11/28/2023

Secondary Metabolites

Phân loại
• Là nhóm các hợp chất hữu có đa dạng và dường như không có
chức năng trực tiếp trong tăng trường và phát triển
• Có thể được gọi là secondary metabolites, secondary products, or
natural products.
• Chất chuyển hoá thứ sinh không có vai trò trực tiếp trong quang
hợp, hô hấp, vận chuyển, không tham gia quá trình tổng hợp
protein, lipid, carbohydate.
• Các chất thứ sinh không phổ biến ở tất cả các loài giống nhau mà
chỉ có trong một loài hay nhóm loài; khác primary metabolites
(axit amin, nucleotids, đường hay lipids)
• Các chất chuyển hoá thứ sinh được chia thành 3 nhóm là terpens,
phenolics và hợp chất chứa nitơ.

Vai trò của chất trao đổi thứ cấp

• Bảo vệ thực vật chống lại bị ăn bởi động vật ăn

cỏ và các mầm bệnh là vi khuẩn.
• Đóng vai trò là chất hấp dẫn cho các loài thụ
phấn và động vật phát tán hạt giống.
• Là tác nhân của sự cạnh tranh thực vật.
• Tầm quan trọng là nơi tạo ra các loại thuốc,
thuốc độc, hương liệu và vật liệu cho công
nghiệp.

1
 11/28/2023

Phòng vệ thực vật là sản phẩm của sự tiến hoá

• Thông qua tiến hoá phát sinh các đột biến di truyền,
CLTN thay đổi.
• Đột biến ngẫu nhiên trong con đường trao đổi chất làm
xuất hiện các chất mới có thể gây độc hoặc cản trở các vi
khuẩn gây bệnh.
• Các hợp chất bảo vệ làm tăng khả năng sinh sản thực vật
khiến chúng không trở thành thức ăn cho người, động vật.
• Lựa chọn phương thức với các thực vật có nồng độ chất
độc cao hay thấp

Vai trò của chất thực vật thứ sinh

• Chất chống oxi hoá
• Hoạt tính ức chế nitric oxide
• Ức chế hoạt động của các enzym chống oxi hoá
như xanthine oxidase, SOD, catalase
• Vai trò như chất dược độc học
• Tác động với quá trình apotosis
• Tác dụng như là chất kháng viêm, chống viêm
• Tác động với các bệnh hiểm nghèo như ung
thư, các bệnh truyền nhiễm...

2
 11/28/2023
IBO Exam Display https://195.70.4.105/jury/148/exam/4/

6 Tế bào, Phân tử và Vi sinh

Hình dưới đây minh họa một phần con đường shikimate, một phần của con đường tổng hợp các axit amin vòng thơm ở vi
khuẩn.

HO COO- COO- COO-

a b

O OH X O OH NADPH+H+ NADP+ HO OH
OH OH OH
Y
c
Z
COO- COO-

PO4 3- 2- O3 PO
COO-
2- O3 PO O 2- O3 PO OH
d
OH COO- OH

Con
Hãy chỉ ra các đường
phát Shkimate
biểu đúng tổng hợp axit amin vòng thơm ở vi khuẩn
hay sai
A. Trong phản ứng a, X là H2O.
A. Trong phản ứng a, X là H2O
B. TrongB.
phản ứngphản
Trong b, cơ chất
ứng bị
b,khử.
cơ chất bị khử
C. TrongC.
phản ứngphản
Trong C, Y là
c,ADP hoặc hoặc
Y là ADP GDP. GDP
D. Phản ứng
D. Pản phảndứng
d làứng là phản hóa cơ chất. hoá cơ chất
ứng photphoryl
photphoryl
A. True B. True C. False D. False

Original commentary
Correct answers
A true
A is a dehydration, the -OH group as well as a hydrogen are removed and form water.
B true
NADPH+H+ is a reducing agent. The oxidation number of the carbon of the carboxyl in the substrate changes from +2 to +1 in the product of b: this is a
reduction.
C false
GDP cannot phosphorylate substrates, Y represents here ATP.
D false
In d, a phosphate group is released as part of the condensation of the 2 substrates.
Terpen
Own commentary
• Terpenes hoặc terpenoids là lớp lớn nhất
• Chúng thường không hoà tan trong nước, được sinh
tổng hợp từ các chất trung gian Acetyl- CoA hoặc
glycolytic.
• Terpen được hình thành bởi sự kết hợp của các đơn
vị 5 carbon Isopren

8 of 52 8/21/2013 7:38 AM

Tecpenoid
• Là những hợp chất hữu cơ chứa C,H và O
• Bộ khung carbon gồm nhiều mắt xích giống
với khung carbon của isoprene

3
 11/28/2023

• Các yếu tố cấu trúc cơ bản của terpen đôi khi được
gọi là các đơn vị isopren vì terpen có thể phân hủy ở
nhiệt độ cao để tạo ra isopren:

• Terpen được phân loại theo số lượng đơn vị 5

carbon mà chúng chứa,
– Các terpen 10 carbon, gồm hai đơn vị C5, là monoterpen;
– Terpen 15 carbon (ba đơn vị C5) là sesquiterpen;
– Terpen 20 carbon (bốn đơn vị C5) là diterpen.
– Các terpen lớn hơn bao gồm triterpen (30 carbons),
tetraterpenes (40 carbons),
– polyterpenoids ([C5] n carbons, trong đó n> 8).

4
 11/28/2023

Sinh tổng hợp Terpen

• Terpen được sinh tổng hợp từ các chất chuyển
hóa chính theo ít nhất hai cách khác nhau.
• Trong con đường axit mevalonic: 3 phân tử
acetyl-CoA được nối với nhau từng bước để tạo
thành axit mevalonic .
• Chất trung gian 6 carbon sau đó được
pyrophosphorylated, decarboxylated và khử
nước để tạo ra isopentenyl diphosphate (IPP2).

• IPP kích hoạt việc hình thành 5 carbon của terpen.

• Gần đây, người ta cũng phát hiện ra rằng IPP cũng có thể
được hình thành từ các chất trung gian của glycolysis
hoặc chu trình khử carbon quang hợp thông qua một bộ
phản ứng riêng biệt gọi là con đường methylerythritol
phosphate (MEP) hoạt động trong lục lạp và các plastid
khác.
• Mặc dù các chi tiết vẫn chưa được minh chứng,
glyceraldehyd-3-phosphate và hai nguyên tử carbon có
nguồn gốc từ pyruvate dường như kết hợp với nhau để
tạo ra một chất trung gian và được chuyển đổi thành IPP.

5
 11/28/2023

Terpens với vai trò sinh trưởng và phát triển

• Ví dụ, gibberellin, một nhóm hormone thực vật quan trọng,
là diterpenes.
• Sterol là dẫn xuất triterpene là thành phần tinh túy của
màng tế bào, chúng ổn định bằng cách tương tác với
phospholipid.
• Các carotenoit đỏ, cam và vàng là các tetraterpen có chức
năng là các sắc tố phụ trong quang hợp và bảo vệ các mô
quang hợp khỏi sự quang hóa. Axit abscisic hormone là một
loại C15 được tạo ra do sự thoái hóa của tiền chất caroten.
• Các polyterpene chuỗi dài là dolichol có chức năng vận
chuyển đường trong thành tế bào và tổng hợp
glycoprotein.
• Các chuỗi bên có nguồn gốc từ terpene, chẳng hạn như
chuỗi bên phytol của diệp lục, giúp cố định các phân tử
nhất định trong màng

6
11/28/2023

7
11/28/2023

8
11/28/2023

9
11/28/2023

10
 11/28/2023

Terpens bảo vệ chống lại động vật ăn cỏ

• Là độc tố ngăn chặn nhiều loài côn trùng và

động vật có vú ăn thực vật.
– Ví dụ, các este monoterpene được gọi là
pyrethroid xảy ra trong lá và hoa.
– Pyrethroid tự nhiên và tổng hợp đều là những
thành phần phổ biến trong thuốc trừ sâu thương
mại vì độ bền thấp trong môi trường và độc tính
của chúng đối với động vật có vú.

Saponin

• Saponin là glycoside steroid và triterpene, có đặc

tính giống như xà phòng. Sự hiện diện của cả hai
yếu tố hòa tan lipid (steroid hoặc triterpene) và
hòa tan trong nước (đường) trong một phân tử
mang lại đặc tính tẩy rửa.
• Độc tính của saponin được cho là kết quả của
khả năng hình thành phức chất với sterol.
• Saponin có thể cản trở sự hấp thu sterol từ hệ
thống tiêu hóa hoặc phá vỡ màng tế bào sau khi
được hấp thụ vào máu.

11
 11/28/2023

• Trong số các hợp chất terpen không bay hơi, chống động
vật ăn cỏ là các limonoid, một nhóm triterpen (C30) được
biết đến như là chất đắng trong trái cây có múi.
• Có lẽ yếu tố ngăn chặn côn trùng ăn mạnh nhất được biết
đến là azadirachtin, một loại limonoid phức tạp từ cây
neem (Azadirachta indica) của Châu Phi và Châu Á.
Azadirachtin là một chất ngăn chặn thức ăn đối với một số
côn trùng với liều lượng thấp tới 50 phần tỷ và nó gây ra
nhiều tác dụng độc hại.
• Nó có tiềm năng đáng kể như là một tác nhân kiểm soát
côn trùng thương mại vì độc tính thấp đối với các bà mẹ và
một số chế phẩm có chứa azadirachtin hiện đang được bán
trên thị trường Bắc Mỹ và Ấn Độ.

• Vai trò terpen dễ bay hơi trong bảo vệ thực vật.

• Trong ngô, bông, thuốc lá hoang dã và các loài khác, một số
monoterpen và sesquiterpen được sản xuất và phát ra chỉ
sau khi bắt đầu ăn côn trùng. Những chất này đẩy lùi động
vật ăn cỏ và thu hút thiên địch, bao gồm cả côn trùng ăn
thịt và ký sinh trùng, tiêu diệt côn trùng ăn thực vật.
• Do đó, terpen dễ bay hơi không chỉ tự vệ, mà còn kêu gọi
sự giúp đỡ phòng thủ từ các cơ quan khác.
• Khả năng của thực vật để thu hút kẻ thù tự nhiên của côn
trùng ăn thực vật cho thấy hứa hẹn là một phương tiện mới
về mặt sinh thái, kiểm soát dịch hại

12
11/28/2023

13
11/28/2023

14
11/28/2023

15
 11/28/2023

Phenolic compounds
• Thực vật sản xuất một lượng lớn sản phẩm thứ
cấp có chứa nhóm phenol có chứa nhóm hydroxy
trên vòng thơm

• Phenol là nhóm không đồng nhất về mặt hoá học

với gần 10.000 chất. Một số hoà tan trong dung
môi, một số axit cacboxilic tan trong nước và một
số khác là các polymer lớn không tan

16
11/28/2023

17
11/28/2023

18
 11/28/2023

Hợp chất flavonoid

• Khung cơ sở của flavonoid
• Các flanonoid còn gọi dẫn xuất của 2- phenyl
chroman (flavan). Có cấu trúc khung C6-C3-C6
gồm 2 vòng benzen A,B và 1 dị vòng C

19
11/28/2023

20
11/28/2023

21
11/28/2023

22
11/28/2023

23
11/28/2023

24
11/28/2023

25
11/28/2023

26
11/28/2023

27
 11/28/2023

Phenylalanine là chất trung gian sinh tổng hợp

các phenolics
Chất phenol thực vật được sinh tổng hợp bởi một
số con đường khác nhau và do đó tạo thành một
nhóm không đồng nhất từ quan điểm trao đổi chất.
Hai con đường cơ bản có liên quan: con đường axit
shikimic và con đường axit malonic.
Con đường axit shikimic tham gia vào quá trình
sinh tổng hợp hầu hết các phenol thực vật.
Con đường axit malonic, mặc dù là một nguồn
quan trọng của các sản phẩm phenol trong nấm và
vi khuẩn, nhưng ít có ý nghĩa ở thực vật bậc cao.

• Con đường axit shikimic chuyển đổi các tiền chất carbohydrate đơn
giản có nguồn gốc từ quá trình glycolysis và con đường phose-
pentose thành các axit amin thơm.
• Một trong những chất trung gian của con đường là axit shikimic, đã
đặt tên cho toàn bộ chuỗi phản ứng này. Thuốc diệt cỏ glyphosate
phổ biến, phổ biến (có sẵn trên thị trường như Roundup) giết chết
thực vật bằng cách chặn một bước trong con đường này.
• Con đường axit shikimic được gửi trước ở thực vật, nấm và vi
khuẩn nhưng không được tìm thấy ở động vật.
• Động vật không có cách nào để tổng hợp ba axit amin thơm,
phenylalanine, tyrosine và tryptophan, đây là những chất dinh
dưỡng thiết yếu trong chế độ ăn của động vật.

Hợp chất phenolic đơn giản được hoạt hoá bởi tia UV

• Chất phenolic đơn giản phổ biến trong thực vật có mạch.
Bao gồm
– Phenylpropanoids đơn giản, chẳng hạn như axit trans-cinnamic,
axit p-coumaric và các dẫn xuất của chúng, chẳng hạn như axit
caffeic, có khung xương phenylpropanoid cơ bản.
– Phenylpropanoid lactones (este mạch vòng) được gọi là
coumarin, với khung phenylpropanoid.
– Các dẫn xuất axit benzoic, có bộ xương C6 C1: được hình thành
từ phenylpropanoids bằng cách phân tách hai mảnh carbon từ
chuỗi bên

28
 11/28/2023

Có 4 nhóm chính của Flavonoids

• Các flavonoid là một trong những nhóm thuốc thực vật lớn nhất. Bộ khung carbon cơ bản của một
flavonoid chứa 15 nguyên tử C được sắp xếp thành hai vòng thơm được nối với nhau. Cấu trúc này
là kết quả của hai con đường sinh tổng hợp riêng biệt: con đường axit shikimic và con đường axit
malonic.

• Flavonoid được phân loại thành các nhóm khác nhau, chủ yếu dựa trên mức độ oxy hóa của cầu 3
C: anthocyanin, flavon, flavonol và isoflavone.
• Bộ khung carbon flavonoid cơ bản có thể có các nhóm thế. Các nhóm hydroxyl thường có mặt ở các
vị trí 4, 5 và 7, nhưng chúng cũng có thể được tìm thấy ở các vị trí khác. Đường rất phổ biến; trong
thực tế, phần lớn flavonoid tồn tại tự nhiên dưới dạng glycoside.
• Cả hai nhóm hydroxyl và đường làm tăng khả năng hòa tan trong nước của flavonoid, các nhóm thế
khác, như ete methyl hoặc các đơn vị isopentyl biến đổi, tạo ra flavonoid lipophilic (kỵ nước).
• Các loại flavonoid khác nhau tạo thành các chức năng rất khác.

29
11/28/2023

30
11/28/2023

31
11/28/2023

32
11/28/2023

33
11/28/2023

34
11/28/2023

35
11/28/2023

36
11/28/2023

37
11/28/2023

38
11/28/2023

39
11/28/2023

40
11/28/2023

41
 11/28/2023

PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

CHẤT CHUYỂN HOÁ THỨ SINH

1.4 Qui trình nghiên cứu các hợp chất thiên nhiên

42
 11/28/2023

Hình 2.2 Quy trình ngâm chiết Bán hạ roi [4]

2.4.3 Phương pháp thử hoạt tính sinh học
3 loại cao chiết với MetOH là : n-hexane, EA, DCM được dùng để thử hoạt
tính sinh học. Chúng tôi áp dụng phương pháp trong [2].
2.4.3.1 Phương pháp thử hoạt tính DPPH
1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) là chất tạo ra gốc tự do được dùng để
thực hiện mang tính chất sàng lọc tác dụng chống oxy hóa của các chất nghiên cứu.
Hoạt tính chống oxy hóa thể hiện qua việc làm giảm màu của DPPH, được xác định
bằng cách đo quang ở bước sóng l = 517 nm.
Pha dung dịch DPPH có nồng độ 1mM trong MetOH. Chất thử được pha
trong DMSO 100% sao cho nồng độ cuối cùng đạt được một dãy các nồng độ 128;
32; 8; 2; 0,5 mg/ml. Để thời gian phản ứng 30 phút ở 370C, đọc mật độ hấp phụ của

20
!

43
 11/28/2023

Bảng 1.2 So sánh các phương pháp tách chiết truyền thống [9]
Phương pháp Đặc điểm Ưu điểm Nhược điểm Ứng dụng

Ngâm là phương pháp lấy bột thực vật ngâm với Dễ dàng và Chất thải vẫn chứa Dùng để tách chiết P.
dung môi nhiệt độ phòng ít nhất 3 ngày để giải đơn giản dung môi guajava L, G. atriviridis,
phóng các chất phytochemical hòa tan. Sau đó, P. oleracea, C.caudatus,
hỗn hợp này được lọc qua màng lọc, nhiệt được M.oliefera
chuyển giao và các dung môi chiết sẽ xác định loại
Ngâm, truyền,
hợp chất chiết xuất.
thấm và sắc
Truyền và sắc có quy trình tương tự như quá trình
ngâm nhưng thời gian nhanh hơn.
Thẩm thấu có nguyên tắc tương tự 3 phương pháp
trên. Ở phương pháp này mẫu được ngâm trong 2
giờ.

Mẫu mịn được đặt trong một túi xốp hoặc "bao" Chỉ cần một Dễ cháy, tốn kém, Dùng để tách chiết A.
được làm từ giấy lọc hoặc xenlulô mạnh nằm lượng nhỏ gây ô nhiễm indica (Neem), M.
dung môi oliefera, C. asiatica
Chiết bằng máy trong buồng của thiết bị Soxhlet. Dung môi chiết
chiết Soxhlet xuất được đun nóng trong bình đáy, và bay hơi
vào buồng mẫu, ngưng tụ trong bình ngưng và nhỏ
giọt. Khi lượng chất lỏng tiếp cận cánh tay siphon,
dung dịch trong bình cạn và quá trình này tiếp tục.

Bảng 1.3 So sánh các phương pháp tách chiết hiện đại [9]
Phương pháp Đặc điểm Ưu điểm Nhược điểm Ứng dụng

Lò vi sóng tương tác với cực của vật liệu Thời gian tách chiết Hạn chế các hợp chất Dùng để chiết xuất
phân cực và cực có thể gây nóng ở gần giảm phenolic nhỏ triterpene từ
bề mặt của vật liệu và nhiệt được truyền Cải thiện sự phục hồi C.asiatica, D.hispida,
Chiết bằng lò vi bằng cách dẫn. A.paniculata
của chất phân tích
sóng (MAE)
MAE có thể được coi là phương pháp có
lợi cho các phân tử cực và dung môi có
hằng số điện môi cao.

Sử dụng sóng siêu âm từ 20 kHz đến Thời gian tách chiết Sóng siêu âm trên 20 Dùng để tách chiết W.
2000 kHz để tăng bề mặt tiếp xúc giữa nhanh. kHz có thể có ảnh somnifera, C.
dung môi và mẫu và độ thấm của thành Sử dụng ít dung môi hưởng đến các formosum
Chiết bằng sóng
tế bào. Như vậy tính chất của tế bào thay phytochemical hoạt
siêu âm (UAE) Chi phí thấp
đổi tế bào để giải phóng các hợp chất và động thông qua sự
tăng cường sự vận chuyển khối lượng hình thành của các gốc
của dung môi vào tế bào thực vật. tự do.

Phổ 1H-NMR của chất Stigmast-4-en-3-one)

44
 11/28/2023

Phổ 1H-NMR dãn rộng của chất TF1 (Stigmast-4-en-3-one)

Phổ 13C-NMR và phổ DEPT của chất TF1

45