University of Kufa

Faculty of Pharmacy
Department of clinical laboratory science

Qualitative tests of
Carbohydrate
Practical Biochemistry
Third class -1st course

Lecturer noor R.Ali

 .‫الكربوهيدرات هي املصدر الرئيسي للطاقة التي تستخدمها الكائنات الحية‬

Introduction
(‫• الجهاز الهضمي البشري يغير الكربوهيدرات الجلوكوز )سكر الدم‬

.‫• يتم تعريف الكربوهيدرات على أنها ألدهيدات متعددة الهيدروكسيل أو كيتونات متعددة الهيدروكسيل‬

(‫ )ومن هنا جاء اسم هيدرات الكربون‬n (CH2O) ‫• معظم وليس كل الكربوهيدرات لها الصيغة‬

.‫ الجلوكوز‬-D ‫ يتم استخدام‬،‫• في جسم اإلنسان‬

ose– ‫• السكريات البسيطة تنتهي بـ‬

• Carbohydrates are the key source of energy used by

living things.
• Human digestive system changes carbohydrates
glucose(blood sugar)
• Carbohydrates are defined as the polyhydroxy
aldehydes or polyhydroxy ketones.
• Most , but not all carbohydrate have a formula H O
C
(CH2O)n (hence the name hydrate of carbon) H C OH

• In human body, the D-glucose is used. HO C H

H C OH
• Simple sugars ends with –ose H C OH

CH2OH

D-glucose
 ‫تصنيف‬

(‫ )وحدة واحدة‬: ‫ السكر البسيط‬-1

‫تحتوي السكريات األحادية على وحدة‬

.‫واحدة من السكريات األحادية‬

Classification
،‫ الجاالكتوز‬،‫ الفركتوز‬،‫)الجلوكوز‬
(‫ والزيلوز‬،‫أرابينوز‬

:(‫السكر املركب )أكثر من واحد‬-2

‫ تحتوي السكريات الثنائية على‬-

‫وحدتني من السكريات األحادية‬
.(‫)الالكتوز والسكروز واملالتوز‬

1-Simple sugar: (one unit) ‫ السكريات قليلة التعدد تحتوي على‬-

‫ ال يوجد‬.‫ وحدة سكر أحادي‬12-3
‫حرا في الطبيعة‬

Monosaccharides contain one monosaccharide unit. ‫ يمكن أن تحتوي السكريات املتعددة‬-

‫ وحدة سكريات‬12 ‫على أكثر من‬

(glucose,fructose,galactose,arabinose,&xylose) ‫ )النشا والدكسترين‬.‫أحادية‬

(‫والجليكوجني والسليلوز‬

2-Complex sugar (more than one): ‫ يمكن تفكيك الكربوهيدرات املعقدة‬-

‫إلى وحدات سكر أصغر من خالل‬
‫عملية تعرف بالتحلل املائي‬

- Disaccharides contain two monosaccharide units.(lactose,

sucrose & maltose)
- Oligosaccharides contain 3-12 monosaccharide units. Is not
present free in nature
- Polysaccharides can contain more than 12monosaccharide
units. (starch,dextrin,glycogen&cellulose)
- Complex carbohydrates can be broken down into smaller
sugar units through a process known as hydrolysis.
Monosaccharide
‫السكريات األحادية‬

‫يمكن تصنيفها حسب عدد ذرات‬

‫الكربون‬ ‫ثالثي‬
(C-3)…….‫جليسرالديهيد‬
‫( رباعيات‬C-4)………‫إريثروز‬
‫( بنتوس‬C-5)…….‫ريبوز و زيلوز‬

 They can be classified by the number of carbon atoms ‫( سداسي‬C-6) ):

‫• يتم تصنيفها أيضًا على أنها‬

 trioses (C-3)…….glyceraldehyde .‫ألدوهيكسوز‬ ‫هكسوز كيتوني أو‬

 tetroses (C-4)………erythrose ‫يحتوي الهكسوز الكيتوني على‬

‫مجموعة كربونيل مرتبطة بمجموعتني‬
R ‫تحتويان على مجموعة‬
 pentoses (C-5)…….ribose&xylose ‫أكثر‬ ‫هيدروكسيل واحدة أو‬.

 hexoses (C-6): ‫يحتوي ألدوهيكسوز على‬

‫مجموعة ألدهيد طرفية باإلضافة إلى‬
‫ مجموعة‬R ‫ التي تحتوي على‬-OH.
• also be classified as ketohexoses or aldohexoses.
 A ketohexoses contains a carbonyl group attached to
two R groups having one or more hydroxyl groups. H
C
O

H C OH

An aldohexoses contains terminal aldehyde group in addition HO C H

to R group containing -OH.

H C OH

H C OH

CH2OH

Daldose
-glucose
 Reducing and non reducing ‫تقليل وعدم تقليل السكريات‬

sugars ‫ إذا كان األكسجني املوجود على‬:‫• السكر املختزل وغير املختزل‬
‫الكربون الشاذ في السكر غير مرتبط بأي بنية أخرى )ألدهيد حر أو‬
‫( فإن السكر يمكن أن يعمل كعامل مختزل ويسمى سكر‬gp ‫كيتون‬
.‫مختزل‬

• Reducing and non reducing sugar :If the oxygen on the

anomeric carbon of a sugar is not attached to any other
structure, (free aldehyde or ketone gp)that sugar can act
as a reducing agent and is termed a reducing sugar.

v
v Anomeric
carbon

reducing
Non-reducing
 :‫اختبار موليش‬

‫ يعطي السكريات األحادية نتيجة إيجابية‬.‫• هذا االختبار خاص بجميع الكربوهيدرات‬

Molisch ’s test:
.‫ بينما تتفاعل السكريات الثنائية والسكريات بشكل أبطأ‬،‫سريعة‬

.‫• التعرف على الكربوهيدرات من الجزيئات الكبيرة األخرى من الدهون والبروتينات‬

‫( بتجفيف البنتوز لتكوين الفورفورال وتجفيف‬H2SO4) ‫ يقوم كاشف االختبار‬:‫• املبدأ‬

.‫هيدروكسي ميثيل فورفورال‬5 ‫السداسيات لتكوين‬

‫نفثول املوجود في‬-‫هيدروكسي ميثيل فورفورال أيضًا مع ألفا‬-5‫• يتفاعل الفورفورال و‬

.(‫كاشف االختبار إلنتاج منتج أرجواني )حلقة‬

• This test is specific for all carbohydrates. Monosaccharide

gives a rapid positive test, Disaccharides and polysaccharides
react slower.
• To identify the carbohydrate from other macromolecules
lipids and proteins.
• Principle: The test reagent(H2SO4) dehydrates pentose to
form furfural and dehydrates hexoses to form 5-
hydroxymethyl furfural.
• The furfural and 5- hydroxymethyl furfural further react with
α-naphthol present in the test reagent to produce a purple
product (ring)
• .
α-naphthol

Purpel color

furfural

α-naphthol
Purpel color

5- hydroxymethyl
furfural
 ‫طريقة‬

‫• يتم وضع مل اثنني من محلول العينة‬

.‫في أنبوب اختبار‬

Method
‫• يضاف قطرتان من كاشف موليش‬
٪ 95 ‫ في‬αnapthol ‫)الذي يضاف‬
.(‫من اإليثانول‬

‫• يتم بعد ذلك صب املحلول ببطء في‬

‫ مل من حمض‬2 ‫أنبوب يحتوي على‬
،‫الكبريتيك املركز بحيث تتشكل طبقتان‬
‫وتنتج حلقة بنفسجية تظهر بني طبقة‬
.‫ والطبقة الحمضية‬CHO

• Two ml of a sample solution is placed in a test

tube.
• Two drops of the Molisch reagent (which α-
napthol in 95% ethanol) is added.
• The solution is then poured slowly into a tube
containing two ml of concentrated sulfuric acid so
that two layers form, producing violet ring appear
between CHO layer and acidic layer
 :‫اختبار بنديكت‬

.‫ يستخدم سريرياً للكشف عن نسبة الجلوكوز في البول‬.‫• يستخدم كاشف بنديكت كاختبار لوجود السكريات املختزلة‬

.‫ لديهم جميعًا مجموعة كربونيل تفاعلية مجانية‬.‫• جميع السكريات األحادية هي سكريات مختزلة‬

Benedict ’s test:
‫ السكريات الثنائية األخرى‬.‫• تحتوي بعض السكريات الثنائية على مجموعات كربونيل مكشوفة وتعمل أيضًا على تقليل السكريات‬
.‫مثل السكروز هي سكريات غير مختزلة ولن تتفاعل مع محلول بنديكت‬

‫ ال تقلل السكريات‬،‫ مثل النشا‬،‫• البوليمرات الكبيرة من الجلوكوز‬

• Benedict's reagent is used as a test for the presence of reducing

sugars. Is used clinically to detect of glucose in urine.
• All monosaccharides are reducing sugars; they all have a free
reactive carbonyl group.

• Some disaccharides have exposed carbonyl groups and are also

reducing sugars. Other disaccharides such as sucrose are non-
reducing sugars and will not react with Benedict's solution.

• Large polymers of glucose, such as starch, are not reducing

sugars
 ‫مبدأ‬

‫• تتفاعل كبريتات النحاس‬

‫( املوجودة في محلول‬CuSO4)
‫بنديكت مع إلكترونات مجموعة‬
‫األلدهيد أو الكيتون من السكر‬

Principle .‫املختزل في حالته األساسية‬

‫• تتم أكسدة السكريات املختزلة‬

‫بواسطة أيون النحاس في‬
‫املحلول لتكوين حمض‬
‫كربوكسيلي وترسب محمر من‬
‫أكسيد النحاس‬

• The copper sulfate (CuSO4) present in Benedict's

solution reacts with electrons from the aldehyde or
ketone group of the reducing sugar in basic condition.
• Reducing sugars are oxidized by the copper ion in

sucrose
lactose

glucose
solution to form a carboxylic acid and a reddish
precipitate of copper oxide.

reddish precipitate of copper

Method
‫طريقة‬

‫• يتم وضع مل واحد من محلول‬

.‫العينة في أنبوب اختبار‬

.‫ مل من كاشف بنديكت‬2 ‫• يضاف‬

‫• يتم بعد ذلك تسخني املحلول في‬

• One ml of a sample solution is placed in a test tube.

‫حمام مائي مغلي ملدة خمس‬
.‫دقائق‬

• Two ml of Benedict's reagent is added.

‫• يتم اإلشارة إلى االختبار‬
‫ تكوين راسب‬:‫اإليجابي عن طريق‬
‫محمر‬

• The solution is then heated in a boiling water bath for

five minutes.
• A positive test is indicated by: The formation of a reddish
precipitate.
Fehling test
• Fehling’s test is one of the most frequently used tests to
determine, estimate and identify the sugars which can be
both reducing or non-reducing in nature. The main
utilization of this test is for the differentiation between
functional groups of ketone and water-
soluble carbohydrates aldehyde
• Aldehydes tend to be oxidised and display positive
results. Ketones, except the alpha-hydroxy-ketones, do
not display any kind of reaction
‫اختبار فهلينج‬

‫• يعد اختبار فهلنج أحد االختبارات‬

‫األكثر استخدامًا لتحديد وتقدير‬
‫وتحديد السكريات التي يمكن أن‬
‫تكون ذات طبيعة مختزلة أو غير‬
‫ االستخدام الرئيسي لهذا‬.‫مختزلة‬
‫االختبار هو التمييز بني املجموعات‬
‫الوظيفية للكيتون وألدهيد‬
‫الكربوهيدرات القابلة للذوبان في‬
.‫املاء‬

‫• تميل األلدهيدات إلى األكسدة‬

،‫ الكيتونات‬.‫وتظهر نتائج إيجابية‬
‫ ال‬،‫باستثناء كيتونات ألفا هيدروكسي‬
‫تظهر أي نوع من التفاعل‬
Method
• Add 2 ml of fehlings solution in a test tube then ad drops
of CHO solution
• Place the tube in boiling water bath an observe the color
changing take place with in min.
• +ve test give colors (yellow , orange, red, & brown)
depend on the concentration of sugar ‫طريقة‬

‫ مل من محلول الفهنغز‬2 ‫• أضف‬

• -ve test …blue color unchanged ‫في أنبوب اختبار ثم أضف قطرات‬
CHO ‫من محلول‬

‫• ضع األنبوب في حمام ماء مغلي‬

.‫والحظ تغير اللون خالل دقيقة‬

‫ اختبار يعطي األلوان‬+ •

،‫ األحمر‬،‫ البرتقالي‬،‫)األصفر‬
‫والبني( حسب تركيز السكر‬

‫اللون األزرق دون تغيير‬...‫اختبار‬- •

Barfoed’s Test
• This test is performed to distinguish between reducing
monosaccharides, reducing disaccharides and non reducing
disaccharides.
Principle:
• Barfoed’s test used copper (II) ions in a slightly acidic medium
• Reducing monosaccharides are oxidized by the copper ion in
solution to form a carboxylic acid and a reddish precipitate of
copper (I) oxide within three minutes. Reducing disaccharides
undergo the same reaction, but do so at a slower rate.
• The nonreducing sugars give negative result.
‫اختبار بارفود‬

.‫• يتم إجراء هذا االختبار للتمييز بني السكريات األحادية املختزلة والسكريات الثنائية املختزلة وغير املختزلة‬

:‫مبدأ‬

ً‫( في وسط حمضي قليال‬II) ‫• اختبار بارفود استخدم أيونات النحاس‬

‫• تتم أكسدة السكريات األحادية املختزلة بواسطة أيون النحاس في املحلول لتكوين حمض كربوكسيلي وراسب محمر من‬
.‫ ولكن يتم ذلك بمعدل أبطأ‬،‫ يخضع اختزال السكريات الثنائية لنفس التفاعل‬.‫( خالل ثالث دقائق‬I) ‫أكسيد النحاس‬

.‫• السكريات غير املختزلة تعطي نتيجة سلبية‬

•.
Method
• Place one ml of a sample solution in a test tube.
• Add 3 ml of Barfoed's reagent
• Heat the solution in a boiling water bath for 6
minutes(after the 3 min check the tubes).
• Red ppt indicate +ev result
‫طريقة‬

‫• ضع مل واحد من محلول العينة في‬

.‫أنبوب اختبار‬

‫ مل من كاشف بارفويد‬3 ‫• أضف‬

‫• قم بتسخني املحلول في حمام مائي‬

‫ دقائق قم‬3 ‫ دقائق )بعد‬6 ‫مغلي ملدة‬
.(‫بفحص األنابيب‬

‫• جزء لكل تريليون باللون األحمر يشير‬

ev+ ‫إلى نتيجة‬
 Bial ’s test:

• This test is used to distinguish between

pentose and hexose monosacharides.

:‫اختبار بيال‬
‫• يستخدم هذا‬
‫االختبار للتمييز‬
‫بني السكريات‬
‫األحادية‬
‫البنتوزية‬
.‫والسداسية‬
 :‫مبدأ‬

‫ آثار من كلوريد الحديديك‬+ ‫• يستخدم اختبار بيال حمض الهيدروكلوريك املركز كحمض مجفف والريسورسينول‬
‫ يتفاعل الفورفورال أيضًا مع الريسورسينول‬.‫ يقوم كاشف االختبار بتجفيف البنتوز لتكوين فورفورال‬.‫ككاشف تكثيف‬
‫ بينما تنتج السداسيات منتج تكثيف بني‬،‫وأيون الحديد املوجود في كاشف االختبار إلنتاج منتج مزرق أو أخضر‬

Principle:
.‫موحل إلى رمادي والسكريات الثنائية صفراء‬

• Bial’s test uses concentrated HCl as a dehydrating acid and

resorcinol + traces of ferric chloride as condensation reagent.
The test reagent dehydrates pentoses to form furfural.
Furfural further reacts with resorcinol and the iron ion
present in the test reagent to produce a bluish or green
product, while hexoses yield muddy-brown to grey
condensation product and disaccharides are yellow.
Method
• Put 1ml of a sample solution in a test tube.
• Add 1ml of Bial's reagent (a solution of
resorcinol, HCl and ferric chloride) to each tube.
• Heat the tubes gently in hot water bath.

‫طريقة‬

.‫ مل من محلول العينة في أنبوب اختبار‬1 ‫• ضع‬

،‫ مل من كاشف بيال )محلول الريسورسينول‬1 ‫• أضف‬

.‫حمض الهيدروكلوريك وكلوريد الحديديك( إلى كل أنبوب‬

.‫• قم بتسخني األنابيب بلطف في حمام ماء ساخن‬

Seliwanoff's Test
• This test is used to distinguish between aldoses (like glucose)
and ketoses (like fructose).
• Sucrose may give +ve because of partial hydrolysis to glucose
and fructose
• Glucose give no color even after ten min.
‫اختبار سيليوانوف‬

‫• يستخدم هذا االختبار‬

‫للتمييز بني األلدوز )مثل‬
‫الجلوكوز( والكيتوز )مثل‬
.(‫الفركتوز‬

ve + ‫• قد يعطي السكروز‬
‫بسبب التحلل املائي الجزئي‬
‫إلى الجلوكوز والفركتوز‬

‫• الجلوكوز ال يعطي أي لون‬

.‫حتى بعد عشر دقائق‬
 Method
• One half ml of a sample solution is placed in a test tube.
• Two ml of Seliwanoff's reagent (a solution of resorcinol and
HCl) is added.
• The solution is then heated in a boiling water bath for 2-5 ‫طريقة‬

minutes. ‫• يتم وضع نصف مل من محلول العينة‬

.‫في أنبوب اختبار‬

‫ مل من كاشف سيليوانوف‬2 ‫• يضاف‬

‫)محلول الريسورسينول وحمض‬
.(‫الهيدروكلوريك‬

‫• يتم بعد ذلك تسخني املحلول في حمام‬

.‫ دقائق‬5-2 ‫مائي مغلي ملدة‬

-Ve + Ve
(pale yellow) (orange color
Or deep red )
Anthrone Test

• is a general test for carbohydrates that provides

a rapid and convenient method for
quantification of carbohydrates that are either
free or bound to any lipids or proteins due to
the intensity of the color is proportional to the
amount of carbohydrates
‫اختبار أنثرون‬

‫• هو اختبار عام للكربوهيدرات يوفر طريقة‬

‫سريعة ومريحة لتقدير كمية الكربوهيدرات‬
‫التي تكون إما حرة أو مرتبطة بأي دهون أو‬
‫بروتينات بسبب شدة اللون التي تتناسب مع‬
‫كمية الكربوهيدرات‬
 ‫مبدأ‬

‫ موجودًا في صورة حر كسكر متعدد أو أحادي السكاريد أو مرتبط كما هو الحال في بروتني سكري أو شحمي‬CHO ‫• إذا كان‬
.‫ فإن الحمض املركز في كاشف األنثرون يقوم أوالً بتحليله مائيًا إلى مكون سكر أحادي‬،‫سكري‬

‫• يقوم الحمض املركز بعد ذلك بتحفيز تجفيف السكريات األحادية لتكوين فورفورال )من البنتوز( أو هيدروكسيل فورفورال )من‬

Principle
.(‫السداسيات‬

.‫• يتكثف الفورفورال أو الهيدروكسيل فورفورال مع جزيئني من النفثول من كاشف األنثرون ليشكل مركبًا مزرقًا أخضر اللون‬

‫ نانومتر في مقياس الطيف الضوئي أو في‬620 ‫• يمكن بعد ذلك قياس كمية املعقد عن طريق قياس امتصاصية الطول املوجي‬
.‫مقياس ألوان املرشح األحمر‬

• if CHO is present in the form of free as poly- or monosaccharide or

bound as in a glycoprotein or a glycolipid, the concentrated acid in
the Anthrone reagent first hydrolyses it into component
monosaccharide.
• concentrated acid then catalyzes the dehydration of the
monosaccharides to form furfural (from pentoses) or hydroxyl
furfural (from hexoses).
• The furfural or hydroxyl furfural formed condenses with two
molecules of naphthol from the Anthrone reagent to form a blue-
green complex.
• The complex can then be quantified by measuring the absorbance of
620 nm wavelength in a spectrophotometer or in a red filter
colorimeter.
 :‫اختبار اليود‬

‫ اختبار السكريات‬.

Iodine test: ‫ األميلوز )سلسلة خطية( مع‬I2

‫يعطي بشكل حلزوني‬

‫سلسلة عديد السكاريد ملفوفة واليود‬

.(‫)مركب األميلوزيودين‬
 Test for polysaccharide .

 Amylose (Linear chain) with I2 give helically

coiled polysaccharide chain and iodine (amylose-
iodine complex).

I2
sugar

Amylose-iodine
complex
 ‫ عند معالجته باليود‬CCC ‫يشكل النشا والدكسترين مركب ألوان‬

‫• األميلوز املوجود في النشا هو املسؤول عن اللون األزرق الكثيف‬

‫• ال يشكل عديد السكاريد ذو السالسل املتفرعة من الجلوكوز )األميلوبكتني والجليكوجني( حلزونًا خطيًا بسهولة‬
‫وينتج مركب يود ملون أقل كثافة‬

‫• الدكسترين يعطي اللون األحمر‬

‫ األحمر والبني‬... ‫• الجليكوجني‬

‫• السليلوز والسكريات األحادية والسكاريد ال تعطي أي لون‬

• Starch and dextrin form ccc color complex when treated with ‫اليود‬

iodine
• Amylose in starch is responsible for the intense blue color
• Polysaccharide with branched chains of glucose (amylopectin
& glycogen) don’t readily form linear helix and yield less
intensely colored iodine complex
• So dextrin gives a red color
• Glcogen …red-brown
• Cellulose, monosaccharide& disaccharide give no color with
iodine
 ‫طريقة‬

Method ‫ مل( سكر‬1) •

‫ قطرة( كاشف اليود‬2) •

‫• يشير التكوين الفوري للون‬

‫األزرق إلى وجود األميلوز‬
• (1ml) of sugar
• (2 drops) iodine reagent
• Immediate formation of blue color indicates
presence of amylose
 Acid \ heat Monosaccharide
Disaccharide or
(pentose or hexose)
polysaccharide

-3H2O

Phenolic derivatives
Ring formation
Colored complex (furfural derivatives )
 Test objective

Molisch test To identify the carbohydrate from other

macromolecules lipids and proteins

‫اختبار موليش‬
Benedict's test ‫اختبار بنديكت‬
Benedict's reagent is used as a test for the
presence of reducing sugars.
‫اختبار بارفود‬

‫اختبار بيال‬

Barfoed’s Test ‫اختبار سيليوانوف‬

to distinguish between reducing
‫التعرف على الكربوهيدرات من الجزيئات‬
monosaccharides, reducing disaccharides
‫الكبيرة األخرى من الدهون والبروتينات‬ and non reducing disaccharides.
‫يستخدم كاشف بنديكت كاختبار لوجود‬
.‫السكريات املختزلة‬

Bial’s Test ‫التمييز بني السكريات األحادية املختزلة‬

To distinguish between pentose
.‫والسكريات الثنائية املختزلة وغير املختزلة‬ monosaccharide and hexose
‫التمييز بني السكاريد األحادي البنتوز‬
‫والسكريات األحادية السداسية‬
monosaccharide
‫التمييز بني سكريات االلدوز والكيتون‬

Seliwanoff's Test To distinguish between aldose and ketone

sugars
 2- benedict ‘s Test : 3- barfoed ‘s Test :
1- Molish ‘s Test :
(for reducing suger) (for mono-suger)
(general test for carbohydrate)

(2ml) of suger (1ml) of suger (1 ml) of suger

(0.5 ml) molish reagent (2 ml) benedict reagent (3ml) barfoed reagent
(2 drops) H2SO4 (con.) on wall heat for (5min) in water bath heat for in water bath

Purple ring
arabinose Starch Sucrose Mono suger Di suger
(+) red (-) blue (-) green (+) red ppt (-) blue

4- bial ‘s Test : 5- seliwanoff ‘s Test : 6- iodine ‘s Test :

(for pentose suger) (for ketose suger) (for poly suger)

(1ml) of suger (0.5ml) of suger (1ml) of suger

(1 ml) bial reagent (2 ml) seliwanoff reagent (2 drops) iodine reagent
heat for in water bath heat for (5 min) in water bath

Arabinose Glucose fructose glucose Dextrin Starch

(+) green-blue (-) orange (+) red (-) yellow (+) red (+) blue