Oznaczanie stężenia białka przed dezintegracją

Wykonanie:

Do przeprowadzenia doświadczenia użyto:

Falkon o objętości 15ml, 1g mokrej masy Saccharomyces cerevisiae, 8ml PBS, wirówkę oraz
probówki typu Eppendorf o objętości 2ml.

Do falkonu o objętości 15ml przeniesiono 1g mokrej masy drożdży ( Saccharomyces cerevisiae).

Następnie dodano 8ml PBS. Całość falkonu została wstrząśnięta w celu wymieszania zawartości
oraz uzyskania jednolitej zawiesiny komórek. Po procesie mieszania falkon odwirowano przez 10
minut przy 3000 rpm. Następnie przeniesiono 2ml supernatantu do probówki typu Eppendorf na
2ml. Całość poddano 5-krotnym rozcieńczeniu. Następnie zmierzono absorbancję uzyskanego
nadsączu przy długości fali 260nm oraz 280nm. Wyniki prezentują się następująco:

Średnia wartość absorbancji przy fali 260nm wynosi 0.778 , natomiast przy fali 280nm 0,701.

Odchylenie standardowe, zarówno jak dla fali 260nm i 280nm wynosi 0.

Stężenie białka: 1,55*0,778 - 0,76*0,701 = 0,67314

 Dezintegracja metodą sonifikacji
Wykonanie:

Do przeprowadzenia doświadczenia wykorzystano:

Kolbę o obiętości 25ml, 1g mokrej masy Saccharomyces cerevisiae, 8ml PBS, łaźnię
ultradźwiękową, falkon o objętości 15ml, wirówkę, probówkę typu Eppendorf o objętości
2ml.

Do kolby o objętości 25ml przeniesiono 1g mokrej masy Saccharomyces cerevisiae.

Następnie dodano 1ml PBS, po czym przeprowadzono sonifikację w użyciu łaźni
ultradźwiękowej przez 10 minut. Po procesie sonifikacji całość badanego preparatu
przeniesiono z kolby do falkonu o objętości 15ml przy użyciu 7ml PBS. Końcowa objętość
zawiesiny wyniosła 8ml. Falkon z zawartością przeniesiono do wirówki, w której przez 10
minut przy 3000 rpm został odwirowany. Po upłynięciu czasu przeniesiono 2ml supernatantu
do probówki typu Eppendorf o objętości 2ml. Całość poddano 5-krotnym rozcieńczeniu.
Następnie zmierzono absorbancję uzyskanego nadsączu przy długości fali 260nm oraz
280nm. Wyniki prezentują się następująco:

Średnia wartość absorbancji przy fali 260nm wynosi 0,641, natomiast dla fali 280nm 0,573.

Odchylenie standardowe dla fali 260nm jest równe 0, natomiast dla fali 280nm 0,00047.

Stężenie białka: 1,55*0,641 – 0,76*0,573 = 0,55807

Wniosek:

Metoda sonifikacji wydaje się być skutecznym narzędziem w procesie dezintegracji komórek
ze względu na jej zdolność do generowania fali dźwiękowej o odpowiednich parametrach,
która może wpływać na strukturę komórkową. Poprzez precyzyjne dostosowanie
parametrów dźwięku, takich jak częstotliwość i amplituda, możliwe jest wywołanie efektów
mechanicznych, termicznych lub akustycznych, które prowadzą do dezintegracji komórek.