاج مركبات األٌض الثانوي نسٌجٌآ(‪)in vitro‬؟‬

‫‪ive‬‬

‫ج‪ .1 /‬كمٌة ونوعٌة المنتج تكون أ كثر ثباتٌة فً حالة األنسجة المزروعة نسٌجٌآ ألنها ال تتؤثر بالظروؾ البٌئٌة كالحرارة‬
‫‪rs‬‬

‫والرطوبة واإلضاءة ونوع التربة‪.‬‬

‫‪ity‬‬

‫‪ .2‬أمكانٌة جدولة اإلنتاج بسبب سهولة التحكم والسٌطرة على الظروؾ المختبرٌة‪.‬‬
‫‪of‬‬

‫‪ .3‬مشكلة تلوث اإلنتاج تكون معدومة ألن الزروعات تكون نامٌة فً ظروؾ معقمة‪.‬‬
‫‪Di‬‬

‫‪ .4‬أمكانٌة زٌادة اإلنتاج لهذه المواد عن طرٌق تضمٌن الوسط الؽذائً بالمركبات الهادئة ألنتاج هذه المواد أو عن طرٌق‬
‫‪ya‬‬

‫المعالجة الوراثٌة لؤلنسجة المزروعة (أدخال جٌنات مسإلٌة عن أنتاج المركبات المطلوبة عن طرٌق الهندسة الوراثٌة)‬
‫‪la‬‬
‫‪-‬‬

‫للحصول على خبلٌا ذات إنتاجٌة عالٌة لهذه المركبات‪.‬‬

‫‪Co‬‬

‫‪ .5‬الزراعة فً المختبر ٌوفر فرضة جٌدة لئلنتاج الواس لهذه المركبات من النباتات‪.‬‬
‫‪lle‬‬
‫‪ge‬‬

‫س‪ /‬ماهً السلبٌات المحتملة ألنتاج المركبات الثانوٌة نسٌجٌآ؟‬

‫‪of‬‬

‫ج‪ . 1 /‬فً زراعة األنسجة لٌست كل الخبلٌا المزروعة تنتج هذه المواد بسبب توقؾ النشاط الجٌنً ألنتاج هذه المواد على‬
‫‪A‬‬

‫المستوى الخلوي‪.‬‬
‫‪gr‬‬

‫‪.‬فً ز راعة األنسجة تبقى األنسجة المزروعة فً الحالة المرستٌمٌة ؼٌر المتماٌزة سوى كانت أنسجة كالس أو معلقات‬ ‫‪2‬‬
‫‪icu‬‬

‫خلوٌة (خبلٌا معلقة) وأن هذه األنسجة المتماٌزة مثل انسجة الؽدد فً النعناع والؽدد العطرٌة فً األزهار والقنوات الزٌتٌة‬
‫‪ltu‬‬

‫فً الكرفس وؼٌرها من األنسجة (م مبلحظة وجود بعض األستثناءات التً بٌنت أن أنتاج بعض المركبات من أنسجة‬
‫‪re‬‬

‫الكالس أعلى من أنسجة النبات النامً فً الحقل)‪.‬‬

‫‪.‬جاهزٌة البادئات البلزمة ألنتاج هذه المركبات فً الوسط الؽذائً قد تكون واطئة خاصة على المستوى الخلوي مما ٌإدي‬ ‫‪3‬‬
‫الى أنخفاض حاد فً المنتجات الثانوٌة‪.‬‬
‫بعض متطلبات النمو النمو للنباتات النسٌجٌة مثل ظروؾ الحضن مثل الحرارة واألضاءة وبعض مكونات الوسط الؽذائً‬ ‫‪4‬‬
‫كوجود منظمات النمو والتً تعد ضرورٌة لنمو هذه األنسجة هذه العوامل قد تإثر سلبآ فً أنتاج بعض المركبات ‪.‬فعلى‬
‫سبٌل المثال التراكٌز العالٌة من األوكسٌن ‪ 2,4,D‬فً الوسط الؽذائً ٌقلل أنتاج المركبات الثانوٌة وكذلك الحال فً التراكٌز‬
‫العالٌة من الفوسفات والناٌتروجٌن‪.‬‬
‫طور النمو للخبلٌا فً مرحلة األنقسام تإثر فً أنتاج المركبات الثانوٌة فٌزداد األنتاج فً طور األستقرار مقارنة م طور‬ ‫‪5‬‬
‫األنقسام السرٌ ‪.‬‬
‫كما مبٌن بالشكل اآلتً‪-:‬‬

‫‪13‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫‪Un‬‬
‫‪ive‬‬
‫‪rs‬‬
‫‪ity‬‬
‫‪of‬‬
‫‪Di‬‬
‫‪ya‬‬
‫‪la‬‬
‫‪-‬‬‫‪Co‬‬

‫شكل )‪ :)2-13‬نمو وحاصل المركبات الثانوٌة خبلل فترة زمنٌة ٌوضح هٌئة المنحنى على‬
‫‪lle‬‬

‫حرؾ ‪.S‬‬ ‫شكل‬

‫‪ge‬‬
‫‪of‬‬
‫‪A‬‬ ‫‪gr‬‬

‫م‪ /‬خطوات أنتاج المواد الثانوٌة‬

‫‪icu‬‬

‫أنتج المواد الثانوٌة عبر المسارات األٌضٌة الثانوٌة خارج الجسم الحً ٌكتسب أهمٌة فً مال التقانات األحٌائٌة وتتزاٌد‬
‫‪ltu‬‬

‫هذه األهمٌة بؤستمرار نتٌجة تنافس الشركات العالمٌة على أنتاج هذ المواد بؤنتاج األدوٌة والمواد الصناعٌة أذ تقوم هذه‬
‫‪re‬‬

‫الشركات بؤنتاج خطوط خلوٌة ‪ Cell Line‬التً تتمٌز بؤنتاج كمٌات كبٌرة من هذه المواد الطبٌة‪.‬‬
‫هناك طرٌقتان أساسٌةمتبعة ألنتاج الخطوط الخلوٌة ذات األنتاجٌة العالٌة‪-:‬‬
‫أستئصال خلٌة واحدة ‪ / Single Cell Cloning‬نظرٌآ فؤن أستئصال خلٌة واحدة هً طرٌقة أفضل لعزل الخبلٌا التً تنتدج‬ ‫‪.1‬‬
‫بكمٌات كبٌرةمن المواد الثانوٌة ومن عٌوبها ظهور مجموعة من الخبلٌا ؼٌر المتجانسة الحقآ بسبب حالة التعدد‬
‫الكروموسومً ‪ diploid‬أوأسباب أخرى معٌنة‪.‬‬
‫أستئصال مجموعة من الخبلٌا ‪ / Grop Cell Cloning‬هذه الطرٌقة أكثر شٌوعآ من الطرٌقة السابقة وأفضل منها وتشمل‬ ‫‪.2‬‬
‫الخطوات األتٌة‪-:‬‬
‫أستحداث تكوٌن الكالس‪.‬‬ ‫أ‪.‬‬
‫أنتخاب مجامٌ من الخبلٌا المتخصصة فً أنتاج المركبات المطلوبة‪.‬‬ ‫ب‪.‬‬
‫زراعة المجامٌ الخلوٌة المنتجة بهدؾ أكثارها‪.‬‬ ‫ت‪.‬‬
‫تقسٌم المجامٌ المنتجة الى نصفٌن األول ٌعاد زراعته ‪ Subculture‬والنصؾ الثانً ٌستخدم فً أنتاج المركبات‬ ‫ث‪.‬‬
‫الثانوٌة‪.‬‬

‫‪14‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬
‫ج‪ .‬أعادة أنتخاب المجموعة الخلوٌة المنجة وأكثارها لضمان المحافظة على األتاج العالً‪.‬‬
‫ح‪ .‬التؤكد من ثبات األنتاج فً المجامٌ المنتخبة بؤعادة الزراعة للكالس فً المجامٌ المنتخبة وأكثارها‪.‬‬

‫*ٌجب المحافظة واألستمرار بعملٌة األنتاج للخبلٌا المنتجة لضمان األنتاج العالً والتخلص من الخبلٌا التً تفقد قابلٌتها‬
‫على أالنتاج‪.‬‬

‫المخطط األتً ٌوضح مراحل أنتاج المركبات الثانوٌة خارج الجسم الحً‪-:‬‬
‫‪Un‬‬
‫‪ive‬‬
‫‪rs‬‬
‫‪ity‬‬
‫‪of‬‬
‫‪Di‬‬
‫‪ya‬‬
‫‪la‬‬
‫‪-‬‬
‫‪Co‬‬
‫‪lle‬‬
‫‪ge‬‬
‫‪of‬‬
‫‪A‬‬ ‫‪gr‬‬
‫‪icu‬‬
‫‪ltu‬‬

‫شكل (‪ :)8-13‬تأثير االنتخاب الساللي المتكرر في حاصل القلويديات لسالالت خاليا وأداؤها‬
‫‪re‬‬

‫خالل اعادة الزراعة المتعاقبة الحظ حصول زيادة في حاصل القلويديات مباشرة بعد االنتخاب‪.‬‬

‫‪15‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫م‪ /‬عزل وزراعة البروتوببلست ‪Isolation and Culture Of Protoplast‬‬

‫س‪ /‬ماهو البروتوببلست؟‬

‫ج‪ /‬هو عبارة عن خلٌة منزوعة الجدار الخلوي ونتٌجة الزالة الجدار فؤن الحاجز بٌن البروتوببلزم والٌئة الخارجٌة هو‬
‫الؽشاء الببلزمً والذي ٌتم من خبلله انتقال المواد الذائبة من الخلٌة النباتٌة والٌها‪ ,‬وٌجب وض البروتوببلست المنزوع‬
‫فً وسط ؼذائً ذو اوزموزٌة متعادلة (‪ ) iso tonic‬كما هو الحال فً الخبلٌا الحٌوانٌة للحفاظ علٌها من التلؾ أذ أن‬
‫وض الخبلٌا المفصولة فً محلول ذو أوزموزٌة عالٌة ٌحصل أنكماش للبروتوببلست أما أذا وض البروتوببلست فً‬
‫أوزموزٌه منخفضة للمحلول المنظم ٌحصل أنتفاخ للبروتوببلست وقد ٌنفجر‪ ,‬من المواد المستخدمة فً تنظٌم األوزموزٌة‬
‫فً األوساط الزراعٌة هً (السكروز‪ ,‬السوربٌتول‪ ,‬المانٌتول)‪.‬‬
‫‪Un‬‬

‫س‪ /‬ماهً تطبٌقات عزل وزراعة البروتوببلست ؟‬

‫ج‪/‬‬
‫‪ive‬‬

‫ٌمكن حث البروتوببلست المعزول على األندماج للحصول على نباتات هجٌنة جسمٌة ‪ Cybrid‬من خبلل دمج‬ ‫‪.1‬‬
‫‪rs‬‬

‫بروتوببلستٌن أو أكثر للحصول على الهجن الجسمٌة‪Heterocaryon‬‬

‫‪ity‬‬

‫دراسة نمو وتطور الجدار الخلوي فً األبحاث المتعلقة بفسٌولوجٌا النبات وبٌان العوامل المإثرة فً بناء الجدر‪.‬‬ ‫‪.2‬‬
‫‪of‬‬

‫ٌمكن تضمٌن البروتوببلست بمكونات الخلٌة المختلفة كـ‪ ,DNA‬الماٌتوكوندرٌا والببلستٌدات كذلك أدخال البكترٌا‬ ‫‪.3‬‬
‫‪Di‬‬

‫والفاٌروسات فً بحوث وقاٌة النبات فً الهندسة الوراثٌة‪.‬‬

‫‪ya‬‬

‫ٌمكن أستخدام هذه التقنٌة فً أنتاج هجن مقاومة لروؾ معٌنة كؤن تكون ملوحة أو أصابة مرضٌة معٌنة‪.‬‬ ‫‪.4‬‬
‫‪la‬‬
‫‪-‬‬‫‪Co‬‬

‫س‪ /‬ماهً المصادر النباتٌة المستخدمة فً عزل البروتوببلست؟‬

‫‪lle‬‬

‫أو ‪ /‬هل جمٌ خبلٌا النبات متاحة لعزل البروتوببلست؟‬

‫‪ge‬‬

‫ج‪ /‬نعم‪ ,‬جمٌ خبلٌا النبات الحٌة متاحة لعزل البروتوببلست لكن تقنٌآ جمٌ األنسجة تختلؾ فٌما بٌنها فً عملٌة العزل‬
‫‪of‬‬

‫من حٌث صعوبة العزل وٌمكن بٌان هذه األنسجة المستخدمة هذا المجال وحسب سهولة فصلها‪ .‬وكما ٌؤتً‪-:‬‬
‫‪A‬‬

‫خبلٌا مٌزوفٌل األوراق‪ /‬تعد هذه الخبلٌا مفككة وتحتوي مسافات بٌنٌة وٌمكن فصلها بسهولة ألنتاج البروتوببلست‪.‬‬ ‫‪.1‬‬
‫‪gr‬‬

‫المزارع الخلوٌة (المعلقة)‪ /‬تعد المزارع الخلوٌة سرٌعة النمو من أكثر المصادر مبلئمة لعزل البروتوببلست وعادة ترشح‬ ‫‪.2‬‬
‫‪icu‬‬

‫المزارع الخلوٌة عبر مرشحات خاصة للتخلص من كتل الخبلٌا الكبٌرة قبل البدء بعملٌة الفصل‪.‬‬
‫‪ltu‬‬

‫الجذور واألعضاء الخازنة‪ /‬أستعملت الجذور واألعضاء الخازنة كجذور البطاطا ودرناتها والبصل وؼٌرها من النباتات‬ ‫‪.3‬‬
‫‪re‬‬

‫ٌعاب على هذه المص در عند أستخدام الطرٌقة األنزٌمٌة لؤلستخبلص أنها تحتاج مدة أطول من أستخبلص البروتوببلست‬
‫من السٌقان‪.‬‬
‫حبوب اللقاح‪ /‬تم فصل البروتوببلست من حبوب اللقاح فً العدٌد من النباتات أذ أن حبوب اللقاح تتوفر بؤعداد كبٌرة جدآ‬ ‫‪.4‬‬
‫ومتجانسة وراثٌآ وتوفر فرصة جٌدة لدراسة الطفرات والتؽٌرات الخلوٌة المختلفة وأن الدمج الطبٌعً بٌن بروتوببلستٌن‬
‫معزولٌن من حبوب اللقاح ٌإدي الى تكوٌن هجٌن طبٌعً لعدد مضاعؾ من الكروموسوم (‪ ,)2n‬أما جدار الخبلٌا لحبة‬
‫اللقاح فٌكون معقد من الناحٌة التركٌبٌة وٌكون مقاوم لؤلنزٌمات الهاضمة لذلك ٌجب أن تعالمل حبوب اللقاح بــمواد‬
‫مإكسدة خاصة قبل التحضٌن بالمحالٌل األنزٌمٌة وأن المرحلة التطورٌة لحبة اللقاح فً النبات األم تعتبر مإثرة فً نجاح‬
‫الفصل والزراعة لحبة اللقاح ومن األفضل أستخدام حبوب لقاح فً مرحلة الخلٌة األمٌة لحبة اللقاح أو فً مرحلة‬
‫الرباعٌات‪.‬‬
‫وعمومآ ٌمكن القول أن البروتوببلست ٌمكن فصله من جمٌ أجزاء النبات الحٌة األ أن نجاح العملٌة ٌعتمد بدرجة كبٌرة‬
‫على نوع النبات والحالة الفسٌولوجٌة له‪.‬‬

‫‪16‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫م‪ /‬طرق فصل البرتوببلست‬

‫أوآل‪ /‬الطرٌقة المٌكانٌكٌة‬
‫ٌتم خبلل هذه الطرٌقة عزل الخبلٌا المراد فصل بروتوببلستها وتوض فً محلول ٌعمل على تحفٌز أنكماش البروتوببلست‬
‫ثم ٌجري قص الجدار الخلوي ٌدوٌآ وتحت الفحص المهري ثم ٌعمد الى أنهاء أنكماش البروتوببلست وسحب‬
‫البروتوببلست بواسطة أبر خاصة وٌختصر أستخدام هذه الطرٌقة على الخبلٌا الحاوي على فجوات كبٌرإة لسهولة أحداث‬
‫األنكماش الضروري لعملٌ ة األستئصال (العزل) ٌمكن الحصول على هذه األنسجة من األجزاء الخازنة مثل الجذور‬
‫واألوراق الحرشفٌة‪.‬‬
‫مزاٌا هذه الطرٌقة‬
‫عدم تعرض البروتوببلست المعزول الى العمل األنزٌمً والذي قد ٌإثر سلبآ فً حٌوٌة البروتوببلست المعزول‪.‬‬

‫مساوئ هذه الطرٌقة‬

‫تحتاج الى جهد ووقت للحصول على البروتوببلست المعزول فضآل عن أن كمٌة البروتوببلست المعزول تكون قلٌلة وال‬
‫‪Un‬‬

‫ٌمكن أستخدام هذه الطرٌقة لفصل البروتوببلست من الخبلٌا المرستٌمٌة البالؽة‪.‬‬

‫‪ive‬‬

‫ثانٌآ‪ /‬الطرٌقة األنزٌمٌة‬

‫‪rs‬‬

‫فً هذه الطرٌقة ٌتم أضافة بعض األنزٌمات الهاضمة السٌلولٌز والبكتنٌز التقً تقوم بهضم الجدار الخلوي أذ ٌقوم أنزٌم‬
‫‪ity‬‬

‫السٌلولٌز بهضم السلٌلوز وأنزٌم البكتنٌز بهضم مادة البكتٌن لتحرٌر البروتوببلست من الجدار ‪ ,‬أن تركٌز المحلول‬
‫‪of‬‬

‫األنزٌمً ومدة الحضن للخبلٌا الالموضوعة فً المحلول ٌعتمد على نوع النبات ونوع النسً المستخدم‪ ,‬على سبٌل المثال‬
‫‪Di‬‬

‫فؤن تركٌز ‪ %2‬من أنزٌم السلٌلوز م ‪ %3‬من أنزٌم البكتٌن الى ‪ 51-41‬دقٌقة تعد كافٌة لفصل البروتوببلست من‬
‫‪ya‬‬

‫األنسجة للعدٌد من النباتات م أنها ؼٌر مبلئمة لؤلنسجة الخازنة‪.‬‬

‫‪la‬‬

‫مزاٌا هذه الطرٌقة‬

‫‪-‬‬‫‪Co‬‬

‫أنها تعطً بروتوببلست مفصول بؤعداد كبٌرة وٌمكن أستخدامها بمدى واس من النباتات واألنسجة المختلفة وسهولة‬
‫‪lle‬‬

‫أجرائها‪.‬‬
‫‪ge‬‬

‫مساوئ هذه الطرٌقة‬

‫‪of‬‬
‫‪A‬‬

‫قد تتضرر نسبة من البروتوببلست المفصول‪.‬‬

‫‪gr‬‬
‫‪icu‬‬

‫م‪ /‬تنقٌة البروتوببلست‬

‫‪ltu‬‬

‫ٌحوي المحلول الناتج من فصل البروتوببلست بالطرٌقة األنزٌمٌة على بقاٌا الخبلٌا المختلفة وخاصة الببلستدٌدات‬
‫‪re‬‬

‫الخضراء والخبلٌا التً لم ٌتم هضم جدرانها والبروتوببلست المهشمة جزئٌآ باألضافة الى البروتوببلست السلٌم وٌتم‬
‫التخلص من هذه الشوائب بطرق مختلفة أذ تضاؾ محالٌل لؽسل البروتوببلست وٌجري ترسٌب هذه المواد بواسطة جهاز‬
‫الطرد المركزي وٌجب مراعاة أوزموزٌة المحلول أثناء عملٌة التنقٌة للمحافظة على حٌوٌة البروتوببلست‪.‬‬

‫م‪ /‬أختبار حٌوٌة البروتوببلست‬

‫من المهم جدآ بعد فصل البروتوببلست وتنقٌته معرفة نسبة البروتوببلست ؼٌر المتضررة والحٌة من أجل نجاح زراعته‬
‫على الوسط الؽذائً‪ ,‬ومن هذه الطرق‪-:‬‬

‫‪ .1‬الجرٌان الساٌتوببلزمً‪.‬‬
‫‪ .2‬أستعمال صبؽة أٌفان الزراقاء‪Evan Blue .‬‬

‫‪17‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬
‫‪ .3‬قٌاس فعالٌة التنفس والبناء الضوئً‪.‬‬
‫‪ .4‬قٌاس التؽٌر فً الحجم‪,‬‬

‫م‪ /‬طرق زراعة البروتوببلست‬

‫طورت العدٌد من الطرق لزراعة البروتوببلست فً السنوات الماضٌة وتعتمد كل طرٌقة علة نوعٌة البروتوببلست‬
‫والؽرض من زراعته ومن هذه الطرق‪-:‬‬
‫‪.1‬الزراعة على األكار‪ /‬فً هذه الطرٌقة تزرع البروتوببلست مباشرة بعد الفصل أو أن البروتوببلست المفصولة تزرع فً‬
‫أوساط ؼذائٌة سائدة من أجل تكوٌن الجدار الخلوي وبعدها تزرع على طبقة من األكار والخطوات المتبعة عادة فً هذه‬
‫الطرٌقة هً مزج البروتوببلست المفصولة م وسط الزراعة بنسبة ‪ %1‬وٌكون الوسط حاوي على األكار وبدرجة حرارة‬
‫‪ 45-41‬م ثم ٌؤخذ كمٌة قلٌلة من الخلٌط الحاوي على األكار والبروتوببلست وتنشر فوق سطح الوسط الؽذائً الصلب أو‬
‫تنشر مباشرة فً أطباق البتري وبعد مرور مدة سوؾ ٌنمو البروتوببلست مكونآ أنقسامات خلوٌة على مواق مختلفة من‬
‫األكار المتصلب بعد أ نخفاض درة حرارته‪.‬‬
‫‪Un‬‬

‫كما فً الشكل االتً‪-:‬‬

‫‪ive‬‬
‫‪rs‬‬

‫‪.2‬الزراعة فً القطرة‪ /‬تستخدم هذه الطرٌقة عادة فً زراعة البروتوببلست فً المعلق الخلوي توض قطرة من‬
‫‪ity‬‬

‫البروتوببلست المعلق فً الوسط الؽذائً حٌث توض هذه القطرة فً حفرة فً الشرائح المعدة لهذا الؽرض وٌمن التبخر‬
‫‪of‬‬

‫من هذه القطرة بوض القلٌل من الزٌت حول ؼطاء الشرٌحة والذي ٌؽطً هذه القطرة وعادة توض الشرائح فً أطباق‬
‫‪Di‬‬

‫بتري حاوٌة على محلول المانٌتول لموازنة الرطوبة الداخلٌة‪.‬‬

‫‪ya‬‬

‫كما فً الشكل األتً‪-:‬‬

‫‪la‬‬
‫‪-‬‬‫‪Co‬‬
‫‪lle‬‬

‫‪.3‬الزراعة فً الؽرؾ الدقٌقة‪ /‬تستخدم هذه الطرٌقة بصورة شائعة فً زراعة البروتوببلست المفصولة وٌمكن من خبلل‬
‫‪ge‬‬

‫هذه الطرٌقة مبلحظة التطور فً نمو البروتوببلست من خبلله وهناك عدة تصامٌم معتمدة لهذه الؽرؾ والمهم فً هذه‬
‫‪of‬‬

‫الطرٌقة أن البروتوببلست ٌوض فً ؼرؾ مهٌئة لهذا الؽرض وٌوض الزٌت الطبٌعً كؽطاء لمن التبخر‪ .‬وقد وجد فً‬
‫‪A‬‬

‫دراسات حدٌثة أن أستخدام صبػ األظافر بدل الزٌت كان أفضل فً من التبخر ونجاح الزراعة‪.‬‬
‫‪gr‬‬

‫كما فً الشكل األتً‪-:‬‬

‫‪icu‬‬

‫م‪ /‬نمو البروتوببلست‬

‫‪ltu‬‬

‫بعد زراعة البروتوببلست فً الطرٌقة المبلئمة وعلى الوسط الؽذائً المبلئم ٌبدء تكون الجدار الخلوي بحدود ‪3-2‬أٌام‬
‫‪re‬‬

‫بعدها تحدث عملٌة تحفٌز لؤلنقسام الخلوي لتكوٌن مجموعة من الخبلٌا المنقسمة والتً تكون الكالس وهذا الكالس‬
‫ٌستحث ألنتاج األعضاء أو األجنة‪.‬‬

‫‪18‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫م‪ /‬أنتاج نباتات خالٌة من األمراض الفاٌروسٌة‬

‫تصاب العدٌد من النباتات خاصة المكثرة خضرٌآ بواحدة أو أكثر من المسببات المرضٌة فعبل سبٌل المثال نبات الشلٌك‬
‫(الفراولة) تهاجم بـ‪ 62‬فاٌروس وأحٌاء الماٌكروببلزما مما ٌجعل من الضروري تبدٌل النبات األم سنوٌآ بنباتات سلٌمة وقد‬
‫التإدي األصابة الفاٌروسٌة الى موت النباتات فالعدٌد منها التظهر أعراضه على النبات وأن وجود هذه الفاٌروسات ٌعمل‬
‫على تقلٌل الحاصل وخفض نوعٌته وقد بٌنت بعض الدراسات أن كمٌة الحاصل أزدادت بنسبة ‪ 300%‬بعد أستبدال األمهات‬
‫المصابة بؤخرى سلٌمة‪.‬‬
‫أن الفاٌروسات التنتقل عن طرٌق البذور وبذلك ٌمكن الحصول على نباتات سلٌمة من أمهات مصابة من خبلل زراعة‬
‫البذور األ أن المشكلة فً ذلك أن بعض النباتات المكثرة بالبذور وتختلؾ وراثٌآ عن النبات األم كما أن هناك العدٌد من‬
‫النباتات التعطً بذورآ فً القطر (العراق) ونظرآ ألن معظم النباتات البستنٌة تكثر بوسائل خضرٌة لذا ٌصبح من‬
‫الضروري أختٌار نباتات سلٌمة خالٌة من األصابات المرضٌة وجعلها كنبات وأكثارها خضرٌآ‪.‬‬
‫‪Un‬‬

‫‪/‬طرق أنتاج النباتات الخالٌة من الفاٌروسات‬

‫‪ive‬‬

‫‪ .1‬المعاملة الحرارٌة‪ٌ /‬تم معاملة النبات األم بدرجات حرارة تصل الى ‪38‬م بؤستخدام الهواء الحار بوض هذه النباتات فً‬
‫صور خاصة وترف درجة الحرارة تدرٌجٌآ لحٌن الوصول الى هذه الدرجة وٌمكن أستخدام الماء الحار أذ توض فٌه‬
‫‪rs‬‬
‫‪ity‬‬

‫األنسجة المراد زراعتها نسٌجٌآ بعد فصلها عن النبات أذ ٌمكن القضاء على الكثٌر من الفاٌروسات فً هذه الطرٌقة ومدة‬
‫التعرض تعتمد على نوع النبات ونوع النسٌج ومن العوامل المهمة فً نجاح هذه الطرٌقة أن ٌكون النبات بصحة جٌدة‬
‫‪of‬‬

‫لكً ٌستطٌ مقاومة أرتفاع درجات الحرارة وأن ٌكون التعرض بالتدرٌج وم ذلك وجد أن العدٌد من الفاٌروسات تقاوم‬
‫‪Di‬‬

‫درجات الحرارة العالٌة وتصبح هذه الطرٌقة ؼٌر فعالة‪.‬‬

‫‪ya‬‬
‫‪la‬‬
‫‪-‬‬

‫‪ .2‬زراعة المرستٌم القمً‪ /‬أستخدمت هذه الطرٌقة فً أنتاج العدٌد من السبلالت الخالٌة من األصابة الفاٌروسٌة أذ ٌتم‬
‫‪Co‬‬

‫أستئصال المرستٌم القمً بطول الٌتجاوز ‪ 1‬ملم وزراعته على أوساط ؼذائٌة مناسبة لٌتم أنتاج نباتات سلٌمة من األصابة‬
‫‪lle‬‬

‫الفاٌروسٌة وقد بٌنت العدٌد من الدراسات نجاح وكفاءة هذه الطرٌقة للتخلص من الفاٌروسات وكلما كان حجم المرستٌم‬
‫‪ge‬‬

‫المفصول صؽٌرآ قلت أحتمالٌة تواجد الفاٌروسات فٌه وزادت معه نجاح زراعته والعكس صحٌح‪ ,‬وبذلك ٌكون حجم‬
‫‪of‬‬

‫المرستٌم المفصول صؽٌرآ بدرجة ٌكون خالً من الفاٌروسات وكبٌرآ بدرجة ٌعطً نسبة نجاح معقولة وهناك بعض‬
‫‪A‬‬

‫الدراسات التً أجرٌت بٌنت وجود أحتمالٌة لعدم التمكن من القضاء على الفاٌروسات بنسبة ‪.%111‬‬
‫‪gr‬‬
‫‪icu‬‬

‫س‪ /‬ماهً األسباب المحتملة لخلو المرستٌم القمً من الفاٌروسات؟‬

‫‪ltu‬‬

‫ج‪/‬‬
‫‪re‬‬

‫عدم وجود األنسجة الوعائٌة فً األنسجة المرستٌمٌة بوصفها ممرآ ألنتقال الفاٌروسات عبرها فً أنسجة النبات‪.‬‬ ‫أ‪.‬‬
‫المستوٌات العالٌة من األوكسٌن فً قمة النبات قد تثبط تضاعؾ الفاٌروس‪.‬‬ ‫ب‪.‬‬
‫ا لفعالٌة البنائٌة العالٌة فً الخبلٌا المرستٌمٌة النشطة األنقسام التسمح للفاٌروس بالتضاعؾ‪.‬‬ ‫ت‪.‬‬
‫المجموعة المبطلة لفعالٌة الفاٌروسات فً جسم النبات أذا توفرت فؤنها تكون بؤعلى فعالٌتها فً المرستٌم مقارنة‬ ‫ث‪.‬‬
‫بالمناطق األخرى‪.‬‬

‫‪ .3‬زراعة الكالس‪ /‬لٌس كل الخبلٌا الموجودة فً كال س مشتق من أنسجة مصابة تحمل المسبب المرضً فقد وجد أن ‪%41‬‬
‫من الخبلٌا المفردة المفصولة مٌكانٌكٌآ من كالس نبات التبػ المصاب بفاٌروس ‪ TMV‬تحتوي على الفاٌروس وقد تؤكد‬
‫فعلٌآ خلو الخبلٌا من الفاٌروس من خبلل توالد العدٌد من النباتات الخالٌة من هذا الفاٌروس من الكالس المستحث من نبات‬
‫مصاب كما وتم توالد النباتات الخالٌة من الفاٌروس من كالس متكون على طرؾ الفرع فً العدٌد من األنواع النباتٌة‪.‬‬
‫*أن السببٌن الرئٌسٌٌن المحتملة لخلو بعض خبلٌا الكالس من الفاٌروس هً‪-:‬‬
‫أ‪ .‬عدم قدرة الفاٌروس مجارات التوالد السرٌ للخبلٌا المنقسمة أثناء نمو الكالس‪.‬‬

‫‪19‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬
‫ب‪ .‬أكتساب بعض الخبلٌا مقاومة فاٌروسٌة من خبلل التؽٌٌر فً المكونات الوراثٌة فً الخلٌة‪.‬‬
‫*قد لوحظ أن الخبلٌا المقاومة لؤلصابة الفاٌروسٌة قد توجد متجاورة م خبلٌا حساسة فً األنسجة األم‪.‬‬

‫*ٌمكن التخلص من الفاٌروسات بؤستخدام أكثر من طرٌقة أي تعرض النبات األم لدرجة الحرارة ثم زراعة المرستٌم القمً‬
‫ألنتاج النباتات بشكل مباشر أو تحفٌز نشوء الكالس وتخصصه بالطرق ؼٌر المباشرة‪.‬‬
‫‪Un‬‬
‫‪ive‬‬
‫‪rs‬‬
‫‪ity‬‬
‫‪of‬‬
‫‪Di‬‬
‫‪ya‬‬
‫‪la‬‬
‫‪-‬‬‫‪Co‬‬
‫‪lle‬‬
‫‪ge‬‬
‫‪of‬‬
‫‪A‬‬ ‫‪gr‬‬
‫‪icu‬‬
‫‪ltu‬‬
‫‪re‬‬

‫‪21‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫م‪ /‬زراعة حبوب اللقاح والمتوك‬

‫ٌعد الحصول على سبلالت متجانسةمن النباتات خطوة أساسٌةفً العملٌات البستنٌة لمربً النبات وٌتم ذلك بؤجراء عملٌة‬
‫التلقٌح الذاتً لعدة أجٌال لضمان الحصول على مستوى معٌن من التجانس الوراثً لهذه النباتات وبتطور زراعة األنسجة‬
‫أصبح باألمكان الحصول على نباتات تحوي على نصؾ العدد الكروموسومً لمدة قصٌرة مقارنة بالطرق التقلٌدٌة المتبعة‬
‫وتكون هذه النباتات عقٌمة وٌمكن تحوٌلها الى نباتات خصبة بمضاعفة عدد الكروموسومات بؤستخدام مادة كولشسٌن‪.‬‬
‫تعود نجاح هذه الزراعة الى عام ‪1953‬م أذ تمكن الباحث ‪ Tulecke‬من تحفٌز تكون الكالس من حبوب اللقاح وٌحمل‬
‫نصؾ العدد من الكروموسومات وفً هذه الحالة ٌحور نمو حبة اللقاح لتكوٌن األنبوب اللقاحً الى األنقسام الخلوي‬
‫وأعادة تماٌز خبلٌاه الى أجنة تنمو فٌما بعد الى نباتات كاملة‪.‬‬

‫س‪ /‬ماهً العوامل المإثرة فً زراعة المتك وحبوب اللقاح ؟‬

‫ج‪.1 /‬مرحلة األنقسام األختزالً لحبة اللقاح‪.‬‬
‫‪Un‬‬

‫‪.2‬الحالة الفسلجٌة للنبات األم‪.‬‬

‫‪ive‬‬

‫‪.3‬مكونات الوسط الؽذائً‪.‬‬

‫‪.4‬ظروؾ الحضن‪.‬‬
‫‪rs‬‬
‫‪ity‬‬

‫*أن نجاح هذه الطرٌقة الزال ٌواجه بعض الصعوبات أذ أن الكثٌر من النباتات لم تستجٌب لهذه الزراعة لذلك لجئ العدٌد‬
‫‪of‬‬

‫من الباحثٌن الى زراعة المتك بالكامل أذ ٌنشق هذا المتك بعد مرور ‪ 6-4‬أسابٌ لٌظهر الكالس أو فً بعض األحٌان تظهر‬
‫‪Di‬‬

‫أجنة مباشرة من حبوب اللقاح‪.‬‬

‫‪ya‬‬

‫ومن محاذٌر هذه الطرٌقة‪ -:‬هو أن النبٌتات قد تنشؤ من جدار المتك باألضافة الى نشإها من حبوب اللقاح أذ تحمل العدد‬
‫‪la‬‬
‫‪-‬‬

‫الكامل من الكروموسومات وبذلك ٌصعب تمٌزها وفصلها‪.‬‬

‫‪Co‬‬
‫‪lle‬‬

‫س‪ /‬ماهً العوامل المإثرة على تكوٌن النباتات من زراعة المتك وحبوب اللقاح؟‬
‫‪ge‬‬

‫ج‪ .1/‬مرحلة تكون حبة اللقاح‪ /‬تعد المرحلة المثلى لزراعة حبوب اللقاح وتتباٌن بؤنواع النباتات والتوجد مرحلة مثلى‬
‫‪of‬‬

‫لجمٌ النباتات فقد تكون قبل األنقسام األعتٌادي األول أو بعده لبعض النباتات مثل نبات التبػ فً حٌن فً نبات الشعٌر‬
‫‪A‬‬

‫تكون الزراعة مبكرة جدآ فً مرحلة الخلٌة الخلٌة الواحدة‪.‬‬

‫‪gr‬‬
‫‪icu‬‬

‫‪.2‬عامل جدار المتك‪ /‬تفشل حبوب لقاح بعض النباتات فً تكوٌن األجنة عند زراعتها دون جدار المتك حتى فً المراحل‬
‫‪ltu‬‬

‫المثلى لتطورها وأن حاجة حبوب اللقاح الى أن تتطور الى أجنة الٌعتمد على وجود جدار المتك لنفس النوع وأنما ٌمكن‬
‫‪re‬‬

‫األستعاضة عنه بجدار متك مؤخوذ من نبات آخر وكذلك ود أن أضافة خبلصات جدار المتك له تؤثٌر مشابه لوجود المتك فً‬
‫تطور حبة اللقاح‪.‬‬

‫‪.3‬نوع النبات والظروؾ البٌئٌة‪ /‬تختلؾ النباتات فٌما بٌنها فً أستجابة حبوب اللقاح لها للنمو أذ ٌكون قسم منها مستجٌب‬
‫والقسم األخر ال ٌستجٌب وهً صفة وراثٌة وأن الظروؾ التً ٌنمو فٌها النبات األم تإثر فً حالته الفسلجٌة وفً أستجابة‬
‫هذا النبات للزراعة وبذلك فؤن النباتات التً ٌراد زراعة حبوب اللقاح منها ٌجب أن تخض الى عناٌة خاصة كً تعطً‬
‫نتائج جٌدة‪.‬‬

‫‪21‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬

‫م‪ /‬مشاكل زراعة األنسجة‬

‫تقسم المشاكل التً تواجه المزارع النسٌجٌة الى‪-:‬‬
‫‪ .1‬المشاكل العامة‬
‫‪ .2‬المشاكل الفسٌولوجٌة‬

‫أوآل‪ /‬المشاكل العامة‪ -:‬وتشمل‬

‫التــــــــلوث ‪ / Contamination‬وٌنتج التلوث من أشٌاء عدة (مصادر التلوث) وهً‪-:‬‬ ‫‪.1‬‬
‫تلوث ناتج من المنفصل النباتً ‪explant‬‬ ‫أ‪.‬‬
‫التلوث الناتج من الزجاجٌات وأدوات الزراعة‬ ‫ب‪.‬‬
‫التلوث الناتج من األجهزة المستخدمة فً تحضٌر األوساط‬ ‫ت‪.‬‬
‫التلوث الناتج من الجو المحٌط من هواء وأتربة وجراثٌم‬ ‫ث‪.‬‬
‫التلوث الناتج من الفنٌٌن العاملٌن فً مجال زراعة األنسجة‬ ‫ج‪.‬‬
‫‪Un‬‬

‫التلوث الناتج من أجهزة التعقٌم مثل األوتوكلٌؾ‬ ‫ح‪.‬‬

‫‪ive‬‬

‫التلوث الناتج من عدم نقاوة الكٌمٌاوٌات المستخدمة‬ ‫خ‪.‬‬

‫‪rs‬‬
‫‪ity‬‬

‫تعانً بعض النباتات من عدمقدرتها على تكوٌن الجذور‬ ‫‪.2‬‬

‫صعوبة أقلمة النبٌتات النسٌجٌة وموت قسم من هذه النباتات‬ ‫‪.3‬‬
‫‪of‬‬

‫بعض النباتات تحتاج وقت طوٌل أو تجد صعوبة فً تكوٌن الكالس مثل التفاح والثوم وٌكون هذا الكالس أن تمكن‬ ‫‪.4‬‬
‫‪Di‬‬

‫الباحثون من أنتاجه صعب التخصص‬

‫‪ya‬‬

‫حدوث تؽٌرات فً التركٌب الوراثً للنسٌج النباتً أبتداءآ من التعقٌم والقط والزراعة على البٌئة‪.‬‬ ‫‪.5‬‬
‫‪la‬‬
‫‪-‬‬
‫‪Co‬‬

‫ثانٌآ‪ /‬المشاكل الفسٌولوجٌة‪ /‬تتعرض مزارع األنسجة النباتٌة لبعض المشاكل الفسٌولوجٌة التً البد من عبلجها‪.‬‬
‫‪lle‬‬

‫‪ .1‬أصفرار القمة النامٌة ‪Shoot tip necrosis‬‬

‫‪ge‬‬

‫‪ .2‬الظاهرةالزجاجٌة ‪Vitrification – Glassiness‬‬

‫‪of‬‬

‫‪ .3‬ظاهرة التلون البنً ‪Browning‬‬

‫‪A‬‬ ‫‪gr‬‬

‫‪ .1‬أصفرار القمة النامٌة‪/‬تعد هذه الظاهرة من العٌوب الفسٌولوجٌة الشائعة المتعلقة بمزارع األنسجة وٌإدي هذا األصفرار‬
‫‪icu‬‬

‫الى‪-:‬‬
‫‪ltu‬‬

‫أ‪ .‬موت القمة النامٌة‬

‫‪re‬‬

‫ب‪ .‬بالحاالت الشدٌدة تتحول األفرع المتضاعفة الى اللون البنً ثم تموت‬

‫*وقد أقترح من بعض الباحثٌن سبب األصفرار‪-:‬‬

‫‪ .1‬أستخدام األؼطٌة الشدٌدة األحكام بؤوعٌة الزراعة ٌعمل على تراكم الؽازات وٌقل معدل التنفس حٌث تتراكم األحماض‬
‫األمٌنٌة واألوكزاالت أذ تتحرر األوكزاالت م الكالسٌوم وتجعله ؼٌر متوفر للنبات فتظهر أعراض نقص الكالسٌوم وٌحدث‬
‫األصفرار‪.‬‬
‫‪ .2‬وجد معدل النتح ٌقل فً األوعٌة محكمة الؽلق أذ ٌبطئ من أنتقال الكالسٌوم لؤلنسجة النامٌة‪.‬‬
‫لعبلج ظاهرة األصفرار نقوم بما ٌؤتً‪-:‬‬
‫‪ .1‬زٌادة تركٌز الكالسٌوم فً البٌئة‪.‬‬
‫‪ .2‬زٌادة التبادل الؽازي فً أوعٌة الزراعة وذلك بتقلٌل شدة األحكام‪.‬‬

‫‪22‬‬
 ‫د‪ .‬أٌــاد عـــاصً‬ ‫زراعة األنســجة النبـاتـٌة‬ ‫المرحلة الرابعة ‪ /‬قسم البستنة‬
‫‪.2‬الظاهرة الزجاجٌة‪ٌ/‬سبب الضؽط الجذري بعض المشاكل الفسٌولوجٌة للمحاصٌل المزروعة فً بٌئات مكٌفة فٌما ٌسمى‬
‫بالظاهرة الزاجٌة أو البلل بالماء وتزداد هذه الظاهرة عند نقص الكالسٌوم وتزداد الظاهرة بالعوامل التً تساعدعلى نمو‬
‫المجموع الجذري على حساب المجموع الخضري أذ تصبح النباتات عصٌرٌة ثم تصفر هذه النباتات وقد تموت‪.‬‬
‫من العوامل التً تإثر فً هذه الظاهرة هً‪-:‬‬
‫نوع النبات المؤخوذ منه الجزء النباتً‪.‬‬ ‫‪.1‬‬
‫حجم وعاء الزراعة‪ ,‬الحجم الكبٌر ٌزٌد من هذه الظاهرة‪.‬‬ ‫‪.2‬‬
‫نوع البٌئة (الوسط الزراعً) صلبة أم سائلة‪ ,‬البٌئة السائلة تزٌد من الظاهرة‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫نوعٌة وتركٌز الساٌتوكانٌن فً الوسط الؽذائً‪ ,‬فقد وجد أن البنزاٌن أدنٌن فً البٌئة ٌزٌد من الظاهرة‪.‬‬ ‫‪.4‬‬
‫تركٌز الكاروبوهٌدرات‪.‬‬ ‫‪.5‬‬

‫*بٌنت بعض الدراسات أن مادة األكار هً المسإلة عن الظاهرة الزجاجٌة أ أنه ٌإثر فً جهد الماءوبزٌادة تركٌز األكارفً‬
‫البٌئة كان عامل أساسً فً زٌادة هذه الظاهرة‪ ,‬وقد لوح على النباتات المصابة بهذه الظاهرة أن أوراقها عرٌضة وسمٌكة‬
‫‪Un‬‬

‫وعصٌرٌة وؼضة أو متجعدة ذات تشوهات واضحة بسبب نقص عملٌات اللكننة لؤلوعٌة والخبلٌا‪.‬‬
‫‪ive‬‬

‫‪ .3‬التلون البنً‪ٌ /‬حدث تلون البٌئة (الوسط الزراعً) باللون البنً عند زراعة عدد من النباتات نسٌجٌآ وٌنتج هذا التلون من‬
‫‪rs‬‬

‫أكسدة المركبات الفٌنولٌة ؼٌر الملونة الى ملونة ذات لون بنً أو أرجوانً ونتٌة األكسدة تتكون مادة ‪ Guinones‬التً‬
‫‪ity‬‬

‫تعتبر سامة لؤلنسجة والتً قد تإدي الى موتها وٌعتقد الباحثون أن التثبٌط الناتج من اللون البنً ٌرج الى ربط الفٌنوالت‬
‫‪of‬‬

‫م البروتٌن وم ذلك تفقد األنسجة نشاط بعض األنزٌمات أو تعمل كمعاون أنزٌمً لبعض أنزٌمات األكسدة من ‪IAA‬‬
‫‪Di‬‬

‫واالوكسدٌز والبٌروكسدٌز وؼٌرها‪.‬‬

‫‪ya‬‬
‫‪la‬‬

‫س‪ /‬ماهً الطرق المتبعة لتقلٌل المواد الفٌنولٌة فً البٌئة (الوسط الزراعً) ؟‬
‫‪-‬‬
‫‪Co‬‬

‫ج‪/‬‬
‫‪lle‬‬

‫صؽر حجم المنفصل النباتً فٌجبؤن ٌكون الجزء المزروع صؽٌرآ بقدر األمكان فً المنفصل النباتً وتقلٌل الجرح م‬ ‫‪.1‬‬
‫‪ge‬‬

‫أستخدام أدوات حادة جدآ للقط ‪.‬‬

‫أستخدام مضادات األكسدة أما بنق األجزاء النباتٌة فٌها أو فً البٌئة أو كلٌهما أذ تعمل مضادات األكسدة على من بلمرة‬ ‫‪.2‬‬
‫‪of‬‬

‫الكٌتون فً الفٌنول وهذا ٌقلل فرصة تفاعل الفٌنول م البروتٌن‪ ,‬وتستخدم عدة مواد لهذا الؽرض منها‪-:‬‬
‫‪A‬‬ ‫‪gr‬‬

‫بولً فٌنٌل بٌرولٌدون‪PVP‬‬ ‫أ‪.‬‬

‫‪icu‬‬

‫سستٌن هاٌدروكلورٌد‬ ‫ب‪.‬‬

‫‪ltu‬‬

‫حامض األسكوربك (فٌتامٌن ‪111 )C‬ملػ‪/‬لتر‬ ‫ت‪.‬‬

‫‪re‬‬

‫حامض السترٌك ‪111‬ملػ‪/‬لتر‬ ‫ث‪.‬‬

‫تقلٌل األمبلح فً البٌئة (الوسط الزراعً) أذ أن تقلٌل األمبلح ومنها الناٌتروجٌن ٌقلل من تؤثٌر الفٌنوالت‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫تقلٌل وجود الهرمونات فً الوسط الؽذائً أذ أن وجود األوكسٌن والساٌتوكانٌن ٌزٌد من المواد الفٌنولٌة وأن رفعها من‬ ‫‪.4‬‬
‫الوسط ٌقلل الضرر لحٌن أنتهاء هذه األفرازات لتنقل بعدها الى وسط ٌحوي الهرمونات‪.‬‬
‫دور الفحم المنشط أذ وجد أن أضافته للوسط الؽذائً بمقدار ‪ 3-1‬ؼم‪/‬لتر ٌقلل المواد الفٌنولٌة وذلك بؤدمصاص هذه‬ ‫‪.5‬‬
‫الفٌنوالت‪.‬‬
‫مستوى األضاءة وجد أن تقلٌل األضاءة ٌقلل من بناء المركبات الفٌنولٌة ‪.‬‬ ‫‪.6‬‬
‫النقل السرٌ للنبٌتات المزروعة على أوساط طازجة جدٌدة حتى أنتهاء أفراز هذه الفٌنوالت‪.‬‬ ‫‪.7‬‬

‫‪23‬‬