Professional Documents
Culture Documents
Sản phẩm phục vụ mục đích phân lập bán tự động các axit nucleic (DNA bộ gen, DNA vi khuẩn, DNA/
RNA virus) từ nhiều loại mẫu lâm sàng bằng công nghệ hạt từ tính.
CẢNH BÁO! Việc xử lý và sử dụng không đúng mục đích có thể gây nguy hiểm và hư hỏng. Vì vậy,
chúng tôi yêu cầu bạn đọc qua các hướng dẫn sử dụng này và làm theo chúng một cách cẩn thận.
Luôn luôn giữ chúng tiện dụng. Để tránh thương tích cá nhân, hãy tuân thủ các hướng dẫn an
toàn.
Bạn có thể tìm thấy tất cả các phiên bản hướng dẫn sử dụng trên trang web của chúng tôi để tải xuống hoặc
Liên hệ:
Hỗ trợ kỹ thuật:
techsupport@invitek.com
NƯỚC ĐỨC
+ 49 30 9489 2908
BỒ ĐÀO NHA
Zona Industrial de Tondela, ZIM II, Lote 6, 3460-070 Tondela, Bồ Đào Nha
Bộ sản phẩm này tuân thủ QUY ĐỊNH (EU) 2017/746 về thiết bị y tế chẩn đoán in vitro. Nhưng nó không được sử dụng để chẩn đoán trong
ống nghiệm ở các quốc gia nơi QUY ĐỊNH (EU) 2017/746 về thiết bị y tế chẩn đoán trong ống nghiệm không được công nhận.
Thương hiệu: InviSorb®, PSP®, InviMag®,Eppendorf®. Các nhãn hiệu, nhãn hiệu đã đăng ký, v.v. được sử dụng trong tài liệu này, ngay
cả khi không được đánh dấu cụ thể như vậy, sẽ không được coi là không được pháp luật bảo vệ.
InviGenius®, InviMag®, InviSorb®, Invitationk®, InviTrap®, MSB®, PSP®, RTP® là các nhãn hiệu đã đăng ký của Invitationk Molecular
GmbH.
Machine Translated by Google
Mục lục
3. Tách chiết axit nucleic bằng InviMag® Universal Kit KF/96 .................................... ...... 9
3.1 Trước khi bắt đầu một giao thức.................................................................. ................................................................. 0,9
3.2 Lấy mẫu và bảo quản nguyên liệu ban đầu................................................................. ...................... 10
3.3.1 Huyết thanh, huyết tương, các dịch cơ thể không chứa tế bào khác ................................. ................... 11
4.1 Giao thức từng bước của KingFisherTM Flex ...................................... ...................... 16
4.4 Các ký hiệu sử dụng trên sản phẩm và ghi nhãn.................................................. ................... 20
Đảm bảo rằng bất kỳ ai sử dụng sản phẩm này đều đã nhận được hướng dẫn về các biện pháp an toàn chung dành
cho phòng thí nghiệm và thông tin an toàn được cung cấp trong tài liệu này.
• Khi và trong khi làm việc với hóa chất, luôn mặc quần áo bảo hộ, đeo găng tay dùng một lần và kính an
toàn. • Luôn thay đầu tip
pipet giữa các lần chuyển chất lỏng. Để tránh lây nhiễm chéo, chúng tôi
khuyên bạn nên sử dụng đầu tip pipet ngăn khí dung.
• Không tái sử dụng bất kỳ vật tư tiêu hao nào.
Trước khi xử lý hóa chất, hãy đọc và hiểu tất cả các bảng dữ liệu an toàn hiện hành (MSDS).
Những thứ này có sẵn trực tuyến tại www.invitek.com.
Vứt bỏ phần còn lại của bộ dụng cụ và chất lỏng thải theo quy định của quốc gia bạn, hãy tham khảo lại MSDS.
Invitationk Molecular chưa kiểm tra chất thải lỏng do bộ sản phẩm tạo ra để tìm các vật liệu lây nhiễm còn
sót lại. Việc chất thải lỏng bị nhiễm các chất lây nhiễm còn sót lại rất khó xảy ra nhưng không thể loại
trừ hoàn toàn. Vì vậy, chất thải lỏng phải được coi là có khả năng lây nhiễm và phải được xử lý, tiêu hủy
theo các quy định an toàn của địa phương.
Cụm từ rủi ro và an toàn của Cộng đồng Châu Âu dành cho các thành phần của InviMag® Universal
Kit/KF96 mà chúng áp dụng được liệt kê dưới đây:
Thông tin y tế khẩn cấp có thể được lấy 24 giờ một ngày từ infotrac, www.infotrac.net:
RNA mang 10 x 1,2 ml dung dịch làm việc/lọ 10 x 1,2 ml dung dịch làm việc/lọ
Proteinase K 10 x 1,1 ml dung dịch làm việc/lọ 10 x 1,1 ml dung dịch làm việc/lọ
-
Đĩa rửa giải 200 µl 5x2 tấm
Niêm phong lá 10 lá 10
• Nước không có DNase/RNase hoặc 1 x PBS để điều chỉnh thể tích mẫu
• 96 - 100 % ethanol (không biến tính) •
Isopropanol* •
Tùy chọn (đối với các mẫu hô hấp có độ nhớt cao): acetylcystein bão hòa (ACC)
dung dịch (200 mg/ml)
* Bộ công cụ đa năng InviMag® / KF96 được xác nhận bằng 2-Propanol; Rotipuran® >99,7%, pa, ACS, ISO
(Đơn hàng số 6752) từ Carl Roth
*
Các nhà cung cấp có thể có cho Isopropanol:
Thời hạn sử dụng: Tất cả các dung dịch đệm và các thành phần của bộ sản phẩm phải được bảo quản ở nhiệt độ phòng và có
thời hạn sử dụng như ghi trên nhãn gói bên ngoài của bộ sản phẩm.
Sau khi mở, các bộ phận riêng lẻ của bộ sản phẩm cũng như các bộ phận được chuẩn bị phù hợp trước lần sử dụng
đầu tiên có thời hạn sử dụng là 3 tháng.
Trước mỗi lần sử dụng, đảm bảo rằng tất cả các bộ phận đều ở nhiệt độ phòng. Nếu có kết tủa liên quan đến nhiệt
độ trong dung dịch, hãy hòa tan chúng bằng cách làm ấm cẩn thận (lên đến 30°C).
Wash Buffer M và Wash Buffer II: sau khi thêm etanol vào phải đậy kín và bảo quản ở nhiệt độ phòng.
Wash Buffer HLT và Binding Solution: sau khi thêm isopropanol, chúng phải được đậy kín và bảo quản ở nhiệt độ
phòng.
Carrier RNA: sau khi hòa tan trong nước không có DNase/RNase Carrier RNA phải được bảo quản ở -20°C.
Proteinase K: sau khi hòa tan trong nước không có DNase/RNase Proteinase K có thể được bảo quản ở nhiệt độ 2
-8 °C trong tối đa hai tháng. Để bảo quản lâu hơn, hãy giữ ở nhiệt độ -20°C, chỉ đông lạnh-rã đông một lần.
Lysozyme: Lysozyme đông khô phải được bảo quản ở nhiệt độ 2 - 8°C. Lysozyme hòa tan (nên chia mẫu) phải được
InviMag® Universal Kit/KF96 dùng để phân lập và tinh chế đồng thời bán tự động DNA bộ gen, DNA vi khuẩn và DNA/
Bộ sản phẩm có thể được sử dụng cho nhiều loại mẫu người, chẳng hạn như máu toàn phần tĩnh mạch tươi hoặc
đông lạnh được chống đông bằng EDTA hoặc citrate hoặc các chế phẩm huyết tương tương ứng, huyết thanh, chất
lỏng rửa từ gạc, đờm đã được xử lý trước, BAL, dịch tiết khí quản, vi khuẩn được nuôi cấy, dịch nổi từ dịch
huyền phù phân, dịch não tủy, dịch nổi nuôi cấy tế bào, vật liệu/mô sinh thiết,
InviMag® Universal Kit/KF96 được xác nhận để sử dụng trên thiết bị KingFisherTM Flex (Thermo Fisher Scientific ).
Đảm bảo chức năng và cấu hình chính xác của thiết bị theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Việc sử dụng thiết bị
không đúng cách có thể dẫn đến năng suất thấp hơn và có thể gây hại cho thiết bị.
Sản phẩm này không được thiết kế để sử dụng với các mẫu máu có chứa heparin. Sản phẩm này chỉ dành cho các
chuyên gia sử dụng, chẳng hạn như kỹ thuật viên phòng thí nghiệm, bác sĩ và nhà sinh học được đào tạo về kỹ
thuật sinh học phân tử và quy trình chẩn đoán trong ống nghiệm
Nguyên liệu ban đầu Năng suất Chất lượng Thời gian
lên đến 200 µl: • Tùy thuộc vào DNA bộ gen từ 40-60 phút,
máu: tùy theo
Huyết thanh, huyết tương, các chất mẫu (lưu trữ và
A260 : A280 phác đồ
dịch cơ thể không chứa tế bào nguồn)
1.8 – 2.1 (bao gồm cả ly giải)
khác, nước tiểu
phân
• vi khuẩn được nuôi cấy
Hiệu suất và chất lượng của axit nucleic tinh khiết phụ thuộc vào loại mẫu, nguồn mẫu, vận chuyển, bảo quản,
tuổi, hiệu giá virus và mẫu máu cũng phụ thuộc vào số lượng bạch cầu.
Để xác định hiệu suất, vui lòng lưu ý rằng axit nucleic được tinh chế bằng bộ này có chứa Carrier RNA (5 μg
trên 200 μl mẫu), chiếm phần lớn axit nucleic có trong dịch rửa giải.
Đặc biệt axit nucleic của virus từ vật liệu mẫu sinh học thường có nồng độ rất thấp và do đó hầu như không
thể định lượng được bằng phương pháp trắc quang. Nên sử dụng RT-PCR định lượng để xác định năng suất.
Bộ sản phẩm được xác nhận cho số lượng bạch cầu là 3x106 - 1x107 tế bào/ml. Số lượng tế bào quá cao có thể
dẫn đến những tác động không mong muốn trong quá trình tinh chế. Do đó, bạn nên coi khối lượng mẫu đầu vào là
một thông số trong quá trình thực hiện quy trình in vitro của mình.
giao thức chẩn đoán. Nếu cần, các mẫu có thể được pha loãng trước bằng nước không chứa PBS hoặc DNase/RNase
trước quá trình phân lập và tinh chế.
như kỹ thuật PCR, NGS, phương pháp lai và định loại HLA.
Các ứng dụng hạ nguồn phải được thực hiện theo thông số kỹ thuật của nhà sản xuất tương ứng.
Thiết bị KingFisherTM Flex sử dụng các thanh từ để vận chuyển các hạt thuận từ có axit nucleic liên kết qua các giai
đoạn chiết khác nhau: ly giải, liên kết, rửa và rửa giải. Quá trình tinh chế bán tự động cung cấp một phương pháp
có thể tái tạo để thu hồi các axit nucleic có độ tinh khiết cao.
1. Mẫu ly giải
Các mẫu được ly giải ở nhiệt độ cao. Quá trình ly giải được thực hiện với sự có mặt của Lysis Buffer HLT, Proteinase
K và lysozyme tùy chọn để phá vỡ thành tế bào vi khuẩn và tiêu hóa protein.
Việc bổ sung Carrier RNA là cần thiết để tăng cường và ổn định quá trình phục hồi DNA/RNA của virus và để tinh chế
Sau khi ly giải mẫu, thiết bị sẽ tạm dừng để điều chỉnh các điều kiện liên kết bằng cách thêm Binding Solution vào dịch
ly giải. Ngoài ra, giải pháp SNAP, chứa các hạt từ tính được phủ silica, cũng được thêm vào. Axit nucleic liên kết
Các chất gây ô nhiễm được rửa sạch một cách hiệu quả trong ba bước rửa bằng cách sử dụng Wash Buffer HLT, Wash Buffer
M và Wash Buffer II, trong khi axit nucleic vẫn liên kết với các hạt từ tính.
Axit nucleic được giải phóng khỏi hạt từ tính và được rửa giải trong 100 µl Elution Buffer M.
Khi sử dụng bộ sản phẩm lần đầu tiên, hãy đảm bảo tất cả các dung dịch đệm được chuẩn bị như chỉ định:
Wash Buffer HLT: Thêm 240 ml isopropanol 99,7% vào chai. Trộn kỹ, luôn đậy kín chai.
Wash Buffer M: Thêm 450 ml ethanol 96 -100% vào chai. Trộn kỹ, luôn đậy kín chai.
Wash Buffer II: Thêm 420 ml ethanol 96 -100% vào chai. Trộn kỹ, luôn đậy kín chai.
Carrier RNA: Hòa lại từng ống trong 1,2 ml nước không có DNase/RNase. Trộn kỹ cho đến khi hòa tan hoàn
toàn.
Proteinase K: Hòa lại từng ống trong 1,1 ml nước không có DNase/RNase. Trộn kỹ cho đến khi hòa tan hoàn
toàn.
Lysozyme: cho toàn bộ lọ bột Lysozyme vào chai Lysozyme Buffer. Trộn kỹ cho đến khi hòa tan hoàn
toàn. Đảm bảo chuẩn bị trực tiếp trước khi chiết lần đầu, sử dụng dung dịch mới chuẩn bị. Sau khi hòa tan,
chuẩn bị các phần mẫu và bảo quản ở -20°C cho đến khi tiếp tục
sử dụng.
Để xử lý dễ dàng hơn, chúng tôi khuyên bạn nên chuẩn bị hỗn hợp chính bao gồm Lysis Buffer HLT, Proteinase
K và Carrier RNA nếu cần. Khi chuẩn bị hỗn hợp gốc, nên chuẩn bị thể tích vượt quá tổng số phản ứng 5 %.
Luôn chuẩn bị hỗn hợp gốc mới và ngay trước khi sử dụng.
Phân lập DNA bộ gen, DNA vi khuẩn và DNA/RNA virus: Mỗi mẫu cần 200 µl
Lysis Buffer HLT, 20 µl Proteinase K và 20 µl Carrier RNA.
Tham khảo hướng dẫn của nhà sản xuất để xác định lượng kiểm soát chiết xuất tối ưu cho các ứng dụng tiếp
theo cụ thể.
Khối lượng kiểm soát chiết xuất thấp (DNA hoặc RNA) phải được kết hợp với Carrier RNA được cung cấp trong
một hỗn hợp. Các lọ chứa Carrier RNA chứa 1,2 ml dung dịch gốc. Thêm lượng axit nucleic kiểm soát chiết
tương ứng vào Carrier RNA, nếu cần thể tích lớn (> 25% tổng thể tích Carrier RNA), thay thế lượng nước
không có DNase/RNase thích hợp trong quá trình pha loãng Carrier RNA.
Ngoài ra, có thể thêm các biện pháp kiểm soát chiết xuất sau khi ly giải ở bước Binding.
Để có năng suất cao và có thể tái sản xuất, việc bảo quản mẫu đúng cách là điều cần thiết. Năng suất có thể thay đổi
tùy thuộc vào các yếu tố như sức khỏe của người hiến, tuổi mẫu, loại mẫu, vận chuyển và bảo quản.
Cần tránh lặp đi lặp lại các chu kỳ đóng băng-rã đông của mẫu để ngăn ngừa sự phân hủy axit nucleic. Nói chung, kết
quả tốt nhất thu được khi sử dụng mẫu mới. Nên xem xét hướng dẫn kỹ thuật, chẳng hạn như các tiêu chuẩn CEN/TS và
ISO về quy trình xét nghiệm trước để chẩn đoán phân tử theo IVDR như được nêu rõ trong G. Dagher, et al.
(https://doi.org/10.1016/j.nbt.2019.05.002).
Huyết thanh, huyết tương, các chất lỏng cơ thể không có tế bào khác: Có thể sử dụng huyết thanh hoặc huyết tương
lấy từ máu toàn phần từ tĩnh mạch (được xử lý bằng thuốc chống đông máu như EDTA hoặc citrate, nhưng không dùng
heparin), mẫu dịch khớp hoặc các chất dịch cơ thể không có tế bào khác có thể được sử dụng để chiết xuất. Máu toàn
phần không nên được khuấy trộn để tránh tan máu. Để yên các ống huyết thanh ít nhất 30 phút trước khi ly tâm. Làm
theo hướng dẫn của hệ thống thu thập máu để chuẩn bị huyết thanh hoặc huyết tương.
Nên tách huyết tương/huyết thanh bằng cách ly tâm trong vòng 12 giờ. Chất nổi phía trên thu được bằng cách sử dụng
hệ thống không có thiết bị tách gel phải được chuyển sang ống mẫu mới. Để bảo quản ngắn hạn, mẫu có thể được giữ trên
đá trong 1-2 giờ. Mẫu có thể được bảo quản ở -20°C trong tối đa 24 giờ. Để bảo quản lâu dài, nên đông lạnh mẫu theo
Chu kỳ đông lạnh-rã đông lặp đi lặp lại có thể ảnh hưởng tiêu cực đến tính nguyên vẹn của mẫu và gây ra sự biến tính/
kết tủa của protein, có khả năng dẫn đến giảm năng suất, chất lượng hoặc hiệu giá virus. Ngoài ra, chất kết tủa lạnh
hình thành trong chu kỳ rã đông-đông lạnh có thể gây ra vấn đề. Nếu thấy có kết tủa lạnh, ly tâm ở tốc độ 6,800 x g
trong 3 phút. Chất nổi phía trên trong suốt nên được sử dụng ngay lập tức.
Máu: Các mẫu máu (được ổn định bằng EDTA hoặc citrate nhưng không được heparin hóa) có thể được bảo quản ở nhiệt độ
phòng trong 2-3 giờ. Để bảo quản ngắn hạn (tối đa 24 giờ), mẫu phải được bảo quản ở 2-8°C. Để bảo quản lâu dài, nên
Gạc: Gạc
khô: chuẩn bị mẫu như mô tả trong phương pháp chuẩn bị mẫu tương ứng. Bảo quản khô ở nhiệt độ 4-8°C.
Gạc trong môi trường ổn định: chất lỏng ổn định có thể được xử lý dưới dạng dịch cơ thể không có tế bào.
Xin lưu ý rằng một số chất ổn định có thể làm giảm năng suất do không tương thích với hóa chất được sử dụng trong
bộ sản phẩm. Bảo quản theo yêu cầu của nhà sản xuất.
Mẫu phân: Các mẫu chứa DNase và RNase có thể nhanh chóng gây suy thoái DNA và RNA. Vì vậy, mẫu phải được bảo quản
Vi khuẩn nuôi cấy: Vi khuẩn sau khi nuôi cấy phải được ép viên và đông lạnh ở -20°C hoặc -80°C để bảo quản lâu dài.
Việc tái huyền phù được mô tả trong phương pháp chuẩn bị mẫu tương ứng.
Nước tiểu: Tùy thuộc vào hiệu giá vi khuẩn và ứng dụng, lượng nước tiểu ban đầu được khuyến nghị là 15-50 ml. Ly
tâm mẫu để tạo thành vi khuẩn và loại bỏ hoàn toàn phần nổi phía trên (ô nhiễm urê có thể ức chế phản ứng PCR). Đối
với một số ứng dụng, nước tiểu tươi có thể được sử dụng trực tiếp. Để bảo quản lâu dài, mẫu đông lạnh ở -20°C hoặc
-80°C
khuyến khích.
Dịch tiết khí quản, BAL, đờm: Mẫu chứa DNase và RNase có thể nhanh chóng gây thoái hóa DNA, RNA. Vì vậy, mẫu phải
Chất nổi trên bề mặt nuôi cấy tế bào: Chuẩn bị các mẫu nổi trên bề mặt giống như các mẫu dịch
cơ thể không chứa tế bào khác được mô tả trong phương pháp chuẩn bị mẫu tương ứng. Để bảo
quản lâu dài, nên đông lạnh mẫu ở -20°C hoặc -80°C.
Phần sau đây sẽ mô tả quá trình chuẩn bị ly giải mẫu cho các nguyên liệu ban đầu khác nhau.
Sau khi nạp mẫu và thuốc thử tương ứng vào Đĩa ly giải, vui lòng tiến hành như mô tả trong phần
3.5 “Chuẩn bị và nạp KingFisherTM Flex để tiếp tục quy trình chiết.
3.3.1 Huyết thanh, huyết tương, các dịch cơ thể không chứa tế bào khác
3.3.2 Máu
3.3.3 Gạc
a) Gạc khô
Rửa sạch các miếng gạc trong lọ thích hợp với thể tích nước không chứa PBS hoặc DNase/RNase thấp
nhất có thể (đối với gạc mũi họng khoảng 400 µl, đối với gạc miệng khoảng 600 µl). Bóp miếng gạc
vào thành trong của lọ để lấy càng nhiều mẫu càng tốt.
Sử dụng 200 µl dung dịch đã rửa để chiết.
Thêm 200 µl Lysis Buffer HLT, 20 µl Proteinase K và 20 µl Carrier RNA (tùy chọn để chuẩn bị DNA
bộ gen) vào mỗi mẫu hoặc thêm 240 µl Master Mix.
Ngoài ra, có thể rửa trực tiếp gạc trong 200 µl nước không có DNase/RNase cộng với Master Mix.
Chèn các miếng gạc vào các khoang riêng lẻ của đĩa ly giải và ủ trong 5-10 phút ở RT, thỉnh
thoảng trộn. Hãy cẩn thận để tránh ô nhiễm chéo.
Để chuẩn bị DNA vi khuẩn, nên bổ sung 20 µl Lysozyme.
Lysozyme cần được thêm vào Lysis Plate trước khi thêm mẫu hoặc thuốc thử khác.
Chuyển 200 µl chất nổi phía trên vào khoang của Đĩa ly giải. Tránh các hạt rắn trong mẫu.
Thêm 200 µl Lysis Buffer HLT, 20 µl Proteinase K và 20 µl Carrier RNA vào mỗi mẫu hoặc thêm 240 µl Master
Mix.
Chuyển 1ml vi khuẩn nuôi cấy qua đêm vào Ống khóa an toàn 2,0 ml. Ly tâm trong 2 phút ở tốc độ 10.000 xg
và loại bỏ hoàn toàn phần nổi phía trên. Hòa lại cặn trong 200 µl đệm PBS và chuyển mẫu vào Đĩa ly giải.
Thêm 200 µl Lysis Buffer HLT, 20 µl Proteinase K và 20 µl Carrier RNA vào mỗi mẫu hoặc thêm 240 µl Master
Mix.
Để chuẩn bị DNA vi khuẩn, nên bổ sung 20 µl Lysozyme.
Lysozyme cần được thêm vào Lysis Plate trước khi thêm mẫu hoặc thuốc thử khác.
Tùy thuộc vào hiệu giá vi khuẩn và ứng dụng, lượng nước tiểu ban đầu được khuyến nghị là 15-50 ml. Ly
tâm mẫu để tạo thành vi khuẩn và loại bỏ hoàn toàn phần nổi phía trên (ô nhiễm urê có thể ức chế phản
ứng PCR). Hòa lại vi khuẩn trong 200 µl đệm PBS.
Đối với một số ứng dụng, có thể sử dụng trực tiếp 200 µl nước tiểu tươi.
Chuyển mẫu vào Lysis Plate và thêm 20 µl Lysozyme.
Thêm 200 µl Lysis Buffer HLT, 20 µl Proteinase K và 20 µl Carrier RNA vào mỗi mẫu hoặc thêm 240 µl Master
Mix.
Chuyển 200 µl mẫu vào khoang của Đĩa ly giải. Thêm 200 µl Lysis Buffer HLT, 20 µl Proteinase K
và 20 µl Carrier RNA (tùy chọn đối với DNA bộ gen). Để chuẩn bị DNA vi khuẩn, nên bổ sung 20 µl Lysozyme .
Lysozyme cần được thêm vào Lysis Plate trước khi thêm mẫu hoặc thuốc thử khác.
Đĩa ly giải: Tham khảo phần 3.3 “Chuẩn bị nguyên liệu ban đầu” để biết cách xử lý sơ bộ mẫu cụ thể.
Đĩa rửa_1: Thêm 900 µl dung dịch đệm rửa HLT vào đĩa giếng sâu 2,0 ml
Đĩa rửa_2: Thêm 900 µl Wash Buffer M vào đĩa giếng sâu 2,0 ml
Đĩa rửa_3: Thêm 1000 µl Wash Buffer II vào đĩa giếng sâu 2,0 ml
Đĩa rửa giải: Thêm 100 µl Elution Buffer M vào đĩa rửa giải (cùng kích thước với đĩa tip)
Tấm mẹo: Lắp Lược đầu KF96 dành cho nam châm DW trên Tấm đầu. Đĩa rửa giải và Đĩa tip giống
hệt nhau, sử dụng một Đĩa rửa giải làm Đĩa tip.
Các bước sau đây được thực hiện trên thiết bị KingFisherTM:
Ly giải mẫu
Tách từ
Tách từ
TM
3.5 Chuẩn bị và tải KingFisher Uốn cong
Khi vận hành KingFisherTM Flex hãy đảm bảo bạn đã đọc và hiểu hướng dẫn của nhà sản xuất.
1. Xác định số lượng phản ứng cần thiết bao gồm cả chất đối chứng và chuẩn bị tất cả các đĩa cần thiết
cho quy trình tinh chế như sau. Dán nhãn cho cạnh ngắn của mỗi tấm cho phù hợp.
Để xử lý các điều khiển trích xuất, vui lòng tham khảo chương 3.1 “Trước khi bắt đầu một
quy trình”.
TM
Thiết lập đĩa cho Đĩa ly giải Uốn cong:
KingFisher tham khảo chương 3.3 “Chuẩn bị nguyên liệu ban đầu” cho quá trình tiền xử lý mẫu cụ thể.
Đĩa giặt_1 Thêm 900 µl Wash Buffer HLT vào các khoang của đĩa giếng sâu
Đĩa giặt_2 Thêm 900 µl Wash Buffer M vào các khoang của đĩa giếng sâu
Đĩa giặt_3 Thêm 1.000 µl Wash Buffer II vào các khoang của đĩa giếng sâu
Tấm rửa giải Thêm 100 µl Elution Buffer M vào các khoang của Đĩa rửa giải
2. Đĩa ly giải: Chuẩn bị đĩa ly giải theo loại mẫu, như mô tả trong phần “Chuẩn bị nguyên liệu ban đầu”.
4. Tấm đầu: Đặt Lược đầu KF96 dành cho nam châm DW trên Tấm rửa giải (Tấm đầu).
5. Chọn một xét nghiệm để bắt đầu chạy (tất cả các xét nghiệm đều có sẵn để tải xuống tại trang web Mời
trang web chẩn đoán).
InviMag_Universal_KF96_V2: giao thức tách DNA bộ gen và axit nucleic của tất cả các loại mầm bệnh
InviMag_Universal_KF96_Virus: giao thức tách axit nucleic từ virus từ mẫu huyết tương hoặc mẫu
phết.
6. Nạp các đĩa đã chuẩn bị vào vị trí được chỉ định trên màn hình của thiết bị
8. Sau các bước ly giải, thiết bị tạm dừng và thêm 230 µl Binding Solution và 20 µl
Giải pháp SNAP phải được thêm vào mỗi phản ứng.
Lưu ý: Trộn dung dịch SNAP trước khi sử dụng bằng cách xoáy mạnh!
9. Đặt đĩa trở lại thiết bị (chú ý hướng đĩa chính xác) và tiếp tục chạy bằng cách nhấn nút “BẮT ĐẦU”.
Bây giờ, công cụ sẽ tiếp tục quá trình thanh lọc mà không cần bất kỳ tương tác nào của người dùng.
10. Sau khi chiết: Chuyển axit nucleic đã tinh khiết vào ống nhận 1,5 ml
(được cung cấp) được khuyến khích.
Giữ axit nucleic ở -20°C hoặc -80°C cho đến khi sử dụng tiếp.
4. Phụ lục
4.1 Giao thức từng bước của KingFisherTM Flex
Lượng axit Ly giải tế bào không đủ Tăng thời gian ly giải trong tệp chạy được cung cấp.
nucleic thấp Giảm lượng nguyên liệu ban đầu.
Rửa giải không hoàn toàn Tăng thể tích Elution Buffer M.
cũng thay đổi âm lượng đã sửa đổi trong tệp chạy được cung cấp.
Lượng SNAP thấp Trộn kỹ dung dịch SNAP trước khi sử dụng.
Giải pháp
Nồng độ axit nucleic Rửa giải với thể tích thấp hơn (tối thiểu 50 µl) Elution Buffer M.
trong mẫu thấp Cũng thay đổi thể tích đã sửa đổi trong tệp chạy.
Bảo quản nguyên liệu ban đầu không Đảm bảo nguyên liệu ban đầu được bảo quản thích hợp.
đúng cách
Tránh các chu kỳ rã đông-đóng băng lặp đi lặp lại của vật liệu mẫu.
Dung dịch đệm rửa được Đảm bảo rằng lượng ethanol/isopropanol chính xác được thêm vào Dung
chuẩn bị không chính xác dịch đệm rửa và tất cả các dung dịch đều được
Axit nucleic Bảo quản nguyên liệu ban đầu không Đảm bảo nguyên liệu ban đầu được bảo quản thích hợp.
bị phân hủy đúng cách Tránh các chu kỳ rã đông-đóng băng lặp đi lặp lại của vật liệu mẫu.
Đảm bảo nguyên liệu ban đầu được bảo quản ở điều kiện thích hợp (–
Vật liệu cũ
20°C/-80°C).
Axit nucleic Ethanol mang theo trong quá trình Tăng thời gian bước sấy để loại bỏ ethanol trong file run.
không rửa giải
Không có kết quả PCR cho bộ gen Do quy trình phân lập rất nhẹ nhàng, có thể xảy ra hiện tượng DNA bộ
ADN gen bị cô lập tạo thành một cụm. Để tránh điều này, bước biến tính
PCR cơ bản ở 95°C phải được kéo dài đến 5 phút.
Hạt từ tính Dư lượng hạt từ trong Ly tâm axit nucleic rửa giải ở tốc độ tối đa trong 1 phút và chuyển
mang theo quá trình chiết rửa phần nổi phía trên sang ống mới.
giải
EN ISO 13485 của Invitationk Molecular, hiệu suất của tất cả các thành phần của bộ sản phẩm đã được
kiểm tra để đảm bảo chất lượng sản phẩm.
Mọi vấn đề, sự cố hoặc khiếm khuyết sẽ được báo cáo cho Mờik Molecular ngay khi phát hiện. Ngay sau khi nhận,
hãy kiểm tra sản phẩm để đảm bảo sản phẩm còn nguyên vẹn và nguyên vẹn.
Trong trường hợp có bất kỳ sự khác biệt nào, bạn phải thông báo ngay cho Mời Molecular bằng văn bản.
Những sửa đổi của bộ sản phẩm, quy trình và cách sử dụng khác với mục đích đã định sẽ không được bảo hành.
Mời Molecular có quyền thay đổi, thay đổi hoặc sửa đổi bất kỳ sản phẩm nào để nâng cao hiệu suất và thiết kế
của nó bất kỳ lúc nào.
Invitationk Molecular bảo hành các sản phẩm như được quy định trong Điều khoản và Điều kiện chung có
sẵn tại www.invitek.com. Nếu bạn có bất kỳ câu hỏi nào, vui lòng liên hệ techsupport@invitek.com.
Số lô
Số mục lục
Nếu, mặc dù đã nghiên cứu kỹ hướng dẫn vận hành và thông tin thêm mà bạn vẫn cần hỗ trợ, vui
lòng liên hệ với chúng tôi theo địa chỉ techsupport@invitek.com hoặc đại lý chịu trách nhiệm cho bạn.
Bộ công cụ đa năng InviMag® /KF96 không có nhựa phẩm 5 x 96 chế phẩm 7450300250
BỒ ĐÀO NHA
Bồ Đào Nha
ĐỨC Robert-
Rössle-Str. 10 13125
Berlin Đức
info@invitek.com
www.invitek.com
2023-04-17 EN-v2-2023