‫‪2013‬‬ ‫قسم الكيمياء الحيوية‬ ‫كلية العـلوم‬ ‫جامعة الملك سعـود‬

‫المملكة العربية السعودية‬

‫وزارة التعليم العالي‬
‫جامعة الملك سعود‬
‫كلية العلوم‬
‫قسم الكيمياء الحيوية‬

‫مذكرة الجزء العـملي‬

‫‪ ١٠١‬كيح‬

‫إعـداد ‪:‬‬
‫د‪ .‬فريد عـطايا‬
‫أ‪ .‬صالح الدغـيشم‬
‫أ‪ .‬محمد اللعـبون‬
‫أ‪ .‬سلمان العـميري‬
‫أ‪ .‬أحمد الزھراني‬
‫أ‪ .‬محمد الحليلي‬
‫أ‪ .‬منى العـنزي‬
‫أ‪ .‬نورة العـلي‬
‫أ‪ .‬فريدة الخويطر‬
 ‫المحتويات‬

‫‪١‬‬ ‫‪ .١‬السالمة في المختبرات‬

‫‪١‬‬ ‫قواعد ومواصفات السالمة في المختبرات‬ ‫‪١٫١‬‬
‫‪٢‬‬ ‫احتياطات السالمة من مخاطر الكيماويات‬ ‫‪١٫٢‬‬
‫‪٢‬‬ ‫العالمات اإلرشادية للمواد الكيميائية‬ ‫‪١٫٣‬‬
‫‪٣‬‬ ‫احتياطات السالمة من مخاطر الزجاجيات‬ ‫‪١٫٤‬‬
‫‪٣‬‬ ‫احتياطات السالمة من المخاطر الكھربائية‬ ‫‪١٫٥‬‬
‫‪٣‬‬ ‫إرشادات السالمة في مختبرات قسم الكيمياء الحيوية‬ ‫‪١٫٦‬‬
‫‪٤‬‬ ‫بعض األدوات المستخدمة في المختبرات‬ ‫‪١٫٧‬‬

‫‪٥‬‬ ‫‪ .٢‬المحاليل المنظمة‬

‫‪٥‬‬ ‫الرقم الھيدروجيني ‪pH‬‬ ‫‪٢٫١‬‬
‫‪٥‬‬ ‫قياس الرقم الھيدروجيني‬ ‫‪٢٫٢‬‬
‫‪٦‬‬ ‫المحاليل المنظمة‬ ‫‪٢٫٣‬‬
‫‪٧‬‬ ‫سعة المحلول المنظم‬ ‫‪٢٫٤‬‬
‫‪٧‬‬ ‫تحضير محلول منظم فوسفاتي‬ ‫‪٢٫٥‬‬
‫‪٩‬‬ ‫دراسة خواص المحاليل‬ ‫‪٢٫٦‬‬

‫‪١١‬‬ ‫‪ .٣‬الكربوھيدرات )‪(١‬‬

‫‪١١‬‬ ‫وظيفة الكربوھيدرات‬ ‫‪.٣٫١‬‬
‫‪١١‬‬ ‫تصنيف الكربوھيدرات‬ ‫‪.٣٫٢‬‬
‫‪١٤‬‬ ‫االختبارات العامة للكربوھيدرات‬ ‫‪.٣٫٣‬‬
‫‪١٤‬‬ ‫‪ .٣٫٣٫١‬اختبار الذوبانية‬
‫‪١٦‬‬ ‫‪ .٣٫٣٫٢‬اختبار موليش‬
‫‪١٨‬‬ ‫‪ .٣٫٣٫٣‬االختبارات االختزالية‬
‫‪١٨‬‬ ‫‪ .٣٫٤٫٣٫١‬اختبار بندكت‬
‫‪٢٠‬‬ ‫‪ .٣٫٤٫٣٫٢‬اختبار بارفويد‬
‫‪٢٢‬‬ ‫‪ .٣٫٤٫٤‬اختبار بيال‬
‫‪٢٤‬‬ ‫‪ .٣٫٤٫٥‬اختبار سيليفانوف‬
‫‪٢٦‬‬ ‫‪ .٤‬الكربوھيدرات )‪(٢‬‬
‫‪٢٦‬‬ ‫التركيب الحلقي للسكريات األحادية‬ ‫‪.٤٫١‬‬
‫‪٢٦‬‬ ‫الكربوھيدرات عديدة التسكر‬ ‫‪.٤٫٢‬‬
‫‪٢٧‬‬ ‫اإلختبارات الوصفية للسكريات العـديدة والثنائية‬ ‫‪.٤٫٣‬‬
‫‪٢٧‬‬ ‫‪ .٤٫٣٫١‬اختبار اليود‬
‫‪٢٩‬‬ ‫‪ .٤٫٣٫٢‬التحلل المائي للسكروز‬
‫‪٣١‬‬ ‫‪ .٤٫٣٫٣‬التحلل المائي للنشاء‬

‫‪٣٣‬‬ ‫‪ .٥‬الليبيدات‬
‫‪٣٣‬‬ ‫األحماض الدھنية‬ ‫‪.٥٫١‬‬
‫‪٣٥‬‬ ‫االختبارات الوصفية لليبيدات‬ ‫‪.٥٫٢‬‬
‫‪٣٥‬‬ ‫‪ .٥٫٢٫١‬اختبار الذوبانية‬
‫‪٣٧‬‬ ‫‪ .٥٫٢٫٢‬اختبار التصبن‬
‫‪٣٩‬‬ ‫‪ .٥٫٢٫٣‬اختبار فصل الصابون من المحلول بالتمليح‬
‫‪٤٠‬‬ ‫‪ .٥٫٢٫٤‬اختبار تكوين األحماض الدھنية من الصابون‬
‫‪٤١‬‬ ‫‪ .٥٫٢٫٥‬اختبار تكوين أمالح األحماض الدھنية الغـير ذائبة‬
‫‪٤٣‬‬ ‫‪ .٥٫٢٫٦‬اختبار خالت النحاس‬
‫‪٤٥‬‬ ‫‪ .٥٫٢٫٧‬اختبار عدم التشبع )اختبار اليود(‬
‫‪٤٦‬‬ ‫‪ .٥٫٢٫٨‬اختبار األكرولين‬

‫‪٤٨‬‬ ‫‪ .٦‬األحماض األمينية‬

‫‪٤٩‬‬ ‫الخواص الكيميائية و الفيزيائية لألحماض األمينية‬ ‫‪.٦٫١‬‬
‫‪٤٩‬‬ ‫‪ .٦٫١٫١‬النشاط الضوئي‬
‫‪٤٩‬‬ ‫‪ .٦٫١٫٢‬الخاصية األمفوتيرية‬
‫‪٥٠‬‬ ‫‪ .٦٫١٫٣‬نقطة التعادل الكھربي‬
‫‪٥٠‬‬ ‫‪ .٦٫١٫٤‬درجة اإلنصھار‬
‫‪٥١‬‬ ‫االختبارات العامة و الوصفية لألحماض األمينية‬ ‫‪.٦٫٢‬‬
‫‪٥١‬‬ ‫‪ .٦٫٢٫١‬اختبار الذوبانية‬
‫‪٥٢‬‬ ‫‪ .٦٫٢٫٢‬اختبار الننھيدرين‬
‫‪٥٥‬‬ ‫‪ .٦٫٢٫٣‬الكشف عن األحماض األمينية المحتوية على الكبريت‬
‫‪٥٧‬‬ ‫‪ .٦٫٢٫٤‬إختبار الزانثوبروتيك‬
‫‪٥٩‬‬ ‫‪ .٦٫٢٫٥‬إختبار ساكاجوتشي‬
‫‪٦٠‬‬ ‫‪ .٦٫٢٫٦‬إختبار ميلون‬
‫‪٦٢‬‬ ‫‪ .٧‬البروتينات‬
‫‪٦٢‬‬ ‫األشكال البنائية للبروتين‬ ‫‪.٧٫١‬‬
‫‪٦٤‬‬ ‫نقطة التعادل الكھربي للبروتين‬ ‫‪.٧٫٢‬‬
‫‪٦٥‬‬ ‫االختبارات الوصفية للبروتينات‬ ‫‪.٧٫٣‬‬
‫‪٦٥‬‬ ‫‪ .٧٫٣٫١‬اختبار الذوبانية‬
‫‪٦٧‬‬ ‫‪ .٧٫٣٫٢‬اختبار البيوريت‬
‫‪٦٩‬‬ ‫‪ .٧٫٣٫٣‬ترسيب البروتينات بأمالح المعادن الثقيلة‬
‫‪٧٠‬‬ ‫‪ .٧٫٣٫٤‬ترسيب البروتينات بواسطة القلويدات‬
‫‪٧١‬‬ ‫‪ .٧٫٣٫٥‬أثر األمالح على ذوبانية البروتين‬
‫‪٧٣‬‬ ‫التقدير الكمي للبروتينات‬ ‫‪.٧٫٤‬‬
‫‪٧٣‬‬ ‫‪ .٧٫٤٫١‬طريقة الوري‬

‫‪٧٦‬‬ ‫‪ .٨‬اإلنزيمات‬
‫‪٧٦‬‬ ‫العوامل المؤثرة في نشاط اإلنزيمات‬ ‫‪.٨٫١‬‬
‫‪٧٦‬‬ ‫مبدأ دراسة نشاط اإلنزيمات بطريقة عملية‬ ‫‪.٨٫٢‬‬
‫‪٧٧‬‬ ‫االختبارات الوصفية للكشف اإلنزيمات‬ ‫‪.٨٫٣‬‬
‫‪٧٧‬‬ ‫‪ .٨٫٣٫١‬الكشف عن الطبيعة الكيميائية لإلنزيمات‬
‫‪٧٨‬‬ ‫‪ .٨٫٣٫٢‬اختبار نشاط إنزيم األمايليز‬
‫‪٨٠‬‬ ‫‪ .٨٫٣٫٣‬اختبار نشاط إنزيم السكريز‬

‫‪٨١‬‬ ‫‪ .٩‬المراجع‬
 ‫‪ .١‬السالمة في المختبرات‬

‫يتطلب العـمل في المختبرات وعي كامل بأھمية وخطورة المواد واألجھزة المستخدمة‪ ،‬حيث أن كثير من المواد يتصف‬
‫بالسمية أو مھيّج لألغشية ومن المواد ما ھو حارق أو مشتعل وغـير ذلك من أشكال الخطورة‪ ،‬لذا يجب قبل بدء العـمل في‬
‫المختبر أن نعي أھمية وخطورة المواد المستخدمة‪ ،‬وأخذ الحيطة والحذر واتباع تعليمات السالمة الموصى بھا في كل مختبر‪.‬‬

‫‪ .١٫١‬قواعد ومواصفات السالمة في المختبرات‪:‬‬

‫‪ .١‬يجب أن تكون مساحة المختبر تتناسب مع أعداد الباحثين والطالب لكي تسمح لھم بحرية الحركة خالل إجراء‬
‫التجارب دون تزاحم‪.‬‬
‫‪ .٢‬يجب أن يتوفر بابان بقاعة المختبر للدخول والخروج‪ ،‬وأن يكون اتجاه فتح األبواب للخارج‪.‬‬
‫‪ .٣‬يجب تزويد النوافذ بستائر مقاومة للحريق و قضبان حماية متحركة‪.‬‬
‫‪ .٤‬يجب تجھيز المختبر بوسائل اإلضاءة والتھوية الطبيعية والصناعية ومتابعة الصيانة الدورية لتلك التجھيزات‪.‬‬
‫‪ .٥‬يجب أن تكون أرضيات المختبرات واألحواض والطاوالت من األنواع المقاومة للمواد الكيميائية والحريق‪.‬‬
‫‪ .٦‬يجب توفير خزانة غازات وذلك الستخدامھا عند تحضير أو استخدام المواد المتطايرة أو الغازات الخطرة أو ذات‬
‫الرائحة الكريھة‪.‬‬
‫‪ .٧‬يجب تجھيز المختبر بمقاعد مريحة سھلة الحركة ويمكن التحكم في ارتفاعھا‪.‬‬
‫‪ .٨‬يجب تجھيز المختبرات بعدد كاف من نقاط الكھرباء متعددة الفولتية وذات أغطية‪.‬‬
‫‪ .٩‬يجب تجھيز المختبرات بأنظمة غاز وكھرباء ووضع مفاتيح للتحكم بھذه األنظمة في مكان ظاھر يمكن الوصول‬
‫إليھا بسھولة في حالة الطوارئ‪.‬‬
‫‪ .١٠‬يجب أن يزود كل مختبر بغرفة لتخزين األدوات و األجھزة‪.‬‬
‫‪ .١١‬يجب تزويد كل مختبر بعربة نقل متحركة لنقل األجھزة واألدوات من غرفة التحضير إلى المختبر وبالعكس‪.‬‬
‫‪ .١٢‬يجب توفير وسائل السالمة األولية مثل طفايات الحريق وصندوق اإلسعافات األولية ودش غسيل الطوارئ وأجھزة‬
‫إنذار وأن تكون في مكان ظاھر ويسھل الوصول إليه وعمل صيانة دورية لھا للتأكد من صالحيتھا‪.‬‬

‫يمكن تقسيم المخاطر في المختبرات إلى‪:‬‬

‫‪ .١‬مخاطر المواد الكيميائية‪.‬‬
‫‪ .٢‬مخاطر الزجاجيات‪.‬‬
‫‪ .٣‬المخاطر الكھربائية‪.‬‬
‫‪ .٤‬المخاطر الحيوية‪.‬‬

‫]‪[١‬‬
 ‫‪ .١٫٢‬احتياطات السالمة من مخاطر المواد الكيمائية‪:‬‬
‫‪ .١‬معرفة خصائص المادة الكيميائية من خالل العالمات اإلرشادية على العبوة‪.‬‬
‫‪ .٢‬عدم لمس الكيماويات باليد مباشرةً وعدم تذوقھا أو استنشاقھا‪.‬‬
‫‪ .٣‬لبس القفازات والبالطو أثناء العـمل‪.‬‬
‫‪ .٤‬عدم استخدام الفم لملء الماصة بل يجب استخدام الضاغطة الھوائية‪.‬‬
‫‪ .٥‬عدم تخزين الكيماويات داخل المختبر ولكن يجب وضعھا في أماكن تخزين خاصة‪.‬‬
‫‪ .٦‬التخلص من بواقي المواد الكيميائية بالطريقة المناسبة لكل مادة حسب إرشادات الفني المسؤول عن المختبر‪.‬‬
‫‪ .٧‬إجراء التجارب التي يتصاعد منھا غازات أو روائح في غرفة الغازات‪.‬‬
‫‪ .٨‬عدم توجيه أنبوبة االختبار ناحية الوجه أو الجسد أثناء التسخين‪.‬‬
‫‪ .٩‬إغالق زجاجات الكيماويات عند االنتھاء منھا وعدم فتح عدة زجاجات في وقت واحد‪.‬‬

‫‪ .١٫٣‬العالمات اإلرشادية على عبوات المواد الكيميائية‬

‫]‪[٢‬‬
 ‫‪ .١٫٤‬احتياطات السالمة من مخاطر الزجاجيات‬
‫‪ .١‬تخزين الزجاجيات على رفوف ذات ارتفاع مناسب ليسھل التقاطھا و إعادتھا‪.‬‬
‫‪ .٢‬حمل الزجاجيات بطريقة مناسبة وبحذر وعدم حمل أكثر من زجاجة واحدة في المرة الواحدة‪.‬‬
‫‪ .٣‬عدم استخدام زجاجات غـير نظيفة أثناء التجارب‪.‬‬
‫‪ .٤‬عدم لمس الزجاجات أثناء التسخين باليد مباشرةً ويجب استخدام الماسكات المخصصة لذلك‪.‬‬

‫‪ .١٫٥‬احتياطات السالمة من المخاطر الكھربائية‬

‫‪ .١‬يجب أن تكون صنابير المياه بعيدة عن الكھرباء واألجھزة‪.‬‬
‫‪ .٢‬التأكد من قوة التيار الكھربائي )‪ ١١٠‬أو ‪ ٢٢٠‬فولت( قبل توصيل األجھزة‪.‬‬
‫‪ .٣‬صيانة األجھزة بشكل دوري وتنظيفھا‪.‬‬
‫‪ .٤‬مراقبة األجھزة أثناء التشغيل وإطفاءھا بعد االنتھاء من االستخدام‪.‬‬

‫‪ .١٫٦‬إرشادات السالمة في مختبرات قسم الكيمياء الحيوية‬

‫‪ .١‬لبس البالطو لحماية مالبسك وجسمك من الكيماويات المنسكبة‪.‬‬
‫‪ .٢‬لبس القفازات المناسبة عند التعامل مع المواد الكيميائية أو العينات‪.‬‬
‫‪ .٣‬لبس الحذاء الواقي يحميك من األخطار المحتملة‪.‬‬
‫‪ .٤‬وضع نظارة واقية لحماية العينين من المواد الكيميائية‪.‬‬
‫‪ .٥‬إزالة الغترة أو الشماغ قبل البدء في إجراء التجربة‪.‬‬
‫‪ .٦‬تأدية التجربة بحرص و ھدوء يقيك من الحوادث‪.‬‬
‫‪ .٧‬تجنب األحاديث الجانبية مع زمالئك أثناء القيام بالتجربة‪.‬‬
‫‪ .٨‬تبليغ الفني المسؤول عن المختبر عن الحوادث مھما كانت صغـيرة‪.‬‬
‫‪ .٩‬ال تتردد في سؤال األستاذ عما ال تعرف‪.‬‬
‫‪ .١٠‬عدم شم أو استنشاق روائح المواد الكيميائية‪.‬‬
‫‪ .١١‬عدم لمس أو تذوق المواد الكيميائية‪.‬‬
‫‪ .١٢‬عدم األكل أو الشرب داخل المختبرات‪.‬‬
‫‪ .١٣‬عدم التدخين داخل المختبرات‪.‬‬
‫‪ .١٤‬عدم إخراج المواد الكيميائية من المختبر‪.‬‬
‫‪ .١٥‬عدم استعمال أو لمس األدوات الملوثة بالكيماويات‪.‬‬
‫‪ .١٦‬طلب اإلسعافات األولية فوراً إذا تعرض أي شخص ألي حادث ال سمح ﷲ‪.‬‬
‫‪ .١٧‬االلتزام باحتياطيات السالمة الخاصة بكل تجربة‪.‬‬
‫‪ .١٨‬إجراء التجارب التي يتصاعد منھا غازات في خزانه شفط الغازات‪.‬‬
‫‪ .١٩‬استخدام التسخين بالحمام المائي بدالً من اللھب المباشر‪.‬‬
‫‪ .٢٠‬سحب السوائل بطريقة آمنه باستخدام الماصات البالستيكية أو الماصات الزجاجية بالضاغطة الھوائية‪.‬‬

‫]‪[٣‬‬
‫‪ .٢١‬اقرأ عالمات التحذير المدونة على زجاجات المواد الكيميائية قبل الستعمال‪.‬‬
‫‪ .٢٢‬عدم محاوله فك الزجاجيات المستعصية بالقوة‪.‬‬
‫‪ .٢٣‬غسل اليدين بالماء والصابون دائما بعد االنتھاء من التجربة‪.‬‬
‫‪ .٢٤‬استخدام المواد المطھرة لتعقيم اليدين ولتعقيم المكان بعد استخدام العينات‪.‬‬
‫‪ .٢٥‬جعل المساحات التي تعمل بھا أو عليھا نظيفة‪.‬‬

‫‪ .١٫٧‬بعض األدوات المستخدمة في المختبرات‬

‫]‪[٤‬‬
 ‫‪ .٢‬المحاليل المنظمة ‪Buffer Solutions‬‬
‫‪ .٢٫١‬الرقم الھيدروجيني ‪pH‬‬
‫اقترح العالم سورنسن ‪ Sorensen‬طريقة للتعبير عن حموضة المحاليل باستخدام الرقم الھيدروجيني الذي ّ‬
‫يعرف بأنه‪:‬‬
‫‪ H‬في المحلول ‪.‬‬ ‫اللوغاريتم السالب لتركيز أيونات الھيدروجين‬

‫‪pH = ‐ Log‬‬
‫وبمالحظة أن اإلشارة سالبة فإن قيمة الرقم الھيدروجيني ترتفع كلما انخفض تركيز أيونات الھيدروجين والعكس صحيح‪.‬‬

‫وسط متعادل ‪Neutral‬‬

‫‪0‬‬ ‫وسط حمضي ‪Acidic‬‬ ‫‪7‬‬ ‫وسط قاعدي ‪Basic‬‬ ‫‪14‬‬

‫‪pH Value‬‬

‫‪ .٢٫٢‬قياس الرقم الھيدروجيني ‪:‬‬

‫لقياس الرقم الھيدروجيني للمحاليل المختلفة بدقة يجب أن نستخدم جھاز خاص يسمى ‪ .pH meter‬يتكون الجھاز من قطبين‪:‬‬
‫األول يسمى قطب مرجعي يحتوي على محلول مشبع من كلوريد البوتاسيوم يعمل اتصاالً كھربائيا ً بالمحلول‪ ،‬والثاني قطب‬
‫زجاجي في أسفله غشاء رقيق على شكل انتفاخ حساس ونفّاذ أليونات الھيدروجين‪ .‬يقيس ھذا الجھاز الفرق في الجھد بين‬
‫القطبين‪ ،‬ويحوله إلى رقم ھيدروجيني من ‪ 0‬إلى ‪.14‬‬

‫جھاز قياس الرقم الھيدروجيني ‪pH meter‬‬

‫]‪[٥‬‬
 ‫‪ .٢٫٣‬المحاليل المنظمة ‪Buffer Solutions‬‬
‫ھي المحاليل التي تقاوم التغـير في الرقم الھيدروجيني عند إضافة كميات قليلة من األحماض أو القواعد القوية أو المخففة‪،‬‬
‫وھي عبارة عن محلول لحمض ضعيف وأحد أمالحه أو قاعدة ضعيفة وأحد أمالحھا‪.‬‬
‫المحاليل المنظمة لھا أھمية كبيرة في األنظمة الكيميائية والبيولوجية بحيث تتميز السوائل الحيوية برقم ھيدروجيني ثابت‪،‬‬
‫ففي جسم اإلنسان تختلف قيمة الـ ‪ pH‬من سائل إلى آخر فمثال في الدم تبلغ ‪ ٧٫٤‬بينما في العصارة المعدية تبلغ ‪ ، ١٫٥‬ھذه‬
‫القيم تعتبر مناسبة ومثالية لعمل اإلنزيمات وموازنة الضغط األسموزي‪ .‬ھذه القيم يحافظ عليھا غالبا ً عن طريق المحاليل‬
‫المنظمة وأھم المحاليل المنظمة ھي الفوسفات والبيكربونات‪.‬‬
‫وضع العالمان ھندرسون و ھاسلبالخ ‪ Henderson & Hasselbalch‬المعادلة األساسية التي توضح العالقة بين الرقم‬
‫الھيدروجيني ‪ pH‬ونسبة الحمض والقاعدة المقترنة‪ .‬وھذه المعادلة لھا أھميتھا في فھم عمل وتحضير المحاليل المنظمة‪.‬‬

‫لنفترض أنه يوجد لدينا محلول من الحمض الضعيف ويرمز له بـ ‪ HA‬فإنه يتفكك لدى إذابته في الماء حسب المعادلة التالية‪:‬‬

‫‪HA‬‬ ‫‪+‬‬
‫حمض ضعيف قرين‬ ‫قاعدة قرينة‬

‫وطبقا ً لقانون فعل الكتلة فإن قيمة ثابت التفكك للحمض ‪:‬‬

‫= ‪Ka‬‬

‫‪ H‬لوحدھا في طرف ونأخذ اللوغاريتم لكال الطرفين الناتجين‬ ‫للحصول على قيمة ‪ pH‬تُفصل‬

‫=‬

‫‪Log‬‬

‫وبحسب قوانين اللوغاريتمات نحصل على ‪:‬‬

‫‪Log‬‬

‫وبضرب الطرفين بـ ) ‪( -‬‬

‫‪‐ Log‬‬

‫‪pH = pKa + log‬‬ ‫معادلة ھندرسون ‪ -‬ھاسلبالخ‬

‫القاعدة القرينة‬
‫‪Or pH = pKa + log‬‬
‫الحمض القرين‬

‫]‪[٦‬‬
‫ويمكن استخدام ھذه المعادلة في حساب الرقم الھيدروجيني للمحلول المنظم المراد تحضيره إذا ُعرفت نسبة الحمض إلى‬
‫القاعدة المقترنة وثابت التفكك للحمض ‪. pKa‬‬
‫ومن المعادلة السابقة نجد أن الرقم الھيدروجيني للمحلول المنظم يعتمد على عاملين ھما ‪:‬‬
‫‪ .١‬قيمة ‪. pKa‬‬
‫‪ .٢‬النسبة بين تركيز الحمض والقاعدة المقترنة‪.‬‬

‫سعة المحلول المنظم )أو كفاءته( ‪Buffer Solution Capacity‬‬ ‫‪.٢٫٤‬‬

‫تُعبر عن مدى مقاومة المحلول المنظم للتغـير في الرقم الھيدروجيني‪ ،‬وتكون أكبر ما يمكن عندما تكون النسبة بين الحمض‬
‫والقاعدة المقترنة مساوية للواحد‪.‬‬
‫من األمثلة‪ :‬حمض الخليك )‐‪ Acetic Acid (CH3COO‬كحمض ضعيف وقاعدته المقترنة ھي خالت الصوديوم‬
‫)‪Sodium Acetate (CH3COONa+‬‬

‫‪ .٢٫٥‬تحضير محلول منظم فوسفاتي ‪Preparation of Phosphate Buffer‬‬

‫المطلوب‪ :‬تحضير واحد لتر من محلول منظم فوسفاتي تركيزه ‪ 0.25M‬و ‪ pH = 7.4‬علما ً بأن )‪(pKa = 7.2‬‬

‫‪ .١‬معرفة مكونات المحلول المنظم وھي‪:‬‬

‫فوسفات الصوديوم ثنائية الھيدروجين ‪ NaH2PO4‬ويعتبر الشق الحمضي )‪(Acid‬‬
‫فوسفات الصوديوم أحادية الھيدروجين ‪ Na2HPO4‬ويعتبر الشق القاعدي )القاعدة المقترنة أو الملح ‪(Salt‬‬

‫‪ .٢‬حساب النسبة بين الحمض والملح باستخدام معادلة ھندرسون كالتالي ‪:‬‬

‫‪pH = pKa + log‬‬

‫‪7.4 = 7.2 + log‬‬

‫‪7.4 – 7.2 = log‬‬

‫‪0.2 = log‬‬

‫وبأخذ مقلوب اللوغاريتم ‪:‬‬

‫‪= 1.6‬‬

‫أي أن النسبة بين الشقين تساوي ‪ 1.6 : 1‬فإذا مزجناھما بحسب ھذه النسبة نحصل على محلول منظم رقمه الھيدروجيني‬
‫يساوي ‪ 7.4‬كما ھو مطلوب في ھذا المثال ‪.‬‬

‫]‪[٧‬‬
 ‫‪ .٣‬حساب وزن كال المادتين كالتالي‪:‬‬

‫‪ x 0.25 x‬الوزن الجزيئي لـ ‪NaH2PO4‬‬ ‫وزن ‪= NaH2PO4‬‬

‫‪.‬‬
‫= ‪ .............‬جرام‬
‫‪.‬‬
‫‪ x 0.25 x‬الوزن الجزيئي لـ ‪Na2HPO4‬‬ ‫وزن ‪= Na2HPO4‬‬
‫‪.‬‬
‫= ‪ .............‬جرام‬
‫‪ .٤‬يذاب وزن كال المادتين في حوالي ‪ 500 ml‬من الماء المقطر في كأس زجاجي‪.‬‬
‫‪ .٥‬يقاس الـ ‪ pH‬للمحلول باستخدام جھاز ‪ pH meter‬وسيكون قريب للمطلوب و يضبط تماما ً على الـ ‪pH‬‬
‫المطلوب بإضافة كميات بسيطة من حمض ‪ HCl‬أو قاعدة ‪. NaOH‬‬
‫‪ .٦‬توضع الكمية في دورق حجمي سعة )‪ (1L‬ثم نكمل الحجم إلى واحد لتر )‪ (1000 ml‬بالماء المقطر‪ ،‬ويُرج‬
‫جيداً‪.‬‬

‫]‪[٨‬‬
 ‫‪ .٢٫٦‬دراسة خواص المحاليل المنظمة ‪Study of Properties of Buffer Solutions‬‬

‫الفكرة األساسية‪:‬‬
‫ھل يتغـير الرقم الھيدروجيني )‪ (pH‬للمحلول المنظم تغـيراً كبيراً أو يقاوم التغـير في الرقم الھيدروجيني عند إضافة حمض‬
‫مخفف أو قاعدة مخففة إليه ومقارنة ذلك بما يحدث للماء المقطر عند إضافة نفس الحمض أو القاعدة إليه‪.‬‬

‫المواد واألدوات المطلوبة‪:‬‬

‫‪ .١‬كـأسين )سعة كل منھما ‪ (50 ml‬وملعقة زجاجية للتحريك‪.‬‬
‫‪ .٢‬جھاز قياس الرقم الھيدروجيني ‪.pH meter‬‬
‫‪ .٣‬محلول منظم فوسفاتي رقمه الھيدروجيني ‪ ) 7.4‬المحضر في الجزء العـملي السابق(‪.‬‬
‫‪ .٤‬حمض ھيدروكلوريك ‪ HCl‬مخفف تركيزه ‪0.1 M‬‬
‫‪ .٥‬محلول ھيدروكسيد صوديوم ‪ NaOH‬مخفف تركيزه ‪0.1 M‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫أوالً‪ :‬دراسة خواص المحلول المنظم باستخدام حمض ھيدروكلوريك ‪ HCl‬تركيزه ‪0.1 M‬‬
‫‪ .١‬ضع في الكأس )أ( ‪ 40 ml‬من الماء المقطر وفي الكأس )ب( ‪ 40 ml‬من المحلول المنظم الفوسفاتي )الذي تم‬
‫تحضيره في الجزء العـملي(‪.‬‬
‫‪ .٢‬يُقاس الرقم الھيدروجيني )‪ (pH‬لمحتويات كال الكأسين باستخدام جھاز ‪pH meter‬‬
‫‪ .٣‬أضف لمحتويات كال الكأسين كمية معينة من حمض الھيدروكلوريك المخفف‪ ،‬وحرك كال المحلولين جيداً بملعقة‬
‫زجاجية نظيفة‪.‬‬
‫‪ .٤‬يُقاس الرقم الھيدروجيني )‪ (pH‬لمحتويات كال الكأسين مرة أخرى‪.‬‬
‫‪ .٥‬أعد الخطوة رقم ‪ ٣‬بإضافة كمية أخرى من حمض ھيدروكلوريك المخفف مرة أخرى لمحتويات كل كأس‪ ،‬وحرك‬
‫المحلولين جيداً بملعقة زجاجية نظيفة‪.‬‬
‫‪ .٦‬يُقاس الرقم الھيدروجيني )‪ (pH‬لمحتويات كل كأس مرة أخرى‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬
‫قيمة الـ ‪ pH‬للماء المقطر‬ ‫قيمة الـ ‪ pH‬للمحلول المنظم‬ ‫حجم الحمض المضاف‬
‫بعد اإلضافة‬ ‫بعد اإلضافة‬ ‫‪volume of HCl 0.1 M‬‬
‫‪0.5 ml‬‬ ‫‪١‬‬
‫‪1 ml‬‬ ‫‪٢‬‬
‫‪2 ml‬‬ ‫‪٣‬‬
‫فرق التغـير في الـ ‪ pH‬بعد اإلضافة‬

‫]‪[٩‬‬
 ‫األسئلة‪:‬‬
‫من خالل نتائج الجدول‪ ،‬أكمل الجمل التالية‪:‬‬
‫نقص الـ ‪ pH‬بعد إضافة الحمض للمحلول المنظم بمقدار ‪ ، .....................‬بينما نقص ‪ pH‬بعد إضافة الحمض‬ ‫‪-‬‬
‫للماء المقطر بمقدار ‪......................‬‬
‫أيھما تغـير له الـ ‪ pH‬بدرجة كبيرة ؟‬ ‫‪-‬‬
‫‪.............................................................................................................................................‬‬
‫أيھما قاوم التغـير في الـ ‪ pH‬؟‬ ‫‪-‬‬
‫‪.............................................................................................................................................‬‬

‫ثانيا ً‪ :‬دراسة خواص المحلول المنظم باستخدام قاعدة ھيدروكسيد الصوديوم ‪ NaOH‬تركيزھا ‪0.1 M‬‬
‫أعد التجربة السابقة مع استبدال حمض الھيدروكلوريك بقاعدة ھيدروكسيد الصوديوم‬
‫النتائج ‪:‬‬
‫قيمة الـ ‪ pH‬للماء المقطر‬ ‫قيمة الـ ‪ pH‬للمحلول المنظم‬ ‫حجم القاعدة المضافة‬
‫بعد اإلضافة‬ ‫بعد اإلضافة‬ ‫‪volume of NaOH 0.1 M‬‬
‫‪0.5 ml‬‬ ‫‪١‬‬
‫‪1 ml‬‬ ‫‪٢‬‬
‫‪2 ml‬‬ ‫‪٣‬‬
‫فرق التغـير في الـ ‪ pH‬بعد اإلضافة‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫من خالل نتائج الجدول‪ ،‬أكمل الجمل التالية‪:‬‬
‫يزيد ‪ pH‬بعد إضافة القاعدة للمحلول المنظم بمقدار ‪ ، ........................................‬بينما يزيد ‪ pH‬بعد إضافة‬ ‫‪-‬‬
‫القاعدة للماء المقطر بمقدار ‪.........................................‬‬
‫أيھما تغـير له الـ ‪ pH‬بدرجة كبيرة ؟‬ ‫‪-‬‬
‫‪.............................................................................................................................................‬‬
‫أيھما قاوم التغـير في الـ ‪ pH‬؟‬ ‫‪-‬‬
‫‪.............................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ١٠‬‬
 ‫‪ .٣‬الكربوھيدرات )‪(١‬‬

‫الكربوھيدرات ھي مركبات عض وية ألدھيدية أو كيتونية متعددة الھيدروكس يل أو التي تعطي عند تحللھا مائيا ألدھيدات أو‬
‫كيتونات عديدة الھيدروكس يل‪ .‬وھي تتكون من عناص ر الكربون )‪ (C‬واألكس جين )‪ (O‬والھيدروجين )‪ (H‬وبعض ھا يحتوي‬
‫على النيتروجين )‪ (N‬والفوسفات )‪ (P‬والكبريت )‪(S‬‬
‫وصيغتھا الجزيئية ھي ‪:‬‬

‫‪(CH2O)n‬‬

‫وظيفة الكربوھيدرات‪:‬‬ ‫‪.٣٫١‬‬

‫الوظيفة األساسية للكربوھيدرات ھي توفير الطاقة لجسم الكائن الحي خاصةً الدماغ والجھاز العصبي‪ ،‬والمادة األولية‬
‫للكربوھيدرات في الجسم ھي الجلوكوز ويسمى الجلوكوز بسكر الدم ألنه يسير في الدم ويصل إلى كل خلية في الجسم لكي‬
‫تستفيد منه في إنتاج الطاقة التي تحتاجھا الخلية‪ .‬حيث يدخل الجلوكوز في العديد من العـمليات البيولوجية التي تؤدي إلى إنتاج‬
‫الطاقة الالزمة لضمان استمرار الحياة وكذلك قيام الخلية بوظائفھا‪ ،‬كما أنه قد يُستخدم في تصنيع أنواع أخرى من السكريات‬
‫األحادية كالفركتوز والجاالكتوز‪.‬‬
‫ويتم تخزين الجلوكوز في الخلية النباتية على ھيئة نشاء وفي الحيوانات على ھيئة جاليكوجين حيث يُخزن في العضالت‬
‫والكبد والمخزون في الكبد يمكن أن يكون مصدرا للجلوكوز لجميع أنسجة وأعضاء الجسم عند الحاجة‪.‬‬

‫تصنيف الكربوھيدرات ‪:‬‬ ‫‪.٣٫٢‬‬

‫)‪ (١‬س كر أحادي )‪ :(Monosaccharides‬ھي أبس ط أنواع الكربوھيدرات وھي الوحدات البنائية للس كريات الثنائية و‬
‫العـديدة‪ ،‬يُرمز لھا بالصيغة الجزيئية ‪ Cn(H2O)n‬و تُصنف إلى قسمين‬
‫سكر ألدھيدي الحتوائه على مجموعة ألدھيد مثل الجلوكوز‪.‬‬ ‫أ‪.‬‬
‫ب‪ .‬سكر كيتوني الحتوائه على مجموعة كيتون مثل الفركتوز‪.‬‬

‫‪Keto group‬‬ ‫‪Aldehyde group‬‬

‫‪D‐Fructose‬‬ ‫‪D‐Glucose‬‬
‫‪Ketohexose‬‬ ‫‪Aldohexose‬‬

‫] ‪[ ١١‬‬
‫)‪ (٢‬س كريات ثنائية )‪ :(Disaccharides‬ھي ناتجه عن اتحاد جزيئين من الس كريات األحادية الس داس ية‪ ،‬وأھمھا‬
‫السكروز والمالتوز والالكتوز‪.‬‬

‫ددة )‪ :(Oligosaccharides‬تش مل الس كريات التي تنش أ من اتحاد ‪ ٣‬إلى ‪ ١٠‬وحدات من‬ ‫)‪ (٣‬الس كريات المتعـ‬
‫السكريات األحادية‪ ،‬ومثالھا سكر رافينوز‪.‬‬

‫‪Glucose‬‬ ‫‪+‬‬ ‫‪Glucose‬‬ ‫‪+‬‬ ‫‪Fructose‬‬

‫‪Raffinose‬‬

‫)‪ (٤‬السكريات العـديدة )‪ :(Polysaccharides‬وھي ناتجة من اتحاد عدد كبير من الجزيئات السكريات األحادية يربط‬
‫بينھا روابط جاليكوسيدية‪ ،‬وأشھرھا النشاء )األمايلوز ‪ ،‬األمايلوبكتين( و الجاليكوجين و السيليولوز‪.‬‬

‫‪Amylose‬‬

‫] ‪[ ١٢‬‬
Amylopectin

Cellulose

[ ١٣ ]
 ‫االختبارات العامة للكربوھيدرات‪:‬‬ ‫‪.٣٫٣‬‬
‫الھدف من ھذه االختبارات‪:‬‬
‫‪ .١‬التعرف على الكربوھيدرات كمواد مختلفة عن الليبيدات والبروتين‪.‬‬
‫‪ .٢‬التمييز بين السكريات المختزلة وغـير المختزلة‪.‬‬
‫‪ .٣‬التمييز بين السكريات األحادية والثنائية والعـديدة‪.‬‬
‫‪ .٤‬التمييز بين السكر األلدھيدي والسكر الكيتوني‪.‬‬
‫‪ .٥‬التمييز بين الس كريات األحادية خماس ية ذرات الكربون )البنتوزات( والس كريات األحادية س داس ية ذرات الكربون‬
‫)الھكسوزات(‪.‬‬

‫‪ .٣٫٣٫١‬اختبار الذوبانية ‪Solubility Test‬‬

‫تذوب الس كريات األحادية و الثنائية في المحاليل المائية نظراً الحتوائھا على مجموعات قطبية مثل مجموعة الھيدروكس يل‬
‫والتي تس تطيع تكوين روابط ھيدروجينية مع الماء بينما الس كريات العـ ديدة فھي إما ض ئيلة أو عديمة الذوبان وذلك بس بب‬
‫وزنھا الجزيئي الكبير و طول السالسل المكونة لھا و درجة تفرعھا‪.‬‬
‫يمكننا من خالل ھذه التجربة التمييز بين السكريات األحادية والثنائية من جھة والسكريات العـديدة من جھة أخرى‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫الس كريات األحادية والثنائية قابلة للذوبان في الماء أما الس كريات العـ ديدة فنظراً لكبر جزيئاتھا فإنھا ش حيحة الذوبان أو‬
‫عديمة الذوبان في الماء وإذا ذابت فإنھا تُك ّون محاليل غروية وتظھر معكرة نوعا ً ما‪.‬‬

‫األدوات و المواد‪:‬‬
‫محاليل مواد سكرية أحادية )جلوكوز ‪ -‬فركتوز ‪ -‬رايبوز(‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫محاليل مواد سكرية ثنائية )سكروز ‪ -‬الكتوز ‪ -‬مالتوز (‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫محاليل مواد سكرية متعددة )النشاء(‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫اختبر ذوبانية كل مادة على حده وذلك ب َر ّج كمية قليلة من المادة مع الماء البارد أوالً ثم مع الماء الساخن‪.‬‬
‫د ّون مالحظاتك في الجدول التالي وقارن بين درجة ذوبانية المواد في الماء البارد والساخن‪.‬‬

‫] ‪[ ١٤‬‬
 ‫النتائج‪:‬‬

‫إذابة في ماء ساخن‬ ‫إذابة في ماء بارد‬ ‫األنبوبة‬

‫جلوكوز‬

‫سكريات أحادية‬
‫فركتوز‬
‫رايبوز‬
‫سكروز‬

‫سكريات ثنائية‬
‫مالتوز‬
‫الكتوز‬
‫سكريات‬
‫نشاء‬ ‫عديدة‬

‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.........................................................................................................................................................................................................‬‬

‫‪.........................................................................................................................................................................................................‬‬

‫‪.........................................................................................................................................................................................................‬‬

‫‪.........................................................................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫لماذا تُك ّون السكريات العـديدة محاليل غروية ؟‬
‫‪.........................................................................................................................................................................................................‬‬

‫‪.........................................................................................................................................................................................................‬‬

‫‪.........................................................................................................................................................................................................‬‬

‫‪..................................................................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ١٥‬‬
 ‫‪ .٣٫٣٫٢‬اختبار موليش ‪Molisch's Test‬‬
‫يعتبر اختبار عام للكش ف عن الكربوھيدرات وتمييزھا عن الليبيدات والبروتينات و يُعطي ھذا االختبار نتيجةً إيجابية عبارة‬
‫عن لون بنفسجي مع جميع أنواع الكربوھيدرات )أحادية‪ ،‬ثنائية‪ ،‬متعددة‪ ،‬عديدة(‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫عند إض افة األحماض المركزة إلى الس كريات يتم نزع ‪ ٣‬جزيئات ماء من ثالث مجموعات ھيدروكس يل في الس كر ويتكون‬
‫مرك ب أل دھي دي حلقي )فورفورال( تتف اع ل مجموع ة األل دھي د في ه مع الكثير من المركب ات العطري ة كمرك ب ألف ا‪ -‬ن افثول‬
‫الكحولي فتنتج عنه مركبات ملونة تس تخدم للتعرف على وجود الس كريات‪ .‬حيث ينتج فورفورال من الس كر خماس ي ذرات‬
‫الكربون وھيدروكس ي ميثايل فورفورال من الس كر س داس ي ذرات الكربون‪ ،‬ويمكن لكل منھما أن يتفاعل مع مركب ألفا‪-‬‬
‫نافثول ليتكون مركب بنفسجي يظھر على ھيئة حلقة أو قرص يفصل بين طبقتين‪.‬‬

‫‪Pentose‬‬ ‫‪Furfural‬‬

‫‪Hexose‬‬ ‫‪5‐OH‐methyl furfural‬‬

‫* معلومة ‪ :‬الكاشف الكيميائي ‪ Chemical Reagent‬ھو مادة كيميائية مصنّعة تتفاعل مع المادة الطبيعية ُ‬
‫المراد‬
‫الكشف عنھا وينتج عن ھذا التفاعل مركب ذو لون مميز‪.‬‬

‫] ‪[ ١٦‬‬
 ‫األدوات و المواد‪:‬‬
‫حمض الكبريتيك المركز‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول ‪ % ٥‬ألفا‪ -‬نافثول )‪٥٠‬جم‪/‬لتر مذاب في كحول اإليثانول ويجب أن يكون حديث التحضير(‬ ‫‪‬‬
‫محاليل بعض الكربوھيدرات‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع في أنبوبة االختبار ‪ ٢‬مل من محلول الكربوھيدرات‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٣‬نقط من محلول ‪ % ٥‬ألفا‪ -‬نافثول‪.‬‬
‫‪ .٣‬أض ف ب احتراس وببطء )على ج ان ب األنبوب ة( ‪ ٢‬م ل من حمض الكبريتي ك المركز مع عدم الرج بحيث تتكون‬
‫طبقتان تفص ل بينھما حلقة بنفس جية اللون في حال وجود مواد كربوھيدراتية‪ ،‬ينتش ر ھذا اللون البنفس جي عند رج‬
‫األنبوبة ليتلون الخليط كله باللون البنفسجي‪ .‬تعتمد كثافة اللون على تركيز المادة السكرية المختبرة‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫لماذا تعطي جميع السكريات نتيجة إيجابية مع اختبار موليش ؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫ھل الحظت سخونة في األنبوبة عند نھاية التجربة مع أنك لم تقم بتسخينھا ! ماھو تعليلك ؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ١٧‬‬
 ‫‪ .٣٫٣٫٣‬االختبارات االختزالية ‪Reducing Tests‬‬
‫تُقس م الس كريات إلى س كريات مختزلة أو غـ ير مختزلة‪ ،‬فإذا وجدت مجموعة كربونيل )‪ُ (C=O‬حره ُس ميت بالس كريات‬
‫المختزلة أما إذا ارتبطت تلك المجموعة بمادة أخرى و أصبحت غـ ير حرة )مثل السكر الثنائي سكروز( فإنھا تفقد صفاتھا‬
‫االختزالية‪.‬‬

‫‪ .٣٫٣٫٣٫١‬اختبار بندكت ‪Benedict’s Test‬‬

‫يُُميز السكريات المختزلة )الجلوكوز ‪ -‬الفركتوز ‪ -‬المالتوز ‪ -‬الالكتوز ‪ -‬الرايبوز( عن غـير المختزلة )السكروز(‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫تتميز السكريات األلدھيدية والكيتونية بقدرتھا االختزالية لكثير من المواد المؤكسدة )لذلك تُصنّف بأنھا عوامل مختزلة قوية(‬
‫وبذلك تتأكسد مجموعة األلدھيد والكيتون إلى مجموعة كربوكسيلية‪.‬‬
‫اختبار بندكت يميز الس كريات المختزلة ‪) Reducing Sugars‬ھي الس كريات المحتوية على مجموعة ألدھيد أو كيتون‬
‫حرة مجاورة لمجموعة كحولية حرة(‪ .‬تختزل السكريات المختزلة مثل الجلوكوز محلول كاشف بندكت )يحتوي على أيونات‬
‫النحاس يك في وس ط قاعدي( حيث يؤدي الوس ط القاعدي إلى تحول التركيب الحلقي للس كر )ھيمي أس يتال( إلى التركيب‬
‫المفتوح )الصورة األلدھيدية أو الكتونية(‪ .‬ثم تؤكسد أيونات النحاسيك مجموعة األلدھيد أو الكيتون إلى مجموعة كربو كسيل‬
‫وبالتالي تُختزل أيونات النحاسيك إلى نحاسوز وتكون على ھيئة راسب أحمر من أكسيد النحاسوز‪.‬‬

‫‪Aldehyde‬‬ ‫‪Carboxyl‬‬ ‫راسب أحمر من‬

‫أكسيد النحاس‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫محاليل سكرية مختلفة )‪( % ١‬‬ ‫‪‬‬
‫كاشف بندكت )كبريتات النحاس ‪ +‬كربونات الصوديوم ‪ +‬سترات الصوديوم(‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي يغلي‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع ‪ ١‬مل في كل أنبوبة من محلول السكر‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٢‬مل من كاشف بندكت ورج المزيج‪.‬‬
‫‪ .٣‬ضع األنابيب في حمام مائي يغلي لمدة دقيقة واحدة‪.‬‬
‫‪ .٤‬أترك األنابيب لتبرد والحظ تكون راس ب أحمر أو برتقالي أو أخض ر وذلك حسب كمية السكر المختزل‪ .‬في غياب‬
‫السكريات المختزلة يتكون لون أسود من أكسيد الحديديك‪.‬‬

‫] ‪[ ١٨‬‬
 ‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫أي من السكريات تختزل كاشف بندكت ؟ ولماذا ؟ اذكر مثال علي ذلك؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫أي من السكريات ال تختزل كاشف بندكت ؟ ولماذا ؟ اذكر مثال علي ذلك؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫بالرغم من أن السكروز والمالتوز كل منھما سكر ثنائي إال أن أحدھما مختزل واآلخر غـير مختزل‪ .‬كيف تفسر ذلك؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ١٩‬‬
 ‫‪ .٣٫٣٫٣٫٢‬اختبار بارفويد ‪Barfoed’s Test‬‬
‫يميز الس كريات األحادية المختزلة )الجلوكوز‪ -‬الفركتوز‪ -‬األرابينوز‪ -‬الرايبوز( عن الس كريات الثنائية المختزلة )المالتوز ‪-‬‬
‫الالكتوز(‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫في ھذا االختبار تقوم السكريات باختزال محلول كاشف بارفويد )يتكون كاشف بارفويد من محلول خالت النحاس في حمض‬
‫الخليك( في وس ط حمض ي بدالً من الوس ط القلوي كما ھو الحال في اختبار بندكت‪ .‬وفي ھذه الظروف تس تجيب الس كريات‬
‫األحادية المختزلة لالختبار أسرع من السكريات الثنائية المختزلة حيث تتفاعل السكريات الثنائية المختزلة ببطء‪ .‬لكن يالحظ‬
‫أنه عند زيادة التس خين فوق خمس دقائق فان السكريات الثنائية سوف تتحلل بفعل الحرارة إلى سكريات أحادية وبذلك تعطي‬
‫نفس النتيجة‪.‬‬

‫‪Aldehyde‬‬ ‫‪Carboxyl‬‬ ‫راسب أحمر من‬

‫أكسيد النحاس‬
‫في قاع األنبوب‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫محاليل سكرية مختلفة )‪(% ١‬‬ ‫‪‬‬
‫كاشف بارفويد )يذاب ‪ ١٣٫٣‬جم من خالت النحاس في ‪٢٠٠‬مل ماء ثم يضاف ‪ ١٫٨‬جم من حمض الخليك(‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي يغلي‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع ‪ ١‬مل من محلول السكر في أنبوبة اختبار‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ١‬مل من كاشف بارفويد ثم رج األنبوب‪.‬‬
‫‪ .٣‬ضعھا في حمام مائي يغلي لمدة ‪ ٣-٢‬دقائق‪.‬‬
‫‪ .٤‬الحظ تكون راسب أحمر طوبي في قاع األنبوب يدل على وجود سكر أحادي مختزل‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫] ‪[ ٢٠‬‬
 ‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫لماذا يجب عدم ترك األنابيب تغلي لمدة تتجاوز خمس دقائق؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫ما وجه االختالف بين اختبار بندكت و اختبار بارفويد؟‬

‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫ما الفرق بين السكريات التي أظھرت نتيجة إيجابية مع ھذا االختبار وتلك التي لم تُظھر؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٢١‬‬
 ‫‪ .٣٫٣٫٤‬اختبار بيال ‪Bial’s Test‬‬
‫يس تخدم ھذا االختبار للتمييز بين فئتين متقاربتين في التركيب الكيميائي ھما الس كريات األحادية خماس ية ذرات الكربون ‪C5‬‬
‫)البنتوزات مثل االرابينوز والرايبوز( والس كريات األحادية س داس ية ذرات الكربون ‪) C6‬الھكس وزات مثل الجلوكوز‬
‫والفركتوز(‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫عند تس خين محلول الس كر الخماس ي )البنتوز( مع حمض الھيدروكلوريك المركز لمدة قص يرة يتم نزع ‪ ٣‬جزيئات ماء و‬
‫يتكون مركب الفورفورال وھذا المركب الوس طي بدوره يتفاعل مع كاش ف بيال )يتكون من مركب األورس ينول في وجود‬
‫أيونات الحديديك( حيث يتكون معقد ذو لون أخضر مائل إلى األزرق‪ .‬بينما إذا تم تسخين محلول السكر السداسي )الھكسوز(‬
‫مع حمض قوي يتكون مركب ھيدروكس ي ميثايل فورفورال وھذا المركب الوس طي أيضا ً يتفاعل مع كاشف بيال ولكن ينتج‬
‫عنه معقد ذو لون أحمر فاتح‪.‬‬

‫‪Pentose‬‬ ‫‪Furfural‬‬ ‫‪Orcinol‬‬ ‫‪Bluish Green dye‬‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫كاش ف بيال )يذاب ‪ ١٫٥‬جم من األورس ينول في ‪ ٥٠٠‬مل من حمض الھيدروكلوريك المركز ثم يضاف ‪ ٢‬مل من‬ ‫‪‬‬
‫محلول ‪ %١٠‬كلوريد الحديديك(‬
‫محاليل سكرية مختلفة )‪.(% ١‬‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي يغلي‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع ‪ ١‬مل من محلول السكر في أنبوبة اختبار‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٢‬مل من كاشف بيال ثم رج األنبوب‪.‬‬
‫‪ .٣‬ضعھا في حمام مائي يغلي لمدة ‪ ٣-٢‬دقائق‪.‬‬
‫‪ .٤‬الحظ تكون لون أخضر مائل إلى األزرق يدل على وجود سكر أحادي خماسي ذرات الكربون‪.‬‬

‫] ‪[ ٢٢‬‬
 ‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫ماھي السكريات التي تتفاعل مع كاشف بيال؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫ما ھو المركب الذي يتكون خالل التفاعل والذي بدوره يتفاعل مع كاشف بيال؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٢٣‬‬
 ‫‪ .٣٫٣٫٥‬اختبار سيليفانوف ‪Seliwanoff's Test‬‬
‫يس تخدم ھذا االختبار لتمييز الس كريات األحادية الكيتونية )الفركتوز( عن الس كريات األحادية األلدھيدية )الجلوكوز(‪ ،‬كذلك‬
‫السكريات الثنائية التي تعطي سكريات كيتونية بالتحلل المائي مثل السكروز‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫تختلف الس كريات الكيتونية عن الس كريات األلدھيدية في أنھا تفقد جزيئات الماء بس ھولة وتك ّون مركب ھيدروكس ي ميثايل‬
‫فورفورال الذي يتكثف مع كاش ف س يليفانوف )يتكون من مركب الريزورس ينول مع حمض الھيدروكلوريك( ليتكون معقد‬
‫أحمر اللون‪ .‬وعلى ذلك يجب أال يُسخن المحلول لمدة طويلة وإال فإن السكريات األلدھيدية تعطي نتيجة إيجابية أيضا ً‪.‬‬

‫‪Resorcinol‬‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫كاشف سيليفانوف )‪ ٠٫٥‬جم ريزوسينول‪/‬لتر من حمض الھيدروكلوريك ‪ ٣‬عياري(‬ ‫‪‬‬
‫محاليل سكرية مختلفة )‪.(% ١‬‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي يغلي‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع ‪ ١‬مل من محلول السكر في أنبوبة اختبار‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٢‬مل من كاشف سيليفانوف ثم رج األنبوب‪.‬‬
‫‪ .٣‬ضع المحلول في حمام مائي يغلي لمدة ‪ ٥‬دقائق‪.‬‬
‫‪ .٤‬الحظ تكون لون أحمر داكن مع الس كريات الس داس ية الكيتونية بينما الس كريات الس داس ية األلدھيدية تعطي لون‬
‫احمر قرمزي فاتح ببطء‪.‬‬

‫] ‪[ ٢٤‬‬
 ‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫ماھي السكريات التي تعطي نتيجة إيجابية مع كاشف سيليفانوف؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٢٥‬‬
 ‫‪ .٤‬الكربوھيدرات )‪(٢‬‬

‫ھناك نوعان من الكربوھيدرات‪:‬‬

‫‪ .١‬كربوھيدرات بسيطة‪ :‬تتكون من السكريات األحادية فقط‬
‫‪ .٢‬كربوھيدرات معـقدة‪ :‬تتكون من جزيء سكري وجزيء آخر غـير سكري مثل البروتينات وتسمى جاليكوبروتين‬
‫أو الدھون وتسمى جاليكوليبيد‪.‬‬

‫‪.٤٫١‬التركيب الحلقي للسكريات األحادية‬

‫أثبتت الدراسات أن السكريات األحادية توجد في محاليلھا على ھيئة الصورة الحلقية وتسمى ھيمي أستيال ‪Hemiacetal‬‬
‫وأن السلسلة المفتوحة تُعد ذات نسبة ضئيلة جداً في المحلول و الشكل الحلقي ينتج عنه أشكال متناظرة ً‬
‫بناء على ارتباط ذرة‬
‫الكربون رقم ‪ ١‬في الجلوكوز الحلقي‪ ،‬فإذا كانت مجموعة الھيدروكسيل إلى أسفل أو اليمين يطلق على المتناظر ألفا )‪(α‬‬
‫والعكس إذا اتجھت إلى أعلى أو اليسار يطلق عليه بيتا )‪.(β‬‬

‫َحلَقي‬ ‫مفتوح‬ ‫َحلَقي‬

‫‪.٤٫٢‬الكربوھيدرات عديدة التسكر ‪:‬‬

‫ھي كربوھيدرات ينتج من تحللھا المائي عدد كبير من الس كريات األحادية و تتكون ھذه الس كريات من س لس لة طويلة جداً‬
‫ممكن أن تكون مس تقيمة أو متفرعة مرتبطة بواس طة روابط جاليكوس يدية ‪ ، Glycosidic Bonds‬وقد تكون متجانسة أي‬
‫أنھا تحتوي على نوع واحد من الس كريات األحادية كالنش اء أو الس يليولوز‪ ،‬أو تكون غـ ير متجانس ة أي أنھا تحتوي علي‬
‫ديدة عموما ً وكذلك المتعددة والثنائية بواس طة‬ ‫أكثر من نوع من الس كريات األحادية كالھيبارين‪ .‬وتتحلل الس كريات العـ‬
‫األحماض القوية أو اإلنزيمات التي تحلل تلك الروابط إلى مكوناتھا من السكريات األحادية‪.‬‬

‫] ‪[ ٢٦‬‬
‫‪.٤٫٣‬االختبارات الوصفية للسكريات العـديدة والثنائية ‪Qualitative Tests for Di and Ploy Saccharides‬‬

‫‪ .٤٫٣٫١‬اختبار اليود ‪Iodine Test‬‬

‫يستخدم ھذا االختبار للتمييز بين السكريات العـ ديدة )النشاء – الجاليكوجين – الديكسترين ‪ -‬األنيولين( والسكريات األخرى‬
‫)األحادية و الثنائية(‪ .‬حيث تعطي بعض السكريات العـ ديدة مثل النشاء )أمايلوز و أمايلوبكتين( و الجاليكوجين و الدكسترين‬
‫ألوانا ً مميزةً عند إضافة اليود إليھا‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫تعتم د فكرة ھ ذا التف اع ل على ظ اھرة فيزي ائي ة لوني ة وليس تف اعالً كيميائيا ً‪ ،‬حيث يتموض ع اليود بين طيّّات الس الس ل‬
‫الكربوھيدراتية الحلزونية لجزيء األمايلوز مثالً ويعطي لون أزرق داكن ناتج عن انعكاس الضوء‪ ،‬ھذا اللون يزول بالتدفئة‬
‫ويعود ب التبري د مرةً أخرى و األم ايلوبكتين يعطي لون بنفس جي مع اليود‪ ،‬بينم ا يعطي الجاليكوجين لون ا ً بني ا ً ويعطي‬
‫الديكس ترين ألوانا ً تتدرج من البنفس جي الفاتح إلي البني إلي األص فر تبعا ً لعدد وحدات الجلوكوز بجزيء الدكس ترين‪ ،‬وال‬
‫يعطي األنيولين أي لون مع اليود‪ .‬وكذلك ال تعطي السكريات األحادية أو الثنائية نتائج إيجابية مع ھذا االختبار‪.‬‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫محلول اليود ) يذاب ‪ ٠٫٦‬جم من اليود في ‪ ٥٠٠‬مل من محلول يوديد البوتاسيوم ‪(%٣‬‬ ‫‪‬‬
‫محاليل سكريات عديدة )النشاء ‪ -‬الجاليكوجين ‪ -‬الديكسترين(‬ ‫‪‬‬
‫محاليل سكريات أحادية وثنائية )جلوكوز ‪ -‬سكروز(‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع ‪ ٢‬مل من محلول الكربوھيدرات في أنبوبة اختبار‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٣‬نقط من محلول اليود‪.‬‬
‫‪ .٣‬رج جي داً والحظ اللون المتك ّون‪ ،‬بع د ذلك س خن األنبوبة والحظ اختفاء اللون ثم برد األنبوبة والحظ عودة اللون‬
‫مرةً أخرى‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫] ‪[ ٢٧‬‬
 ‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫لماذا يعطي النشاء والجاليكوجين نتيجة إيجابية بينما ال يعطي الجلوكوز وال السكروز نفس النتيجة؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٢٨‬‬
 ‫‪ .٤٫٣٫٢‬التحلل المائي للسكروز ‪Sucrose Hydrolysis‬‬
‫يس تخدم ھذا االختبار للكش ف عن نواتج التحلل المائي للس كروز بواس طة حمض الھيدروكلوريك المركز حيث يتم كس ر‬
‫الرابطة الجاليكوسيدية وإضافة جزيء ماء‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫الس كروز س كر ثنائي يتكون من ارتباط جزيء من الجلوكوز مع جزيء من الفركتوز في الذرتين ‪ ١‬و ‪ ٢‬على الترتيب ولذا‬
‫ال توجد مجموعات مختزلة في الس كروز وبالتالي فإنه ال يمتلك الخواص االختزالية فال يؤثر على كاش ف بندكت أو كاش ف‬
‫ب ارفوي د إال في ح ال تحلل ه إلى مكون ات ه من الس كري ات األحادية‪ .‬فعند تحلله مائيا يعطي الس كرين المختزلين الجلوكوز‬
‫والفركتوز فيكتسب خواصا ً اختزالية مما يسھل الكشف بطريقة غير مباشرة عن وجوده في المحاليل‪.‬‬

‫‪HCl‬‬
‫‪H 2O‬‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫محلول سكروز )‪ ١‬جم‪/‬لتر(‬ ‫‪‬‬
‫حمض الھيدروكلوريك المركز‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول ھيدروكسيد الصوديوم )‪٥‬عياري(‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫كاشف بندكت‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي يغلي‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصه‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع ‪ ٢‬مل من محلول السكروز في أنبوبة اختبار‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٣‬نقط من حمض الھيدروكلوريك المركز‪.‬‬
‫‪ .٣‬سخن لمدة ‪ ٥‬دقائق في حمام مائي يغلي ثم أترك األنبوبة لتبرد‪.‬‬
‫‪ .٤‬أضف ‪ ٠٫٥‬مل من محلول ھيدروكسيد الصوديوم لتحصل على محلول متعادل أو قلوي‪.‬‬
‫‪ .٥‬اكش ف عن وجود الجلوكوز و الفركتوز في المحلول وذلك بإجراء اختبار بندكت للكش ف عن الجلوكوز أو إجراء‬
‫اختبار سيليفانوف للكشف عن الفركتوز‪.‬‬

‫] ‪[ ٢٩‬‬
 ‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫مما يتكون السكروز؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫السكروز سكر غـير مختزل! لماذا؟‬

‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٣٠‬‬
 ‫‪ .٤٫٣٫٣‬التحلل المائي للنشاء ‪Starch Hydrolysis‬‬
‫يس تخدم ھذا االختبار للتعرف على طبيعة الس كر األحادي المكون لجزيء النش اء وذلك بالتحلل المائي في وس ط حمض ي‬
‫حيث يتكون الجلوكوز الذي يمكن الكشف عنه بواسطة اختبار بندكت‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫ال يحتوي جزيء النشاء العـ مالق إال على عدد محدد جداً من المجموعات المختزلة ولذا فھو أساسا ً ال يختزل كاشف بندكت‬
‫وال كاشف بارفويد‪ .‬أما بعد التحلل المائي فينتج عنه الجلوكوز وھو سكر مختزل يمكنه اختزال كاشف بندكت أو بارفويد‪.‬‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫محلول النشاء )‪(%١‬‬ ‫‪‬‬
‫حمض الھيدروكلوريك المركز‬ ‫‪‬‬
‫محلول ھيدروكسيد الصوديوم )‪ ٥‬عياري(‬ ‫‪‬‬
‫محلول اليود‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫كاشف بندكت‬ ‫‪‬‬
‫ھيدروكسيد الصوديوم ‪%١٠‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع ‪ ٢‬مل من النشاء في أنبوبة اختبار‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٣‬نقط من حمض الھيدروكلوريك المركز‪.‬‬
‫‪ .٣‬سخن في حمام مائي يغلي لمدة ‪ ١٠‬دقائق‪ ،‬ثم برد المحلول‪.‬‬
‫‪ .٤‬أضف ‪ ٠٫٥‬مل من ھيدروكسيد الصوديوم لكي يصبح الوسط قاعديا ً‪.‬‬
‫‪ .٥‬قسم محتوى األنبوبة إلى أنبوبتين نظيفتين بالتساوي‪.‬‬
‫‪ .٦‬أضف إلحدى األنبوبتين ‪ ١‬مل من محلول اليود والحظ النتيجة‪.‬‬
‫‪ .٧‬أضف لألنبوبة الثانية ‪ ١‬مل من ‪ NaOH‬و ‪ ١‬مل من كاشف بندكت ثم رج و سخن لمدة ‪ ٣‬دقائق والحظ النتيجة‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫] ‪[ ٣١‬‬
 ‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫ماذا ينتج من تحلل النشاء؟ وكيف يمكن الكشف عنه؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٣٢‬‬
 ‫‪ .٥‬الليبيدات ‪Lipids‬‬

‫توج د ال دھون طبيعيا ً في الكائنات الحية‪ ،‬حيث تُمثل حوالي ‪ % ٥‬من تركيب الخلية الحية‪ ،‬ولھا وظائف تركيبية في الخلية‪،‬‬
‫حيث تدخل في تركيب الغش اء الخلوي‪ ،‬وتعتبر الدھون مص درا أس اس يّا ً من مص ادر الطاقة في الجس م تفوق كل من‬
‫الكربوھيدرات والبروتينات‪.‬‬
‫ويمكن تعريفھا بأنھا مركبة عض وية غـ ير قطبية عديمة الذوبان في الماء ولكنھا تذوب في المذيبات العض وية مثل البنزين‬
‫واإليثر والكلوروفورم وغـيرھا‪.‬‬

‫‪.٥٫١‬األحماض الدھنية ‪Fatty Acids‬‬

‫ھي الوحدات البنائية للدھون‪ ،‬وھي عبارة عن س لسلة ھيدروكربونية )‪ (Hydrocarbon Chain‬طويلة تحتوي في طرفھا‬
‫على مجموعة كربو كسيل )‪ .(Carboxyl Group‬وتنقسم األحماض الدھنية إلى‪:‬‬

‫أحماض دھنية مشبّعة )‪(Saturated Fatty Acids‬‬ ‫‪‬‬

‫أحماض دھنية غـير مشبّعة )‪(Unsaturated Fatty Acids‬‬ ‫‪‬‬

‫الصيغة العامة لألحماض الدھنية‪:‬‬

‫‪CH3 (CH2)n COOH‬‬

‫يمكن تقسم الليبيدات حسب تركيبھا الكيميائي إلى‪:‬‬

‫أ‪ -‬ليبيدات بسيطة )‪:(Simple Lipids‬‬
‫وھي إسترات األحماض الدھنية مع الكحول مثل الجليسيرول‪ ،‬ومن أمثلتھا الدھون والزيوت )‪ .(Fats and Oils‬ويعتبر‬
‫ثالثي أسايل الجليسيرول ‪ Triacylglycerol‬من أبسط وأكثر الدھون انتشاراً وھو الصورة التي تُخزن عليھا الدھون ومخزن‬
‫الطاقة داخل الخلية‪ .‬والصيغة العامة للدھون والزيوت ھي‬

‫‪Triacylglycerol‬‬

‫] ‪[ ٣٣‬‬
 ‫ب‪ -‬ليبيدات مركبة )‪:(Conjugated Lipids‬‬
‫وھي دھون تربط مع مركبات أخرى مثل الفوسفوليبيد )‪ (Phospholipids‬و الجاليكوليبيد )‪.(Glycolipids‬‬

‫ج‪ -‬ليبيدات مشتقة )‪:(Derived Lipids‬‬

‫وھي مواد توجد ذائبة في الدھون وبالرغم من أن العديد منھا ليست إسترات ولكن حيث إنھا توجد ذائبة في الدھون‬
‫أو اشتُقت من تحلل الدھون مائيا فتعتبر جوازاً أنھا دھون مشتقة ومن أمثلتھا الكولسترول‪.‬‬

‫] ‪[ ٣٤‬‬
 ‫‪.٥٫٢‬االختبارات الوصفية لـ الليبيدات ‪Qualitative Tests of Lipids‬‬

‫‪ .٥٫٢٫١‬اختبار الذوبانية ‪Solubility Test‬‬

‫يھدف ھذا االختبار إلى إثبات أن الزيوت والدھون ھي مركبات تختلف في ذوبانھا عن الكربوھيدرات و البروتينات نظراً‬
‫الختالف تركيبھا الكاره للماء‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫ال تذوب الزيوت أو الدھون في الماء نظراً لطبيعتھا الغـير قطبية )‪ (Hydrophobic‬ولكنھا تذوب في المذيبات العضوية‬
‫كاإليثر والبنزين والكلوروفورم والكحول المغلي وغـيرھا‪.‬‬
‫تختلف الدھون فيما بينھا في قابليتھا للذوبان في المذيبات العضوية المختلفة ويستفاد من ذلك في فصل خليط من الدھون عن‬
‫بعضھا البعض وعلى سبيل المثال ال تذوب الفوسفاتيدات )‪ (Phosphatides‬في األسيتون وال تذوب السيريبروسايد‬
‫)‪ (Cerebroside‬وكذلك السفنجومايلين )‪ (Sphingomyelin‬المختلفة في اإليثر‪.‬‬

‫المواد واألدوات‪:‬‬
‫زيت الزيتون )أو زيت بذرة القطن( ‪ -‬زبدة ‪ -‬زيت الذرة‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫المذيبات‪ :‬حمض مخفف ‪ -‬قلوي مخفف ‪ -‬إيثانول ‪ -‬إيثر ‪ -‬كلوروفورم ‪ -‬أسيتون‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‬ ‫‪‬‬
‫حامل أنابيب‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع ‪ ٠٫٥‬مل من الزيت في ‪ ٦‬أنابيب اختبار نظيفة جافه‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف لكل أنبوبة ‪ ٤‬مل من أحد المذيبات )األسيتون و الكلوروفورم و اإليثر و اإليثانول البارد والماء(‪.‬‬
‫‪ .٣‬رج األنابيب جيداً ‪ ،‬ثم اترك المحاليل لمدة حوالي دقيقة واحدة‪.‬‬
‫‪ .٤‬الحظ النتائج ‪ ،‬فإذا انفصل المحلول إلى طبقتين فيكون الزيت غـير ذائب وإما إذا تكونت طبقه واحدة متجانسة‬
‫شفافة يكون الزيت ذائبا ً في المذيب‪.‬‬
‫‪ .٥‬دون النتائج في الجدول‪.‬‬

‫] ‪[ ٣٥‬‬
 ‫النتائج‪:‬‬
‫مــدى الذوبانية‬ ‫المذيـب‬
‫الماء‬ ‫اإليثانول البارد‬ ‫اإليثر‬ ‫الكلوروفورم‬ ‫األسيتون‬ ‫الليبيد‬

‫زيت الزيتون‬
‫زيت بذرة القطن‬
‫زيت الذرة‬
‫زبدة‬

‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫أي المذيبات يعتبر أفضل المذيبات لليبيدات ؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫أي المذيبات يعتبر أسوا المذيبات لليبيدات ؟‬

‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫ما أنواع األحماض الدھنية الموجودة في األغذية الشائعة االستخدام مثل‪:‬‬

‫زيت دوار الشمس‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫زيت الزيتون‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫زيت الذرة‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫الزبدة‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫شمع النحل‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٣٦‬‬
 ‫‪ .٥٫٢٫٢‬اختبار التصبن ‪Saponification Test‬‬
‫يھدف ھذا االختبار إلى معرفة التركيب الكيميائي للصابون و طريقة عمله كمنظف ومزيل للزيوت واألوساخ‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫التص بن عبارة عن عملية تحليل الزيت أو الدھن مائيا في وس ط قلوي )قاعدي( وينتج عن ذلك جليسيرول وأمالح األحماض‬
‫الدھنية )الص ابون ‪ (Soap‬ويمكن اس تخدام عملية التص بن في فص ل المواد القابلة للتص بن عن المواد الغـ ير قابلة للتصبن‬
‫)التي توجد ذائبة في الدھون( ويمكن توضيح عملية التصبن كما يلي ‪:‬‬

‫‪Triacylglycerol‬‬ ‫‪Glycerol‬‬ ‫‪Salts of Fatty‬‬

‫)‪Acids (SOAP‬‬

‫ير قابل‬ ‫يمكن تعريف الص ابون على انه األمالح المعدنية لألحماض الدھنية‪ .‬والص ابون قابل للذوبان في الماء ولكنه غـ‬
‫للذوبان في اإليثر‪ .‬ويعمل الص ابون على اس تحالب الزيوت والدھون في الماء حيث أنه يعمل على تقليل الجذب الس طحي‬
‫للمحلول ‪.‬‬

‫المواد واألدوات‪:‬‬
‫زيت الذرة أو زيت الزيتون‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول ھيدروكسيد البوتاسيوم )‪.(2O% KOH‬‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي يغلي‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ض ع ‪ ١‬مل من الزيت في أنبوبة اختبار كبيره )خذ في االعتبار أن ھذا محتوى ھذا األنبوب س يُُس تخدم في جميع‬
‫التجارب الالحقة فاحرص على تطبيق الخطوات بشكل دقيق لتحصل على نتائج صحيحة(‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٥‬مل من ھيدروكسيد البوتاسيوم‪.‬‬
‫‪ .٣‬ضع األنبوب في حمام مائي يغلي لمدة ‪ ٥‬دقائق‪.‬‬
‫‪ّ .٤‬‬
‫برد األنبوبة تحت ماء الصنبور )في ھذه الخطوة يتكون صابون ذائب وللتأكد رج األنبوب والحظ تكون الرغوة(‪.‬‬
‫‪ .٥‬أضف بشكل بطيء ‪ ١٠‬مل من الماء المقطر‪.‬‬
‫‪ .٦‬احفظ جميع المحلول الناتج إلجراء التجارب المتبقية‪.‬‬

‫] ‪[ ٣٧‬‬
 ‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫ما ھو التركيب الكيميائي للصابون ؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫ما فائدة إضافة ھيدروكسيد البوتاسيوم في ھذا االختبار؟‬

‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫اذكر أھم النواتج لعملية التصبن؟‬

‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫لو استخدمت أحماض دھنية بدالً من الزيت فھل تتوقع أن تحصل على الصابون ؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٣٨‬‬
 ‫‪ .٥٫٢٫٣‬اختبار فصل الصابون من المحلول بالتمليح ‪Salting Out of Soap‬‬
‫يمكن بواسطة ھذا االختبار الحصول على الصابون من محلوله وذلك بعملية التمليح )‪(Salting Out‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫عند إض افة كلوريد الص وديوم الص لب أو المذاب في الماء المقطر إلى محلول الص ابون حتى درجة التشبع ينفصل الصابون‬
‫على ص ورة غـ ير ذائبة ويطفو فوق السطح ‪ ،‬وذلك ألن كلوريد الصوديوم مركب شره للماء فھو ينافس جزيئات الصابون‬
‫على االرتباط مع جزيئات الماء‪.‬‬

‫المواد واألدوات‪:‬‬
‫محلول الصابون )الذي تم تحضيره في التجربة األولى(‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ملح كلوريد الصوديوم الصلب ‪.NaCl‬‬ ‫‪‬‬
‫كأس زجاجي صغـير‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع ‪ ٣-٢‬مل من محلول الصابون في كأس صغير )سعة ‪ ٢٥‬مل(‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ١‬مل من محلول كلوريد الصوديوم الذائب )‪ (NaCl‬ثم حرك المحلول‪.‬‬
‫‪ .٣‬أض ف كمية أخرى كافية من محلول كلوريد الص وديوم الذائب مع التحريك المس تمر حتى تالحظ انفص ال الصابون‬
‫على ھيئة قطع صغيرة على سطح المحلول‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫األسئلة‪:‬‬
‫ما سبب انفصال طبقة الصابون على السطح عند إضافة الملح؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٣٩‬‬
 ‫‪ .٥٫٢٫٤‬اختبار تكوين األحماض الدھنية من الصابون ‪Formation of Fatty Acids‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫عند إض افة حمض الھيدروكلوريك إلى الص ابون )األمالح المعدنية لألحماض الدھنية( فإنه يعمل على تحلل الجليس يريدات‬
‫إلى أحماض دھنية على صورة حرة غـير ذائبة في الماء‪.‬‬

‫‪O‬‬
‫‪+‬‬
‫‪Na – O – C – R + HCl‬‬ ‫‪R – COOH + NaCl‬‬
‫‪Fatty Acids Salts‬‬ ‫‪Fatty Acid‬‬
‫)‪(Soap‬‬

‫المواد واألدوات‪:‬‬
‫محلول الصابون )الذي تم تحضيره في التجربة األولى(‬ ‫‪‬‬
‫حمض الھيدروكلوريك )‪(10% HCl‬‬ ‫‪‬‬
‫حمام ثلجي‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع ‪ ٢‬مل من محلول الصابون في أنبوبة اختبار ثم ضعھا في حمام ثلجي‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٥‬نقط من حمض الھيدروكلوريك‪.‬‬
‫‪ .٣‬الحظ تكون طبقة زيتية طافية على السطح تدل على تكون األحماض الدھنية‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫ما ھو التركيب الكيميائي للطبقة الزيتية الطافية؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫اكتب معادلة حمض الھيدروكلوريك مع الصابون؟‬

‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٤٠‬‬
 ‫‪ .٥٫٢٫٥‬اختبار تكوين أمالح األحماض الدھنية الغـير ذائبة ‪lnsoluble Soaps‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫تعمل أيونات الكالسيوم أو المغنسيوم أو الرصاص أو الحديد على ترسيب الصابون وتجعله غـ ير ذائب في الماء حيث تحل‬
‫ھذه األيونات محل أيونات الص وديوم أو البوتاس يوم الموجودة في الص ابون ‪ ،‬ونظراً الحتواء الماء العس ر على كميات‬
‫ملحوظة من أيونات ‪ Ca++‬و ‪ Mg++‬وبعض أيونات ‪ Fe+++‬فيص عب تكون الرغوة و يتكون ص ابون غير ذائب على ھيئة‬
‫راسب أبيض‪.‬‬

‫المواد واألدوات‪:‬‬
‫محلول الصابون )الذي تم تحضيره في التجربة األولى(‬ ‫‪‬‬
‫كلوريد الكالسيوم )‪(5% Calcium chloride CaCl2‬‬ ‫‪‬‬
‫كلوريد المغنيسيوم )‪(5% Magnesium chloride MgCl2‬‬ ‫‪‬‬
‫أسيتات الرصاص ‪Lead Acetate‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار نظيفة وجافة‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع في ‪ ٢‬مل من محلول الصابون في ‪ ٣‬أنابيب اختبار‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٥‬قطرات من محلول كلوريد الكالسيوم على األنبوب األول‪.‬‬
‫‪ .٣‬أضف ‪ ٥‬قطرات من محلول كلوريد الماغنيسيوم على األنبوب الثاني‪.‬‬
‫‪ .٤‬أضف ‪ ٥‬قطرات من محلول خالت الرصاص على األنبوب الثالث‪.‬‬
‫‪ .٥‬الحظ تكون صابون غير ذائب يترسب في المحلول‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫‪Ca++‬‬
‫‪Mg++‬‬
‫‪Fe+++‬‬

‫] ‪[ ٤١‬‬
 ‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫اكتب معادلة تفاعل كلوريد الكالسيوم مع الصابون؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫ماذا يحدث للصابون عند الغسيل بالماء العسر؟‬

‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٤٢‬‬
 ‫‪ .٥٫٢٫٦‬اختبار خالت النحاس ‪Copper Acetate Test‬‬
‫يستخدم ھذا االختبار للتمييز بين الزيت أو الدھن المتعادل و الحمض الدھني المشبع والحمض الدھني غـير المشبع‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫ال تتفاعل الزيوت أو الدھون مع محلول خالت النحاس أما األحماض الدھنية المش بعة والغـ ير مش بعة فتتفاعل مع خالت‬
‫النحاس مكونةً ملح النحاس المقابل‪ .‬الملح النحاسي المتكون في حالة األحماض الدھنية الغـ ير مشبعة فقط يمكن استخالصه‬
‫بواسطة اإليثر البترولي‪.‬‬

‫المواد واألدوات‪:‬‬
‫زيت الزيتون‬ ‫‪‬‬
‫حمض األولييك )حمض دھني غـير مشبع(‬ ‫‪‬‬
‫حمض الستيارك )حمض دھني مشبع(‬ ‫‪‬‬
‫إيثر بترولي‬ ‫‪‬‬
‫محلول خالت النحاس )‪.(5%‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع ‪ ٠٫٥‬مل من كل مادة في ‪ ٣‬أنابيب اختبار‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٣‬مل من اإليثر البترولي‬
‫‪ .٣‬أضف ‪ ٣‬مل من محلول خالت النحاس‪.‬‬
‫‪ .٤‬رج األنابيب جيداً واتركھا بعض الوقت‪.‬‬

‫في ح ال ة زي ت الزيتون يُالحظ أن طبق ة اإليثر البترولي العلي ا تحتوي على الزي ت م ذاب ا ً فيھ ا ويظھر ع ديم اللون ويبقى‬
‫المحلول المائي الس فلي أزرق اللون ‪ ،‬وفي حالة حمض األولييك تتلون طبقة اإليثر البترولي العليا بلون أخضر نتيجة لذوبان‬
‫أولييات النحاس فيھا أما الطبقة السفلى فتقل زرقتھا ‪ ،‬وفي حالة حمض الستيارك يُالحظ أن طبقة اإليثر البترولي العليا تبقى‬
‫عديمة اللون بينما يتكون راسب أخضر باھت من ستيارات النحاس في الطبقة السفلى‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫زيت الزيتون‬

‫حمض األولييك‬

‫حمض الستيارك‬

‫] ‪[ ٤٣‬‬
 ‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫لماذا ال يتكون راسب أو لون أخضر مع زيت الزيتون في ھذه التجربة ؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫ماذا تتوقع أن تكون النتيجة فيما لو استخدمت حمض البالمتيك أو اللينولييك؟‬

‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٤٤‬‬
 ‫‪ .٥٫٢٫٧‬اختبار عدم التشبع بواسطة اليود ‪Desaturation Test by Iodine‬‬
‫تستخدم ھذه التجربة للتعرف على طبيعة األحماض الدھنية في الزيت أو الدھن ھل ھي من النوع المشبع أو غـير المشبع‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫يتفاعل اليود )بني اللون( مع المركبات غـير المشبعة وذلك باإلضافة على جانبي الرابطة المزدوجة وبذلك يتغـير لون اليود‪.‬‬

‫المواد واألدوات‪:‬‬
‫زيت الزيتون‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫حمض األولييك‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫زبدة‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫حمض الستيارك‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول اليود مذاب في الكحول‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع ‪ ٢‬مل من كل محلول في أنبوبة اختبار‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٣‬نقط من محلول اليود‪.‬‬
‫‪ .٣‬الحظ ما يحدث وفسر مشاھدتك‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫زيت الزيتون‬

‫حمض األولييك‬

‫زبدة‬

‫حمض الستيارك‬

‫] ‪[ ٤٥‬‬
 ‫‪ .٥٫٢٫٨‬اختبار األكرولين ‪Acrolein Test‬‬
‫يستخدم ھذا االختبار للكشف عن وجود الليبيدات حيث تعطي رائحة مميزة مع مركب األكرولين‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫تعمل بيكبريتات البوتاس يوم ‪) KHSO4‬الص لبة( على نزع جزيئين ماء )‪ (Dehydration‬من كل جزيء جليس يرول في‬
‫الزيوت أو ال دھون حي ث يتحول الجليس يرول إلى أكرولين ‪ Acrolein‬وال ذي يمكن تمييزه من رائحت ه النف اذة المھيج ة‬
‫لألغشية‪.‬‬

‫‪Glycerol‬‬ ‫‪Acrolein‬‬

‫ويمكن الكش ف عن وجود الدھون بواس طة ص بغة ‪) Sudan IV‬ص بغة عامه للدھون( ‪ ،‬حيث تُص بغ الدھون عند إض افتھا‬
‫بصبغه حمراء‪.‬‬

‫المواد واألدوات‪:‬‬
‫أنواع من الزيوت النباتية مثل )زيت الذرة ‪ -‬زيت الزيتون ‪ -‬زبدة(‬ ‫‪‬‬
‫جليسيرول ‪Glycerol‬‬ ‫‪‬‬
‫بيكبريتات البوتاسيوم ‪KHSO4‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار نظيفة وجافة‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي يغلي‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ض ع كمية من بيكبريتات البوتاس يوم الص لبة في حوالي ‪ ٠٫٥‬مل من الجليس يرول في أنبوبة اختبار ‪ ،‬ثم س خن‬
‫األنبوبة بحذر في حمام مائي يغلي والحظ ظھور رائحة األكرولين )رائحة مھيّجة لألغشية(‪.‬‬
‫‪ .٢‬أعد الخطوة السابقة باستعمال أحد أنواع الزيوت النباتية بدالً من الجليسيرول‪.‬‬

‫] ‪[ ٤٦‬‬
 ‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫لماذا يستخدم اختبار األكرولين كاختبار عام للزيوت والدھون ؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫ھل تتوقع أن تحصل على نتيجة إيجابية فيما لو استخدمت مايلي مع توضيح السبب‪:‬‬
‫‪ .١‬حمض األولييك أو حمض البالمتيك‬
‫‪ .٢‬شمع النحل‬

‫] ‪[ ٤٧‬‬
 ‫‪ .٦‬األحماض األمينية ‪Amino Acids‬‬

‫األحماض األمينية ھي الوحدات األساسية لبناء البروتينات‪ .‬وھناك عشرون حمض أميني تم اكتشافھا في الطبيعة‪ .‬كل حمض‬
‫أميني يحتوي على األقل على مجموعة أمين )‪ (NH2‬ومجموعة كربوكسيل )‪ (COOH‬وذرة ھيدروجين ومجموعة طرفيّة‬
‫‪) R‬تختلف من حمض إلى آخر(‪.‬‬

‫الصيغة العامة لتركيب األحماض األمينية‪:‬‬

‫تختلف األحماض األمينية باختالف المجموعة الطرفية ولذا أمكن تقسيم األحماض األمينية تبعا ً لقطبية تلك السالسل الجانبية‬
‫)‪ (R‐group‬في المحاليل المائية إلى‪:‬‬

‫‪ .١‬غـير قطبية ‪Non polar‬‬

‫‪ .٢‬قطبية متعادلة الشحنة ‪Uncharged polar‬‬
‫‪ .٣‬قطبية موجبة الشحنة )‪Basic polar (positively charged‬‬
‫‪ .٤‬قطبية سالبة الشحنة )‪Acidic polar (Negatively charged‬‬

‫وتتميز األحماض األمينية القطبية بكونھا أكثر ذوبانا ً في الماء من األحماض األمينية الغير قطبية ويعود ذلك إلى أن المجاميع‬
‫الطرفية ‪ R‬عبارة عن مجاميع قادرة علي تكوين روابط ھيدروجينية مع الماء‪.‬‬
‫ترتبط األحماض األمينية فيما بينھا بتفاعل مجموعة الكربوكسيل ألحد األحماض األمينية مع مجموعة األمين لحمض أميني‬
‫آخر ويصاحب ذلك فقدان جزيء ماء وتتكون الرابطة الببتيدية ويؤدي تكرار ھذا االرتباط بين األحماض األمينية إلى تكوين‬
‫ُجزيء البروتين‪.‬‬

‫] ‪[ ٤٨‬‬
 ‫‪.٦٫١‬الخواص الكيميائية و الفيزيائية لألحماض األمينية ‪Chemical & Physical Properties‬‬

‫‪ .٦٫١٫١‬النشاط الضوئي ‪Optical Activity‬‬

‫تتميز األحماض األمينية بقدرتھا على عمل انحراف التجاه الضوء المستقطب الحتوائھا جميعا ً )باستثناء الجاليسين( على‬
‫ذرة كربون غـير متماثلة )‪ (asymmetrical‬مرتبطة بأربع مجاميع مختلفة‪.‬‬
‫لذا فإن جميع األحماض األمينية ذات نشاط ضوئي فتحرف الضوء المستقطب الموجه إليھا إما إلى اليمين أو إلى اليسار‬
‫وتتميز جميع األحماض األمينية المكونة للبروتين بأنھا من النوع ‪ L‬والمقصود بذلك ھو ترتيب المجموعات حول ذرة‬
‫الكربون الغـير متماثلة وليس اتجاه االنحراف‪ ،‬فالنوع يعني أنه عندما تكون مجموعة الكربوكسيل ألعلى فإن مجموعة األمين‬
‫توجد ناحية اليسار‪.‬‬

‫‪ .٦٫١٫٢‬الخاصية األمفوتيرية ‪Amphoteric Property‬‬

‫جميع األحماض األمينية تتميز بالخاصية األمفوتيرية أي أنھا عندما تذوب في الماء فإنھا تحمل شحنتين )شحنة موجبة وأخرى‬
‫سالبة( مكونة ما يسمى باأليون مزدوج الشحنة ‪ Zwitter ion‬وتعمل كحمض )معطي للبروتونات( وكقلوي )مكتسب‬
‫للبروتونات( في نفس الوقت‪ ،‬حيث تكتسب مجموعة الكربوكسيل الشحنة السالبة )‐‪ (COO‬لسھولة فقدھا البروتون بينما‬
‫تكتسب مجموعة األمين الشحنة الموجبة )‪ (NH3+‬لسھولة ارتباطھا بالبروتون المنفصل عن مجموعة الكربوكسيل‪.‬‬
‫إن وجود ھذه الحالة من التأين المزدوج يجعل الحمض األميني قادراً على أن يسلك سلوك األحماض لوجود مجموعة‬
‫)‐‪ (COO‬وسلوك القواعد لوجود مجموعة )‪.(NH3+‬‬

‫] ‪[ ٤٩‬‬
 ‫يحمل الحمض األميني الشحنة الموجبة في الوسط الحمضي و يحمل الشحنة السالبة في الوسط القاعدي‪.‬‬

‫وعلية فإن تغيير األس الھيدروجيني ‪ pH‬للوسط الذي يوجد فيه الحمض األميني يؤدي إلى تغـير محصلة الشحنات عليه و‬
‫بالتالي على حركته في المجال الكھربي‪.‬‬

‫‪ .٦٫١٫٣‬نقطة التعادل الكھربي ‪Isoelectric Point‬‬

‫ھي درجة األس الھيدروجيني ‪ pH‬الذي تتساوى فيه عدد الشحنات الموجبة والسالبة على الحمض األميني‪ ،‬بمعنى أن تكون‬
‫محصلة الشحنات تساوي الصفر‪ ،‬وعندھا ال يتحرك الحمض األميني ألي من القطبين السالب أو الموجب إذا وضع في مجال‬
‫وبناء عليه فإنه يترسب بسھوله عند ھذه الدرجة‪.‬‬
‫ً‬ ‫كھربي‬

‫‪ .٦٫١٫٤‬درجة االنصھار ‪Melting Point‬‬

‫وجود الروابط األيونية القوية بين جزيئات الحمض األميني لتكوين البلورات يجعلھا صعبة االنصھار لذلك يجب تعريضھا‬
‫لدرجات حرارة عالية تصل إلى ) ‪°٢٠٠‬م( فما فوق‪.‬‬

‫] ‪[ ٥٠‬‬
 ‫‪.٦٫٢‬االختبارات العامة والوصفية لألحماض األمينية ‪Qualitative Tests of Amino Acids‬‬

‫‪ .٦٫٢٫١‬اختبار الذوبانية ‪Solubility Test‬‬

‫يھدف إلى اختبار ذوبان األحماض األمينية في المحاليل القطبية والغـير قطبية واألحماض والقواعد لالستدالل على السلوك‬
‫القطبي والخاصية األمفوتيرية‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫تذوب األحماض األمينية في الماء الرتباط جزيئاتھا المستقطبة بجزيئات الماء القطبية‪ ،‬و بوجود المجموعات ‪ NH3+‬القاعدية‬
‫و ‐‪ COO‬الحمضية تُسھّل ذوبان األحماض األمينية في القواعد و األحماض‪.‬‬

‫األدوات والمواد‪:‬‬
‫أحماض أمينية‪ :‬جاليسين‪ ،‬جلوتامين‪ ،‬اليسين‬ ‫‪‬‬
‫المذيبات‪ :‬ماء‪ ،‬كلوروفورم‪ ،‬ھيدروكسيد الصوديوم‪ ،‬حمض الھيدروكلوريك‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬جھّز ‪ ٤‬أنابيب اختبار ثم ضع ‪ ٥‬مل من كل من مذيب في أنبوبة‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٠٫٥‬جم من األحماض األمينية تحت االختبار )مع تغيير محتوى األنابيب عند تغيير الحمض تحت االختبار‬
‫في كل مرة(‪.‬‬
‫دون المالحظات في الجدول‪.‬‬
‫‪ّ .٣‬‬

‫النتائج‪:‬‬
‫النتيجة‬ ‫األحماض‬
‫االستنتاج‬ ‫األنبوب‬
‫اليسين‬ ‫جلوتامين‬ ‫جاليسين‬
‫‪ .١‬ماء‬
‫‪ .٢‬كلوروفورم‬
‫‪ .٣‬ھيدروكسيد الصوديوم‬
‫‪ .٤‬حمض الھيدروكلوريك‬

‫] ‪[ ٥١‬‬
 ‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫مستعينا ً بالتركيب الكيميائي كل حمض‪ ،‬أي األحماض يذوب في المذيبات المذكورة؟ ولماذا؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫من دراسة االستنتاج‪ ،‬على ماذا تدل ھذه التجربة؟‬

‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٥٢‬‬
 ‫‪ .٦٫٢٫٢‬اختبار الننھيدرين ‪Ninhydrin Test‬‬
‫يعد أھم االختبارات اللونية العامة للكشف عن األحماض األمينية‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫يتفاعل الننھيدرين مع جميع األحماض األمينية من النوع ‪) α‬حيث أن مجموعة األمين ‪ ‐NH2‬مرتبطة بذرة الكربون ‪ (α‬عند‬
‫درجات حرارة عالية لتكوين المركب الوسطي ھيدرين ‪ -‬دانتين و النشادر و يتصاعد ثاني أكسيد الكربون‪ .‬ثم يتفاعل الھيدرين‬
‫‪ -‬دانتين والنشادر مع جزيء آخر من الننھيدرين معطيا ً معقداً بنفسجي اللون‪ .‬يُستثنى من ذلك الحمض األميني برولين‬
‫‪ Proline‬حيث يعطي لونا ً أصفر‪.‬‬

‫‪Cysteine‬‬ ‫‪Glycine‬‬ ‫‪Proline‬‬

‫‪Amino Acid‬‬

‫‪‬‬

‫‪Ninhydrin‬‬ ‫‪Purple Complex‬‬

‫‪Aldehyde‬‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫محاليل أحماض أمينية مجھولة )‪ ١‬جم‪/‬لتر ماء مقطر(‬ ‫‪‬‬
‫محلول الننھيدرين ‪ ٢) ، Ninhydrin solution‬جم‪/‬لتر إيثانول(‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي يغلي‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬أضف في كل أنبوب ‪ ١‬مل من المحلول المجھول‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ١‬مل على كل أنبوبة من محلول الننھيدرين‪.‬‬
‫‪ .٣‬رج جيداً ثم ضعھا في حمام مائي يغلي ثم ّ‬
‫دون مالحظاتك‪.‬‬

‫] ‪[ ٥٣‬‬
 ‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫ما ھي األحماض األمينية التي تعطي نتيجة إيجابية مع ھذا االختبار؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫ما ھو الحمض األميني الذي يعطي لونا ً أصفر بدالً من البنفسجي مع ھذا االختبار؟ وماھو السبب ؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٥٤‬‬
 ‫‪ .٦٫٢٫٣‬الكشف عن األحماض األمينية المحتوية على الكبريت ‪Sulfur Test‬‬
‫ھذا االختبار خاص للكشف عن األحماض األمينية المحتوية على مجموعة كبريت وھي السيستين و الميثيونين‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫تسخين األحماض األمينية التي تحتوي على كبريت مع ھيدروكسيد الصوديوم )قاعدة( يحول الكبريت العضوي إلى كبريت‬
‫غـير عضوي والذي بدوره يتفاعل مع أسيتات الرصاص معطيا ً راسب أسود من كبريتيد الرصاص‪.‬‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫محاليل أحماض أمينية مجھولة )‪ ١‬جم‪/‬لتر ماء مقطر(‬ ‫‪‬‬
‫ھيدروكسيد الصوديوم )‪.(10% NaOH‬‬ ‫‪‬‬
‫أسيتات الرصاص )‪.(5% lead acetate‬‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي يغلي‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع في كل أنبوب ‪ ١‬مل من محلول الحمض األميني المجھول‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ١‬مل من ھيدروكسيد الصوديوم‪.‬‬
‫‪ .٣‬أضف ‪ ٠٫٥‬مل من أسيتات الرصاص‪ ،‬ثم رج جيداً‪.‬‬
‫‪ .٤‬ضع األنابيب في حمام مائي يغلي لمدة ‪ ٥‬دقائق‪.‬‬
‫‪ .٥‬الحظ ّ‬
‫تكون راسب أسود في حال وجود الكبريت‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫] ‪[ ٥٥‬‬
 ‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫ما ھي األحماض األمينية التي تعطي نتيجة إيجابية مع ھذا االختبار؟ و أكتب الصيغة البنائية لھذه األحماض ؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫ما التركيب الكيميائي للراسب األسود الذي يتكون من ھذا االختبار؟‬

‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٥٦‬‬
 ‫‪ .٦٫٢٫٤‬اختبار الزانثوبروتيك ‪Xanthoproteic Test‬‬
‫يستخدم ھذا االختبار للكشف عن حلقة البنزين الموجودة في األحماض األمينية العطرية )األروماتية(‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫تتفاعل األحماض األمينية العطرية المحتوية على حلقة بنزين مع حمض النيتريك المركز ‪ HNO3‬عند درجات حرارة عالية‬
‫)خاصة التايروسين وبدرجة أقل الفينايل آالنين والتربتوفان( مانحا ً إياھا مجموعة ‪ NO2‬ترتبط مع حلقة البنزين‪ ،‬وتسمى ھذه‬
‫العملية ‪ Nitration‬والتي ينتج عنھا ظھور لون أصفر واضح‪.‬‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫محاليل أحماض أمينية مجھولة )‪ ١‬جم‪/‬لتر ماء مقطر(‬ ‫‪‬‬
‫حمض النيتريك المركز‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي يغلي‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع في كل أنبوبة ‪ ١‬مل من محلول الحمض األميني المجھول‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ١‬مل من حمض النيتريك المركز )بحذر( ثم رج جيداً‪.‬‬
‫‪ .٣‬ضعھا في حمام مائي يغلي لمدة ‪ ٣‬دقائق‪.‬‬
‫دون مالحظاتك‪.‬‬
‫‪ّ .٤‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٥٧‬‬
 ‫األسئلة‪:‬‬
‫ما ھي األحماض األمينية التي تعطي نتائج إيجابية مع ھذا االختبار؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫ما ھي المجموعة الوظيفية المسئولة عن إعطاء النتيجة اإليجابية؟ وھل تقتصر ھذه النتيجة على األحماض األمينية؟ ولماذا؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٥٨‬‬
 ‫‪ .٦٫٢٫٥‬إختبار ساكاجوتشي ‪Sakaguchi Test‬‬
‫ھو اختبار خاص يكشف عن مجموعة الجوانيدين ‪ guanidine group‬والتي تشكل جزءاً من تركيب الحمض األميني‬
‫آرجينين ‪Arginine‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫تتفاعل مجموعة الجوانيدين الموجودة في الحمض األميني آرجنين مع مركب ألفا ‪ -‬نافثول في وجود مركب الھيبوبرومايت‬
‫كعامل مؤكسد فيُعطي معقد ذو لون أحمر غامق يدل على وجود ھذه المجموعة وبالتالي تدل على وجود حمض اآلرجينين‪.‬‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫محاليل أحماض أمينية مجھولة )‪ ١‬جم‪/‬لتر ماء مقطر(‬ ‫‪‬‬
‫ھيدروكسيد الصوديوم )‪.(10% NaOH‬‬ ‫‪‬‬
‫ألفا ‪ -‬نافثول )‪ (α‐ naphthol‬في ‪ %١٠‬اإليثانول ‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول ھيبوبرومايت الصوديوم )‪.(5% Sodium Hypobromite‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع في كل أنبوبة ‪ ١‬مل من محلول الحمض األميني المجھول‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٢‬مل من ھيدروكسيد الصوديوم ثم رج جيداً‪.‬‬
‫‪ .٣‬أضف ‪ ٣‬نقط من ألفا ‪ -‬نافثول‪.‬‬
‫‪ .٤‬أضف ‪ ٠٫٥‬مل من ھيبوبرومايت الصوديوم ثم رج جيداً‪.‬‬
‫دون مالحظاتك‪.‬‬
‫‪ّ .٥‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫] ‪[ ٥٩‬‬
 ‫‪ .٦٫٢٫٦‬اختبار ميلون ‪Millon Test‬‬
‫وھو اختبار خاص بالكشف عن مجموعة الھيدروكسي فينايل‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫تتفاعل مجموعة الھيدروكسي فينايل في الحمض األميني التيروسين مع كاشف ميلون )ھو عبارة عن أيونات الزئبق مذابة‬
‫حم ّر من أمالح الزئبق ‪ .‬ھذا الكشف إيجابي أيضا ً مع مركبات الفينول‪.‬‬
‫في أحماض النترات( فيتكون راسب بني ُم َ‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫محاليل أحماض أمينية مجھولة )‪ ١‬جم‪/‬لتر ماء مقطر(‬ ‫‪‬‬
‫كاشف ميلون )‪ (Millon Reagent‬يتوفر بشكل تجاري‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫حمام مائي يغلي‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع في كل أنبوب ‪ ١‬مل من محلول الحمض األميني المجھول‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ١‬مل من كاشف ميلون على كل أنبوبة ثم رج جيداً‪.‬‬
‫‪ .٣‬ضعھا في حمام مائي يغلي لمدة دقيقتين )مع الحذر(‪.‬‬
‫دون مالحظاتك‪.‬‬
‫‪ّ .٤‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫] ‪[ ٦٠‬‬
 ‫دون نتائج التجارب السابقة على كل من األحماض األمينية في الجدول‪:‬‬

‫اختبار‬ ‫اختبار‬ ‫اختبار‬ ‫اختبار‬ ‫نتيجة االختبار‬

‫زانثوبروتيك‬ ‫ساكاجوشي‬ ‫الكبريت‬ ‫الننھيدرين‬ ‫الحمض األميني‬

‫جاليسين ‪Glycine‬‬

‫سيرين ‪Serine‬‬

‫برولين ‪Proline‬‬

‫تريبتوفان ‪Tryptophan‬‬

‫تايروسين ‪Tyrosine‬‬

‫فينايل آالنين ‪Phenylalanine‬‬

‫أرجينين ‪Arginine‬‬

‫سيستين ‪Cysteine‬‬

‫] ‪[ ٦١‬‬
 ‫‪ .٧‬البروتينات ‪Proteins‬‬

‫البروتينات عبارة عن مركبات عضوية ذات أوزان جزيئية كبيرة ُمكونة من سالسل من األحماض األمينية المرتبطة فيما‬
‫بينھا بروابط ببتيدية )‪.(Peptide Bonds‬‬
‫تلعب البروتينات دوراً ھاما ً في جسم الكائن الحي حيث تدخل في تركيب العديد من المواد البيولوجية المتخصصة مثل األجسام‬
‫المضادة )‪ (Anti Bodies‬و اإلنزيمات )‪ (Enzymes‬و بعض الھرمونات )‪ ،(Hormones‬كما تساعد في نقل السياالت‬
‫العصبية والتحكم في التعبير الجيني و ھي المكون األساسي لألنسجة الحية‪.‬‬
‫يتكون البروتين من سلسلة من األحماض األمينية المرتبطة مع بعضھا بروابط بيبتيدية حيث ترتبط فيھا مجموعة الكربوكسيل‬
‫من حمض أميني مع مجموعة األمين من حمض أميني آخر مع فقد جزيء ماء‪.‬‬

‫تختلف البروتينات عن بعضھا البعض في بنائھا الكيميائي تبعا ً لعدة عوامل‪:‬‬

‫عدد ونوع األحماض األمينية المكونة لسالسلھا البيبتيدية‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ترتيب وتتابع األحماض األمينية‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ارتباط البروتين مع جزيئات أخرى غـير بروتينية‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫‪ .٧٫١‬األشكال البنائية للبروتين ‪Structural Forms‬‬

‫تأخذ السالسل الببتيدية المكونة للبروتين أشكاالً فراغية ناتجة عن التفاف تلك السالسل معطيةً أربعة تراكيب بنائية‪.‬‬

‫‪ .١‬التركيب البنائي األولي )‪(Primary structure‬‬

‫يُعبّر عن تسلسل وتتابع األحماض األمينية المرتبطة مع بعضھا البعض بروابط ببتيدية‪.‬‬
‫‪ .٢‬التركيب البنائي الثانوي )‪(Secondary structure‬‬
‫ينتج عن تكوين روابط ھيدروجينية بين المجموعات الطرفية ‪ R group‬لألحماض األمينية مع بعضھا البعض مما‬
‫يتسبب في التفاف والتواء السلسلة الببتيدية مكونةً إما شكل الصفيحة المطوية ‪ B‐sheet‬أو الشكل الحلزوني‬
‫‪.alpha helix‬‬

‫] ‪[ ٦٢‬‬
 ‫‪ .٣‬التركيب البنائي الثالثي )‪(Tertiary structure‬‬
‫ينتج عن تكوين روابط ھيدروجينية بين المجموعات الطرفية ‪ R group‬لألحماض األمينية البعيدة عن بعضھا‬
‫مكونة الشكل الثالثي األبعاد‪.‬‬
‫‪ .٤‬التركيب الرباعي )‪(Quaternary structure‬‬
‫لتكون الشكل الرباعي‬
‫وفيه ترتبط وحدات مختلفة أو متشابھة من السالسل الببتيدية )‪ (subunits‬مع بعضھا البعض ّ‬
‫األبعاد للبروتين‪ .‬مثال جزيء الھيموجلوبين المتكون من أربعة وحدات مرتبطة معا ً‪.‬‬

‫والبروتينات في ھذا التركيب تصبح قادرة على أداء وظائف بيولوجية‪ .‬وتشبه البروتينات في خصائصھا الفيزيائية والكيميائية‬
‫تلك الخصائص التي تتميز بھا األحماض األمينية المكونة لھا‪ ،‬لذا فللبروتينات خاصية أمفوتيرية في تفاعلھا مع األحماض‬
‫فتحمل شحنة موجبة بينما مع القواعد نجد أنھا تكتسب شحنة سالبة‪ ،‬ولذا فإن حركتھا في المجال الكھربي تعتمد على قيمة‬
‫الـ ‪ pH‬للوسط‪ .‬تبتدأ السلسلة الببتيدية المكونة للبروتينات بالطرف األميني الحر البروتينات وتنتھي بالطرف الكربوكسيلي‪.‬‬

‫وتُقسم البروتينات بالنسبة الرتباطھا بمركبات غير بروتينية إلى ثالثة أقسام‪:‬‬

‫‪ .١‬البروتينات البسيطة ‪:Simple Proteins‬‬

‫وھي التي تحتوي جزيئاتھا على أحماض أمينية فقط ‪ ،‬وعند تحللھا فإنھا تعطي أحماض أمينية فقط مثل األلبيومينات‬
‫و الجلوبيولينات‪.‬‬
‫‪ .٢‬البروتينات المرتبطة ‪:Conjugated Proteins‬‬
‫وھي بروتينات ترتبط بجزيئات غير بروتينية مثل البروتينات النووية والبروتينات الدھنية ‪.‬‬
‫‪ .٣‬البروتينات المشتقة ‪:Derived Proteins‬‬
‫وھي جزيئات بروتينية نتجت من تأثير بعض العوامل الطبيعية أو الكيميائية أو الحيوية على البروتينات )مثل‬
‫الحرارة العالية‪ ،‬األحماض والقواعد القوية ‪ ،‬اإلشعاعات ‪ ،‬تغير الـ ‪ (pH‬حيث غيرت من تركيبھا الطبيعي ولكنھا‬
‫تحتفظ بمعظم الخواص العامة للبروتينات‪.‬‬

‫] ‪[ ٦٣‬‬
 ‫‪ .٧٫٢‬نقطة التعادل الكھربي للبروتين ‪Isoelectric Point‬‬
‫ھي قيمة األس الھيدروجيني )‪ (pH‬التي تكون عندھا محصلة الشحنات على البروتين تساوي صفر‪ .‬نتيجة لتساوي الشحنات‬
‫الموجبة والسالبة على جزيء البروتين وعند ھذه النقطة يصبح البروتين أقل كثافة وأقل ذوبانية فيسھل ترسيبه‪ ،‬وتختلف نقطة‬
‫التعادل الكھربي من بروتين إلى آخر حسب األحماض األمينية المكونة له‪.‬‬

‫] ‪[ ٦٤‬‬
 ‫‪.٧٫٣‬االختبارات الوصفية للبروتينات ‪Qualitative Tests of Proteins‬‬

‫‪ .٧٫٣٫١‬اختبار الذوبانية ‪Solubility Test‬‬

‫الھدف من اختبار ذوبانية البروتينات ھو اختبار السلوك األمفوتيري و الخاصية القطبية لجزيئات البروتين‪ ،‬حيث أن‬
‫البروتينات الليفية مثل الكيراتينات غـير قابلة للذوبان بينما البروتينات الكروية تمثل القسم األعظم وقابلة للذوبان في‬
‫كون البروتينات مع الماء محاليل غروية نظراً لكبر حجم‬
‫المذيبات القطبية واألحماض والقلويات بدرجات مختلفة‪ .‬تُ ّ‬
‫جزيئاتھا‪ ،‬بينما في الوسط الحمضي غالبا ً تكتسب جزيئات البروتين الشحنة الموجبة فتتنافر‪ ،‬أما في الوسط القاعدي‬
‫فتكتسب جزيئات البروتين الشحنة السالبة فتصبح أيضا ً قابلة للذوبان‪.‬‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫محاليل بروتينات‪:‬‬ ‫‪‬‬
‫‪ ‬البيومين )‪(2% Albumin‬‬
‫‪ ‬محلول جيالتين )‪.(1% Gelatin‬‬
‫‪ ‬محلول كازين )‪.(1% Casein‬‬
‫محلول ھيدروكسيد الصوديوم )‪.(0.1% NaOH‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬اختبر ذوبان كل من البروتينات )البيومين‪ ،‬جيالتين‪ ،‬كازين( في كل من الماء البارد و الماء الحار و محلول‬
‫ھيدروكسيد الصوديوم )‪.(1% NaOH‬‬
‫‪ .٢‬سجل قابلية ذوبان كل من البروتينات في جدول النتائج‪.‬‬
‫دون مالحظاتك وناقش ما الحظته‬
‫‪ّ .٣‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫قابلية الذوبان في‬ ‫قابلية الذوبان في الماء‬ ‫قابلية الذوبان في الماء‬

‫نوع البروتين‬ ‫البروتين‬
‫‪1% NaOH‬‬ ‫الحار‬ ‫البارد‬

‫بسيط‬ ‫البيومين‬
‫مرتبط‬ ‫كازين‬
‫مشتق‬ ‫جيالتين‬

‫] ‪[ ٦٥‬‬
 ‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫بماذا تفسر اختالف درجات الذوبان من بروتين آلخر؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٦٦‬‬
 ‫‪ .٧٫٣٫٢‬اختبار بيوريت ‪Biuret Test‬‬
‫ھو اختبار عام للكشف عن البروتينات الذائبة أو الصلبة‪ .‬يھدف ھذا االختبار إلى التعرف على البروتينات وتمييزھا عن بقية‬
‫المواد البيولوجية كالكربوھيدرات والليبيدات‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫يتفاعل البروتين مع محلول كبريتات النحاس في وسط قاعدي فيعطي نتيجة إيجابية فقط عند وجود رابطتين ببتيديتين فأكثر‬
‫في جزيء البروتين‪ .‬فيتفاعل أيون النحاسيك مع مجموعتي )‪ (‐NH , ‐CO‬في الرابطة البيبتيدية مكونا ً أيونا ً معقداً بنفسجي‬
‫اللون و قد تم تسمية ھذا المركب باسم مركب بيوريت ألن البيوريت ھو المركب الغـير بروتيني الوحيد الذي يعطي نتيجة‬
‫إيجابية مع ھذا االختبار‪.‬‬

‫المواد واألدوات‪:‬‬
‫محاليل بروتينات و محاليل مجھولة‬ ‫‪‬‬
‫محلول كبريتات النحاس )‪.(2% CuSO4‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول ھيدروكسيد الصوديوم )‪.(10% NaOH‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع في كل أنبوبة ‪ ١‬مل من المحلول المجھول‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٢‬مل من ھيدروكسيد الصوديوم‪.‬‬
‫‪ .٣‬أضف ‪ ٠٫٥‬مل من كبريتات النحاس ثم رج جيداً‪.‬‬
‫دون مالحظاتك‪.‬‬
‫‪ّ .٤‬‬

‫] ‪[ ٦٧‬‬
 ‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫ماھي البروتينات التي تعطي نتيجة إيجابية مع ھذا االختبار؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫كم عدد الروابط الببتيدية الالزم توفرھا في البروتين لكي يعطي نتيجة إيجابية مع ھذا االختبار؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٦٨‬‬
‫‪ .٧٫٣٫٣‬ترسيب البروتينات بأمالح المعادن الثقيلة ‪Precipitation of Proteins by Salts of Heavy Metals‬‬
‫يھدف ھذا االختبار إلى التعرف على تأثير أمالح الفضة و الزئبق على طبيعة تركيب البروتينات و نشاطھا الحيوي‪ ،‬وإيضاح‬
‫خطورة التسمم بالرصاص‪ ،‬وإيضاح إمكانية استخدام البروتينات )األلبيومين( كعالج في حاالت التسمم بالزئبق و الرصاص‪.‬‬

‫النظرية العلمية لالختبار‪:‬‬

‫تستخدم ھذه الطريقة لفصل البروتينات دون النظر إلى المحافظة على نشاطھا الحيوي‪ .‬تميل البروتينات إلى حمل شحنات‬
‫سالبة في الوسط المتعادل أو القاعدي )‪ (pH≥7‬ويؤدي ذلك إلى ارتباط المجموعات الموجبة ألمالح المعادن الثقيلة مع‬
‫مجموعة الكربوكسيل السالبة )‐‪ (COO‬فيحدث تعادل للشحنة ويترسب البروتين‪.‬‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫محاليل بروتينات‪:‬‬ ‫‪‬‬
‫البيومين )‪(2% Albumin‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول جيالتين )‪.(1% Gelatin‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول كازين )‪.(1% Casein‬‬ ‫‪‬‬
‫نترات الفضة )‪(2% Silver Nitrate AgNO3‬‬ ‫‪‬‬
‫كلوريد الزئبق )‪.(5% Mercury Chloride HgCl2‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع في كل أنبوب ‪ ١‬مل من محلول البروتين‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٠٫٥‬مل من نترات الفضة‪.‬‬
‫‪ .٣‬كرر الخطوات السابقة مع استبدال نترات الفضة بكلوريد الزئبق و قارن النتيجة‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٦٩‬‬
 ‫‪ .٧٫٣٫٤‬ترسيب البروتينات بالقلويدات ‪Precipitation of Proteins by Alkaloids‬‬
‫يھدف ھذا االختبار إلى التعرف على تأثير القلويدات )األحماض( مثل حمض البكريك ‪ Picric Acid‬وحمض التانيك‬
‫‪ Tanic Acid‬على طبيعة تركيب البروتينات و نشاطھا الحيوي‪.‬‬

‫النظرية العلمية لالختبار‪:‬‬

‫تستخدم ھذه الطريقة كذلك لفصل البروتينات دون النظر إلى المحافظة على نشاطھا الحيوي‪ .‬حيث تميل البروتينات إلى حمل‬
‫شحنات موجبة في الوسط الحامضي )‪ (pH<7‬ويؤدي ذلك إلى ارتباط المجموعات السالبة للقلويدات مع مجموعة األمين‬
‫الموجبة )‪ (NH3+‬فيحدث تعادل للشحنة ويترسب البروتين‪.‬‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫محاليل بروتينات‪:‬‬ ‫‪‬‬
‫البيومين )‪(2% Albumin‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول جيالتين )‪.(1% Gelatin‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول كازين )‪.(1% Casein‬‬ ‫‪‬‬
‫حمض البكريك )‪.(10% Picric Acid‬‬ ‫‪‬‬
‫حمض التانيك )‪.(10% Tanic Acid‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار ‪ -‬ماسك ‪ -‬ماصة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع في كل أنبوب ‪ ١‬مل من محلول البروتين‪.‬‬
‫‪ .٢‬أضف ‪ ٠٫٥‬مل من حمض التانيك‪.‬‬
‫‪ .٣‬كرر الخطوات السابقة مع استبدال حمض التانيك بحمض البكريك و قارن النتيجة‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫] ‪[ ٧٠‬‬
 ‫‪ .٧٫٣٫٥‬أثر األمالح على ذوبانية البروتين ‪Precipitation of Proteins by Salts‬‬
‫يتم ترسيب البروتينات باستخدام المحاليل المركزة لألمالح و يتميز كل بروتين بتركيز معين للملح يترسب عنده فيتم فصله‬
‫عن البروتينات األخرى في المحلول و تسمى ھذه العـملية ‪salting out‬‬

‫الھدف من االختبار‪:‬‬
‫بيان أن التراكيز القليلة من الملح قد تساعد على ذوبان البروتينات بينما التراكيز العالية تسبب ترسيب البروتين‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫التراكيز المنخفضة من الملح تساعد على استقرار جزيئات البروتين و إذابته نتيجة للتجاذب بين أيونات الملح و المجموعات‬
‫الفعالة في البروتين‪ .‬بينما في التراكيز العالية فإن أيونات الملح تنافس جزيئات البروتين على االرتباط بجزيئات الماء فيقل‬
‫استقرار البروتين مما يؤدي إلى ترسيبه‪ .‬وبالرغم من ترسيب البروتينات إال أنھا تحافظ على خصائصھا ونشاطھا بعد إذابتھا‬
‫وبالتالي فإن ھذه الطريقة تستخدم لتنقية البروتينات من محاليلھا‪.‬‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫البيومين )‪(2% Albumin‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول كلوريد الصوديوم )‪.(1% NaCl‬‬ ‫‪‬‬
‫ماء مقطر‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول مشبع من كبريتات األمونيوم )‪٧٦٧‬جم‪/‬لتر(‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫ملح كبريتات أمونيوم )صلب(‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع األلبيومين في بيكر و أضف ‪ ٣٠٠‬مل ماء مقطر‪.‬‬
‫‪ .٢‬يتم إضافة محلول مشبع أو الملح الصلب لكبريتات األمونيوم بكميات مختلفة‪.‬‬
‫‪ .٣‬يفصل الراسب بالطرد المركزي )‪ (300 rpm‬ويحدد وزن الراسب‪.‬‬
‫‪ .٤‬دون النتائج في الجدول‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫إضافة كبريتات‬ ‫إضافة محلول كبريتات‬ ‫يفصل بالطرد‬ ‫البيومين ‪٣٠٠+‬مل‬

‫البروتين‬
‫الصوديوم‬ ‫أمونيوم مشبع‬ ‫المركزي‬ ‫ماء مقطر‬

‫ألبيومين‬
‫جلوبيولين‬

‫] ‪[ ٧١‬‬
 ‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫ما درجة التشبع التي يترسب عندھا الجلوبيولين؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫كيف تفسر أن البروتين ال يترسب عند تراكيز قليلة من الملح ويزداد ترسبه كلما زاد تركيز الملح؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٧٢‬‬
 ‫‪.٧٫٤‬التقدير الكمي للبروتينات ‪Quantitative Proteins Estimation‬‬
‫تقدير البروتينات كميا ً يساعد على معرفة التراكيز القياسية لبروتينات معينة كما أن له دالالت تشخيصية عند ارتفاع أو‬
‫انخفاض تركيز البروتينات عن المستوى الطبيعي‪ ،‬وله أھمية في معرفة المحتوى البروتيني للعينات الغذائية‪.‬‬
‫تعتبر مقدرة الجزيئات على امتصاص أطياف الضوء من أكثر الطرق الكيموحيوية المستخدمة في تقدير كميات الجزيئات في‬
‫محاليلھا‪ ،‬ومن ھذه الجزيئات المھمة على مستوى الخلية الحية ھي البروتينات التي لھا القدرة على االمتصاص الضوئي‬
‫لوجود بعض األحماض األمينية الحلقية العطرية )تربتوفان ‪ -‬فينايل أالنين ‪ -‬تايروسين(‪.‬‬
‫وتوجد أجھزة خاصة لقياس امتصاص الطيف الضوئي تسمى )‪ (Spectrophotometer‬يمكن من خاللھا تقدير كمية‬
‫تركيز البروتين في العينة عند طول موجي معين‪.‬‬

‫‪ .٧٫٤٫١‬طريقة الوري ‪Lowry Protein Assay‬‬

‫تقدير البروتينات بطريقة الوري ھي من الطرق الشائعة و ذلك لسھولتھا و سرعة إجرائھا و كذلك لحساسيتھا العالية فھي‬
‫مطورة و مشتقة من‬
‫ّ‬ ‫تستخدم في تقدير البروتينات المخففة عندما يكون تركيزھا منخفضا ً جداً‪ ،‬و تعتبر طريقة الوري طريقة‬
‫طريقة بيوريت للكشف عن البروتينات‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫عند معاملة البروتين بمحلول كبريتات النحاس في وسط قاعدي فإن أيون النحاسيك يكون معقد مع الرابطة الببتيدية في‬
‫البروتين ويسمى معقد بيوريت‪ ،‬وھذا المعقد يختزل محلول فولن )الذي يتكون من أمالح معقدة من تنجستنات فوسفوموليبدات(‬
‫ليعطي لون أزرق يمكن قياس االمتصاص الضوئي له عند طول موجي ‪.750nm‬‬
‫ولتحديد تركيز أي بروتين مجھول يجب إعداد منحنى قياسي )‪ (Standard Curve‬عن طريق رسم العالقة بين مقدار‬
‫االمتصاص الضوئي والتركيز لبروتينات معلومة ومختلفة التراكيز‪ .‬يمكن من المنحنى القياسي حساب تركيز البروتينات‬
‫المجھولة بمعرفة مقدار االمتصاص الضوئي لھا‪.‬‬

‫المواد و األدوات‪:‬‬
‫محاليل البيومين سيرم الدم معلومة التراكيز‪ ،‬تحضر بتراكيز )‪.(50, 100, 150, 200, 250 ug/ml‬‬ ‫‪‬‬
‫محاليل بروتين مجھولة التراكيز )تُحضر في نطاق التراكيز المعلومة(‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول )‪ (a‬يحتوي على كربونات الصوديوم )‪ ,(2% Na2CO3‬وھيدروكسيد الصوديوم )‪.(0.1M NaOH‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول )‪ (b‬يحتوي على كبريتات النحاسيك )‪ (0.5% CuSO4‬وطرطرات الصوديوم والبوتاسيوم‬ ‫‪‬‬
‫)‪.(1% Sodium Potassium Tartarate‬‬
‫محلول كبريتات النحاس القاعدية‪ ،‬وينتج عن خلط ‪ ٥٠‬مل من المحلول )‪ (a‬مع ‪ ١‬مل من محلول )‪ (b‬ويجب أن يتم‬ ‫‪‬‬
‫الخلط بين المحلولين قبل إجراء التجربة مباشرة‪.‬‬
‫محلول فولن )يجب تخفيف المحلول التجاري بالماء المقطر بنسبة ‪ ١:١‬قبل االستعمال(‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫جھاز ‪ Spectrophotometer‬و يُضبط على طول موجي ‪750nm‬‬ ‫‪‬‬
‫ماصات أتوماتيكية‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫عدد ‪ ٨‬أنابيب اختبار نظيفة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫] ‪[ ٧٣‬‬
 ‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫رقم األنبوبة‬
‫المحلول‬
‫‪٨‬‬ ‫‪٧‬‬ ‫‪٦‬‬ ‫‪٥‬‬ ‫‪٤‬‬ ‫‪٣‬‬ ‫‪٢‬‬ ‫‪١‬‬

‫‪ ١‬مل‬ ‫ماء مقطر‬

‫البروتين القياسي‬
‫‪ ١‬مل‬
‫‪50 ug/ml‬‬
‫البروتين القياسي‬
‫‪ ١‬مل‬ ‫‪100 ug/ml‬‬
‫البروتين القياسي‬
‫‪ ١‬مل‬
‫‪150 ug/ml‬‬
‫البروتين القياسي‬
‫‪ ١‬مل‬ ‫‪200 ug/ml‬‬
‫البروتين القياسي‬
‫‪ ١‬مل‬
‫‪250 ug/ml‬‬
‫البروتين المجھول‬
‫‪ ١‬مل‬
‫‪A‬‬
‫البروتين المجھول‬
‫‪ ١‬مل‬
‫‪B‬‬
‫محلول كبريتات‬
‫‪ ٥‬مل‬ ‫‪ ٥‬مل‬ ‫‪ ٥‬مل‬ ‫‪ ٥‬مل‬ ‫‪ ٥‬مل‬ ‫‪ ٥‬مل‬ ‫‪ ٥‬مل‬ ‫‪ ٥‬مل‬ ‫النحاس القاعدية‬

‫رج األنابيب لمزج محتوياتھا و انتظر لمدة ‪ ١٠‬دقائق‬

‫‪ ٠٫٥‬مل‬ ‫‪ ٠٫٥‬مل‬ ‫‪ ٠٫٥‬مل‬ ‫‪ ٠٫٥‬مل‬ ‫‪ ٠٫٥‬مل‬ ‫‪ ٠٫٥‬مل‬ ‫‪ ٠٫٥‬مل‬ ‫‪ ٠٫٥‬مل‬ ‫كاشف فولن‬

‫رج األنابيب لمزج محتوياتھا و انتظر لمدة ‪ ١٥‬دقيقة‬

‫قياس االمتصاص الضوئي للعينات بواسطة جھاز ‪ Spectrophotometer‬عند طول موجي ‪750 nm‬‬

‫النتائج ‪:‬‬

‫االمتصاص الضوئي عند ‪750nm‬‬ ‫تركيز البروتين ‪ug/ml‬‬ ‫األنبوبة‬

‫‪0‬‬ ‫‪١‬‬

‫‪50‬‬ ‫‪٢‬‬

‫‪100‬‬ ‫‪٣‬‬

‫‪150‬‬ ‫‪٤‬‬

‫‪200‬‬ ‫‪٥‬‬

‫‪250‬‬ ‫‪٦‬‬

‫بروتين مجھول ‪A‬‬ ‫‪٧‬‬

‫بروتين مجھول ‪B‬‬ ‫‪٨‬‬

‫] ‪[ ٧٤‬‬
‫‪ ‬ارسم منحنى قياسي يوضح العالقة بين تركيز البروتين )على المحور األفقي( ومقدار االمتصاص الضوئي )على المحور‬
‫الرأسي( وذلك على ورقة رسم بياني‪.‬‬
‫‪ ‬استنتج من الرسم البياني تركيز محلول البروتين المجھول وذلك بمعلومية االمتصاص الضوئي له‪.‬‬

‫مالحظة‪ :‬من الممكن االكتفاء بتحضير محلول بروتين قياسي واحد فقط ثم نستخدم المعادلة الحسابية التالية لحساب تركيز‬
‫محلول بروتين مجھول )تعتبر ھذه الطريقة غير دقيقة العتمادھا على عينة قياسية واحدة فقط مما يزيد من نسبة الخطأ(‪:‬‬

‫حيث أن‪:‬‬
‫‪ = C1‬تركيز محلول البروتين القياسي‬
‫‪ = A1‬مقدار االمتصاص الضوئي للبروتين القياسي‬
‫‪ = C2‬تركيز محلول البروتين المجھول‬
‫‪ = A2‬مقدار االمتصاص الضوئي للبروتين المجھول‬

‫األسئلة‪:‬‬

‫ما نوع العالقة بين تركيز البروتين و االمتصاص الضوئي له ؟‬

‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫قارن بين قيمة تركيز البروتين المجھول المستنتجة بواسطة المنحنى القياسي أو المعادلة الحسابية؟ و أيھما أدق في النتيجة؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٧٥‬‬
 ‫‪ .٨‬اإلنزيمات ‪Enzymes‬‬

‫الوظيفة األساسية التي تقوم بھا الخاليا الحية في الكائن الحي ھي إنشاء مركبات معقدة من مواد بسيطة والعكس ‪ ،‬أي تفكيك‬
‫تلك المركبات المعقدة إلى مواد أبسط ‪ ،‬إن ھذه القدرة التي تتمتع بھا الخاليا على تكوين مواد عضوية معقدة من مواد أخرى‬
‫أبسط تركيبا ً )أو العكس( تحتاج لعدد كبير من التفاعالت الكيميائية المختلفة ‪ ،‬وتخضع ھذه التفاعالت آلليات تتحكم في سرعتھا‬
‫واتجاھھا عن طريق جزيئات متخصصة تسمى اإلنزيمات ‪ ،‬التي يعتمد عملھا على تحفيز )تسريع( التفاعالت الكيميائية داخل‬
‫الخلية وتنظيمھا بدقة بحسب حاجة الخاليا ‪.‬‬
‫فاإلنزيمات عوامل مساعدة عضوية حيوية تُصنّع داخل الخلية ‪ ،‬وتقوم بعملھا من خالل تحفيز التفاعالت داخل الخلية بطريقة‬
‫تخصصية ‪ ،‬أي أن كل إنزيم يقوم بتنشيط تفاعل محدد أو أكثر من خالل العـمل على مادة معينة )‪ (substrate‬أو مجموعة‬
‫مواد متشابھة كيميائيا ً دون غـيرھا ‪ ،‬فالتخصص رغم اختالف درجة تفاوته من إنزيم آلخر ‪ ،‬يحمي مادة الخلية نفسھا‬
‫ومكوناتھا من الھدم ‪ ،‬مع مالحظة أن عملية التنشيط التي يقــوم بھا اإلنزيم تعني أن اإلنزيم ال يتفاعل بنفسه وال يتأثر بنواتج‬
‫التفاعل‪.‬‬
‫تتركب اإلنزيمات في تكوينھا من بروتينات بغض النظر عن اسمھا ويمكن تقسيمھا من حيث التركيب إلى نوعين‪:‬‬
‫‪ .١‬اإلنزيمات البسيطة )‪(Simple Enzymes‬‬
‫وھي كأي بروتينات بسيطة عبارة عن سلسلة من األحماض األمينية المتتالية‪.‬‬
‫‪ .٢‬اإلنزيمات المرتبطة )‪(Conjugated Enzymes‬‬
‫وھي التي تتكون من شقين ‪ ،‬أحدھما بروتيني واآلخر غـير بروتيني ‪ .‬علما ً بأن المجموعات غـير البروتينية ھي جزء‬
‫الفعال في اإلنزيم ‪ ،‬وتسمى في ھذه الحالة باسم المرافق اإلنزيمي )‪ (Co‐Enzyme‬أو العامل المعاون‬
‫من المركز ّ‬
‫)‪ ، (Co‐Factor‬وھذه األجزاء غـير البروتينية ضرورية لنشاط ھذه اإلنزيمات ‪.‬‬

‫‪.٨٫١‬العوامل المؤثرة في نشاط اإلنزيمات‪:‬‬

‫‪ .١‬تركيز اإلنزيم‪.‬‬
‫‪ .٢‬تركيز المادة الداخلة في التفاعل )‪ (substrate‬التي يعمل عليھا ذلك اإلنزيم‪.‬‬
‫‪ .٣‬درجة الحرارة التي يحدث فيھا التفاعل‪.‬‬
‫‪ .٤‬درجة األس الھيدروجيني للوسط ) قيمة ‪. ( pH‬‬
‫‪ .٥‬وجود مواد مثبطة )‪ (inhibitors‬تعيق عمل اإلنزيم أو تقلل من نشاطه الحيوي‪.‬‬

‫‪.٨٫٢‬مبدأ دراسة نشاط اإلنزيمات بطريقة عملية‪:‬‬

‫لنتذكر ما سبق قوله من أن اإلنزيم ال يدخل في التفاعل ‪ ،‬ولھذا فإن دراسة نشاطه عمليا ً تتم من خالل قياس وتتبع المواد‬
‫المتفاعلة ومدى نقصھا أو اختفائھا ‪ ،‬وكذلك باختبار ظھور نواتج التفاعل أو زيادتھا‪ .‬فمن الواضح أن اختفاء المواد المتفاعلة‬
‫أو نقصھا ‪ ،‬وظھور نواتج التفاعل أو تزايدھا يدل على أن اإلنزيم نشط في تحفيزه للتفاعل في الظروف المناسبة للتفاعل ‪.‬‬

‫] ‪[ ٧٦‬‬
 ‫‪ .٨٫٣‬االختبارات الوصفية للكشف عن اإلنزيمات ‪Qualitative Tests of Enzyme‬‬

‫‪ .٨٫٣٫١‬الكشف عن الطبيعة الكيميائية لإلنزيمات‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬
‫من المعلوم سابقا ً بأن اإلنزيمات ھي من أنواع البروتينات وفي دراستنا للبروتينات تعرفنا على الكاشف العام لھا وھو اختبار‬
‫بيوريت ‪ ،‬والمبدأ ھنا أن نُجري التجربة المذكورة على محاليل إنزيمات ‪ ،‬فإن ظھرت نتيجة إيجابية نكون قد تحققنا من أن‬
‫اإلنزيم عبارة عن بروتين في طبيعته الكيميائية ‪.‬‬

‫المواد واألدوات‪:‬‬
‫محلول إنزيم األمايليز و محلول إنزيم السكريز‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول كبريتات النحاس ‪2% CuSO4‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول ھيدروكسيد الصوديوم ‪10% NaOH‬‬ ‫‪‬‬
‫أنابيب اختبار نظيفة‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬ضع في أنبوبة ‪ ١‬مل من إنزيم األمايليز ‪ ،‬وفي األنبوبة األخرى ‪ ١‬مل من أنزيم السكريز ‪.‬‬
‫ورج جيداً‬
‫ّ‬ ‫‪ .٢‬أضف لكل منھما ‪ ٢‬مل من ھيدروكسيد الصوديوم ‪،‬‬
‫ورج جيداً ‪.‬‬
‫ّ‬ ‫‪ .٣‬أضف ‪ ٠٫٥‬مل من كبريتات النحاس ‪،‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫إنزيم األمايليز‬

‫إنزيم السكريز‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫أكمل الفراغات التالية‪:‬‬
‫‪ ‬الكاشف العام للبروتينات ھو اختبار ‪. ......................‬‬
‫‪ ‬نستنتج من النتائج السابقة أن اإلنزيمات عبارة عن مواد ‪ ، ......................‬ألنھا أعطت نتيجة ‪ ........................‬مع‬
‫اختبار البيوريت ‪.‬‬
‫‪ ‬جميع اإلنزيمات عبارة عن ‪ ، ......................‬بينما ليس جميع البروتينات ‪. .......................‬‬

‫] ‪[ ٧٧‬‬
 ‫‪ .٨٫٣٫٢‬اختبار نشاط إنزيم األمايليز ‪α‐Amylase Activity Test‬‬
‫تفرزه الغدد اللعابية في الفم ‪ ،‬ليقوم بتحليل النشاء إلى وحدات عديدة من السكر األحادي )جلوكوز( ‪ ،‬من خالل تفاعل يأخذ‬
‫عدة خطوات ‪:‬‬
‫‪α‐Amylase‬‬
‫‪Starch‬‬ ‫)‪Glucose (many units‬‬

‫الھدف من االختبار‪:‬‬
‫متابعة نشاطية إنزيم ألفا أمايليز وذلك بالكشف عن نواتج التفاعل مع النشاء‪.‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫في ھـذه التجـربة يتم تحضير مستخلص خام من إنزيم األمايليز من اللعـاب ‪ ،‬ولكي نستدل على نشاطية اإلنزيم يجب أن نختبر‬
‫اختفاء النشاء أو بقاءه ‪ ،‬ونختبر كذلك ظھور الجلوكوز من عدمه‪ .‬ھذا وسبق أن درسنا اختبار اليود لفحص وجود النشاء ‪،‬‬
‫واختبار بندكت لفحص وجود السكر األحادي المختزل )جلوكوز(‪.‬‬

‫المواد واألدوات‪:‬‬
‫أنابيب اختبار نظيفة‬ ‫‪‬‬
‫محلول نشاء ‪1% Starch‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول إنزيم األمايليز من اللعاب ‪ Salivary Amylase‬يُ ّ‬
‫حضر بمضمضة الفم بالماء عدة مرات ووضعه في‬ ‫‪‬‬
‫كأس صغـير‪.‬‬
‫محلول اليود ‪ Iodine Solution‬يُ ّ‬
‫حضر بإذابة ‪ ٢٥‬مجم من اليود في ‪ ١٠٠‬مل من محلول يوديد البوتاسيوم ‪%٢‬‬ ‫‪‬‬
‫كاشف بندكت‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول كبريتات النحاس ‪2% CuSO4‬‬ ‫‪‬‬

‫محلول ھيدروكسيد الصوديوم ‪10% NaOH‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ -١‬جھّّز أنبوبتي اختبار ) أ‪ ،‬ب(‬
‫‪ -٢‬ضع ‪ ١‬مل من محلول إنزيم األمايليز في كال األنبوبتين‪.‬‬
‫‪ -٣‬ضع األنبوبة )أ( في حمام مائي يغلي لمدة ‪ ١٠‬دقائق ثم ب ّرّده تحت ماء الصنبور ‪ ،‬واترك األنبوبة )ب( بدون تسخين‪.‬‬
‫‪ -٤‬أضف ‪ ٢‬مل من محلول النشاء إلى كال األنبوبتين مع الرج جيداً‪.‬‬
‫‪ -٥‬اترك األنبوبتين في درجة حرارة الغرفة لمدة ‪ ٥‬دقائق حتى يتم التفاعل بين اإلنزيم والنشاء‪.‬‬
‫‪ -٦‬جھّّز أنبوبتين جديدين واقسم محتوى كل أنبوبة )أ ‪ ،‬ب( إلى قسمين ليصبح لديك )أ‪ ١‬و أ‪ (٢‬و )ب‪ ١‬و ب‪.(٢‬‬
‫‪ -٧‬أضف ‪ ٣‬نقط من اليود إلى األنبوبتين أ‪ ١‬و ب‪ ، ١‬ثم الحظ النتيجة‪.‬‬
‫‪ -٨‬أض ف ‪ ٢‬مل من ‪ NaOH‬إلى األنبوبتين أ‪ ٢‬و ب‪ ٢‬ثم أض ف لھما ‪ ١‬مل من كاش ف بندكت وس خنھما في حمام مائي‬
‫يغلي لمدة دقيقتين ‪ ،‬ثم الحظ النتيجة‪.‬‬

‫] ‪[ ٧٨‬‬
 ‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫أ ‪) ١‬مع اليود(‬

‫أ ‪) ٢‬مع بندكت(‬

‫ب ‪) ١‬مع اليود(‬

‫ب ‪) ٢‬مع بندكت(‬

‫مناقشة النتائج‪:‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫األسئلة‪:‬‬
‫في أي الحالتين وجدت أن اإلنزيم غـير قادر على تحليل النشاء ؟ ولماذا ؟‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬
‫‪.......................................................................................................................................................‬‬

‫] ‪[ ٧٩‬‬
 ‫‪ .٨٫٣٫٣‬اختبار نشاط إنزيم السكريز ‪Sucrase (Invertase) Activity Test‬‬
‫ھو أحد إنزيمات العصارة المعويّة التي تفرزھا خاليا األمعاء الدقيقة ليقوم بتحليل السكروز )سكر ثنائي( إلى الجلوكوز‬
‫والفركتوز )سكريات أحادية(‪.‬‬

‫‪Sucrase‬‬
‫‪Sucrose‬‬ ‫‪Glucose + Fructose‬‬

‫النظرية العـلمية لالختبار‪:‬‬

‫السكروز سكر ثنائي غـير مختزل ‪ ،‬متكون من ارتباط جزيئين مختلفين من سكريات أحادية مختزلة ھما الجلوكوز والفركتوز‬
‫ويتحلل تحت تأثير إنزيم السكريز ‪ ،‬ويمكن الكشف عن نشاط ھذا اإلنزيم بالكشف عن وجود سكريات مختزلة ناتجة من تحلل‬
‫السكروز وذلك عن طريق تطبيق تجربة بندكت‪.‬‬

‫المواد واألدوات‪:‬‬
‫محلول السكروز ‪10%‬‬ ‫‪‬‬
‫محلول إنزيم السكريز ‪ ،‬يُ ّ‬
‫حضر من الخميرة‪.‬‬ ‫‪‬‬
‫كاشف بندكت‪.‬‬ ‫‪‬‬

‫طريقة العـمل‪:‬‬
‫‪ .١‬جھّز أنبوبتي اختبار‪.‬‬
‫‪ .٢‬ضع في كل منھما ‪ ١‬مل من محلول إنزيم السكريز‪.‬‬
‫‪ .٣‬ضع األنبوبة األولى في حمام مائي يغلي واتركھا لمدة ‪ ١٠‬دقائق ‪ ،‬واترك األنبوبة الثانية بدون غليان‪.‬‬
‫‪ّ .٤‬‬
‫برد األنبوبة األولى تحت ماء الصنبور‪.‬‬
‫الرج جيداً‪.‬‬
‫‪ .٥‬أضف ‪ ٢‬مل من محلول السكروز إلى كال األنبوبتين مع ّ‬
‫‪ .٦‬اترك األنبوبتين في درجة حرارة الغرفة لمدة ‪ ٥‬دقائق حتى يتم التفاعل بين اإلنزيم والسكروز‪.‬‬
‫‪ .٧‬أضف ‪ ٢‬مل من ‪ NaOH‬إلى كال األنبوبتين ثم أضف لھما ‪ ١‬مل من كاشف بندكت وسخنھما في حمام مائي يغلي‬
‫لمدة دقيقتين ‪ ،‬ثم الحظ النتيجة‪.‬‬

‫النتائج‪:‬‬

‫االستنتاج‬ ‫المالحظة‬ ‫األنبوبة‬

‫] ‪[ ٨٠‬‬
 References ‫ المراجع‬.٩

- Abousalah, K. and Alnaser, A., 1996, Principles of Practical Biochemistry.

- Farid Shokry Ataya, 2007, Practical Biochemistry. AlRoshd Publisher, Riyadh, Saudi
Arabia.
- Milio, F. R. and Loffredo, W. M., 1995, Qualitative Testing for Amino Acids and
Proteins, Modular Laboratory Program in Chemistry, REAC 448.
- David T. Plummer, 1978, An Introduction to Practical Biochemistry

[ ٨١ ]