Intratympanic

Administration of
Nanoparticles
Ameliorates Hearing loss
นางสาวพีรยา คล่องขยัน 603150277-6 sec.1
อาจารย์ที่ปรึกษา ผศ.ดร. ปฐมทรรศน์ ศรีสุข
อาจารย์ที่ปรึกษาร่วม ผศ.ดร. นรินทร์ จันทร์ศรี
1
TABLE OF CONTENTS
Introduction Problems and
01 - Anatomy of the ear 02 Obstacles in the
- Hearing loss treatment of
- Treatment hearing loss

Nanoparticles and Future

03 Drug Delivery systems 04 perspectives
- Poloxamers
- Cubosomes
- PEGs

2
 01
Introduction

3
INTRODUCTION
ประเทศไทย
มากกว่า 2.7 ล้านคน
Hearing loss

5% ของคนทัว่ โลก พ.ศ. 2559

430 ล้านคน เขตสุขภาพที่ 7 จังหวัดขอนแก่น
“ มากที่สุด ” ภาคตะวันออกเฉี ยงเหนื อ
ลาดับที่ 2 ของประเทศไทย

4
 Anatomy of the ear Tympanic Membrane

Round window membrane

Harkin, H. (2021) The structure and function of the ear and its role in hearing and balance. Nursing Times [online]; 117: 4, 56-59.

5
 Hearing loss

Lee, J. W., & Bance, M. L. (2018). Hearing loss. Practical Neurology, 19(1), 28–35. 6
 1. Conductive hearing loss

เกิดจาก
X การสูญเสียความสามารถในการนาเสียงของหูช้น
ั นอกหรือหูช้น
ั กลาง
✓ หูช้น
ั ในและระบบประสาทการได้ยินอยู่ในเกณฑ์ปกติ
สาเหตุ
ขี้หูอุดตัน หูช้น
ั กลางอักเสบ หรือหูน้าหนวก หูพิการแต่กาเนิด
สิ่งแปลกปลอมเข้าหู แก้วหูอักเสบ เยื่อแก้วหูหนา มีเลือดออกในหูช้น
ั กลาง
รักษา
ผ่าตัดจากสาเหตุส่วนใหญ่ที่ส่งผลทาให้เกิด

Lee, J. W., & Bance, M. L. (2018). Hearing loss. Practical Neurology, 19(1), 28–35. 7
 2. Sensorineural hearing loss

เกิดจาก
ความผิดปกติของส่วนหูช้น
ั ใน (Cochlea) เซลล์ขนรับ
ความรูส
้ ึกหรือประสาทรับเสียง ไปจนถึงสมอง
สาเหตุ
เป็นมาแต่กาเนิด, การติดเชื้อ เช่น ไวรัส แบคทีเรีย,
ได้ยินเสียงที่ดัง, ได้รบ
ั ยาที่เป็นพิษต่อหูช้น
ั ใน, เสื่อมตามวัย,
โรคน้าในหูไม่เท่ากัน (Meniere’s disease), เนื้องอกในสมอง
รักษา
- การรักษาโดยการใช้ยา
- เครื่องช่วยฟังหรือประสาทหูเทียม
Lee, J. W., & Bance, M. L. (2018). Hearing loss. Practical Neurology, 19(1), 28–35. 8
 3. Mixed hearing loss

เกิดจาก
X การสูญเสียความสามารถในการนาเสียงของหูช้น
ั นอกหรือหูช้น
ั กลาง หูช้น
ั ใน
X ประสาทในการได้ยินบกพร่องเพียงเล็กน้อยเท่านั้น
Lee, J. W., & Bance, M. L. (2018). Hearing loss. Practical Neurology, 19(1), 28–35. 9
https://houghear.org/bhsm/ 10
 Grading of hearing loss

Smith, A. (2007). The role of the world health organization in the prevention and management of deafness and hearing impairment. World Health
Organization. 10th China National Congress on Ear, Nose, Throat, and Head & Neck Surgery 11-14 October 2007, Nanjing, China, p. 48-7.
11
Treatment of Hearing loss

การรักษาโดยไม่ใช้ยา การรักษาโดยใช้ยา

- เครื่องช่วยฟัง ใช้ยา corticosteroid ในการรักษา

- ผ่าตัดฝังประสาทหูเทียม - systemic corticosteroid oral form
(Cochlear implant) - Intratympanic corticosteroids

12
Treatment of Hearing loss : การรักษาโดยใช้ยา

Sujana S. Chandrasekhar, Betty S. Tsai Do, Seth R. Schwartz, Laura J. Bontempo, Erynne A. Faucett, Sandra A. Finestone, et al. (2019). Clinical Practice Guideline:
Sudden Hearing Loss. American Academy of Otolaryngology–Head and Neck Surgery Foundation, Vol. 161(1S) S1–S45
13
 02
Problems and Obstacles
in the treatment of
Hearing loss

14
 Problems and Obstacles in the treatment of hearing loss

ขนาดอนุภาคใหญ่

Mittal, R., Pena, S. A., Zhu, A., Eshraghi, N., Fesharaki, A., Horesh, E. J.,
Pritz, C. O., Dudás, J., Rask-Andersen, H., Schrott-Fischer, A., & Glueckert, R. Mittal, J., & Eshraghi, A. A. (2019). Nanoparticle-based drug delivery in
(2013). Nanomedicine strategies for drug delivery to the ear. Nanomedicine the inner ear: current challenges, limitations and opportunities.
(London, England), 8(7), 1155–1172. Artificial cells, nanomedicine, and biotechnology, 47(1), 1312–1320. 15
 03
Nanoparticles
and
Drug Delivery systems

16
Nanoparticles and Drug Delivery Systems

- ขนาดตัง
้ แต่ 1 – 1000 nm
้ ่อหุ้มตัวยาและนาส่ งยาไปยังอวัยวะ
- ใชห
เป้าหมายที่ เฉพาะเจาะจงได้
- สามารถขนส่ งผ่าน Tympanic membrane และ
Round window membrane ได้

Jung, S. Y., Yoo, J., Yang, K.-J., Jang, S., Yi, G., Kim, D.-K., & Koo, H. (2021). Intratympanic administration of alpha-lipoic acid-loaded pluronic
F-127 nanoparticles ameliorates acute hearing loss. Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine, 32, 102329. 17
 Nanoparticles and Drug Delivery systems:
IT injection VS Nanoparticles

Modified from Li, L., Chao, T., Brant, J., O'Malley, B., Jr, Tsourkas, A., & Li, D. (2017). Advances in nano-based inner ear delivery systems for
the treatment of sensorineural hearing loss. Advanced drug delivery reviews, 108, 2–12. 18
Advantages and Disadvantages of Nanoparticles

- Higher stability - Limited drug-loading capacity

- Higher carrier capacity
- Controlled delivery of drug
- Reduce dosing frequency and
have higher concentration
- On repeated administration,
toxic metabolites may be formed
during the biotransformation of
polymeric carriers.
- slowly biodegradable

Advantages Disadvantages
19
Type of Nanoparticles

01 Poloxamers

02 Cubosomes

03 Polyethylene glycol (PEGs)

20
Poloxamers: Preparation and Fabrication
O/W Emulsion

Alpha-lipoic acid (ALA)

Jung, S. Y., Yoo, J., Yang, K.-J., Jang, S., Yi, G., Kim, D.-K., & Koo, H. (2021). Intratympanic administration of
alpha-lipoic acid-loaded pluronic F-127 nanoparticles ameliorates acute hearing loss. Nanomedicine:
Nanotechnology, Biology and Medicine, 32, 102329. 21
Poloxamers: Schematic of poloxamers TM delivery

Jung, S. Y., Yoo, J., Yang, K.-J., Jang, S., Yi, G., Kim, D.-K., & Koo, H. (2021). Intratympanic administration of
alpha-lipoic acid-loaded pluronic F-127 nanoparticles ameliorates acute hearing loss. Nanomedicine:
Nanotechnology, Biology and Medicine, 32, 102329. 22
Poloxamers: Results & Discussion

- ขนาดเส้นผ่าศูนย์กลาง 187.3 ± 5.3 nm.

- มีประสิทธิภาพในการห่อหุม
้ ยา (%EE) = 86.54 %
- loading capacity = 10.82 %
- เวลาในการปลดปล่อย ALA 64 ชั่วโมง

Jung, S. Y., Yoo, J., Yang, K.-J., Jang, S., Yi, G., Kim, D.-K., & Koo, H. (2021). Intratympanic administration of
alpha-lipoic acid-loaded pluronic F-127 nanoparticles ameliorates acute hearing loss. Nanomedicine:
Nanotechnology, Biology and Medicine, 32, 102329. 23
Poloxamers: Results & Discussion
ศึกษาประสิทธิภาพการซึมผ่าน RWM ของ ALA-NPs

x
24 ชั่วโมง : เก็บตัวอย่างที่ cochlea

ดูการเรืองแสงสีแดงของ Organ of Corti โดยนาไป

ส่องภายใต้กล้องจุลทรรศน์แบบ confocal
Jung, S. Y., Yoo, J., Yang, K.-J., Jang, S., Yi, G., Kim, D.-K., & Koo, H. (2021). Intratympanic administration of
alpha-lipoic acid-loaded pluronic F-127 nanoparticles ameliorates acute hearing loss. Nanomedicine:
Nanotechnology, Biology and Medicine, 32, 102329. 24
 Poloxamers: Results & Discussion
ศึกษาผลของการรักษาการสูญเสียการได้ยน
ิ
- Normal saline
- free ALA
- 2.5 mg/mL ALA-NPs
- 5.0 mg/mL ALA-NPs

Kanamycin (500 mg/kg)

ประเมิน (ABR) เสียง click และ burst (4, 8, 16 และ 32 kHz)

โดยจะวัดในวันที่ 4 และ 7 หลังจากฉีด Kanamycin
Jung, S. Y., Yoo, J., Yang, K.-J., Jang, S., Yi, G., Kim, D.-K., & Koo, H. (2021). Intratympanic
administration of alpha-lipoic acid-loaded pluronic F-127 nanoparticles ameliorates acute
hearing loss. Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine, 32, 102329. 25
Cubosomes: Preparation and Fabrication
Solvent evaporation melt dispersion-emulsification
Dexamethasone

Mansour, M., Abo El Ezz, T. A., Fattoh, F. N., AbouelFadl, D. M., & Gad, H. A. (2021). Delineating the usage of dexamethasone-loaded cubosomes as a therapeutic armamentarium
for hearing loss versus its protective effect: In-vitro and in-vivo animal study. Journal of Drug Delivery Science and Technology, 61, 102244. 26
Cubosomes: Results & Discussion

liquid crystalline systems

Particle size
melt dispersion-emulsification < Solvent evaporation
(132.6 nm – 218.4 nm)
PDI : 0.259 – 0.574
Zeta potential: -0.070 mV ถึง -6.990 mV
Mansour, M., Abo El Ezz, T. A., Fattoh, F. N., AbouelFadl, D. M., & Gad, H. A. (2021). Delineating the usage
Selection: FS-4
of dexamethasone-loaded cubosomes as a therapeutic armamentarium for hearing loss versus its
protective effect: In-vitro and in-vivo animal study. Journal of Drug Delivery Science and Technology, นาไปใช้ในการทดลองต่อไป 27
61, 102244.
 Cubosomes: Results & Discussion
ศึกษาผลการป้องกันพิษต่อหูของ DEX ทีเ่ กิดจากยา Cisplatin
กลุ่ม Protective
P1: 0.9% NaCl solution IT injection
P2: DEX solution (4 mg/ kg) IT injection
P3: DEX cubosomes FS-4 (4 mg/kg) IT injection
หมายเหตุ: หูขวา = treatment , หูซ้าย = no treatment
liquid crystalline systems
Distortion product otoacoustic
emissions (DPOAE)
- ที่ความถี่ 1.5, 2, 3, 4, 6 และ 8 kHz
30 นาที - เป็นเวลา 3, 7 แลa 14 วันหลังจากได้รบ ั
Cisplatin และ DEX ทั้งหมดแล้ว

Cisplatin (IP) 10 mg/kg Mansour, M., Abo El Ezz, T. A., Fattoh, F. N., AbouelFadl, D. M., & Gad, H. A. (2021). Delineating the usage
of dexamethasone-loaded cubosomes as a therapeutic armamentarium for hearing loss versus its
protective effect: In-vitro and in-vivo animal study. Journal of Drug Delivery Science and Technology, 28
61, 102244.
 Cubosomes: Results & Discussion
ศึกษาผลการป้องกันพิษต่อหูของ DEX ทีเ่ กิด
จากยา Cisplatin

liquid crystalline systems

Mansour, M., Abo El Ezz, T. A., Fattoh, F. N., AbouelFadl, D. M., & Gad, H. A. (2021).
Delineating the usage of dexamethasone-loaded cubosomes as a therapeutic
armamentarium for hearing loss versus its protective effect: In-vitro and in-vivo
animal study. Journal of Drug Delivery Science and Technology, 61, 102244. 29
 Cubosomes: Results & Discussion
ศึกษาผลการรักษาพิษต่อหูของ DEX ทีเ่ กิดจากยา Cisplatin
กลุ่ม Therapeutic
T1: 0.9% NaCl solution IT injection
T2: DEX solution (4 mg/ kg) IT injection
T3: DEX cubosomes FS-4 (4 mg/kg) IT injection
หมายเหตุ: หูขวา = treatment , หูซ้าย = no treatment
liquid crystalline systems
Distortion product otoacoustic
emissions (DPOAE)
- ที่ความถี่ 1.5, 2, 3, 4, 6 และ 8 kHz
- เป็นเวลา 3, 7 และ 14 วันหลังจากได้รบ ั
24 ชั่วโมง Cisplatin และ DEX ทั้งหมดแล้ว

Cisplatin (IP) 10 mg/kg Mansour, M., Abo El Ezz, T. A., Fattoh, F. N., AbouelFadl, D. M., & Gad, H. A. (2021). Delineating the usage
of dexamethasone-loaded cubosomes as a therapeutic armamentarium for hearing loss versus its
protective effect: In-vitro and in-vivo animal study. Journal of Drug Delivery Science and Technology, 30
61, 102244.
Cubosomes: Results & Discussion
ศึกษาผลการรักษาพิษต่อหูของ DEX
ทีเ่ กิดจากยา Cisplatin

liquid crystalline systems

Mansour, M., Abo El Ezz, T. A., Fattoh, F. N., AbouelFadl, D. M., & Gad, H. A. (2021).
Delineating the usage of dexamethasone-loaded cubosomes as a therapeutic
armamentarium for hearing loss versus its protective effect: In-vitro and in-vivo
animal study. Journal of Drug Delivery Science and Technology, 61, 102244. 31
Cubosomes: Results & Discussion
การฟื้นตัวของหูจากภาวะการสูญเสียการได้ยิน

liquid crystalline systems

Full recovery >90%

Partial recovery 20 - 90%
No recovery < 20%

Mansour, M., Abo El Ezz, T. A., Fattoh, F. N., AbouelFadl, D. M., & Gad, H. A. (2021). Delineating the usage of dexamethasone-loaded cubosomes as a therapeutic armamentarium
for hearing loss versus its protective effect: In-vitro and in-vivo animal study. Journal of Drug Delivery Science and Technology, 61, 102244. 32
Cubosomes:
Preparation and Fabrication

liquid crystalline systems

Earthworm
fibrinolytic enzyme
liquid crystalline systems

(EFE)

Liu, H., Wang, Y., Wang, Q., Li, Z., Zhou, Y., Zhang, Y., & Li, S. (2013).
Protein-bearing cubosomes prepared by liquid precursor dilution:
inner ear delivery and pharmacokinetic study following intratympanic
administration. Journal of biomedical nanotechnology, 9(10), 1784–1793.
33
Cubosomes: Results & Discussion

liquid crystalline systems

Particle size: 149.60 nm ถึง 210.9 nm
PDI : 0.125 – 0.212
Zeta potential: -13.03 mv ถึง -16.90 mv
Selection:
4.1% lipid และ 1 mg EFE
%EE = 79.6%
Liu, H., Wang, Y., Wang, Q., Li, Z., Zhou, Y., Zhang, Y., & Li, S. (2013). Protein-bearing cubosomes prepared by liquid precursor dilution: inner ear delivery
and pharmacokinetic study following intratympanic administration. Journal of biomedical nanotechnology, 9(10), 1784–1793.
34
 Cubosomes: Results & Discussion
Treated ear
Biodistribution ของ cubosomes

R18 labeled
cubosomes 50 µL
(the formula B)

liquid crystalline systems

Untreated ear
สัตว์จะถูกตัดหัวและกระดูกขมับจะถูกดึงออกและเปิด
ออกเพื่อให้เห็น cochlea

ส่องด้วยกล้องจุลทรรศน์เรืองแสง Nikon ECLIPSE E600

Liu, H., Wang, Y., Wang, Q., Li, Z., Zhou, Y., Zhang, Y., & Li, S. (2013). Protein-bearing
cubosomes prepared by liquid precursor dilution: inner ear delivery and
pharmacokinetic study following intratympanic administration. Journal of
35
biomedical nanotechnology, 9(10), 1784–1793.
 Cubosomes: Results & Discussion
ศึกษาเภสัชจลนศาสตร์
R18 labeled
cubosomes 50 µL
(the formula E)

liquid crystalline systems

สัตว์จะถูกตัดหัวและกระดูกขมับจะถูกดึงออกและเปิดออก
เพื่อให้เห็น cochlea

เก็บ cochlea fluid ด้วย microinjection

Liu, H., Wang, Y., Wang, Q., Li, Z., Zhou, Y., Zhang, Y., & Li, S. (2013). Protein-bearing
หาปริมาณโดยใช้ RF-5301 fluorescence cubosomes prepared by liquid precursor dilution: inner ear delivery and
pharmacokinetic study following intratympanic administration. Journal of
spectrophotometer biomedical nanotechnology, 9(10), 1784–1793. 36
PEGs: Preparation and Fabrication
O/W Emulsion

Dexamethasone
Yang, K. J., Son, J., Jung, S. Y., Yi, G., Yoo, J., Kim, D. K., & Koo, H. (2018). Optimized phospholipid-based nanoparticles for inner ear drug
delivery and therapy. Biomaterials, 171, 133–143. 37
PEGs: Schematic of PEGs TM delivery

Yang, K. J., Son, J., Jung, S. Y., Yi, G., Yoo, J., Kim, D. K., & Koo, H. (2018). Optimized phospholipid-based
nanoparticles for inner ear drug delivery and therapy. Biomaterials, 171, 133–143. 38
PEGs: Results & Discussion

Yang, K. J., Son, J., Jung, S. Y., Yi, G., Yoo, J., Kim, D. K., & Koo, H. (2018). Optimized phospholipid-based
nanoparticles for inner ear drug delivery and therapy. Biomaterials, 171, 133–143.
39
PEGs: Results & Discussion
nanoparticle Screening
1. Neutral Nile Red 24 ชั่วโมง
2. Cationic Nile Red ผ่าตัดส่วน cochleae ของหนูออกมา
3. Anionic Nile Red
4. Cat-PEG Nile Red ล้างด้วยน้าประปา 1 นาที

แช่ไว้ใน 4% (v/v) paraformaldehyde 20 นาที

ล้างด้วย PBS ย้อมด้วย DAPI

สังเกตการดูดซึมของ nanoparticles ภายใต้ confocal

microscope
Yang, K. J., Son, J., Jung, S. Y., Yi, G., Yoo, J., Kim, D. K., & Koo, H. (2018). Optimized phospholipid-based
nanoparticles for inner ear drug delivery and therapy. Biomaterials, 171, 133–143. 40
PEGs: Results & Discussion

Selection: Cat-PEG
%EE = 93.1 ± 7.6%
Particle size: 143.53 ± 21.18 nm
Yang, K. J., Son, J., Jung, S. Y., Yi, G., Yoo, J., Kim, D. K., & Koo, H. (2018). Optimized phospholipid-based
nanoparticles for inner ear drug delivery and therapy. Biomaterials, 171, 133–143.
41
 PEGs: Results & Discussion Absorbed
Cat-PEG-Dex > Dex-SP

Drug distribution (Cat-PEG)

ผ่าตัดส่วน cochleae ของหนูออกมา

ล้างด้วยน้าประปาเป็นเวลา 1 นาที

แช่ไว้ใน 4% (v/v) paraformaldehyde 24 ชั่วโมง

ล้างด้วย 5% (w/v) EDTA (0.3M, pH 6.5)

ย้อมสีโดยใช้ Vectastain Elite ABC HRP Kit และ Vector NovaRED

Peroxidase Substrate และย้อมด้วย anti-Dex antibody
Yang, K. J., Son, J., Jung, S. Y., Yi, G., Yoo, J., Kim, D. K., & Koo, H. (2018). Optimized phospholipid-based
42
nanoparticles for inner ear drug delivery and therapy. Biomaterials, 171, 133–143.
PEGs: Results & Discussion
ผลการรักษาของ Cat-PEG-Dex และ Dex-SP ในหนูทถ
ี่ ูกทาให้ประสาทหูเสื่อม (ototoxicity)

auditory brainstem response

(ABR)

Yang, K. J., Son, J., Jung, S. Y., Yi, G., Yoo, J., Kim, D. K., & Koo, H. (2018). Optimized phospholipid-based
nanoparticles for inner ear drug delivery and therapy. Biomaterials, 171, 133–143.
43
Comparison of three different nanoparticles for treating hearing loss

44
The comparison of three different nanoparticles for treating hearing loss

45
 04
Future perspectives

46
Cubosomes: Toxicity and Safety Study

Achouri, Djamila & Alhanout, Kamel & Piccerelle, Philippe & Andrieu, Véronique. (2012). Recent
advances in ocular drug delivery. Drug development and industrial pharmacy. 39. 47
THANK YOU
CREDITS: This presentation template was
created by Slidesgo, including icons from
Flaticon, and infographics & images by
Freepik.

48