‫ﻣﺘﺮﺟﻢ ﻣﻦ ﺍﻟﻔﺮﻧﺴﻴﺔ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﻌﺮﺑﻴﺔ ‪www.onlinedoctranslator.

com -‬‬

‫ﺍﻟﻤﺠﻠﺪ‪ ،2‬ﺍﻟﻌﺪﺩ ‪ ،2‬ﺩﻳﺴﻤﺒﺮ ‪ .2002‬ﺍﻟﺼﻔﺤﺎﺕ ‪11-2‬‬ ‫ﻣﺮﺍﺟﻌﺎﺕﻓﻲ ﻋﻠﻢ ﺍﻷﺣﻴﺎء ﻭﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‬
‫ﻃﺒﻊﻓﻲ ﻛﻨﺪﺍ‬ ‫ﺑﻮﺍﺳﻄﺔﺍﻟﺠﻤﻌﻴﺔ ﺍﻟﻤﻐﺮﺑﻴﺔ ﻟﻠﺒﻴﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺑﻜﻨﺪﺍ‬

‫ﻓﻲﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ‪ :PCR‬ﺍﻟﻤﺒﺎﺩﺉ ﻭﺍﻟﺘﻄﺒﻴﻘﺎﺕ‬

‫ﺇﻟﻴﺰﺑﻮﻳﺘﺮﺍﺱ ﻭﺃﻻﻥ ﻫﻮﺩ*‬

‫ﺃﺻﺒﺤﺖﺗﻘﻨﻴﺔ ‪ PCR‬ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﺃﻛﺜﺮ ﺷﻴﻮﻋﺎً ﻓﻲ ﻣﺨﺘﻠﻒ ﺍﻟﺼﻨﺎﻋﺎﺕ‪ .‬ﺗﻌﺘﻤﺪ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﻋﻠﻰ ﺍﻟﻜﺸﻒ ﻭﺍﻟﻘﻴﺎﺱ ﺍﻟﻜﻤﻲ‬
‫ﻟﻤﺮﺍﺳﻞﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﺍﻟﺬﻱ ﻳﺘﻨﺎﺳﺐ ﺍﻧﺒﻌﺎﺛﻪ ﺑﺸﻜﻞ ﻣﺒﺎﺷﺮ ﻣﻊ ﻛﻤﻴﺔ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﺍﻟﻤﺘﻮﻟﺪﺓ ﺃﺛﻨﺎء ﺗﻔﺎﻋﻞ ‪ .PCR‬ﻧﻈﺮﺍً ﻷﻧﻪ ﻳﺴﺘﺨﺪﻡ‬
‫ﻋﺎﺩﺓ ًﺃﻧﻈﻤﺔ ﺍﻷﻧﺎﺑﻴﺐ ﺍﻟﻤﻐﻠﻘﺔ ﻭﻻ ﻳﺘﻄﻠﺐ ﺍﻟﻘﻴﺎﺱ ﺍﻟﻜﻤﻲ ﺃﻱ ﻣﻌﺎﻟﺠﺔ ﺑﻌﺪ ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢ‪ ،‬ﻳﺘﻢ ﺗﻘﻠﻴﻞ ﻣﺸﻜﻼﺕ ﺗﻠﻮﺙ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ ﺑﻌﺪ‬
‫‪ PCR‬ﺑﺸﻜﻞ ﻛﺒﻴﺮ‪ .‬ﺗﺘﻢ ﺍﻟﻌﻤﻠﻴﺔ ﺑﺄﻛﻤﻠﻬﺎ ﺗﻠﻘﺎﺉﻴﺎً ﻣﻦ ﺍﻟﺒﺪﺍﻳﺔ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﻨﻬﺎﻳﺔ‪ ،‬ﻣﻤﺎ ﻳﺠﻌﻞ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﻓﻌﺎﻟﺔ ﺟﺪﺍً ﻟﺘﻄﺒﻴﻘﺎﺕ ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻞ‬
‫ﻭﺍﺳﻌﺔﺍﻟﻨﻄﺎﻕ‪ .‬ﺗﻮﻓﺮ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﻤﻘﺎﻟﺔ ﻭﺻﻔﺎً ﻟﻠﻤﺒﺎﺩﺉ ﺍﻟﻜﺎﻣﻨﺔ ﻭﺭﺍء ﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ‪ ،‬ﻭﺗﻘﻨﻴﺎﺕ‬
‫ﺍﻟﻜﺸﻒﻋﻦ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ ﺍﻟﻤﺨﺘﻠﻔﺔ‪ ،‬ﻭﺃﻣﺜﻠﺔ ﻟﻠﺘﻄﺒﻴﻘﺎﺕ ﺍﻟﺸﺎﺉﻌﺔ‪..‬‬

‫ﻧﻘﻄﺔﺍﻟﺒﺪﺍﻳﺔ ﻭﻛﻤﻴﺔ ﺍﻟﻤﻨﺘﺞ ﺍﻟﻤﺘﻀﺨﻤﺔ ﻓﻲ ﺃﻱ ﺩﻭﺭﺓ‪ .‬ﻣﻦ ﺍﻟﻨﺎﺣﻴﺔ‬ ‫ﺗﺎﺭﻳﺨﻲ‬

‫ﺍﻟﻌﻤﻠﻴﺔ‪،‬ﻟﻴﺲ ﻣﻦ ﻏﻴﺮ ﺍﻟﻤﺄﻟﻮﻑ ﺃﻥ ﺗﻌﻄﻲ ﺗﻔﺎﻋﻼﺕ ‪ PCR‬ﺍﻟﻤﺘﻤﺎﺛﻠﺔ‬
‫ﻣﺴﺘﻮﻳﺎﺕﻣﺨﺘﻠﻔﺔ ﻣﻦ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ‪ .‬ﻟﻘﺪ ﺃﺩﻯ ﺗﻄﻮﻳﺮ ‪ PCR‬ﺍﻟﻜﻤﻲ ﻓﻲ‬
‫ﺍﻟﻮﻗﺖﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﻘﻀﺎء ﻋﻠﻰ ﺍﻟﻤﺘﻐﻴﺮﺍﺕ ﺍﻟﺘﻘﻠﻴﺪﻳﺔ ﺍﻟﻤﺮﺗﺒﻄﺔ ﺑـ‬
‫‪ PCR‬ﺍﻟﻜﻤﻲ ﻭﻳﺴﻤﺢ ﺑﺘﻘﺪﻳﺮ ﻣﻨﺘﺞ ‪ PCR‬ﺑﻄﺮﻳﻘﺔ ﻣﻮﺛﻮﻗﺔ ﻭﺭﻭﺗﻴﻨﻴﺔ‪.‬‬
‫ﻓﻲﺑﺪﺍﻳﺔ ﺗﻔﺎﻋﻞ ‪ ،PCR‬ﺗﻜﻮﻥ ﺍﻟﻜﻮﺍﺷﻒ ﺯﺍﺉﺪﺓ ﻭﻟﻜﻦ ﺑﺘﺮﻛﻴﺰ ﻣﻨﺨﻔﺾ‬
‫ﺇﻟﻰﺣﺪ ﻣﺎ ﻟﻤﻨﻊ ﺇﻋﺎﺩﺓ ﻃﺒﻴﻌﺔ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﻣﻦ ﺍﻟﺘﻨﺎﻓﺲ ﻣﻊ ﺗﻬﺠﻴﻦ‬
‫ﺍﻟﺒﺎﺩﺉﺎﺕ‪.‬ﻳﺘﻢ ﺑﻌﺪ ﺫﻟﻚ ﺇﺟﺮﺍء ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢ ﺑﺸﻜﻞ ﺛﺎﺑﺖ ﺑﻤﻌﺪﻝ ﺃﺳﻲ‬
‫ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡﺑﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻘﺎﺑﻞ ﻟﻠﺤﺮﺍﺭﺓ‪ .‬ﺑﻌﺪ ﺍﻟﻤﺮﺣﻠﺔ‬
‫ﺍﻷﺳﻴﺔ‪،‬ﻳﺪﺧﻞ ﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢ ﻣﺮﺣﻠﺔ ﺧﻄﻴﺔ ﺣﻴﺚ ﻳﺼﺒﺢ ﻣﻌﺪﻝ‬
‫ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢﻣﺘﻐﻴﺮﺍً ﻟﻠﻐﺎﻳﺔ‪ ،‬ﺣﺘﻰ ﻋﻠﻰ ﻣﺴﺘﻮﻯ ﺗﻜﺮﺍﺭ ﻧﻔﺲ ﺍﻟﻌﻴﻨﺔ‪ ،‬ﺑﺴﺒﺐ‬
‫ﺍﻟﺘﻨﺎﻓﺲﺑﻴﻦ ﺇﻋﺎﺩﺓ ﻃﺒﻴﻌﺔ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﻭﺗﻬﺠﻴﻦ ﺍﻟﺒﺎﺩﺉﺎﺕ‪ .‬ﺛﻢ ﺗﺘﺒﻊ‬
‫ﻣﺮﺣﻠﺔﺍﻟﻬﻀﺒﺔ ﺣﻴﺚ ﻳﻨﺨﻔﺾ ﻣﻌﺪﻝ ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢ ﺇﻟﻰ ﻣﺎ ﻳﻘﺮﺏ ﻣﻦ‬
‫ﺍﻟﺼﻔﺮ‪،‬ﻣﻤﺎ ﻳﻮﻟﺪ ﻋﺪﺩﺍً ﻗﻠﻴﻼ ًﺟﺪﺍً ﻣﻦ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ‪.‬‬
‫ﻛﺎﻥﺭﺍﺳﻞ ﻫﻴﻐﻮﺗﺸﻲ ﻣﻦ ﺃﻭﺍﺉﻞ ﺍﻟﺬﻳﻦ ﻗﺎﻣﻮﺍ ﺑﺘﺤﻠﻴﻞ ﺣﺮﻛﻴﺔ ﺗﻔﺎﻋﻞ‬
‫ﺍﻟﺒﻠﻤﺮﺓﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ )ﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ( ﻣﻦ ﺧﻼﻝ ﺗﻄﻮﻳﺮ‬
‫ﻧﻈﺎﻡﻳﻜﺘﺸﻒ ﻣﻨﺘﺞ ﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﺃﺛﻨﺎء ﺗﺮﺍﻛﻤﻪ‪.‬‬
‫ﺍﺳﺘﺨﺪﻡﻫﺬﺍ ﺍﻟﻨﻈﺎﻡ "ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ" ﺑﺮﻭﻣﻴﺪ ﺍﻹﻳﺜﻴﺪﻳﻮﻡ ﻛﻌﺎﻣﻞ‬
‫ﻣﻘﺤﻢﻓﻲ ﻛﻞ ﺗﻔﺎﻋﻞ ﻣﻦ ﺗﻔﺎﻋﻼﺕ ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢ ﻭﺩﻭﺭﺓ ﺣﺮﺍﺭﻳﺔ ﻣﻌﺪﻟﺔ‬
‫ﻟﺘﺤﻔﻴﺰﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻌﻴﻨﺎﺕ ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﺍﻷﺷﻌﺔ ﻓﻮﻕ ﺍﻟﺒﻨﻔﺴﺠﻴﺔ‪ .‬ﺗﻢ‬
‫ﺍﻛﺘﺸﺎﻑﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﻛﺎﻣﻴﺮﺍ ‪) CCD‬ﺟﻬﺎﺯ ﻣﻘﺘﺮﻥ‬
‫ﺑﺎﻟﺸﺤﻦ(‪ .‬ﻭﻟﻮﺣﻈﺖ ﺯﻳﺎﺩﺓ ﻓﻲ ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﻋﻨﺪﻣﺎ ﺗﻢ ﺭﺑﻂ‬
‫ﺑﺮﻭﻣﻴﺪﺍﻹﻳﺜﻴﺪﻳﻮﻡ ﺑﺎﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺰﺩﻭﺝ ﺍﻟﺬﻱ ﺗﻢ ﺇﻧﺘﺎﺟﻪ ﺃﺛﻨﺎء‬
‫ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢ‪.‬ﻣﻦ ﺧﻼﻝ ﺭﺳﻢ ﺍﻟﺰﻳﺎﺩﺓ ﻓﻲ ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﻛﺪﺍﻟﺔ ﻟﺮﻗﻢ‬
‫ﺍﻟﺪﻭﺭﺓ‪،‬ﻳﻨﺘﺞ ﺍﻟﻨﻈﺎﻡ ﻣﻨﺤﻨﻴﺎﺕ ﺗﻀﺨﻴﻢ ﺗﻌﺮﺽ ﺻﻮﺭﺓ ﺃﻛﺜﺮ ﺍﻛﺘﻤﺎﻻً‬
‫ﻟﻌﻤﻠﻴﺔ‪ PCR‬ﻣﻦ ﻣﺠﺮﺩ ﺗﺤﺪﻳﺪ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﺍﻟﻤﺘﺮﺍﻛﻤﺔ )ﻣﻨﺘﺠﺎﺕ‬
‫ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢﻓﻲ ﻧﻬﺎﻳﺔ ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢ( )ﻫﻴﺠﻮﺗﺸﻲ ﻭﺁﺧﺮﻭﻥ‪. .(1992 ،‬‬

‫ﻣﻦﺃﺟﻞ ﺟﻤﻊ ﺍﻟﺒﻴﺎﻧﺎﺕ ﺍﻟﻜﻤﻴﺔ ﺑﺪﻗﺔ‪ ،‬ﻳﺠﺐ ﺗﺤﻠﻴﻞ ﻛﻞ ﻋﻴﻨﺔ ﻓﻲ ﻣﺮﺣﻠﺔ‬
‫ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢﺍﻷﺳﻲ ﻭﻫﻲ ﺍﻟﻤﺮﺣﻠﺔ ﺍﻷﻛﺜﺮ ﺍﺳﺘﻨﺴﺎﺧﺎً ﻓﻲ ﺗﻔﺎﻋﻞ ‪ .PCR‬ﻓﻲ‬
‫ﺍﻟﻮﻗﺖﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ‪ PCR‬ﻟﺬﻟﻚ ﻳﺘﺘﺒﻊ ﺍﻷﺳﻔﺎﺭ ﺍﻟﻤﻨﺒﻌﺜﺔ ﺃﺛﻨﺎء ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ ﻣﻊ‬
‫ﻣﺆﺷﺮﻹﻧﺘﺎﺝ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ ﺧﻼﻝ ﻛﻞ ﺩﻭﺭﺓ‪ ،‬ﻋﻠﻰ ﻋﻜﺲ ‪ PCR‬ﺍﻟﻜﻤﻲ‬
‫ﺍﻟﺘﻘﻠﻴﺪﻱﺣﻴﺚ ﻳﺘﻢ ﺍﻟﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﻓﻘﻂ ﻓﻲ ﻧﻬﺎﻳﺔ ﻋﻤﻠﻴﺔ‬
‫ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ‪.‬‬
‫ﻫﺬﻩﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﺟﺬﺍﺑﺔ ﻟﻠﺘﺤﻠﻴﻼﺕ ﺍﻟﻜﻤﻴﺔ‪ .‬ﻣﻦ ﺍﻟﻨﺎﺣﻴﺔ ﺍﻟﻨﻈﺮﻳﺔ‪ ،‬ﻫﻨﺎﻙ‬
‫‪.‬‬
‫ﻣﺒﺪﺃ‬
‫ﻣﻨﺬﺍﺧﺘﺮﺍﻋﻪ‪ ،‬ﺃﺻﺒﺢ ﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ )‪ (PCR‬ﻫﻮ‬
‫ﺍﻷﺳﻠﻮﺏﺍﻷﻛﺜﺮ ﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻣﺎً ﻋﻠﻰ ﻧﻄﺎﻕ ﻭﺍﺳﻊ ﻟﻠﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﺍﻟﺤﻤﺾ‬
‫ﺍﻟﻨﻮﻭﻱﺍﻟﺮﻳﺒﻮﺯﻱ )‪ (DNA‬ﻭﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﺮﻳﺒﻲ )‪ .(RNA‬ﻣﻦ ﻧﺴﺨﺔ‬
‫ﻭﺍﺣﺪﺓﻣﻦ ﺗﺴﻠﺴﻞ ﺣﻤﺾ ﻧﻮﻭﻱ ﻣﻌﻴﻦ‪ ،‬ﻳﻤﻜﻦ ﺗﻀﺨﻴﻢ ﻫﺬﺍ‬
‫ﺍﻟﺘﺴﻠﺴﻞﻭﺍﻟﻜﺸﻒ ﻋﻨﻪ ﻋﻠﻰ ﻭﺟﻪ ﺍﻟﺘﺤﺪﻳﺪ‪ .‬ﻃﺒﻴﻌﺘﻬﺎ ﺍﻷﺳﻴﺔ ﺗﺠﻌﻞ‬
‫ﻋﻼﻗﺔﻛﻤﻴﺔ ﺑﻴﻦ ﻛﻤﻴﺔ ﺍﻟﺘﺴﻠﺴﻞ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ‬

‫ﺍﻟﻤﺮﺍﺳﻼﺕ‪:‬ﺍﻟﺪﻛﺘﻮﺭ ﺁﻻﻥ ﻫﻮﺩ‪ ،‬ﺍﻟﺰﺭﺍﻋﺔ ﻭﺍﻷﻏﺬﻳﺔ ﺍﻟﺰﺭﺍﻋﻴﺔ ﺑﻜﻨﺪﺍ‪ ،‬ﻣﺮﻛﺰ ﺑﺤﻮﺙ ﺍﻷﻏﺬﻳﺔ ﻭﺍﻟﺘﻨﻤﻴﺔ‪ 3600 ،‬ﺑﻮﻝ‪ ،Casavant Ouest، St-Hyacinthe .‬ﻛﻴﺒﻴﻚ‪ ،‬ﻛﻨﺪﺍ‪.J2S 8E3 ،‬‬
‫ﺍﻟﺒﺮﻳﺪﺍﻹﻟﻜﺘﺮﻭﻧﻲ‪Houdea@agr.gc.ca :‬‬
‫‪3‬‬
‫ﺃﻧﻬﺎﺍﻗﺘﺼﺎﺩﻳﺔ ﻭﺳﻬﻠﺔ ﺍﻻﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﻭﻟﻬﺎ ﺣﺴﺎﺳﻴﺔ ﺃﻛﺜﺮ ﻣﻦ ﺑﺮﻭﻣﻴﺪ‬
‫ﺍﻹﻳﺜﻴﺪﻳﻮﻡﺩﻭﻥ ﺗﺜﺒﻴﻂ ﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢ‪.‬‬
‫ﺃﺛﻨﺎءﺗﻔﺎﻋﻞ ﺗﻀﺨﻴﻢ ‪ ،PCR‬ﺗﻈُﻬﺮ ﺍﻟﺼﺒﻐﺔ ﺍﻟﺤﺮﺓ ﻓﻲ ﺍﻟﻤﺤﻠﻮﻝ ﺍﻟﻘﻠﻴﻞ‬
‫ﻣﻦﺍﻟﺘﺄﻟﻖ‪ .‬ﺃﺛﻨﺎء ﻣﺮﺣﻠﺔ ﺍﻻﺳﺘﻄﺎﻟﺔ‪ ،‬ﺗﺮﺗﺒﻂ ﺍﻟﺰﻳﺎﺩﺓ ﻓﻲ ﺍﻟﺘﺄﻟﻖ ﺑﻜﻤﻴﺔ‬
‫ﺍﻟﺼﺒﻐﺔﺍﻟﻤﺮﺗﺒﻄﺔ ﺑﺎﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺰﺩﻭﺝ ﺍﻟﺠﺪﻳﻠﺔ ﺍﻟﻨﺎﺷﺊ‪ .‬ﻋﻨﺪ‬
‫ﻣﺮﺍﻗﺒﺘﻬﺎﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ‪ ،‬ﻳﺘﻢ ﻣﻼﺣﻈﺔ ﺍﻟﺰﻳﺎﺩﺓ ﻓﻲ ﺇﺷﺎﺭﺓ‬
‫ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖﺃﺛﻨﺎء ﺧﻄﻮﺓ ﺍﻟﺒﻠﻤﺮﺓ ﻭﻳﺘﺤﻠﻞ ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﺗﻤﺎﻣﺎً‬
‫ﻋﻨﺪﻣﺎﻳﺘﻢ ﺗﻐﻴﻴﺮ ﻃﺒﻴﻌﺔ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﻓﻲ ﺍﻟﺨﻄﻮﺓ ﺍﻟﺘﺎﻟﻴﺔ‪ .‬ﻭﺑﺎﻟﺘﺎﻟﻲ‪،‬‬
‫ﻳﺘﻢﻗﻴﺎﺱ ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﻓﻲ ﻧﻬﺎﻳﺔ ﻛﻞ ﺧﻄﻮﺓ ﺍﺳﺘﻄﺎﻟﺔ ﻟﻜﻞ‬
‫ﺩﻭﺭﺓﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﻧﻈﺎﻡ ﻗﺮﺍءﺓ ﻣﺪﻣﺞ ﻓﻲ ﺟﻬﺎﺯ ‪ PCR‬ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ‬
‫ﻣﻤﺎﻳﺠﻌﻞ ﻣﻦ ﺍﻟﻤﻤﻜﻦ ﻣﺮﺍﻗﺒﺔ ﺍﻟﺰﻳﺎﺩﺓ ﻓﻲ ﻛﻤﻴﺔ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ‬
‫ﺍﻟﻤﺘﻀﺨﻢﺃﺛﻨﺎء ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ )‪) (Bustin،. 2000‬ﺍﻟﺸﻜﻞ ‪.(1‬‬
‫ﻻﺗﺘﻄﻠﺐ ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﻤﻌﺘﻤﺪﺓ ﻋﻠﻰ ‪ SYBR Green I‬ﺃﻱ ﻣﺴﺒﺎﺭ‬
‫ﻓﻠﻮﺭﺳﻨﺖﻭﻟﻜﻦ ﺧﺼﻮﺻﻴﺘﻬﺎ ﺗﻌﺘﻤﺪ ﻛﻠﻴﺎً ﻋﻠﻰ ﺑﺎﺩﺉﺎﺗﻬﺎ‬
‫)‪ .(Bustin, 2000‬ﻭﻟﺬﻟﻚ ﻓﻬﻮ ﻻ ﻳﺘﻄﻠﺐ ﺃﻱ ﺧﺒﺮﺓ ﺧﺎﺻﺔ ﻟﺘﺼﻤﻴﻢ‬
‫ﻣﺠﺴﺎﺕﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﻭﻻ ﻳﺘﺄﺛﺮ ﺑﺎﻟﻄﻔﺮﺍﺕ ﻓﻲ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ‬
‫ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑﺍﻟﺬﻱ ﻳﺆﺛﺮ ﻋﻠﻰ ﺗﻬﺠﻴﻦ ﻣﺠﺴﺎﺕ ﻣﺤﺪﺩﺓ )ﻣﺎﻛﺎﻱ ﻭﺁﺧﺮﻭﻥ‪،‬‬
‫‪ .(2002‬ﻧﻈﺮﺍً ﻷﻥ ‪ SYBR Green I‬ﻳﺮﺗﺒﻂ ﺑﺄﻱ ﺟﺰﻱء ‪ DNA‬ﻣﺰﺩﻭﺝ‬
‫ﺍﻟﺠﺪﻳﻠﺔ‪،‬ﻓﺈﻥ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﺗﻘﺪﻡ ﺑﻌﺾ ﺍﻟﺘﻨﻮﻉ ﺣﻴﺚ ﻳﻤﻜﻦ ﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻡ‬
‫ﻓﻲﺇﺷﺎﺭﺓ ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﺗﺘﻨﺎﺳﺐ ﻃﺮﺩﻳﺎً ﻣﻊ ﻛﻤﻴﺔ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ‬
‫ﻧﻔﺲﺍﻟﻌﺎﻣﻞ ﻟﻠﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﺃﻛﺜﺮ ﻣﻦ ﻣﻨﺘﺞ ﺗﻀﺨﻴﻢ ﻓﻲ ﻧﻔﺲ ﺗﺴﻠﺴﻞ‬
‫ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ‪.‬‬
‫ﺍﻷﺧﻴﺮﺓ‪،‬ﺗﻮﺟﺪ ﺣﺎﻟﻴﺎً ﺃﺭﺑﻊ ﺗﻘﻨﻴﺎﺕ ﺭﺉﻴﺴﻴﺔ‪ :‬ﺍﻟﺘﺤﻠﻞ ﺍﻟﻤﺎﺉﻲ ﻟﻠﻤﺴﺎﺑﻴﺮ )‬
‫ﻟﻬﺬﻩﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺃﻳﻀﺎً ﻋﻴﻮﺏ ﻣﻌﻴﻨﺔ‪ (1 :‬ﻧﻈﺮﺍً ﻷﻥ ﺇﺟﻤﺎﻟﻲ ﺍﻟﺤﻤﺾ‬
‫ﺍﻟﻨﻮﻭﻱﺍﻟﻤﺰﺩﻭﺝ ﺍﻟﺠﺪﻳﻠﺔ ﻳﺼﺪﺭ ﺇﺷﺎﺭﺍﺕ‪ ،‬ﻳﺼﺒﺢ ﻣﻦ ﺍﻟﻤﺴﺘﺤﻴﻞ ﺃﺛﻨﺎء‬
‫ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞﺍﻟﺘﺄﻛﺪ ﻣﻦ ﺧﺼﻮﺻﻴﺔ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﺃﻭ ﺍﻟﺘﻤﻴﻴﺰ ﺑﻴﻦ‬
‫ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕﺍﻟﻤﺨﺘﻠﻔﺔ ﻓﻲ ﺣﺎﻟﺔ ﺗﻌﺪﺩ ﺍﻹﺭﺳﺎﻝ؛ ‪ (2‬ﻋﺪﻡ ﺍﻟﺘﻄﺎﺑﻖ )‬
‫ﺳﻮءﺍﻟﺘﺤﻀﻴﺮ(‪ ،‬ﻏﺎﻟﺒﺎً ﻣﺎ ﻳﻮﻟﺪ ﻧﻄﺎﻗﺎﺕ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﺰﺍﺉﺪﺓ ﻋﻦ‬
‫ﺍﻟﺤﺎﺟﺔﻭﺍﻟﺘﻲ ﻳﻤﻜﻦ ﻣﻼﺣﻈﺘﻬﺎ ﻋﻠﻰ ﻫﻼﻡ ﺍﻟﺘﻔﺮﻳﺪ‪ ،‬ﻳﻤﻜﻦ ﺃﻥ ﻳﺆﺩﻱ ﺇﻟﻰ‬
‫ﻧﺘﺎﺉﺞﺇﻳﺠﺎﺑﻴﺔ ﻛﺎﺫﺑﺔ ﺃﻭ ﺍﻟﻤﺒﺎﻟﻐﺔ ﻓﻲ ﺗﻘﺪﻳﺮ ﺍﻟﻘﻴﺎﺱ ﺍﻟﻜﻤﻲ؛ ‪ (3‬ﻳﻤﻜﻦ‬
‫ﺃﻥﻳﻜﻮﻥ ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﻣﺘﺤﻴﺰﺍً ﻣﻦ ﺧﻼﻝ ﺍﻟﻜﺘﻠﺔ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ‬
‫ﻟﻠﺤﻤﺾﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﻀﺨﻢ ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﺃﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ ﺃﻃﻮﻝ ﻭﺍﻟﺬﻱ ﺳﻴﺮﺑﻂ‬
‫ﺍﻟﻤﺰﻳﺪﻣﻦ ﺟﺰﻳﺉﺎﺕ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﻣﻘﺎﺭﻧﺔ ﻣﻊ ﺃﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ ﺃﻗﺼﺮ ﻓﻲ‬
‫ﻧﻔﺲﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ )‪.(Bustin، 2000‬‬
‫‪ (2‬ﺗﺤﻘﻴﻘﺎﺕ ﺍﻟﺘﺤﻠﻞ ﺍﻟﻤﺎﺉﻲ )ﺗﺤﻘﻴﻘﺎﺕ ﺍﻟﺘﺤﻠﻞ ﺍﻟﻤﺎﺉﻲ‪ :‬ﻣﻘﺎﻳﺴﺔ ﻃﻘﻤﺎﻥ(‬
‫ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎﻃﻘﻤﺎﻥﻳﻌﺘﻤﺪ ﻋﻠﻰ ﻧﺸﺎﻁ ﻧﻮﻛﻠﻴﺎﺯ ﺧﺎﺭﺟﻲ ‪ '5‬ﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ‬
‫ﻃﻖﻟﺘﺤﻠﻞ ﻣﺴﺒﺎﺭ ﻣﻬﺠﻦ ﺇﻟﻰ ﺗﺴﻠﺴﻠﻪ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ ﻋﻠﻰ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ‬
‫ﺃﺛﻨﺎءﺧﻄﻮﺓ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ‪/‬ﺍﻟﺘﻤﺪﻳﺪ ﻟـ ‪ .PCR‬ﻳﺘﻢ ﺭﺑﻂ ﻓﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ ﺑﺎﻋﺚ )‬
‫ﻣﺮﺍﺳﻞ( )ﻋﻠﻰ ﺳﺒﻴﻞ ﺍﻟﻤﺜﺎﻝ ‪(FAM: 6-carboxyfluorocein‬‬
‫ﺑﺎﻟﻨﻬﺎﻳﺔ‪ '5‬ﻣﻦ ﻣﺴﺒﺎﺭ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ ﻭﻳﺘﻢ ﺗﺜﺒﻴﻂ ﺍﻧﺒﻌﺎﺛﻪ ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ‬
‫ﻓﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡﻛﺎﺗﻢ ﺛﺎﻥ ٍ)ﻣﺨﻤﺪ( ﻣﻮﺟﻮﺩ ﻓﻲ ﺍﻟﻨﻬﺎﻳﺔ ‪) '3‬ﻋﻠﻰ ﺳﺒﻴﻞ ﺍﻟﻤﺜﺎﻝ‬
‫‪ -TAMRA: 6‬ﻛﺮﺑﻮﻛﺴﻲ‪-‬ﺭﺑﺎﻋﻲ ﻣﻴﺜﻴﻞ‪-‬ﺭﻭﺩﺍﻣﻴﻦ(‪ .‬ﻋﻨﺪ ﺗﺤﻔﻴﺰﻩ‪ ،‬ﻳﻘﻮﻡ‬
‫ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡﺍﻟﺒﺎﻋﺚ ﺑﻨﻘﻞ ﻃﺎﻗﺘﻪ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ ﺍﻟﻤﺜﺒﻂ ﺍﻟﻤﺠﺎﻭﺭ‬
‫ﻭﻓﻘﺎًﻟﻠﻤﺒﺪﺃ‬
‫‪http://www.rbmc.qc.ca/reviews/‬‬
‫ﺍﻟﻘﺲ‪.‬ﺑﻴﻮﻝ‪ .‬ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‪.‬‬
‫ﺗﻌﺘﻤﺪﺗﻘﻨﻴﺔ ‪ PCR‬ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﻋﻠﻰ ﺍﻟﻜﺸﻒ ﻭﺍﻟﻘﻴﺎﺱ ﺍﻟﻜﻤﻲ‬
‫ﻟـ"ﻣﺮﺍﺳﻞ" ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ‪ .‬ﺍﻟﺰﻳﺎﺩﺓ ﻓﻲ ﺇﺷﺎﺭﺓ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﺗﺘﻨﺎﺳﺐ‬
‫ﻃﺮﺩﻳﺎﻣﻊ ﻛﻤﻴﺔ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﺍﻟﻤﺘﻮﻟﺪﺓ ﺃﺛﻨﺎء ﺗﻔﺎﻋﻞ ‪ .PCR‬ﻣﻦ ﺧﻼﻝ‬
‫ﻣﺮﺍﻗﺒﺔﻛﻤﻴﺔ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﺍﻟﻤﻨﺒﻌﺜﺔ ﻓﻲ ﻛﻞ ﺩﻭﺭﺓ‪ ،‬ﻳﺼﺒﺢ ﻣﻦ ﺍﻟﻤﻤﻜﻦ‬
‫ﻣﺘﺎﺑﻌﺔﺗﻔﺎﻋﻞ ‪ PCR‬ﺧﻼﻝ ﻣﺮﺣﻠﺘﻪ ﺍﻷﺳﻴﺔ ﺣﻴﺚ ﺗﻜﻮﻥ ﺃﻭﻝ ﺯﻳﺎﺩﺓ ﻛﺒﻴﺮﺓ‬
‫ﻓﻲﻛﻤﻴﺔ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﻣﺮﺗﺒﻄﺔ ﺍﺭﺗﺒﺎﻃﺎً ﻣﺒﺎﺷﺮﺍً ﺑﺎﻟﻤﺒﻠﻎ ﺍﻷﻭﻟﻲ ﻟﻘﺎﻟﺐ‬
‫ﺍﻟﻬﺪﻑﺍﻷﺻﻠﻲ‪ .‬ﺗﻮﺟﺪ ﺣﺎﻟﻴﺎً ﺍﻟﻌﺪﻳﺪ ﻣﻦ ﺃﺩﻭﺍﺕ ‪ PCR‬ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ‬
‫ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲﻓﻲ ﺍﻟﺴﻮﻕ‪ .‬ﺗﺴﺘﺨﺪﻡ ﻫﺬﻩ ﺍﻷﺟﻬﺰﺓ ﺑﺸﻜﻞ ﻋﺎﻡ ﻧﻈﺎﻡ ﺃﻧﺒﻮﺏ‬
‫ﻣﻐﻠﻖﻭﻻ ﻳﺘﻄﻠﺐ ﺍﻟﻘﻴﺎﺱ ﺍﻟﻜﻤﻲ ﻣﻌﺎﻟﺠﺔ ﻣﺎ ﺑﻌﺪ ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢ‪ ،‬ﻣﻤﺎ ﻳﻘﻠﻞ‬
‫ﺃﻭﻳﺰﻳﻞ ﻣﺸﺎﻛﻞ ﺗﻠﻮﺙ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ ﺑﻌﺪ ﺗﻔﺎﻋﻞ ‪ PCR‬ﻭﻳﻘﻠﻞ ﻭﻗﺖ‬
‫ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻞ)‪ .(Bustin, 2000‬ﻭﺑﺎﻟﺘﺎﻟﻲ ﻓﺈﻥ ﺍﻟﻌﻤﻠﻴﺔ ﺑﺄﻛﻤﻠﻬﺎ ﻣﺆﺗﻤﺘﺔ ﻣﻦ‬
‫ﺍﻟﺒﺪﺍﻳﺔﺇﻟﻰ ﺍﻟﻨﻬﺎﻳﺔ‪ ،‬ﻣﻤﺎ ﻳﺠﻌﻞ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﻣﺜﻴﺮﺓ ﻟﻼﻫﺘﻤﺎﻡ‬
‫ﻟﺘﻄﺒﻴﻘﺎﺕﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻞ ﻭﺍﺳﻌﺔ ﺍﻟﻨﻄﺎﻕ )ﻋﺎﻟﻴﺔ ﺍﻹﻧﺘﺎﺟﻴﺔ( )‪et al, 1999‬‬
‫‪.(Martell‬‬
‫ﺗﻘﻨﻴﺎﺕﺍﻟﻜﺸﻒ‬
‫ﻟﺬﻟﻚﺗﻌﺘﻤﺪ ﺟﻤﻴﻊ ﺃﻧﻈﻤﺔ ‪ PCR‬ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﻋﻠﻰ ﺍﻟﻜﺸﻒ‬
‫ﻭﺍﻟﻘﻴﺎﺱﺍﻟﻜﻤﻲ ﻟﺒﺎﻋﺚ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﺃﺛﻨﺎء ﻋﻤﻠﻴﺔ ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢ ﻭﺍﻟﺰﻳﺎﺩﺓ‬
‫ﺍﻟﻤﻨﺘﺠﺔﺃﺛﻨﺎء ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ‪ .‬ﻫﻨﺎﻙ ﻣﺒﺪﺃﺍﻥ ﻋﺎﻣﺎﻥ ﻟﻠﻜﺸﻒ ﺍﻟﻜﻤﻲ ﻋﻦ‬
‫ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ‪:‬ﻋﻮﺍﻣﻞ ﺭﺑﻂ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﻣﺰﺩﻭﺟﺔ ﺍﻟﺠﺪﻳﻠﺔ )ﻣﺜﻞ ‪I‬‬
‫‪ (SYBR Green‬ﻭﺗﺤﻘﻴﻘﺎﺕ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ‪ .‬ﺑﺎﻟﻨﺴﺒﺔ ﻟﻬﺬﻩ ﺍﻟﻔﺉﺔ‬
‫ﻣﻘﺎﻳﺴﺔﻃﻘﻤﺎﻥ(‪ ،‬ﻭﺗﻬﺠﻴﻦ ﻣﺴﺒﺎﺭﻳﻦ )‪ ،(HybProbes‬ﻭﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕ‬
‫ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ)ﻣﻨﺎﺭﺍﺕ ﺟﺰﻳﺉﻴﺔ(‪ ،‬ﻭﺑﺎﺩﺉﺎﺕ ﺍﻟﻌﻘﺮﺏ )ﺑﺎﺩﺉﺎﺕ ﺍﻟﻌﻘﺮﺏ(‪.‬‬
‫ﻭﻓﻘﺎﻟﻮﻳﺘﻮﻳﺮ ﻭﺁﺧﺮﻭﻥ‪ ،(1997) .‬ﺳﻴﻜﻮﻥ ﻟﺘﻘﻨﻴﺎﺕ ﺍﻟﻜﺸﻒ ﺍﻟﻤﺨﺘﻠﻔﺔ‬
‫ﻫﺬﻩﺣﺴﺎﺳﻴﺔ ﻣﻜﺎﻓﺉﺔ‪ .‬ﻭﻣﻊ ﺫﻟﻚ‪ ،‬ﺗﺨﺘﻠﻒ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺎﺕ ﻓﻲ‬
‫ﺍﻟﺨﺼﻮﺻﻴﺔ)‪.(Bustin، 2000‬‬
‫‪ (1‬ﺃﺻﺒﺎﻍ ﺭﺑﻂ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﻣﺰﺩﻭﺟﺔ ﺍﻟﺠﺪﻳﻠﺔ‪ :‬ﻣﻘﺎﻳﺴﺔ‬
‫‪Lightcycler‬‬
‫ﻳﻤﻜﻦﺗﻘﺴﻴﻢ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﺎﺕ ﺍﻟﺘﻲ ﺗﺮﺗﺒﻂ ﺑﺎﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺰﺩﻭﺝ ﺇﻟﻰ‬
‫ﻓﺉﺘﻴﻦ‪:‬ﺍﻟﻌﻮﺍﻣﻞ ﺍﻟﻤﻘﺤﻤﺔ ﻣﺜﻞ ﺑﺮﻭﻣﻴﺪ ﺍﻹﻳﺜﻴﺪﻳﻮﻡ )‪et al، 1992‬‬
‫‪Ishiguro et al، 1995) YO-PRO-1 ،(Higuchi‬؛ ‪et al، 1992‬‬
‫‪(Tseng‬؛ ( ‪ SYBR Green I )Morrison et al، 1998( ،‬ﻭﻣﺠﻠﺪﺍﺕ‬
‫ﺍﻷﺧﺪﻭﺩﺍﻟﺼﻐﻴﺮﺓ ﻣﺜﻞ ‪and Embrey، 1990) Hoeschst 33258‬‬
‫‪Searle‬؛ ‪ .(Nielsen، 1991‬ﻳﺰﺩﺍﺩ ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﻋﻨﺪﻣﺎ‬
‫ﻳﺮﺗﺒﻄﻮﻥﺑﺎﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺰﺩﻭﺝ‪ .‬ﻻﺳﺘﺨﺪﺍﻣﻬﺎ ﻓﻲ ﺗﻔﺎﻋﻞ ‪ PCR‬ﻓﻲ‬
‫ﺍﻟﻮﻗﺖﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ‪ ،‬ﻳﺠﺐ ﺃﻥ ﺗﺴﺘﻮﻓﻲ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﻌﻮﺍﻣﻞ ﻣﺘﻄﻠﺒﻴﻦ‪ :‬ﺯﻳﺎﺩﺓ‬
‫ﺍﻟﺘﺄﻟﻖﻋﻨﺪ ﺍﻻﺭﺗﺒﺎﻁ ﺑﺎﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺰﺩﻭﺝ ﻭﻋﺪﻡ ﻣﻨﻊ ﺗﻔﺎﻋﻞ ‪PCR‬‬
‫‪.‬ﻳﻌﺪ ‪ ،SYBR Green I‬ﺍﻟﺬﻱ ﻟﻢ ﻳﺘﻢ ﺗﻌﺮﻳﻒ ﺁﻟﻴﺔ ﺭﺑﻄﻪ ﺑﺸﻜﻞ ﺟﻴﺪ‪،‬‬
‫ﻫﻮﺍﻟﻌﺎﻣﻞ ﺍﻷﻛﺜﺮ ﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻣﺎً‪ .‬ﻣﺰﺍﻳﺎﻫﺎ ﻫﻲ‬
‫‪4‬‬ ‫ﺍﻟﻘﺲ‪.‬ﺑﻴﻮﻝ‪ .‬ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‪.‬‬

‫ﺍﻟﻰ‬
‫‪'3‬‬ ‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬
‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬
‫‪'5‬‬

‫ﺏ‬

‫ﺿﺪ‬
‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬

‫‪:‬ﺍﻟﺘﻤﻬﻴﺪﻱ‬ ‫‪:‬ﺍﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ‬ ‫‪:‬ﺗﺤﻔﻴﺰ ﻓﻠﻮﺭﻭ ﻛﺮﻭﻡ‬

‫‪:‬ﺍﺳﺘﻬﺪﺍﻑ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺰﺩﻭﺝ ﺗﻘﻄﻌﺖ ﺑﻬﻢ ﺍﻟﺴﺒﻞ‬ ‫‪:‬ﻓﻠﻮﺭﻭ ﻛﺮﻭﻡ ﻏﻴﺮ ﻣﺤﻔﺰ ﻣﺠﺎﻧﻲ‬

‫ﺷﻜﻞ‪: 1‬ﺍﻷﺻﺒﺎﻍ ﺍﻟﻤﺮﺗﺒﻄﺔ ﺑﺎﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺰﺩﻭﺝ ﺍﻟﺬﻳﻦ ﺗﻘﻄﻌﺖ ﺑﻬﻢ ﺍﻟﺴﺒﻞ‪ :‬ﺍﺧﺘﺒﺎﺭ ‪).Lightcycler‬ﺍﻟﻰ( ﺃﺛﻨﺎء ﺗﻤﺴﺦ ﺍﻟﻄﺒﻴﻌﺔ‪ ،‬ﻳﻈُﻬﺮ ‪SYBR Green I‬‬
‫ﺍﻟﻤﺠﺎﻧﻲﺍﻟﻘﻠﻴﻞ ﻣﻦ ﺍﻟﺘﺄﻟﻖ‪) .‬ﺏ( ﻋﻨﺪ ﺩﺭﺟﺔ ﺣﺮﺍﺭﺓ ﺍﻻﻗﺘﺮﺍﻥ‪ ،‬ﺗﺮﺗﺒﻂ ﺑﻌﺾ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﺎﺕ ﺑﺤﺒﻞ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺰﺩﻭﺝ ﺍﻟﻨﺎﺷﺊ ﻣﻤﺎ ﻳﺆﺩﻱ ﺇﻟﻰ ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﻣﻀﺎﻥ ﻋﻨﺪ‬
‫ﺍﻹﺛﺎﺭﺓ‪).‬ﺿﺪ( ﺃﺛﻨﺎء ﻣﺮﺣﻠﺔ ﺍﻟﺒﻠﻤﺮﺓ‪ ،‬ﺗﺮﺗﺒﻂ ﺍﻟﻤﺰﻳﺪ ﻭﺍﻟﻤﺰﻳﺪ ﻣﻦ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﺎﺕ ﺑﺎﻟﺨﻴﻂ ﺍﻟﻨﺎﺷﺊ ﻭﻳﻤﻜﻦ ﻣﺮﺍﻗﺒﺔ ﺍﻟﺰﻳﺎﺩﺓ ﻓﻲ ﺍﻟﺘﺄﻟﻖ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﻔﻌﻠﻲ‪.‬‬

‫ﺳﻴﺘﻢﺗﻘﻠﻴﻞ ﺑﻠﻤﺮﺓ ﺍﻹﻧﺰﻳﻢ ﻗﻠﻴﻼ ًﻋﻨﺪ ﺩﺭﺟﺔ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﺓ ﺩﻭﻥ ﺍﻟﻤﺴﺘﻮﻯ‬
‫ﺍﻷﻣﺜﻞ‪.‬ﺑﺎﻟﻨﺴﺒﺔ ﻟﻸﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﺍﻟﻄﻮﻳﻠﺔ‪ ،‬ﺧﻄﻮﺓ ﺗﻬﺠﻴﻦ‪/‬ﺑﻠﻤﺮﺓ ﺃﻃﻮﻝ ﺃﻭ‬
‫ﺯﻳﺎﺩﺓﻓﻲ ﺗﺮﻛﻴﺰ ﺍﻟﻤﻨﻐﻨﻴﺰ‪+2‬ﺃﻭ ﻣﻠﻎ‪+2‬‬
‫ﻗﺪﻳﻜﻮﻥ ﺿﺮﻭﺭﻳﺎً ﻟﺘﺤﻘﻴﻖ ﺍﻻﺳﺘﻘﺮﺍﺭ ﻓﻲ ﺗﻬﺠﻴﻦ ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭ ﺣﺘﻰ ﻳﺼﻞ‬
‫ﺇﻟﻰﺗﺴﻠﺴﻠﻪ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ‪.‬‬
‫ﺍﻟﻤﺒﺎﺩﺉﺍﻟﻮﺍﺟﺐ ﺍﺣﺘﺮﺍﻣﻬﺎ ﻓﻲ ﺗﺼﻤﻴﻢ ﺍﻟﻤﺠﺴﺎﺕﻃﻘﻤﺎﻥ ﺗﻨﻄﺒﻖ‬
‫ﺃﻳﻀﺎًﻋﻠﻰ ﺍﻟﻤﺠﺴﺎﺕ ﺍﻟﺨﻄﻴﺔ ﺍﻷﺧﺮﻯ ﻭﺗﺘﻀﻤﻦ ﻛﻘﻮﺍﻋﺪ ﻋﺎﻣﺔ‪(1 :‬‬
‫ﻃﻮﻝ‪ 40-20‬ﻧﻴﻮﻛﻠﻴﻮﺗﻴﺪﺍﺕ‪ (2 ،‬ﻣﺤﺘﻮﻯ ‪ GC‬ﻳﺘﺮﺍﻭﺡ ﻣﻦ ‪(3 ،%60-40‬‬
‫ﻻﻳﻮﺟﺪ ﻧﻤﻂ ﺗﺴﻠﺴﻞ ﻣﺘﻜﺮﺭ‪ (4 ،‬ﻻ ﻳﻮﺟﺪ ﺗﺴﻠﺴﻞ ﻳﺴﻤﺢ ﺑﺎﻟﺘﻬﺠﻴﻦ ﺃﻭ‬
‫ﺗﺘﺪﺍﺧﻞﻣﻊ ﺍﻻﺷﻌﺎﻝ‪ A (5 ،‬ﺃﻭ ‪ C‬ﺃﻭ ‪ T‬ﻋﻨﺪ ﺍﻟﻨﻬﺎﻳﺔ ‪ '5‬ﻷﻥ ‪ G‬ﻳﻤﻨﻊ‬
‫ﻣﻀﺎﻥﺍﻟﻤﺮﺳﻞ ﺣﺘﻰ ﺑﻌﺪ ﺍﻻﻧﻘﺴﺎﻡ‪ ،‬ﻭ‪ Tm (6‬ﻣﻦ ‪ 5‬ﺇﻟﻰ ‪10‬ﺱ‪، 2002(.‬‬
‫‪ Mackay et al‬؛‪ )Bustin، 2000‬ﺃﻋﻠﻰ ﻣﻦ ﺍﻻﺷﻌﺎﻝ ﻟﻠﺘﺄﻛﺪ ﻣﻦ ﺃﻧﻬﺎ‬
‫ﺳﻮﻑﺗﺼﻠﺐ ﻗﺒﻞ ﺍﻻﺷﻌﺎﻝ ﻭﺗﻈﻞ ﺻﻠﺒﺔ ﺃﺛﻨﺎء ﺧﻄﻮﺓ ﺍﻟﺘﻠﺪﻳﻦ ﻭﺍﻟﺒﻠﻤﺮﺓ‬
‫ﺍﻟﻤﺪﻣﺠﺔ‪C‬‬
‫‪A(.‬ﺍﻟﺸﻜﻞ ‪ )2‬ﻧﻈﺮﺍً ﻷﻥ ﻧﺸﺎﻁ ﻧﻮﻛﻠﻴﺎﺯ ﺧﺎﺭﺟﻲ ‪ '5‬ﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﻃﻖ‬
‫ﺧﺎﺹﺑﺎﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺰﺩﻭﺝ‪ ،‬ﻓﺈﻥ ﺍﻟﻤﺠﺴﺎﺕ ﺍﻟﺤﺮﺓ ﻓﻲ ﺍﻟﻤﺤﻠﻮﻝ‬
‫ﺗﻈﻞﺳﻠﻴﻤﺔ ﻭﻻ ﻳﻨﺒﻌﺚ ﺃﻱ ﻣﻀﺎﻥ‪ .‬ﺃﺛﻨﺎء ﺧﻄﻮﺓ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ‪ ،‬ﻳﻌﻠﻖ‬
‫ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭﻭﺍﻟﺒﺎﺩﺉﺎﺕ ﺑﺎﻟﺘﺴﻠﺴﻞ ﺍﻟﺘﻜﻤﻴﻠﻲ ﺍﻟﺨﺎﺹ ﺑﻜﻞ ﻣﻨﻬﻤﺎ‪ .‬ﻓﻲ‬
‫ﺍﻟﺨﻄﻮﺓﺍﻟﺘﺎﻟﻴﺔ‪ ،‬ﻳﺒﺪﺃ ﺑﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﻃﻖ ﻓﻲ ﺍﺳﺘﻄﺎﻟﺔ ﺷﺮﻳﻂ ﺍﻟﺤﻤﺾ‬
‫ﺍﻟﻨﻮﻭﻱﺍﻟﺠﺪﻳﺪ ﻣﻦ ﺍﻟﺘﻤﻬﻴﺪﻱ ﺣﺘﻰ ﻳﻮﺍﺟﻪ ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭ ﺍﻟﻤﻬﺠﻦ ﻓﻲ ﻃﺮﻳﻘﻪ‬
‫ﻭﺍﻟﺬﻱﻳﺘﺤﺮﻙ ﻭﻳﺘﺤﻠﻞ ﺑﻨﺸﺎﻃﻪ ‪ 5‬ﻧﻮﻛﻠﻴﺎﺯ‪ .‬ﻳﺘﻢ ﺑﻌﺪ ﺫﻟﻚ ﺗﺤﺮﻳﺮ‬
‫ﺍﻟﻤﺮﺍﺳﻞﻣﻦ ﺑﻴﺉﺔ ﺍﻟﻘﺎﻣﻊ‪ ،‬ﻣﻤﺎ ﻳﺴﻤﺢ ﺑﺎﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﺍﻟﺬﻱ‬
‫ﻳﺰﻳﺪﻣﻊ ﻛﻞ ﺩﻭﺭﺓ ﺑﻤﺎ ﻳﺘﻨﺎﺳﺐ ﻣﻊ ﻣﻌﺪﻝ ﺍﻟﺘﺤﻠﻞ ﺍﻟﻤﺎﺉﻲ ﻟﻠﻤﺴﺒﺎﺭ ‪(.‬‬
‫‪ )Mackay et al، 2002‬ﺍﻟﺬﻱ ﻳﺒﺪﺩ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﻄﺎﻗﺔ ﻓﻲ ﺷﻜﻞ ﺣﺮﺍﺭﺓ ﺑﺪﻻ ً‬
‫ﻣﻦﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﻣﻀﺎﻥ (ﻧﻘﻞ ﻃﺎﻗﺔ ﺍﻟﺮﻧﻴﻦ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻱ) ‪FRET‬‬

‫ﻧﻈﺮﺍًﻷﻥ ﺑﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﻃﻖ ﺳﻮﻑ ﻳﺘﺤﻠﻞ ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭ ﻓﻘﻂ ﻋﻨﺪﻣﺎ ﻳﺘﻢ‬

‫ﺗﺘﻤﺘﻊﻣﺠﺴﺎﺕ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﺑﻤﻴﺰﺓ ﻋﻠﻰ ﻋﻮﺍﻣﻞ ﺭﺑﻂ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ‬
‫ﺫﺍﺕﺍﻟﺨﺼﻮﺻﻴﺔ ﺍﻟﻤﺘﺰﺍﻳﺪﺓ ﻭﻗﺪﺭﺓ ﻣﻀﺎﻋﻔﺔ ﺃﻓﻀﻞ‪ .‬ﺧﺼﻮﺻﻴﺔ‬
‫ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦﺑﻴﻦ ﻣﺴﺒﺎﺭ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﻭﺗﺴﻠﺴﻞ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ‬
‫ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑﺍﻟﺨﺎﺹ ﺑﻪ ﻳﻘﻠﻞ ﺑﺸﻜﻞ ﻛﺒﻴﺮ ﻣﻦ ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﻣﻀﺎﻥ ﻏﻴﺮ‬
‫ﻣﺤﺪﺩﺑﺴﺒﺐ ﻋﺪﻡ ﺍﻟﺘﻄﺎﺑﻖ ﺃﻭ ‪ dimers‬ﺍﻟﺘﻤﻬﻴﺪﻱ‪ .‬ﻳﻤﻜﻦ ﺇﻋﺪﺍﺩ‬
‫ﺗﻔﺎﻋﻼﺕﺍﻹﺭﺳﺎﻝ ﺍﻟﻤﺘﻌﺪﺩ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﻓﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻣﺎﺕ ﺑﺎﻋﺜﺔ ﻣﺘﻤﻴﺰﺓ‬
‫ﻣﺮﺗﺒﻄﺔﺑﻤﺴﺎﺑﻴﺮ ﻣﺨﺘﻠﻔﺔ ﻓﻲ ﻧﻔﺲ ﺗﻔﺎﻋﻞ ‪.PCR‬‬
‫ﺗﻬﺠﻴﻨﻪﺇﻟﻰ ﺗﺴﻠﺴﻠﻪ ﺍﻟﺘﻜﻤﻴﻠﻲ‪ ،‬ﻳﺠﺐ ﺗﻌﺪﻳﻞ ﻇﺮﻭﻑ ﺩﺭﺟﺔ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﺓ‬
‫ﻟﺨﻄﻮﺓﺍﻟﺒﻠﻤﺮﺓ ﻟﻠﺴﻤﺎﺡ ﻟﻠﻤﺴﺒﺎﺭ ﺑﺎﻟﺒﻘﺎء ﻣﻬﺠﻨﺎً ﺃﺛﻨﺎء ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺨﻄﻮﺓ‪.‬‬
‫ﺗﺘﻤﺘﻊﻏﺎﻟﺒﻴﺔ ﺍﻟﻤﺠﺴﺎﺕ ﺑﺪﺭﺟﺔ ﺣﺮﺍﺭﺓ ﺗﻔﻜﻚ )‪ (Tm‬ﺗﺒﻠﻎ ﺣﻮﺍﻟﻲ ‪70‬‬
‫ﺩﺭﺟﺔﻣﺉﻮﻳﺔ ﺃﻭ ﻣﻦ ‪ 5‬ﺇﻟﻰ ‪10‬ﺱﺃﻋﻠﻰ ﻣﻦ ﺍﻻﺷﻌﺎﻝ‪ .‬ﻭﻟﺬﻟﻚ ﻓﺈﻥ‬
‫ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ‪C‬ﻃﻘﻤﺎﻥﻳﺴﺘﺨﺪﻡ ﺧﻄﻮﺓ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ ﻭﺍﻟﺒﻠﻤﺮﺓ ﻣﺠﺘﻤﻌﺔ ﻋﻨﺪ‬
‫‪62-60‬ﺩﺭﺟﺔ ﻣﺉﻮﻳﺔ ﻟﻀﻤﺎﻥ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ ﻭﺍﺳﺘﻘﺮﺍﺭ ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭ ﺃﺛﻨﺎء‬
‫ﺍﻟﺘﻤﺪﻳﺪ‪.‬ﻭﻫﺬﺍ ﻳﺴﻤﺢ ﺃﻳﻀﺎً ﺑﺤﺪ ﺃﻗﺼﻰ ﻟﻨﺸﺎﻁ ﻧﻮﻛﻠﻴﺎﺯ ‪ 5‬ﻣﻦ‬
‫ﺑﻮﻟﻴﻤﻴﺮﻳﺰﻃﻖ ﻭﻟﻜﻦ ﻛﻔﺎءﺓ ﻧﺸﺎﻁ‬

‫‪/http://www.rbmc.qc.ca/reviews‬‬
‫‪5‬‬ ‫ﺍﻟﻘﺲ‪.‬ﺑﻴﻮﻝ‪ .‬ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‪.‬‬

‫ﺍﻟﻰ‬
‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬
‫ﺍﻟﻰ‬
‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬
‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬
‫‪'3‬‬

‫‪'5‬‬

‫ﺏ‬

‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬ ‫ﺿﺪ‬

‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬

‫‪'3‬‬

‫‪:‬ﻣﺴﺒﺎﺭ ﺗﺤﻠﻞ ﻣﻊ ﺍﻟﻘﺎﻣﻊ‬

‫‪'5‬‬
‫‪:‬ﺍﺳﺘﻬﺪﺍﻑ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺰﺩﻭﺝ ﺍﻟﺬﻳﻦ ﺗﻘﻄﻌﺖ ﺑﻬﻢ ﺍﻟﺴﺒﻞ‬ ‫‪:‬ﻣﺴﺒﺎﺭ ‪TaqMan‬‬
‫‪'3‬‬

‫‪:‬ﺍﻟﺘﻤﻬﻴﺪﻱ‬ ‫‪:‬ﺍﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ‬ ‫‪:‬ﻣﺴﺒﺎﺭ ﻣﺘﺤﻠﻞ ﻣﻊ ﻓﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ ﻣﺤﻔﺰ‬

‫ﺏ‬
‫ﺍﻟﻰ‬ ‫‪'5‬‬
‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬
‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬

‫‪'3‬‬

‫‪'5‬‬
‫‪'3‬‬
‫ﺏ‬
‫‪'5‬‬

‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬ ‫ﺿﺪ‬ ‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬

‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬

‫‪:‬ﺗﺤﻘﻴﻘﺎﺕ ﻣﻬﺠﻨﺔ ﻣﻊ ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﻣﻀﺎﻥ ﺃﺣﻤﺮ‬ ‫‪:‬ﺍﻟﺘﺤﻘﻴﻖ ﻣﻊ ﻓﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ ﺍﻟﻤﺎﻧﺤﺔ‬

‫‪:‬ﻣﺴﺒﺎﺭ ﻳﻨﺒﻌﺚ ﻣﻨﻪ ﻓﻠﻮﺭﻭ ﻛﺮﻭﻡ‬

‫ﺍﻟﺸﻜﻞ‪:2‬ﺍﻟﻰ‪:‬ﺗﺤﻘﻴﻘﺎﺕ ﺍﻟﺘﺤﻠﻞ ﺍﻟﻤﺎﺉﻲ‪ :‬ﻓﺤﺺ ﻃﻘﻤﺎﻥ)ﺍﻟﻰ( ﺃﺛﻨﺎء ﺧﻄﻮﺓ ﺗﻤﺴﺦ ﺍﻟﻄﺒﻴﻌﺔ‪ ،‬ﻳﻜﻮﻥ ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭ ﺣﺮﺍً ﻓﻲ ﺍﻟﻤﺤﻠﻮﻝ‪) .‬ﺏ( ﻋﻨﺪ ﺩﺭﺟﺔ ﺣﺮﺍﺭﺓ ﺍﻻﻗﺘﺮﺍﻥ‪،‬‬
‫ﻳﻬﺠﻦﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭ ﻭﺍﻟﺒﺎﺩﺉﺎﺕ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﺘﺴﻠﺴﻞ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ ﺍﻟﺨﺎﺹ ﺑﻜﻞ ﻣﻨﻬﻤﺎ‪ ،‬ﻛﻤﺎ ﻳﺴﻤﺢ ﺍﻟﻘﺮﺏ ﻣﻦ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ ﺑﺘﺜﺒﻴﻂ ﺍﻟﺘﺄﻟﻖ‪ .‬ﺗﺒﺪﺃ ﺍﻟﺒﻠﻤﺮﺓ‪) .‬ﺿﺪ( ﻳﻘﻮﻡ ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ‬
‫ﺑﺈﺯﺍﺣﺔﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭ ﻭﺗﺤﻠﻴﻠﻪ‪ .‬ﻳﺘﻢ ﺗﺤﺮﻳﺮ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ ﺍﻟﺒﺎﻋﺚ ﻣﻦ ﺑﻴﺉﺔ ﺍﻟﻜﺎﺗﻢ ﻣﻤﺎ ﻳﺴﻤﺢ ﺑﺎﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ‪.‬ﺏ‪:‬ﺗﻬﺠﻴﻦ ‪ 2‬ﺗﺤﻘﻴﻘﺎﺕ )ﺗﺤﻘﻴﻘﺎﺕ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ()ﺍﻟﻰ( ﺃﺛﻨﺎء‬
‫ﺧﻄﻮﺓﺗﻤﺴﺦ ﺍﻟﻄﺒﻴﻌﺔ‪ ،‬ﻳﻈﻞ ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭﺍﻥ ﻣﻨﻔﺼﻠﻴﻦ ﻭﻓﻲ ﺍﻟﻤﺤﻠﻮﻝ‪) .‬ﺏ( ﻋﻨﺪ ﺩﺭﺟﺔ ﺣﺮﺍﺭﺓ ﺍﻻﻗﺘﺮﺍﻥ‪ ،‬ﻳﺘﻢ ﺗﻬﺠﻴﻦ ﺍﻟﻤﺴﺎﺑﻴﺮ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﺘﺴﻠﺴﻞ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ ﺍﻟﺨﺎﺹ ﺑﻜﻞ‬
‫ﻣﻨﻬﺎ‪،‬ﻛﻤﺎ ﻳﺴﻤﺢ ﺍﻟﻘﺮﺏ ﻣﻦ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻣﺎﺕ ﺑﺎﻧﺒﻌﺎﺙ ﻣﻀﺎﻥ ﺃﺣﻤﺮ ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﻣﺒﺪﺃ ‪) .FRET‬ﺿﺪ( ﺗﻌﻮﺩ ﺍﻟﻤﺠﺴﺎﺕ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﺤﻞ ﻣﺠﺎﻧﺎً‪.‬‬

‫ﻭﺍﻟﺬﻱﻳﻨﺘﺞ ﺿﻮء ﻓﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﺃﺧﻀﺮ ﻋﻨﺪ ﺍﻹﺛﺎﺭﺓ (‪ )FITC‬ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭ ﺍﻷﻭﻝ‪،‬‬ ‫ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎﻃﻘﻤﺎﻥﻭﻣﻊ ﺫﻟﻚ‪ ،‬ﻓﻬﻲ ﺃﻗﻞ ﻛﻔﺎءﺓ ﻭﺃﻗﻞ ﻣﺮﻭﻧﺔ ﻣﻦ‬
‫ﺍﻟﻤﺤﻈﻮﺭﻋﻨﺪ ﻧﻬﺎﻳﺘﻪ ‪ '3‬ﻟﻤﻨﻊ ﺍﻣﺘﺪﺍﺩﻩ ﺃﺛﻨﺎء ﺧﻄﻮﺓ ﺍﻻﺳﺘﻄﺎﻟﺔ‪ ،‬ﻳﻨﻘﻞ‬ ‫ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺎﺕﺍﻷﺧﺮﻯ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﻔﻌﻠﻲ ﻻﻛﺘﺸﺎﻑ ﻃﻔﺮﺍﺕ ﻣﻌﻴﻨﺔ )‬
‫ﻋﻨﺪ‪ '3‬ﻓﻠﻮﺭﻭ ﻛﺮﻭﻡ ﻣﺘﺒﺮﻉ ‪ )Wittwer et al، 1997(.‬ﻭﻳﻌﺘﻤﺪ ﻋﻠﻰ‬ ‫‪Bustin، 2000‬؛ ‪.(Mackay et al، 2002‬‬
‫ﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻡﻣﺠﺴﻴﻦ ﺧﻄﻴﻴﻦ ﻣﻜﻤﻠﻴﻦ ﻟﻠﺘﺴﻠﺴﻞ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ ﻟﺘﻌﻈﻴﻢ‬
‫ﺧﺼﻮﺻﻴﺔﺍﻹﺷﺎﺭﺓ ‪HybProbes‬‬
‫‪ (3‬ﺗﻬﺠﻴﻦ ‪ 2‬ﺗﺤﻘﻴﻘﺎﺕ )ﺗﺤﻘﻴﻘﺎﺕ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ( ﺗﻌُﺮﻑ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﺃﻳﻀﺎً‬
‫ﺑﺎﺳﻢ‬

‫‪/http://www.rbmc.qc.ca/reviews‬‬
‫‪6‬‬
‫ﻳﺘﻢﻧﻘﻞ ﺟﻬﺎﺯ ﺍﻹﺭﺳﺎﻝ ﺑﻌﻴﺪﺍً ﻋﻦ ﺍﻟﻘﺎﻣﻊ ﺍﻟﺨﺎﺹ ﺑﻪ ﻭﺑﺎﻟﺘﺎﻟﻲ ﺍﺳﺘﻌﺎﺩﺓ‬
‫ﺍﻧﺒﻌﺎﺙﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﺍﻟﺬﻱ ﻳﻤﻜﻦ ﺍﻛﺘﺸﺎﻓﻪ ﺑﻴﻨﻤﺎ ﺗﻈﻞ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕ‬
‫ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔﺍﻷﺧﺮﻯ ﻓﻲ ﺑﻨﻴﺔ ﺩﺑﻮﺱ ﺍﻟﺸﻌﺮ )ﻭﺿﻊ ﻣﻐﻠﻖ(‪ .‬ﺇﺫﺍ ﻛﺎﻥ‬
‫ﺗﺴﻠﺴﻞﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ ﻻ ﻳﺘﻄﺎﺑﻖ ﺗﻤﺎﻣﺎً )ﻏﻴﺮ ﻣﺘﻄﺎﺑﻖ(‪،‬‬
‫ﻓﻠﻦﻳﺤﺪﺙ ﺗﻬﺠﻴﻦ ﻟﺘﺴﻠﺴﻞ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ‪ ،‬ﻭﺑﺎﻟﺘﺎﻟﻲ ﻻ ﻳﺤﺪﺙ ﺃﻱ‬
‫ﺍﻧﺒﻌﺎﺙﻓﻠﻮﺭﺳﻨﺖ‪ .‬ﻭﻳﺮﺟﻊ ﺫﻟﻚ ﺃﺳﺎﺳﺎً ﺇﻟﻰ ﺍﻟﺨﺼﺎﺉﺺ ﺍﻟﺪﻳﻨﺎﻣﻴﻜﻴﺔ‬
‫ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﻳﺔﻟﺒﻨﻴﺔ ﺍﻟﻌﻼﻣﺔ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ﺍﻟﺘﻲ ﺗﻔﻀﻞ ﺑﺸﻜﻞ ﺃﺳﺎﺳﻲ ﺗﻜﻮﻳﻦ‬
‫ﺩﺑﻮﺱﺍﻟﺸﻌﺮ ﺇﻻ ﻓﻲ ﺣﺎﻟﺔ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ ﺍﻟﻤﺜﺎﻟﻲ ﻟﻠﺘﺴﻠﺴﻼﺕ‬
‫)‪) (Bustin, 2000‬ﺍﻟﺸﻜﻞ ‪ .(3A‬ﺧﺼﻮﺻﻴﺔ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺗﺠﻌﻞ‬
‫ﻣﻦﺍﻟﻤﻤﻜﻦ ﺍﻛﺘﺸﺎﻑ ﺍﺧﺘﻼﻓﺎﺕ ﺍﻟﺘﺴﻠﺴﻞ ﻭﺻﻮﻻ ًﺇﻟﻰ ﺍﻟﻨﻮﻛﻠﻴﻮﺗﻴﺪﺍﺕ‪،‬‬
‫ﻭﺍﻟﺘﻲﻗﺪ ﻳﻜﻮﻥ ﻣﻦ ﺍﻟﺼﻌﺐ ﺃﺣﻴﺎﻧﺎً ﺗﺤﻘﻴﻘﻬﺎ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﺗﻘﻨﻴﺎﺕ‬
‫ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭﺍﻟﺨﻄﻲ )‪Giesendorf et al، 1998‬؛ ‪Marras et al، 1999‬‬
‫(‪ .‬ﻭﻟﺬﻟﻚ ﻓﻬﻲ ﺗﺸﻜﻞ ﺗﻘﻨﻴﺔ ﻓﻌﺎﻟﺔ ﻟﻠﻜﺸﻒ ﻭﺍﻟﻔﺤﺺ ﻓﻲ‬
‫ﺍﻟﻨﻮﻛﻠﻴﻮﺗﻴﺪﺍﺕ‬ ‫)ﺃﻋﺰﺏ‬ ‫ﺗﻌﺪﺩﺍﻷﺷﻜﺎﻝ‬ ‫ﺍﻟﺘﺎﺑﻊ‬ ‫ﺳﻠُﻢُّ‬
‫ﺗﻌﺪﺩﺍﻷﺷﻜﺎﻝ( )‪Tyagi et al، 1998‬؛ ‪and Malmberg، 2001‬‬
‫‪ .(Mhlanga‬ﺗﻢ ﺗﺼﻤﻴﻢ ﺍﻟﻤﺠﺴﺎﺕ ﻟﺘﺒﻘﻰ ﺳﻠﻴﻤﺔ ﺃﺛﻨﺎء ﺗﻔﺎﻋﻞ‬
‫ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢﻭﻳﺠﺐ ﺇﻋﺎﺩﺓ ﺗﻬﺠﻴﻨﻬﺎ ﻟﻠﻮﺻﻮﻝ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﻬﺪﻑ ﻓﻲ ﻛﻞ ﺩﻭﺭﺓ‬
‫ﻟﻘﻴﺎﺱﺍﻹﺷﺎﺭﺓ‪ ،‬ﻣﻤﺎ ﻳﻮﻓﺮ ﻣﻴﺰﺓ ﺃﺧﺮﻯ ﻋﻠﻰ ﺍﻟﻤﺠﺴﺎﺕ‪.‬ﻃﻘﻤﺎﻥ ﺗﺤﻠﻞ‬
‫ﻓﻲﻛﻞ ﺩﻭﺭﺓ‪.‬‬
‫ﺍﻟﻌﻴﺐﺍﻷﻛﺜﺮ ﺃﻫﻤﻴﺔ ﺍﻟﻤﺮﺗﺒﻂ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ﻫﻮ‬
‫ﺗﺼﻤﻴﻢﻣﺠﺴﺎﺕ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ‪ .‬ﻳﻌﺪ ﺍﻟﺘﺼﻤﻴﻢ ﺍﻷﻣﺜﻞ ﻟﻠﺠﺬﻉ ﻟﻠﻤﻨﺎﺭﺍﺕ‬
‫ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔﺃﻣﺮﺍً ﺑﺎﻟﻎ ﺍﻷﻫﻤﻴﺔ‪ .‬ﻣﻊ ﺍﻟﺘﺼﻤﻴﻢ ﻏﻴﺮ ﺍﻟﻤﻨﺎﺳﺐ‪ ،‬ﻳﻤﻜﻦ ﺃﻥ‬
‫ﻳﺘﺒﻨﻰﺍﻟﺠﺬﻉ ﺷﻜﻼ ًﻣﺨﺘﻠﻔﺎً ﻣﻦ ﺷﺄﻧﻪ ﺃﻥ ﻳﺤﺮﻙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ ﺍﻟﻤﻨﺒﻌﺚ‬
‫ﺑﻌﻴﺪﺍًﻋﻦ ﺍﻟﺒﻴﺉﺔ ﺍﻟﻤﺒﺎﺷﺮﺓ ﻟﻠﻘﺎﻣﻊ‪ ،‬ﻣﻤﺎ ﻳﺆﺩﻱ ﺇﻟﻰ ﻣﺠﻤﻮﻋﺔ ﻣﻦ‬
‫ﺍﻟﻤﺠﺴﺎﺕﺍﻟﻤﻜﺒﻮﺗﺔ ﺑﺸﻜﻞ ﺳﻴﺊ ﻭﺿﻮﺿﺎء ﺧﻠﻔﻴﺔ ﻛﺒﻴﺮﺓ‪ .‬ﻣﻦ ﻧﺎﺣﻴﺔ‬
‫ﺃﺧﺮﻯ‪،‬ﺇﺫﺍ ﻛﺎﻧﺖ ﻗﻮﻯ ﺗﻬﺠﻴﻦ ﺍﻟﺠﺬﻉ )ﺍﻟﺘﻲ ﺗﻌﺘﻤﺪ ﻋﻠﻰ ﻃﻮﻝ ﻭﺗﻜﻮﻳﻦ‬
‫ﺍﻟﺘﺴﻠﺴﻼﺕﺍﻟﺘﻜﻤﻴﻠﻴﺔ ﻟﻸﺫﺭﻉ( ﻛﺒﻴﺮﺓ ﺟﺪﺍً‪ ،‬ﻓﻴﻤﻜﻦ ﺃﻥ ﺗﺘﺪﺍﺧﻞ ﻣﻊ‬
‫ﺗﻬﺠﻴﻦﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﺘﺴﻠﺴﻞ ﺍﻟﺘﻜﻤﻴﻠﻲ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ ﻭﻓﻠﻮﺭﺓ‬
‫ﺍﻻﻧﺒﻌﺎﺙ ‪.‬ﻳﺠﺐ ﺇﻧﺸﺎء ﻣﻠﻒ ﺗﻌﺮﻳﻒ ﺩﻗﻴﻖ ﻟﻠﺘﺴﺨﻴﻦ ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﻱ ﻟﻜﻞ‬
‫ﻣﻨﺎﺭﺍﺕﺟﺰﻳﺉﻴﺔ ﻟﺘﺤﺪﻳﺪ ﺧﺼﺎﺉﺺ ﺍﻟﺘﻔﻜﻚ )ﺍﻟﺬﻭﺑﺎﻥ( ﻟﻸﺫﺭﻉ‪.‬‬
‫ﺍﻟﻌﺪﻳﺪﻣﻦ ﺍﻟﻤﺘﻐﻴﺮﺍﺕ ﻟﻬﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﻣﺜﻞ ﺑﺎﺩﺉﺎﺕ ‪) Sunrise‬ﺍﻵﻥ‬
‫ﺗﺤﺖﺍﻻﺳﻢ ﺍﻟﺘﺠﺎﺭﻱ ‪TMAmplifluor‬ﺗﻢ ﺍﻗﺘﺮﺍﺡ ﺑﺎﺩﺉﺎﺕ ﺩﺑﻮﺱ ﺍﻟﺸﻌﺮ‬
‫( )‪Nazarenko et al، 1997‬؛ ‪،(Myakishev et al، 2001‬‬
‫ﻭﺍﻟﺪﻭﺭﻳﺎﺕ)‪ (Kandimalla and Agrawal، 2000‬ﻭﺍﻟﺒﺎﺩﺉﺎﺕ‬
‫ﺍﻟﻌﻘﺮﺑﻴﺔ)‪ (Mhlanga and Malmberg، 2001‬ﻟﻠﻜﺸﻒ ﻋﻦ‬
‫ﺃﺣﻤﺎﺽﻧﻮﻭﻳﺔ ﻣﺤﺪﺩﺓ ﻓﻲ ﺍﻟﻤﺤﺎﻟﻴﻞ ﺍﻟﻤﺘﺠﺎﻧﺴﺔ‪.‬‬
‫‪ (5‬ﺍﻟﺘﻤﻬﻴﺪﻱ ﺍﻟﻌﻘﺮﺏ‪ :‬ﺃﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ ﺍﻟﺘﺄﻟﻖ ﺍﻟﺬﺍﺗﻲ‬
‫ﺗﻤﺜﻞﺑﺎﺩﺉﺎﺕ ﺍﻟﻌﻘﺮﺏ ﻣﺠﻤﻮﻋﺔ ﻣﺘﻨﻮﻋﺔ ﻣﻦ ﺗﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓ‬
‫ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ‪.‬ﻳﺘﻢ ﺩﻣﺞ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ ﻭﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭ )ﺟﺰء ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ( ﻓﻲ‬
‫ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥﺑﺸﻜﻞ ﻻ ﺭﺟﻌﺔ ﻓﻴﻪ ﺃﺛﻨﺎء ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢ ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ‬
‫‪/http://www.rbmc.qc.ca/reviews‬‬
‫ﺍﻟﻘﺲ‪.‬ﺑﻴﻮﻝ‪ .‬ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‪.‬‬
‫ﺑﻮﺍﺳﻄﺔﻣﺼﺪﺭ ﺍﻟﻀﻮء‪ .‬ﻃﻴﻒ ﺍﻧﺒﻌﺎﺛﻪ ﺃﻭﺳﻊ ﻣﻦ ﻃﻴﻒ ﺍﻻﻧﺒﻌﺎﺙ‬
‫ﺍﻟﺨﺎﺹﺑﺎﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ ﺍﻟﻤﺴﺘﻘﺒﻞ )ﺍﻷﺣﻤﺮ ‪ 640‬ﺃﻭ ﺍﻷﺣﻤﺮ ‪(705‬‬
‫ﺍﻟﻤﺘﺼﻞﺑﺎﻟﻨﻬﺎﻳﺔ ‪ '5‬ﻟﻠﻤﺴﺒﺎﺭ ﺍﻟﺜﺎﻧﻲ‪ .‬ﻓﻲ ﺍﻟﻤﺤﻠﻮﻝ‪ ،‬ﻳﻜﻮﻥ ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭﺍﻥ‬
‫ﺣﺮﻳﻦﻭﻣﻨﻔﺼﻠﻴﻦ‪ .‬ﻧﻈﺮﺍً ﻷﻥ ﻧﻘﻞ ﺍﻟﻄﺎﻗﺔ ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﻣﺒﺪﺃ ‪ FRET‬ﻳﻌﺘﻤﺪ‬
‫ﻋﻠﻰﺍﻟﻤﺴﺎﻓﺔ ﺑﻴﻦ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻣﻴﻦ‪ ،‬ﻓﺈﻧﻪ ﻳﻨﺘﺞ ﺑﻌﺪ ﺫﻟﻚ ﻓﻘﻂ ﺧﻠﻔﻴﺔ‬
‫ﻣﻦﺍﻟﺘﺄﻟﻖ ﺍﻷﺧﻀﺮ ﺍﻟﻤﻨﺒﻌﺚ ﻣﻦ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ ﺍﻟﻤﺎﻧﺢ‪ .‬ﺃﺛﻨﺎء ﺧﻄﻮﺓ‬
‫ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ‪،‬ﻳﺮﺗﺒﻂ ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭﺍﻥ ﺑﺎﻟﺘﺴﻠﺴﻞ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ ﻟﻜﻞ ﻣﻨﻬﻤﺎ‬
‫ﺍﻟﻤﻮﺟﻮﺩﺿﻤﻦ ‪ 10‬ﻧﻴﻮﻛﻠﻴﻮﺗﻴﺪﺍﺕ )‪ (Mackay et al، 2002‬ﻓﻲ‬
‫ﺗﺮﺗﻴﺐﻣﻦ ﺍﻟﺮﺃﺱ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﺬﻳﻞ‪ .‬ﻳﺴﻤﺢ ﺍﻟﻘﺮﺏ ﻣﻦ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻣﻴﻦ ﺑﻨﻘﻞ‬
‫ﻃﺎﻗﺔﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻴﻦ ﺍﻷﺧﻀﺮ ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﻣﺒﺪﺃ ‪ FRET‬ﺇﻟﻰ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ‬
‫ﺍﻟﻤﺴﺘﻘﺒﻞﺍﻷﺣﻤﺮ ﻭﻳﺴﺒﺐ ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ‪ .‬ﺃﺛﻨﺎء ﺧﻄﻮﺓ ﺍﻟﺒﻠﻤﺮﺓ‪،‬‬
‫ﻳﻌﻮﺩﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭﺍﻥ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﺤﻞ ﺑﺸﻜﻞ ﻣﺴﺘﻘﻞ‪ ،‬ﻣﻤﺎ ﻳﻤﻨﻊ ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ‬
‫ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖﺍﻷﺣﻤﺮ )ﺍﻟﺸﻜﻞ ‪ .(2B‬ﺗﺘﻨﺎﺳﺐ ﺍﻟﺰﻳﺎﺩﺓ ﻓﻲ ﺍﻟﺘﺄﻟﻖ ﺍﻷﺣﻤﺮ‬
‫ﻣﻊﻛﻤﻴﺔ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺼُﻨﻊّ ﺃﺛﻨﺎء ﺗﻔﺎﻋﻞ ‪ PCR‬ﻭﺗﺒﺪﺃ ﻓﻲ‬
‫ﺍﻻﻧﺨﻔﺎﺽﻋﻨﺪﻣﺎ ﺗﺼﺒﺢ ﻛﻤﻴﺔ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﺍﻟﻤﻨﺘﺠﺔ ﻛﺒﻴﺮﺓ ﺑﻤﺎ ﻳﻜﻔﻲ‬
‫ﻟﺘﺴﺒﺐﻣﻨﺎﻓﺴﺔ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﻀﺨﻢ ﻣﻊ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ ﺍﻟﻤﺘﺰﺍﻣﻦ‬
‫ﻟﻠﻤﺴﺒﺎﺭﻳﻦﻋﻠﻰ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ ) ﻣﺎﻛﺎﻱ ﻭﺁﺧﺮﻭﻥ‪(2002 ،‬‬
‫ﻛﺒﻴﺮ‬ ‫‪.‬‬
‫ﻭﺑﺎﻟﺘﺎﻟﻲﻓﺈﻥ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺗﺘﻤﺘﻊ ﺑﺨﺼﻮﺻﻴﺔ ﻛﺒﻴﺮﺓ ﻭﺗﺴﻤﺢ ﺃﻳﻀﺎً‬
‫ﺑﻤﺮﻭﻧﺔﻛﺒﻴﺮﺓ ﻓﻲ ﺗﺼﻤﻴﻢ ﺍﻟﻤﺠﺴﺎﺕ‪ .‬ﺑﺎﻹﺿﺎﻓﺔ ﺇﻟﻰ ﺫﻟﻚ‪ ،‬ﻧﻈﺮﺍً ﻟﻌﺪﻡ‬
‫ﺗﺤﻠﻞﺍﻟﻤﺠﺴﺎﺕ ﻣﺎﺉﻴﺎً‪ ،‬ﻳﺘﻢ ﺇﻋﺎﺩﺓ ﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻣﻬﺎ ﻓﻲ ﻛﻞ ﺩﻭﺭﺓ )‪، 2000‬‬
‫‪ .(Bustin‬ﺑﺎﻹﺿﺎﻓﺔ ﺇﻟﻰ ﺣﻘﻴﻘﺔ ﺃﻥ ﺍﻟﺘﺴﻠﺴﻞ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ ﻳﺠﺐ ﺃﻥ‬
‫ﻳﻜﻮﻥﻣﻮﺟﻮﺩﺍً ﻓﻲ ﻧﻬﺎﻳﺔ ‪ '3‬ﻣﻦ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ ﻭﺃﻥ ‪ Tm‬ﻟﻠﻤﺴﺒﺎﺭﻳﻦ ﻳﺠﺐ‬
‫ﺃﻥﻳﻜﻮﻧﺎ ﻣﺘﺸﺎﺑﻬﻴﻦ‪ ،‬ﻓﺈﻥ ﺍﻟﻤﺒﺎﺩﺉ ﺍﻟﻌﺎﻣﺔ ﻓﻲ ﺗﺼﻤﻴﻢ ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭﻃﻘﻤﺎﻥ‬
‫ﺗﻨﻄﺒﻖﻋﻠﻰ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ‪.‬‬
‫‪ (4‬ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ )ﻣﺴﺒﺎﺭ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ ﺩﺑﻮﺱ ﺍﻟﺸﻌﺮ‪ :‬ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕ‬
‫ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ(‬
‫ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ﻫﻲ ﻣﺴﺒﺎﺭ ﺗﻬﺠﻴﻦ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﻋﻠﻰ ﺷﻜﻞ‬
‫ﺩﺑﻮﺱﺍﻟﺸﻌﺮ‪ .‬ﺟﺰء ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭ ﺍﻟﺬﻱ ﻳﺸﻜﻞ ﺍﻟﺤﻠﻘﺔ ﻣﻜﻤﻞ ﻟﺘﺴﻠﺴﻞ‬
‫ﺍﻟﺤﻤﺾﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ‪ .‬ﻳﺘﻜﻮﻥ ﺻﻨﺪﻭﻕ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ﻣﻦ‬
‫ﺫﺭﺍﻋﻴﻦﺑﺘﺴﻠﺴﻼﺕ ﺗﻜﻤﻴﻠﻴﺔ )‪ .(Tyagi and Kramer، 1996‬ﻳﺘﻢ‬
‫ﺗﻮﺻﻴﻞﺑﺎﻋﺚ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ )‪ (FAM، TAMRA، TET، ROX‬ﺑﻨﻬﺎﻳﺔ ﺃﺣﺪ‬
‫ﺍﻷﺫﺭﻉﻭﺍﻟﻘﺎﻣﻊ )ﺍﻟﻤﺨﻤﺪ( )‪-(dimethylamino-phenylazo-'4)-4‬‬
‫ﺍﻟﺒﻨﺰﻳﻦ‪ (DABCYL:‬ﻣﺘﺼﻞ ﺑﻨﻬﺎﻳﺔ ﺍﻟﺬﺭﺍﻉ ﺍﻷﺧﺮﻯ‪ .‬ﺍﻟﻘﺎﻣﻊ ﻋﺒﺎﺭﺓ ﻋﻦ‬
‫ﻛﺮﻭﻣﻮﻓﻮﺭﻏﻴﺮ ﻓﻠﻮﺭﻱ ﻳﻌﻤﻞ ﻋﻠﻰ ﺗﺒﺪﻳﺪ ﻃﺎﻗﺔ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ ﺍﻟﺒﺎﻋﺚ ﺇﻟﻰ‬
‫ﺣﺮﺍﺭﺓﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﻣﺒﺪﺃ ‪ .FRET‬ﺗﻌﺘﻤﺪ ﺍﻟﻤﺠﺴﺎﺕ ﺍﻟﺤﺮﺓ ﺑﻨﻴﺔ ﺩﺑﻮﺱ‬
‫ﺍﻟﺸﻌﺮﻓﻲ ﺍﻟﻤﺤﻠﻮﻝ ﻭﻳﺮﺑﻂ ﺍﻟﺠﺬﻉ ﺍﻷﺫﺭﻉ ﻣﻌﺎً ﻣﻦ ﺃﺟﻞ ﺍﻟﻘﻤﻊ ﺍﻟﻔﻌﺎﻝ‬
‫ﻻﻧﺒﻌﺎﺙﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ‪ .‬ﺃﺛﻨﺎء ﺧﻄﻮﺓ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ‪ ،‬ﻋﻨﺪﻣﺎ ﻳﻮﺍﺟﻪ ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭ‬
‫ﺗﺴﻠﺴﻼًﻣﻜﻤﻼ ًﻟﻪ‪ ،‬ﻓﺈﻧﻪ ﻳﺘﺨﺬ ﺷﻜﻼ ًﻋﺎﺑﺮﺍً ﻳﺠﺒﺮ ﺍﻟﺠﺬﻉ ﻋﻠﻰ ﺍﻻﻧﻔﺼﺎﻝ‪،‬‬
‫ﻭﺑﺎﻟﺘﺎﻟﻲﺗﺤﺮﻳﺮ ﺍﻟﺬﺭﺍﻋﻴﻦ‪ .‬ﻳﻘﻮﻡ ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭ ﺑﻌﺪ ﺫﻟﻚ ﺑﺘﻬﺠﻴﻨﻪ ﺑﺸﻜﻞ‬
‫ﺗﻔﻀﻴﻠﻲﻟﻠﺘﺴﻠﺴﻞ ﺍﻟﺘﻜﻤﻴﻠﻲ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ ﻋﻠﻰ ﺍﻟﻤﺼﻔﻮﻓﺔ‪ .‬ﻓﻲ ﻫﺬﺍ‬
‫ﺍﻟﺘﺸﻜﻞ‪،‬ﻓﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ‬
‫‪7‬‬ ‫ﺍﻟﻘﺲ‪.‬ﺑﻴﻮﻝ‪ .‬ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‪.‬‬

‫ﺍﻟﻰ‬

‫ﺍﻟﻰ‬
‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬
‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬
‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬

‫ﺏ‬
‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬ ‫‪'5‬‬
‫‪'3‬‬ ‫ﺿﺪ‬ ‫‪'3‬‬
‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬

‫‪:‬ﺍﺳﺘﻬﺪﺍﻑ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺰﺩﻭﺝ ﺍﻟﺬﻳﻦ ﺗﻘﻄﻌﺖ ﺑﻬﻢ ﺍﻟﺴﺒﻞ‬ ‫‪:‬ﺍﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ‬ ‫‪:‬ﺍﻟﺘﻤﻬﻴﺪﻱ‬ ‫‪:‬ﻣﻨﺎﺭﺓ ﺟﺰﻳﺉﻴﺔ‬

‫‪:‬ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﻓﻠﻮﺭﻭ ﻛﺮﻭﻡ‬ ‫‪:‬ﺍﻟﻤﺜﺒﻂ‬

‫ﺏ‬
‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬ ‫‪'5‬‬
‫‪'3‬‬ ‫ﺍﻟﻰ‬ ‫‪'5‬‬ ‫‪'3‬‬

‫‪'3‬‬
‫‪'5‬‬

‫ﺏ‬
‫‪'3‬‬ ‫ﺿﺪ‬ ‫‪'3‬‬
‫‪'5‬‬ ‫‪'5‬‬ ‫‪'5‬‬
‫‪'5‬‬

‫ﺩ‬
‫‪'5‬‬ ‫ﻩ‬ ‫‪'5‬‬

‫‪'3‬‬ ‫‪'3‬‬

‫‪:‬ﺍﻟﺘﻤﻬﻴﺪﻱ‬ ‫‪:‬ﻣﺎﻧﻊ )‪(HEG‬‬ ‫‪:‬ﺍﻟﻌﻘﺮﺏ ﺍﻟﺘﻤﻬﻴﺪﻱ ‪ /‬ﺍﻟﺘﺤﻘﻴﻖ‬

‫ﺍﻟﺸﻜﻞ‪:3‬ﺍﻟﻰ‪:‬ﻣﻨﺎﺭﺍﺕ ﺟﺰﻳﺉﻴﺔ‪) .‬ﺍﻟﻰ( ﺃﺛﻨﺎء ﺧﻄﻮﺓ ﺗﻤﺴﺦ ﺍﻟﻄﺒﻴﻌﺔ‪ ،‬ﺗﻜﻮﻥ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ﻓﻲ ﺷﻜﻞ ﻣﺮﻳﺢ ﻭﺣﺮﺓ ﻓﻲ ﺍﻟﻤﺤﻠﻮﻝ ﻭﻟﻜﻦ ﻗﺮﺏ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻣﺎﺕ ﻳﺴﻤﺢ ﺑﺘﺜﺒﻴﻂ‬
‫ﺍﻟﺘﺄﻟﻖ‪).‬ﺏ( ﻋﻨﺪﻣﺎ ﻳﻬﺠﻦ ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭ ﺇﻟﻰ ﺗﺴﻠﺴﻠﻪ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ‪ ،‬ﻳﻜﻮﻥ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ ﺍﻟﻤﻨﺒﻌﺚ ﺑﻌﻴﺪﺍً ﺑﺪﺭﺟﺔ ﻛﺎﻓﻴﺔ ﻋﻦ ﺍﻟﻘﺎﻣﻊ ﻟﻠﺴﻤﺎﺡ ﺑﺎﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺓ‪) .‬ﺿﺪ( ﻓﻲ ﻣﺮﺣﻠﺔ ﺍﻟﺒﻠﻤﺮﺓ‪،‬‬
‫ﺗﻌﻮﺩﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﻤﺤﻠﻮﻝ ﻋﻠﻰ ﺷﻜﻞ ﺩﺑﻮﺱ ﺍﻟﺸﻌﺮ‪.‬ﺏ‪:‬ﺍﻟﺘﻤﻬﻴﺪﻱ ﺍﻟﻌﻘﺮﺏ‪) .‬ﺍﻟﻰ( ﺃﺛﻨﺎء ﺧﻄﻮﺓ ﺗﻤﺴﺦ ﺍﻟﻄﺒﻴﻌﺔ‪ ،‬ﺗﻜﻮﻥ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ﻓﻲ ﺷﻜﻞ ﻣﺮﻳﺢ ﻭﺣﺮﺓ ﻓﻲ‬
‫ﺍﻟﻤﺤﻠﻮﻝﻭﻟﻜﻦ ﻗﺮﺏ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻣﺎﺕ ﻳﺴﻤﺢ ﺑﺘﺜﺒﻴﻂ ﺍﻟﺘﺄﻟﻖ‪) .‬ﺏ( ﻳﺮﺗﺒﻂ ﺍﻟﺘﻤﻬﻴﺪﻱ ﺍﻟﻌﻘﺮﺏ ﺑﺎﻟﺘﺴﻠﺴﻞ ﺍﻟﺘﻜﻤﻴﻠﻲ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ‪) .‬ﺿﺪ( ﺑﻠﻤﺮﺓ ﺍﻟﺤﺒﻼ ﺍﻟﺘﻜﻤﻴﻠﻲ‪) .‬ﺩ( ﺗﻤﺴﺦ ﺧﻴﻮﻁ‬
‫ﺍﻟﺤﻤﺾﺍﻟﻨﻮﻭﻱ‪) .‬ﻩ( ﺗﻬﺠﻴﻦ ﺍﻟﺘﺴﻠﺴﻞ ﺍﻟﺘﻜﻤﻴﻠﻲ ﻟﺠﺰء ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ﺇﻟﻰ ﺗﺴﻠﺴﻠﻬﺎ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ ﻣﻤﺎ ﻳﺴﻤﺢ ﺑﺎﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ‪.‬‬

‫ﺃﺛﻨﺎءﺗﻔﺎﻋﻞ ‪ .PCR‬ﻟﺬﻟﻚ ﻳﻘﻊ ‪ HEG‬ﺑﻌﺪ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ ﺍﻟﻘﺎﻣﻊ ﻭﻳﺘﺒﻌﻪ‬ ‫ﺗﻔﺎﻋﻞﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ‪ .‬ﺇﻥ ﺗﺼﻤﻴﻢ ﻣﺴﺒﺎﺭ‪/‬ﻣﺴﺒﺎﺭ ﺍﻟﻌﻘﺮﺏ‬
‫ﻣﻨﻄﻘﺔﺗﻤﻬﻴﺪﻳﺔ‪ .‬ﻳﻤﻜﻦ ﺃﻥ ﻳﻜﻮﻥ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻭﻛﺮﻭﻡ ﺍﻟﻤﻨﺒﻌﺚ ﺍﻟﺬﻱ ﻳﺤﻤﻞ ‪5‬‬ ‫ﻳﺸﺒﻪﻋﻤﻠﻴﺎ ﺗﺼﻤﻴﻢ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ‪ .‬ﺗﻌﺪ ﺇﺿﺎﻓﺔ ﺟﺰﻱء‬
‫ﺑﻮﺻﺎﺕﻣﻦ ﻣﻨﻄﻘﺔ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ‪ FAM‬ﺃﻭ ‪ ROX‬ﻭﻳﻜﻮﻥ ﺍﻟﻜﺎﺗﻢ‬ ‫ﻫﻴﻜﺴﻴﺜﻴﻠﻴﻦﺟﻼﻳﻜﻮﻝ )‪ ،(HEG‬ﻭﺍﻟﺬﻱ ﻳﺴﻤﻰ ﺃﻳﻀﺎً ﺑﺎﻟﻤﺎﻧﻊ‪ ،‬ﺿﺮﻭﺭﻳﺎً‬
‫ﻋﺎﺩﺓ ًﺃﺣﻤﺮ ﺍﻟﻤﻴﺜﻴﻞ‪ .‬ﺗﺒﺪﺃ ﺍﻟﻤﻨﻄﻘﺔ‬ ‫ﻟﻤﻨﻊﺗﻜﺮﺍﺭ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﺑﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ‪.‬‬

‫‪/http://www.rbmc.qc.ca/reviews‬‬
‫‪8‬‬
‫ﺍﻟﻨﺴﺦﻓﻲ ﺍﻟﻤﺨﺘﺒﺮ)ﻟﻴﻮ ﻭﺁﺧﺮﻭﻥ‪.(2002 ،‬‬
‫ﻳﺜﺒﺖ‪ PCR‬ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﺃﻳﻀﺎً ﺃﻧﻪ ﺃﺩﺍﺓ ﻗﻮﻳﺔ ﻟﺘﺤﻠﻴﻞ ﺍﻟﻄﻔﺮﺍﺕ‬
‫ﻣﺜﻞ‪ SNPs‬ﻭﺩﺭﺍﺳﺎﺕ ﺍﻟﺘﻨﻤﻴﻂ ﺍﻟﺠﻴﻨﻲ ﻭﺍﺳﻌﺔ ﺍﻟﻨﻄﺎﻕ ﻣﺜﻞ ﺟﻴﻨﺎﺕ‬
‫ﻣﺴﺘﻘﺒﻼﺕﻫﺮﻣﻮﻥ ﺍﻻﺳﺘﺮﻭﺟﻴﻦ )‪.(Täpp et al، 2000‬‬
‫ﺍﻟﺸﻌﺮﻋﻠﻰ ﺗﻐﻴﻴﺮ ﺍﻟﺘﺸﻜﻞ ﻭﺑﺎﻟﺘﺎﻟﻲ ﺍﻟﺴﻤﺎﺡ ﺑﺎﻧﺒﻌﺎﺙ ﻣﻀﺎﻥ )‪، 1999‬‬
‫ﻋﻠﻰﻧﺤﻮ ﻣﺘﺰﺍﻳﺪ‪ ،‬ﻳﺘﻢ ﺗﺼﻤﻴﻢ ﺍﻻﺧﺘﺒﺎﺭﺍﺕ ﺍﻟﺘﻲ ﺗﺴﺘﺨﺪﻡ ﺗﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ‬
‫ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ﻟﻠﻜﺸﻒ ﺍﻟﺴﺮﻳﻊ ﻋﻦ ﻣﺴﺒﺒﺎﺕ ﺍﻷﻣﺮﺍﺽ ﺍﻟﻔﻴﺮﻭﺳﻴﺔ‬
‫ﻭﺍﻟﺒﻜﺘﻴﺮﻳﺔﻭﺍﻟﻄﻔﻴﻠﻴﺔ ﻭﺗﺤﺪﻳﺪ ﻛﻤﻴﺘﻬﺎ‪ .‬ﺍﻗﺘﺮﺡ (‪Vet et al )1999‬‬
‫ﺑﺎﻟﻔﻌﻞﻧﻈﺎﻣﺎً ﻣﺘﻌﺪﺩ ﺍﻹﺭﺳﺎﻝ ﻳﺴﻤﺢ ﺑﺎﻟﻜﺸﻒ ﺍﻟﻤﺘﺰﺍﻣﻦ ﻭﺍﻟﺘﻘﺪﻳﺮ‬
‫ﺍﻟﻜﻤﻲﻟﻔﻴﺮﻭﺳﺎﺕ ﻧﻘﺺ ﺍﻟﻤﻨﺎﻋﺔ ﺍﻟﺒﺸﺮﻳﺔ ‪ 1-‬ﻭﻓﻴﺮﻭﺱ ﻧﻘﺺ ﺍﻟﻤﻨﺎﻋﺔ‬
‫ﺍﻟﺒﺸﺮﻳﺔ‪ 2-‬ﻭﺍﻟﻔﻴﺮﻭﺳﺎﺕ ﺍﻟﻠﻴﻤﻔﺎﻭﻳﺔ ﺍﻟﺘﺎﺉﻴﺔ ﺍﻟﺒﺸﺮﻳﺔ ﻣﻦ ﺍﻟﻨﻮﻉ ﺍﻷﻭﻝ‬
‫ﻭﺍﻟﻨﻮﻉﺍﻟﺜﺎﻧﻲ ﻣﻊ ﻋﺘﺒﺔ ﺍﻛﺘﺸﺎﻑ ﺗﺒﻠﻎ ‪ 10‬ﻧﺴﺦ ﺟﻴﻨﻮﻡ ﻭﺑﻮﺩﺍﺭ )‪.(1999‬‬
‫‪ (1999‬ﻟﻠﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﺍﻟﻔﻴﺮﻭﺳﺎﺕ ﺍﻟﻐﺪﻳﺔ‪ .‬ﻛﻤﺎ ﺗﻢ ﺗﻄﻮﻳﺮ ﺍﺧﺘﺒﺎﺭﺍﺕ‬
‫ﺍﻟﻜﺸﻒﻝﺍﻟﺴﺎﻟﻤﻮﻧﻴﻼﻣﻊ ﺣﺴﺎﺳﻴﺔ ‪ CFU 2‬ﻟﻜﻞ ﺗﻔﺎﻋﻞ ‪ PCR‬ﻓﻲ‬
‫ﺍﻟﻮﻗﺖﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ )‪ (Chen et al، 2000‬ﻭ ‪ CFU / ml 1‬ﺑﻌﺪ ‪6‬‬
‫ﺳﺎﻋﺎﺕﻣﻦ ﺍﻟﺘﺨﺼﻴﺐ ﻟـﺍﻹﺷﺮﻳﻜﻴﺔ ﺍﻟﻘﻮﻟﻮﻧﻴﺔﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ‬
‫ﻟﻔﺤﺺﺍﻟﻄﻔﻴﻠﻴﺎﺕ ‪ PCR‬ﻓﻲ ﺍﻟﻄﻔﻴﻠﻴﺎﺕ‪ ،‬ﺗﻢ ﺗﻄﻮﻳﺮ ﺍﺧﺘﺒﺎﺭ ‪al, 2001(.‬‬
‫‪ )Fortin et‬ﻣﻦ ﻋﻴﻨﺎﺕ ﺍﻟﺤﻠﻴﺐ ﺍﻟﺨﺎﻡ ﻭﻋﺼﻴﺮ ﺍﻟﺘﻔﺎﺡ ‪O157:H7‬‬
‫ﺍﻟﺘﻮﻛﺴﻮﺑﻼﺯﻣﺎ)ﻟﻴﻦ ﻭﺁﺧﺮﻭﻥ‪ .(2000 ،‬ﺗﻌﻤﻞ ﺍﻟﻌﺪﻳﺪ ﻣﻦ ﺍﻟﻤﺨﺘﺒﺮﺍﺕ‬
‫ﺣﺎﻟﻴﺎًﻋﻠﻰ ﺗﻄﻮﻳﺮ ﺍﻟﻌﺪﻳﺪ ﻣﻦ ﺍﻻﺧﺘﺒﺎﺭﺍﺕ ﺍﻟﺘﺸﺨﻴﺼﻴﺔ ﺍﻷﺧﺮﻯ‬
‫ﻟﻤﺴﺒﺒﺎﺕﺍﻷﻣﺮﺍﺽ ﺍﻟﻤﺨﺘﻠﻔﺔ‪.‬‬
‫ﺗﻘﻠﻴﺪﻳﺎ‪،‬ﺗﻢ ﺇﺟﺮﺍء ﺗﺤﻠﻴﻞ ﺭﻗﻢ ﻧﺴﺨﺔ ﺍﻟﺒﻼﺯﻣﻴﺪ ﻟﺘﻘﻴﻴﻢ ﺍﻻﺳﺘﻘﺮﺍﺭ‬
‫ﺍﻟﺠﻴﻨﻲﻟﻤﺠﻤﻮﻋﺎﺕ ﺍﻟﺨﻼﻳﺎ ﻋﻦ ﻃﺮﻳﻖ ﺍﻟﻨﺸﺎﻑ ﺍﻟﺠﻨﻮﺑﻲ‪ .‬ﻳﺘﻴﺢ ﺗﻔﺎﻋﻞ‬
‫ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﺇﻣﻜﺎﻧﻴﺔ ﺇﺟﺮﺍء ﻫﺬﻩ‬
‫ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻼﺕﺑﺸﻜﻞ ﺃﺳﺮﻉ ﻭﺃﻛﺜﺮ ﺩﻗﺔ‪ .‬ﻭﻳﻤﻜﻦ ﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻣﻪ ﺃﻳﻀﺎً ﻓﻲ ﺗﻘﻴﻴﻢ‬
‫ﻛﻤﻴﺔﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﺼﺒﻐﻲ ﺍﻟﺒﻜﺘﻴﺮﻱ ﺃﻭ ﺍﻟﺜﺪﻳﻴﺎﺕ ﺍﻟﻤﻠﻮﺙ ﺃﻭ‬
‫ﺍﻟﻤﺘﺒﻘﻲﻓﻲ ﺇﻧﺘﺎﺝ ﺍﻟﺒﺮﻭﺗﻴﻨﺎﺕ ﺍﻟﻤﺆﺗﻠﻔﺔ‪.‬‬
‫ﻳﻌﺪﺗﺤﻠﻴﻞ ﺍﻟﺘﻮﺯﻳﻊ ﺍﻟﺤﻴﻮﻱ ﻟﻠﻨﺎﻗﻞ ﻋﻨﺼﺮﺍً ﻣﻬﻤﺎً ﻓﻲ ﺗﻘﻴﻴﻢ ﻓﻌﺎﻟﻴﺔ‬
‫ﺑﺮﻭﺗﻮﻛﻮﻻﺕﺍﻟﻌﻼﺝ ﺍﻟﺠﻴﻨﻲ‪ .‬ﻳﻌﻤﻞ ﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﻓﻲ‬
‫ﺍﻟﻮﻗﺖﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﻋﻠﻰ ﺗﺒﺴﻴﻂ ﺍﻟﺪﺭﺍﺳﺎﺕ ﺍﻟﺘﻲ ﺗﻘﻴﻢ ﻭﺟﻮﺩ‪/‬ﻏﻴﺎﺏ‬
‫ﺍﻟﺤﻤﺾﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ ﺃﻭ ﺍﻟﺮﻧﺎ ﺍﻟﻤﺮﺳﺎﻝ ﻓﻲ ﺍﻷﻧﺴﺠﺔ ﺍﻟﻤﺨﺘﻠﻔﺔ‬
‫ﻭﻳﺠﻌﻞﻣﻦ ﺍﻟﻤﻤﻜﻦ ﺗﺤﺪﻳﺪ ﻇﺮﻭﻑ ﺍﻟﺘﻮﺍﺯﻥ ﻟﻠﺮﻧﺎ ﺍﻟﻤﺮﺳﺎﻝ ﺍﻟﻤﻌﺒﺮ ﻋﻨﻪ )‬
‫ﺍﻟﺤﺎﻟﺔﺍﻟﻤﺴﺘﻘﺮﺓ ﺍﻟﻤﻌﺒﺮ ﻋﻨﻬﺎ ﻓﻲ ﺍﻟﺮﻧﺎ ﺍﻟﻤﺮﺳﺎﻝ(‪.‬‬
‫ﺧﺎﺗﻤﺔ‬
‫ﻭﻓﻘﺎًﻟﻸﺩﺑﻴﺎﺕ‪ ،‬ﻓﺈﻥ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﺍﻷﻛﺜﺮ ﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻣﺎً ﺣﺘﻰ ﺍﻵﻥ ﻫﻲ ﺗﻘﻨﻴﺔ‬
‫ﻣﺴﺒﺎﺭﺍﻟﺘﺤﻠﻞ ﺍﻟﻤﺎﺉﻲ )ﻣﻘﺎﻳﺴﺔ ﻃﻘﻤﺎﻥ( ﻋﻠﻰ ﺍﻟﺮﻏﻢ ﻣﻦ ﺃﻥ ﺷﻌﺒﻴﺘﻬﺎ‬
‫ﺗﺮﺟﻊﺑﺸﻜﻞ ﺃﺳﺎﺳﻲ ﺇﻟﻰ ﻧﻀﺠﻬﺎ ﺍﻟﺘﺠﺎﺭﻱ‪ .‬ﻟﻘﺪ ﺃﺛﺒﺘﺖ ﻫﺬﻩ‬
‫ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎﺃﻧﻬﺎ ﺃﻛﺜﺮ ﻓﻌﺎﻟﻴﺔ ﻣﻦ ﻋﻮﺍﻣﻞ ﺍﻹﻗﺤﺎﻡ ﻣﻦ ﺣﻴﺚ‬
‫ﺍﻟﺨﺼﻮﺻﻴﺔﻭﺗﻌﺪﺩ ﺍﻹﺭﺳﺎﻝ‪ .‬ﺗﻄﻮﻳﺮ ﺗﻘﻨﻴﺎﺕ ﺍﻟﻜﺸﻒ ﻋﻠﻰ ﺃﺳﺎﺱ‬
‫ﺍﻟﻤﺘﻐﻴﺮﺓﺍﻟﻨﺎﺗﺠﺔ ﻋﻦ ﺍﻟﺮﺑﻂ ﺍﻟﺒﺪﻳﻞ ) ﻓﺎﻧﺪﻧﺒﺮﻭﻙ ﻭﺁﺧﺮﻭﻥ‪ ،(2001 ،‬ﺍﻟﺦ‪.‬‬
‫ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ﺗﺠﻠﺐ ﺍﻟﻤﺰﻳﺪ ﻣﻦ ﺍﻟﺨﺼﻮﺻﻴﺔ‬
‫ﻭﺍﻟﺪﻗﺔ‪،‬ﻣﻦ ﺑﻴﻦ ﺃﻣﻮﺭ ﺃﺧﺮﻯ‪ ،‬ﻟﻠﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﺗﻌﺪﺩ ﺍﻷﺷﻜﺎﻝ ﻭﺗﺤﻠﻴﻼﺕ‬
‫ﺍﻟﺘﻨﻤﻴﻂﺍﻟﺠﻴﻨﻲ ﻣﻘﺎﺭﻧﺔ ﺑﺎﻟﺘﻘﻨﻴﺎﺕ ﺍﻟﻘﺎﺉﻤﺔ ﻋﻠﻰ ﺍﻟﻤﺠﺴﺎﺕ ﺍﻟﺨﻄﻴﺔ‪.‬‬
‫ﻳﻌﺪﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﺟﺬﺍﺑﺎً ﻟﻠﻐﺎﻳﺔ‬
‫ﻟﻠﺘﻄﺒﻴﻘﺎﺕﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻠﻴﺔ ﻭﺍﺳﻌﺔ ﺍﻟﻨﻄﺎﻕ ﻧﻈﺮﺍً ﻷﻥ ﺍﻟﻌﻤﻠﻴﺔ ﺑﺮﻣﺘﻬﺎ ﻛﺬﻟﻚ‬
‫‪/http://www.rbmc.qc.ca/reviews‬‬
‫ﺍﻟﻘﺲ‪.‬ﺑﻴﻮﻝ‪ .‬ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‪.‬‬
‫ﻭﺑﺎﻟﺘﺎﻟﻲﻓﺈﻥ ﺍﻟﻌﻘﺮﺏ ﻳﺠﻌﻞ ﻣﻦ ﺍﻟﻤﻤﻜﻦ ﺩﻣﺞ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ﻓﻲ‬
‫ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥﺍﻟﺠﺪﻳﺪ ﺃﺛﻨﺎء ﺗﻔﺎﻋﻞ ‪ .PCR‬ﺗﻢ ﺗﺼﻤﻴﻢ ﺣﻠﻘﺔ ﺩﺑﻮﺱ ﺍﻟﺸﻌﺮ‬
‫ﻟﻠﺴﻤﺎﺡﺑﺘﻬﺠﻴﻦ ﺍﻟﻤﺴﺒﺎﺭ ﺇﻟﻰ ﺗﺴﻠﺴﻠﻪ ﺍﻟﺘﻜﻤﻴﻠﻲ ﺍﻟﻤﺴﺘﻬﺪﻑ‬
‫ﺍﻟﻤﻮﺟﻮﺩﻋﻠﻰ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ )ﺍﻟﺸﻜﻞ ‪3‬ﺏ(‪ .‬ﻳﺠﺒﺮ ﻫﺬﺍ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ ﺩﺑﻮﺱ‬
‫‪Whitcombe et al‬؛ ‪Thelwell et al، 2000‬؛ ‪et al، 2002‬‬
‫‪ .(Mackay‬ﺃﻓﺎﺩ (‪ Thelwell et al )2000‬ﺃﻥ ﺗﻘﻨﻴﺔ ﻣﺴﺒﺎﺭ ﺍﻟﻌﻘﺮﺏ‬
‫ﺍﻟﺘﻤﻬﻴﺪﻱﺃﻛﺜﺮ ﻓﻌﺎﻟﻴﺔ ﺑﺸﻜﻞ ﻋﺎﻡ ﻣﻦ ﺍﻟﺘﻘﻠﻴﺪﻳﺔﻃﻘﻤﺎﻥﻭﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕ‬
‫ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ‪،‬ﻭﺧﺎﺻﺔ ﻓﻲ ﺑﺮﻧﺎﻣﺞ ‪ PCR‬ﻣﻊ ﺩﻭﺭﺍﺕ ﻗﺼﻴﺮﺓ ﺟﺪﺍ‪.‬‬
‫ﺩﻭﺭﺓﺍﻟﻌﺘﺒﺔ‬
‫ﺇﻥﻣﻔﻬﻮﻡ "ﺩﻭﺭﺓ ﺍﻟﻌﺘﺒﺔ" ﻫﻮ ﺃﺳﺎﺱ ﺍﻟﻘﻴﺎﺱ ﺍﻟﻜﻤﻲ ﺍﻟﺪﻗﻴﻖ ﻭﺍﻟﻘﺎﺑﻞ‬
‫ﻟﻠﺘﻜﺮﺍﺭﻟﺘﻘﻨﻴﺎﺕ ‪ PCR‬ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﻳﺔ‪ .‬ﻳﺘﻢ ﺗﺴﺠﻴﻞ ﻗﻴﻢ ﺍﻹﺳﻔﺎﺭ ﺧﻼﻝ ﻛﻞ‬
‫ﺩﻭﺭﺓﻭﺗﻤﺜﻞ ﻛﻤﻴﺔ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﺍﻟﻤﻨﺘﺠﺔ ﻋﻨﺪ ﻧﻘﻄﺔ ﻣﺤﺪﺩﺓ ﻓﻲ‬
‫ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ)ﺍﻟﺸﻜﻞ ‪ .(4‬ﻛﻠﻤﺎ ﺯﺍﺩ ﻋﺪﺩ ﺍﻟﻘﻮﺍﻟﺐ ﺍﻟﺘﻲ ﺳﻴﺘﻢ ﺗﻀﺨﻴﻤﻬﺎ ﻓﻲ‬
‫ﺑﺪﺍﻳﺔﺗﻔﺎﻋﻞ ‪ ،PCR‬ﻗﻞ ﻋﺪﺩ ﺍﻟﺪﻭﺭﺍﺕ ﺍﻟﻤﻄﻠﻮﺑﺔ ﻟﻠﻮﺻﻮﻝ ﺇﻟﻰ ﻧﻘﻄﺔ‬
‫ﺗﻜﻮﻥﻓﻴﻬﺎ ﺇﺷﺎﺭﺓ ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﺃﻋﻠﻰ ﺇﺣﺼﺎﺉﻴﺎً ﻭﺑﺸﻜﻞ ﻣﻠﺤﻮﻅ‬
‫ﻣﻦﺿﻮﺿﺎء ﺍﻟﺨﻠﻔﻴﺔ )‪ .(Gibson et al، 1996‬ﻳﺘﻢ ﺗﻌﺮﻳﻒ ﻫﺬﻩ‬
‫ﺍﻟﻨﻘﻄﺔﻋﻠﻰ ﺃﻧﻬﺎ ﻋﺘﺒﺔ ﺍﻟﺪﻭﺭﺓ )‪ (Ct‬ﻭﺳﺘﻈﻬﺮ ﺩﺍﺉﻤﺎً ﺃﺛﻨﺎء ﺍﻟﻤﺮﺣﻠﺔ‬
‫ﺍﻷﺳﻴﺔﻟﻠﺘﻀﺨﻴﻢ‪ .‬ﻭﻟﺬﻟﻚ‪ ،‬ﻻ ﻳﺘﺄﺛﺮ ﺍﻟﻘﻴﺎﺱ ﺍﻟﻜﻤﻲ ﺑﺎﺳﺘﻨﻔﺎﺩ ﺃﺣﺪ‬
‫ﺍﻟﻜﻮﺍﺷﻒﻛﻤﺎ ﻫﻮ ﺍﻟﺤﺎﻝ ﺧﻼﻝ ﻣﺮﺣﻠﺔ ﺍﻟﻬﻀﺒﺔ ﻭﻫﻮ ﻣﺎ ﻳﻔﺴﺮ ﺳﺒﺐ‬
‫ﺍﺳﺘﻨﺴﺎﺥﻧﻈﺎﻡ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ‪ .‬ﻭﻳﻤﻜﻦ ﺗﺮﺟﻤﺔ ﻗﻴﻤﺔ ‪ Ct‬ﺇﻟﻰ ﻧﺘﻴﺠﺔ‬
‫ﻛﻤﻴﺔﻣﻦ ﺧﻼﻝ ﻣﻘﺎﺭﻧﺘﻬﺎ ﺑﻘﻴﻢ ‪ Ct‬ﺍﻟﻤﺘﻮﻟﺪﺓ ﺑﻤﺼﻔﻮﻓﺎﺕ ﺍﻟﻘﻴﺎﺱ‬
‫ﺍﻟﻜﻤﻲﺍﻟﻤﻌﺮﻭﻓﺔ )‪.(Bustin, 2000‬‬
‫ﺍﻟﺘﻄﺒﻴﻘﺎﺕ‬
‫ﺇﻥﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﻔﻌﻠﻲ‪ ،‬ﻧﻈﺮﺍً ﻟﻘﺪﺭﺗﻪ‬
‫ﻋﻠﻰﺇﻧﺘﺎﺝ ﻧﺘﺎﺉﺞ ﺳﺮﻳﻌﺔ ﻭﻣﺤﺪﺩﺓ ﻭﻛﻤﻴﺔ‪ ،‬ﻳﺠﺪ ﺍﻟﻤﺰﻳﺪ ﻭﺍﻟﻤﺰﻳﺪ ﻣﻦ‬
‫ﺍﻟﺘﻄﺒﻴﻘﺎﺕﻓﻲ ﻣﺠﺎﻻﺕ ﻣﺨﺘﻠﻔﺔ‪ .‬ﻋﻠﻰ ﺍﻟﺮﻏﻢ ﻣﻦ ﺃﻥ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﻘﺎﺉﻤﺔ‬
‫ﻟﻴﺴﺖﺷﺎﻣﻠﺔ‪ ،‬ﺇﻟﻴﻚ ﺃﻣﺜﻠﺔ ﺍﻟﺘﻄﺒﻴﻘﺎﺕ ﺍﻷﻛﺜﺮ ﺷﻴﻮﻋﺎً‪.‬‬
‫ﻳﺘﻴﺢﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﺇﻣﻜﺎﻧﻴﺔ‬
‫ﺇﺟﺮﺍءﺩﺭﺍﺳﺎﺕ ﺃﻛﺜﺮ ﺗﻔﺼﻴﻼ ًﻟﻠﺘﻌﺒﻴﺮ ﺍﻟﺠﻴﻨﻲ ﻣﻦ ﺍﻷﻧﺴﺠﺔ ﺃﻭ ﺧﻄﻮﻁ‬
‫ﺍﻟﺨﻼﻳﺎﻣﺜﻞ ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻞ ﺍﻟﻜﻤﻲ ﻟﻠﺘﻌﺒﻴﺮ ﻋﻦ ﺟﻴﻨﺎﺕ ﻣﺨﺘﻠﻔﺔ ﻓﻲ ﺩﺭﺍﺳﺎﺕ‬
‫ﺗﻌﺪﻳﻞﺩﻭﺭﺓ ﺍﻟﺨﻠﻴﺔ ﻣﻊ ﺍﻷﻧﺴﺠﺔ ﺍﻟﻤﻜﺸﻮﻓﺔ ﻟﻤﻮﺍﺩ ﻣﺴﺮﻃﻨﺔ ﻏﻴﺮ ﺳﺎﻣﺔ‬
‫ﻟﻠﺠﻴﻨﺎﺕ)‪ TNO‬ﺷﺮﻛﺔ ‪ ، (BIBRA‬ﻳﻘﻮﻡ ﺑﺘﺤﻠﻴﻞ ﺍﻟﻤﺮﻭﺝ ﻓﻲ ﺧﻄﻮﻁ‬
‫ﺍﻟﺨﻼﻳﺎﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﺟﻴﻦ ﻣﺮﺍﺳﻞ ﻧﺎﻗﻞ ﺍﻟﻜﻠﻮﺭﺍﻣﻔﻴﻨﻴﻜﻮﻝ ﺃﺳﻴﺘﻴﻞ )‬
‫‪ ،(Jeyaselan et al، 2001‬ﻭﺩﺭﺍﺳﺎﺕ ﺗﻌﺪﻳﻼﺕ ﺍﻟﺘﻌﺒﻴﺮ ﺍﻟﺠﻴﻨﻲ ﻓﻲ‬
‫ﺗﺠﺎﺭﺏﺍﻟﺪﻭﺍء ‪ /‬ﺍﻻﺳﺘﺠﺎﺑﺔ )ﺍﻟﺪﻭﺍء ‪ /‬ﺍﻻﺳﺘﺠﺎﺑﺔ(‪ ،‬ﻭﺩﺭﺍﺳﺔ ‪mRNAs‬‬
‫ﻛﻤﺎﻳﻤﻜﻦ ﺃﻥ ﻳﺠﻌﻞ ﻣﻦ ﺍﻟﻤﻤﻜﻦ ﺗﻮﺣﻴﺪ ﻛﻤﻴﺔ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﺒﺎﺩﺉ‬
‫ﻭﺗﻘﻴﻴﻢﻛﻤﻴﺔ ﺍﻟﺮﻧﺎ ﺍﻟﻤﺮﺳﺎﻝ ﻓﻲ ﻧﻬﺎﻳﺔ ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ ﻓﻲ ﺩﺭﺍﺳﺎﺕ‬
‫‪9‬‬ ‫ﺍﻟﻘﺲ‪.‬ﺑﻴﻮﻝ‪ .‬ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‪.‬‬

‫‪0.9‬‬

‫‪0.8‬‬

‫‪0.7‬‬

‫‪0.6‬‬
‫ﻁﻡ‪ :‬ﺩﻭﺭﺓ ﺍﻟﻌﺘﺒﺔ‬
‫‪0.5‬‬

‫ﺣﺪﻭﺩ‬ ‫‪0.4‬‬

‫‪0.3‬‬

‫‪0.2‬‬

‫‪0.1‬‬

‫‪1‬‬ ‫‪0‬‬
‫‪6‬‬
‫‪16‬‬ ‫‪11‬‬
‫‪26‬‬ ‫‪21‬‬
‫‪36‬‬ ‫‪31‬‬
‫ﻋﺪﺩﺍﻟﺪﻭﺭﺍﺕ‬

‫ﺍﻟﺸﻜﻞ‪ :4‬ﻧﻤﻮﺫﺝ ﺭﺳﻮﻣﻲ ﻟـ ‪ PCR‬ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﺣﻴﺚ ﻳﺘﻢ ﺍﻟﺘﻌﺒﻴﺮ ﻋﻦ ﻛﺜﺎﻓﺔ ﺍﻟﺘﺄﻟﻖ ﻛﺪﺍﻟﺔ ﻟﺮﻗﻢ ﺍﻟﺪﻭﺭﺓ‪ .‬ﺗﺘﻨﺎﺳﺐ ﺷﺪﺓ ﺍﻟﺘﺄﻟﻖ ﻓﻲ ﻛﻞ ﺩﻭﺭﺓ ﻣﻊ‬
‫ﺗﺮﻛﻴﺰﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ‪ ،‬ﻭﺗﻤﺜﻞ ﻋﺘﺒﺔ ﺍﻟﺪﻭﺭﺓ )‪ (Ct‬ﻋﺪﺩ ﺍﻟﺪﻭﺭﺍﺕ ﺍﻟﻤﻄﻠﻮﺑﺔ ﺣﻴﺚ ﺗﻜﻮﻥ ﺇﺷﺎﺭﺓ ﺍﻧﺒﻌﺎﺙ ﺍﻟﺘﺄﻟﻖ ﺃﻋﻠﻰ ﺇﺣﺼﺎﺉﻴﺎً ﻭﺑﺸﻜﻞ ﻣﻠﺤﻮﻅ‬

‫ﺃﻋﻠﻰﻣﻦ ﺧﻂ ﺍﻷﺳﺎﺱ‪.‬‬

‫ﺍﻟﺠﻴﻦ‪،‬ﻭﺍﻟﺘﻘﺪﻳﺮ ﺍﻟﻜﻤﻲ ﻟﻌﺪﺩ ﺍﻟﻨﺴﺦ ﻓﻲ ﻣﺠﻤﻮﻋﺔ ﻣﻦ ﺍﻟﺨﻼﻳﺎ‪ ،‬ﻭﻓﻲ‬ ‫ﺍﻵﻟﻲﻣﻦ ﺍﻟﺒﺪﺍﻳﺔ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﻨﻬﺎﻳﺔ‪ .‬ﻭﺑﻤﺎ ﺃﻥ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﺗﺘﻀﻤﻦ ﻋﻤﻮﻣﺎً‬
‫ﻧﻬﺎﻳﺔﺍﻟﻤﻄﺎﻑ‪ ،‬ﺗﻘﻴﻴﻢ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ‬ ‫ﺃﻧﻈﻤﺔﺍﻷﻧﺎﺑﻴﺐ ﺍﻟﻤﻐﻠﻘﺔ ﻭﻻ ﻳﺘﻄﻠﺐ ﺍﻟﻘﻴﺎﺱ ﺍﻟﻜﻤﻲ ﺃﻱ ﻣﻌﺎﻟﺠﺔ ﺑﻌﺪ‬
‫ﺃﻣﺜﻠﺔ‬ ‫ﻗﻠﻴﻠﺔ‬ ‫ﺣﺎﻟﻴﺎ‪ً،‬‬ ‫ﻧﻜﻮﻥ‪،‬‬ ‫ﺍﻟﻤﺘﺒﻘﻴﺔ‬ ‫ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢ‪،‬ﻓﺈﻥ ﻣﺸﺎﻛﻞ ﺍﻟﺘﻠﻮﺙ ﺑﻌﺪ ‪ PCR‬ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﺗﻘﻞ‬
‫ﺗﻄﺒﻴﻘﺎﺕﻭﺍﺳﻌﺔ ﺍﻟﻨﻄﺎﻕ ﻋﻠﻰ ﻧﺤﻮ ﻣﺘﺰﺍﻳﺪ ﻣﻦ ‪ PCR‬ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ‪.‬‬ ‫ﺇﻟﻰﺣﺪ ﻛﺒﻴﺮ‪.‬‬

‫ﻟﺬﻟﻚﻳﻌﺪ ﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﻔﻌﻠﻲ ﺃﺩﺍﺓ ﻗﻮﻳﺔ‪،‬‬
‫ﻭﺗﺸﻴﺮﺍﻟﺘﻄﻮﺭﺍﺕ ﺍﻟﺤﺪﻳﺜﺔ ﻓﻲ ﺗﻘﻨﻴﺎﺕ ﺍﻟﻜﺸﻒ ﺍﻟﻤﺨﺘﻠﻔﺔ ﺇﻟﻰ‬
‫ﺗﻄﺒﻴﻘﺎﺕ‪،‬ﻛﻞ ﻣﻨﻬﺎ ﺃﻛﺜﺮ ﺍﺑﺘﻜﺎﺭﺍً ﻣﻦ ﺳﺎﺑﻘﺘﻬﺎ‪.‬‬
‫ﺿﻮﺉﻲ‬
‫ﺗﺤﻠﻴﻞﺍﻟﺘﻌﺒﻴﺮ ﺍﻟﺠﻴﻨﻲ‪ ،‬ﻭﺍﻻﺳﺘﺠﺎﺑﺔ ﺍﻟﺨﻠﻮﻳﺔ ﻟﻸﺩﻭﻳﺔ ﺍﻟﻤﺨﺘﻠﻔﺔ )ﺍﻟﺪﻭﺍء‪/‬‬
‫ﺍﻻﺳﺘﺠﺎﺑﺔ(‪ ،‬ﻭﺍﻟﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﺍﻟﻄﻔﺮﺍﺕ‪ ،‬ﻭﺍﻟﺘﻨﻤﻴﻂ ﺍﻟﺠﻴﻨﻲ‪ ،‬ﻭﺍﻟﻜﺸﻒ‬
‫ﻋﻦﻣﺴﺒﺒﺎﺕ ﺍﻷﻣﺮﺍﺽ ﻭﺗﻘﺪﻳﺮﻫﺎ ﺍﻟﻜﻤﻲ‪ ،‬ﻭﺗﻘﺪﻳﺮ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ‬
‫ﺍﻟﺮﻳﺒﻮﺯﻱ)‪ (DNA‬ﻭﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﺮﻳﺒﻲ )‪ ،(RNA‬ﻭﻓﺤﻮﺻﺎﺕ‬
‫ﺍﻟﺘﻌﺒﻴﺮﻭﺍﻟﺘﻮﺯﻳﻊ ﻟﻠﻌﻼﺝ‬

‫‪.‬ﺍﻟﻜﻤﻲﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ‪ .‬ﺑﺤﺚ ﺍﻟﺠﻴﻨﻮﻡ ‪ RT-PCR 1001-6:995#‬ﻃﺮﻳﻘﺔ‬ ‫ﻣﺮﺍﺟﻊ‬

‫ﺟﺪﻳﺪﺓﻟﺘﺤﻠﻴﻞ ‪Gibson, UE, Heid, CA and Williams, PM 1996.‬‬
‫‪.‬ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡﻓﺤﻮﺻﺎﺕ ﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻠﻤﺮﺓ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﻟﻠﻨﺴﺦ ﺍﻟﻌﻜﺴﻲ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ‬
‫ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ‪.‬ﻣﺠﻠﺔ ﺍﻟﻐﺪﺩ ﺍﻟﺼﻤﺎء ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ ‪mRNA 193-25:169#‬ﺍﻟﻘﻴﺎﺱ‬
‫‪.‬ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ‪ :‬ﻧﻬﺞ ﺟﺪﻳﺪ ﻟﺘﺤﻠﻴﻞ ﺍﻟﻄﻔﺮﺓ ﺷﺒﻪ ﺍﻵﻟﻴﺔ‪ .‬ﺍﻟﻜﻴﻤﻴﺎء ﺍﻟﺴﺮﻳﺮﻳﺔ‬ ‫ﺍﻟﻜﻤﻲﺍﻟﻤﻄﻠﻖ ﻟﻞ ‪Bustin, SA 2000.‬‬
‫‪، S.، Mensink، EJ، Trijbels، FJ and Blom، HJ 1998. 486-44:482#‬‬
‫‪Giesendorf، BA، Vet، JA، Tyagi‬‬ ‫ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ‪ :‬ﺍﺧﺘﺒﺎﺭ ﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻠﻤﺮﺓ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ‬
‫ﻟﻠﻜﺸﻒ‪Chen، W.، Martinez، G. and Mulchandani، A. 2000.‬‬
‫ﺍﻟﺴﺎﻟﻤﻮﻧﻴﻼ‪.‬ﺍﻟﻜﻴﻤﻴﺎء ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻠﻴﺔ ‪.172-280:166#‬‬
‫‪.‬ﻣﺤﺪﺩﺓ‪.‬ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ ‪ DNA 417-10:413#‬ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢ ﺍﻟﻤﺘﺰﺍﻣﻦ‬
‫ﻭﺍﻟﻜﺸﻒﻋﻦ ﺗﺴﻠﺴﻼﺕ ‪، G.، Walsh، PS and Griffith، R. 1992.‬‬ ‫ﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻡﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻠﻤﺮﺓ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﻭﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕ‬
‫‪Higuchi، R.، Dollinger‬‬ ‫ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔﻟﻠﻜﺸﻒ ﻋﻦ ‪، NY، Mulchandani، A. and Chen، W. 2001.‬‬
‫‪Fortin‬ﺍﻹﺷﺮﻳﻜﻴﺔ ﺍﻟﻘﻮﻟﻮﻧﻴﺔﺍﻟﻜﻴﻤﻴﺎء ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻠﻴﺔ ‪O157:H7.‬‬
‫‪.#289:281-288‬‬

‫‪/http://www.rbmc.qc.ca/reviews‬‬
‫‪10‬‬ ‫ﺍﻟﻘﺲ‪.‬ﺑﻴﻮﻝ‪ .‬ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‪.‬‬

‫‪.‬ﺍﻟﺘﻌﺮﻑﻋﻠﻰ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻻﻧﺘﻘﺎﺉﻲ ﺑﺎﻟﺘﺴﻠﺴﻞ ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﺍﻟﺮﻭﺍﺑﻂ‬ ‫‪.‬ﺑﻮﺍﺳﻄﺔﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻠﻤﺮﺓ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﻓﻲ ﻭﺟﻮﺩ ﻣﻘﺤﻢ ﻓﻠﻮﺭﻱ ‪ .‬ﺍﻟﻜﻴﻤﻴﺎء‬
‫ﺍﻻﺻﻄﻨﺎﻋﻴﺔ‪.‬ﺍﻟﻜﻴﻤﻴﺎء ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ ‪Nielsen, PE 1991. 12-1 :2#‬‬ ‫ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻠﻴﺔ ‪ RNA 213-229:207#‬ﺍﻟﻔﺤﺺ ﺍﻟﻜﻤﻲ ﺍﻟﻤﺘﺠﺎﻧﺲ‬
‫ﻟﻔﻴﺮﻭﺱﺍﻟﺘﻬﺎﺏ ﺍﻟﻜﺒﺪ ﺍﻟﻮﺑﺎﺉﻲ ‪H.، Iwasaki، S. and Mitoma، Y. 1995.‬‬
‫‪.‬ﻭﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ‪ .‬ﻣﺠﻠﺔ ﺍﻟﻄﺮﻕ ﺍﻟﻔﻴﺮﻭﺳﻴﺔ ‪ PCR 26-82:19#‬ﺍﻟﻜﺸﻒ ﻋﻦ‬ ‫‪Ishiguro، T.، Saitoh، J.، Yawata، H.، Yamagishi،‬‬
‫ﺍﻟﻔﻴﺮﻭﺱﺍﻟﻐﺪﻱ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ‪Poddar, SK 1999.‬‬

‫‪.‬ﺃﺑﺤﺎﺙﺍﻷﺣﻤﺎﺽ ﺍﻟﻨﻮﻭﻳﺔ ﺭﻗﻢ ‪H. 3762-18:3753‬ﻣﻊ ﺍﻷﺧﺪﻭﺩ ﺍﻟﺒﺴﻴﻂ ﻟﺜﻨﺎﺉﻲ‬ ‫‪ E58.‬ﺍﻟﻜﺸﻒ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﻋﻦ ﻧﺸﺎﻁ ﻣﺮﻭﺝ ﺍﻟﺠﻴﻨﺎﺕ‪ :‬ﺍﻟﻘﻴﺎﺱ‬
‫ﺍﻟﺤﻤﺾﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﻐﺪﻱ ﻓﻲ ﻣﺤﻠﻮﻝ ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻞ ﺍﻟﻄﻴﻔﻲ ﻟﻠﺮﻧﻴﻦ ﺍﻟﻤﻐﻨﺎﻃﻴﺴﻲ‬ ‫ﺍﻟﻜﻤﻲﻟﻨﺴﺦ ﺍﻟﺠﻴﻨﺎﺕ ﺍﻟﺴﺎﻣﺔ‪ .‬ﺑﺤﺚ ﺍﻷﺣﻤﺎﺽ ﺍﻟﻨﻮﻭﻳﺔ ﺭﻗﻢ ‪ 29‬ﺭﻗﻢ ‪12‬‬
‫ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ‪ Hoescht 33258 1‬ﺗﻤﺖ ﺩﺭﺍﺳﺔ ﺍﻟﺘﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺨﺎﺹ ﺑﺎﻟﺘﺴﻠﺴﻞ ﻟـ ‪1990.‬‬ ‫‪Jeyaseelan، K.، Ma، D. and Armugam A. 2001.‬‬
‫‪Searle, MS and Embrey, KE‬‬
‫‪.‬ﻓﻲﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ‪ .‬ﺍﻟﻜﻴﻤﻴﺎء ﺍﻟﻌﻀﻮﻳﺔ ﻭﺍﻟﻄﺒﻴﺔ ﺭﻗﻢ ‪PCR 1916-1911 :8‬‬
‫‪.‬ﺗﺴﺠﻴﻞﻣﺘﺠﺎﻧﺲ ﻷﺷﻜﺎﻝ ﺍﻟﻨﻮﻛﻠﻴﻮﺗﻴﺪﺍﺕ ﺍﻟﻤﻔﺮﺩﺓ‪ :‬ﻣﻘﺎﺭﻧﺔ ﻣﻘﺎﻳﺴﺔ ﻃﻖ ﻣﺎﻥ‬ ‫ﻛﻤﺴﺒﺎﺭﺍﺕﺗﻤﻬﻴﺪﻳﺔ ﻓﻠﻮﺭﻳﺔ ﻗﺎﺉﻤﺔ ﻋﻠﻰ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ‪ :‬ﺍﻟﺘﻮﻟﻴﻒ ﻭﺍﻟﺨﺼﺎﺉﺺ‬
‫‪-'5‬ﻧﻮﻛﻠﻴﺎﺯ ﻭﺗﺤﻘﻴﻘﺎﺕ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺓ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ‪ .‬ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺎﺕ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ ﺭﻗﻢ ‪:28‬‬ ‫ﻭﺍﻟﺘﻄﺒﻴﻖﻓﻲ "‪Kandimalla، ER and Agrawal، S. 2000. "Cyclicons‬‬
‫‪، I.، Rennel، E.، Wik، M. and Syvänen، A.-C. 2000.738-732‬‬
‫‪Täpp، I.، Malmberg‬‬
‫ﻟﻴﻦ‪ ،.M.-H،‬ﺗﺸﻦ‪ ،.T.-C ،‬ﻛﻮ‪ ،.T.-T ،‬ﺗﺴﻨﻎ‪ .C ،‬ﻭﺗﺴﻨﻎ‪.C.-P. 2000 ،‬‬
‫‪.‬ﻃﺮﻳﻘﺔﺍﻟﻌﻤﻞ ﻭﺗﻄﺒﻴﻖ ﺑﺎﺩﺉﺎﺕ ﺍﻟﻌﻘﺮﺏ ﻟﻠﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﺍﻟﻄﻔﺮﺍﺕ‪ .‬ﺃﺑﺤﺎﺙ‬ ‫ﺗﻔﺎﻋﻞﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﻟﻠﻜﺸﻒ ﺍﻟﻜﻤﻲ ﻋﻦ‬
‫ﺍﻷﺣﻤﺎﺽﺍﻟﻨﻮﻭﻳﺔ ﺭﻗﻢ ‪، Booth، J. and Brown، T. 2000. 3761-28:3752‬‬ ‫ﺍﻟﺘﻮﻛﺴﻮﺑﻼﺯﻣﺎ‪ .‬ﻣﺠﻠﺔ ﻋﻠﻢ ﺍﻷﺣﻴﺎء ﺍﻟﺪﻗﻴﻘﺔ ﺍﻟﺴﺮﻳﺮﻳﺔ ‪.4125-38:4121#‬‬
‫‪Thelwell، N.، Millington، S.، Solinas، A.‬‬
‫ﻟﻴﻮ‪،‬ﺟﻴﻪ‪ ،‬ﻓﻴﻠﺪﻣﺎﻥ‪ ،‬ﺑﻲ‪ ،‬ﻭﺗﺸﻮﻧﺞ‪ ،‬ﺗﻲ ﺩﻱ ﻭﺍﻱ ‪ .2002‬ﺍﻟﻤﺮﺍﻗﺒﺔ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ‬
‫ﺍﺧﺘﺒﺎﺭﺗﻔﺎﻋﻞ ﺳﻠﺴﻠﺔ ﺍﻟﺒﻠﻤﺮﺓ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﺍﻟﻤﺘﺠﺎﻧﺲ ﻟﺘﺤﺪﻳﺪ ‪، D. 1997.‬‬ ‫ﺍﻟﻔﻌﻠﻲﻓﻲ ﺍﻟﻤﺨﺘﺒﺮﺍﻟﻨﺴﺦ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕ ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ‪ .‬ﺍﻟﻜﻴﻤﻴﺎء ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‬
‫‪، D.، Elliot، V.، Tice، G.، Jackson، R.، Barbour، M. and Amorese‬‬ ‫ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻠﻴﺔ‪.45-300:40#‬‬
‫‪ Tseng، SY، Macool‬ﺍﻟﺴﺎﻟﻤﻮﻧﻴﻼ‪.‬ﺍﻟﻜﻴﻤﻴﺎء ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻠﻴﺔ ‪#‬‬
‫‪.212-245:207‬‬ ‫ﺗﻔﺎﻋﻞﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ‪Mackay, IM, Arden, KE and Nitsche A. 2002.‬‬
‫ﻓﻲﻋﻠﻢ ﺍﻟﻔﻴﺮﻭﺳﺎﺕ‪ .‬ﺃﺑﺤﺎﺙ ﺍﻷﺣﻤﺎﺽ ﺍﻟﻨﻮﻭﻳﺔ ﺭﻗﻢ ‪.1305-30:1292‬‬
‫‪.‬ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ‪ :‬ﻣﺠﺴﺎﺕ ﺗﺘﺄﻟﻖ ﻋﻨﺪ ﺍﻟﺘﻬﺠﻴﻦ‪ .‬ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‬
‫ﺍﻟﻄﺒﻴﻌﻴﺔ‪Tyagi، S. and Kramer، FR 1996. 308-14:303#‬‬ ‫‪.‬ﺍﻟﻜﺸﻒﺍﻟﻤﺘﻌﺪﺩ ﻋﻦ ﺍﺧﺘﻼﻓﺎﺕ ﺍﻟﻨﻮﻛﻠﻴﻮﺗﻴﺪﺍﺕ ﺍﻟﻤﻔﺮﺩﺓ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕ‬
‫ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔ‪.‬ﺍﻟﺘﺤﻠﻴﻞ ﺍﻟﺠﻴﻨﻲ ﺭﻗﻢ ‪and Tyagi, S. 1999. 156-151 :14‬‬
‫‪Marras, SA, Kramer, FR‬‬
‫ﻣﻨﺎﺭﺍﺕﺟﺰﻳﺉﻴﺔ ﻣﺘﻌﺪﺩﺓ ﺍﻷﻟﻮﺍﻥ ﻟﺘﻤﻴﻴﺰ ﺍﻷﻟﻴﻞ‪ .‬ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ ﺍﻟﻄﺒﻴﻌﻴﺔ‬
‫‪Tyagi، S.، Bratu، DP and Kramer، FR1998.‬‬ ‫‪.‬ﺍﻟﻜﻤﻲﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﺮﻳﺒﻮﺯﻱ ﻟﻔﻴﺮﻭﺱ ﺍﻟﺘﻬﺎﺏ ﺍﻟﻜﺒﺪ ﺍﻟﻮﺑﺎﺉﻲ ﺳﻲ‪ .‬ﻣﺠﻠﺔ ﻋﻠﻢ‬
‫‪.#16:49-53‬‬ ‫ﺍﻷﺣﻴﺎءﺍﻟﺪﻗﻴﻘﺔ ﺍﻟﺴﺮﻳﺮﻳﺔ ‪- PCR 332-327 :37#‬ﺍﻟﻨﺴﺦ ﺍﻟﻌﻜﺴﻲ ﻋﺎﻟﻲ ﺍﻹﻧﺘﺎﺟﻴﺔ‬
‫ﻓﻲﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ‪Guardia, J. 1999.‬‬
‫ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ‪ .‬ﺑﺤﺚ ﺍﻷﺣﻤﺎﺽ ﺍﻟﻨﻮﻭﻳﺔ ﺭﻗﻢ ‪ 29‬ﺭﻗﻢ ‪ PCR 13‬ﺍﻟﻘﻴﺎﺱ‬ ‫‪ E68.‬ﻓﻲ‬
‫‪Martell,‬‬ ‫‪M. Gomez, J., Esteban, JI, Sauleda, S., Quer, J., Cabot, B., Esteban, R. and‬‬
‫ﺍﻟﻜﻤﻲﻟﻤﺘﻐﻴﺮ ﺍﻟﻮﺻﻠﺔ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ‪، J.، De Paepe، A. and Messiaen، L. 2001.‬‬
‫‪Vandenbroucke، II، Vandesompele‬‬
‫‪.‬ﻓﻲﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ‪ .‬ﺍﻟﻄﺮﻕ ﺭﻗﻢ ‪ PCR 471-25:463‬ﺍﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﺍﻟﻤﻨﺎﺭﺍﺕ‬
‫ﺍﻟﺠﺰﻳﺉﻴﺔﻟﻠﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﺗﻌﺪﺩ ﺃﺷﻜﺎﻝ ﺍﻟﻨﻮﻛﻠﻴﻮﺗﻴﺪﺍﺕ ﺍﻟﻤﻔﺮﺩﺓ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ‬
‫‪.‬ﺍﻟﻜﺸﻒﺍﻟﻤﺘﻌﺪﺩ ﻋﻦ ﺃﺭﺑﻌﺔ ﻓﻴﺮﻭﺳﺎﺕ ﻗﻬﻘﺮﻳﺔ ﻣﺴﺒﺒﺔ ﻟﻸﻣﺮﺍﺽ ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ‬ ‫‪Mhlanga, MM and Malmberg, L. 2001.‬‬
‫ﻣﻨﺎﺭﺍﺕﺟﺰﻳﺉﻴﺔ‪ .‬ﻭﻗﺎﺉﻊ ﺍﻷﻛﺎﺩﻳﻤﻴﺔ ﺍﻟﻮﻃﻨﻴﺔ ﻟﻠﻌﻠﻮﻡ ‪6399-6394 :96#‬‬
‫‪، SAE، Tagi، S.، Dube، S.، Poiesz، BJ and Kramer، FR1999.‬‬ ‫‪.‬ﺍﻟﺨﻀﺮﺍءﺍﻟﻤﺴﺘﻤﺮﺓ ﺃﺛﻨﺎء ﺍﻟﺘﻀﺨﻴﻢ‪ .‬ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺎﺕ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ ‪962-952 :24#‬‬
‫‪Vet، JAM، Majithia، AR، Marras‬‬ ‫‪ SYBR‬ﺍﻟﻘﻴﺎﺱ ﺍﻟﻜﻤﻲ ﻟﻠﻨﺼﻮﺹ ﺫﺍﺕ ﺍﻟﻨﺴﺦ ﺍﻟﻤﻨﺨﻔﻀﺔ ﻣﻦ ﺧﻼﻝ ﻣﺮﺍﻗﺒﺔ‬
‫‪Morrison, TM, Weis, JJ and Wittwer, CT1998.‬‬
‫‪.‬ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﺫﺍﺗﻴﺔ ﺍﻟﻔﺤﺺ ﻭﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺓ‪ .‬ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‬
‫ﺍﻟﻄﺒﻴﻌﻴﺔ‪ PCR 807-17:804#‬ﺍﻟﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﻣﻨﺘﺠﺎﺕ ‪Little، S. 1999.‬‬
‫‪Whitcombe، D.، Theaker، J.، Guy، SP، Brown، T. and‬‬ ‫‪.‬ﺍﻟﻄﺎﻗﺔ‪.‬ﺃﺑﺤﺎﺙ ﺍﻟﺠﻴﻨﻮﻡ ﺭﻗﻢ ‪ Tensfer 169-163 :11‬ﺧﺎﺹ ﺑﺎﻷﻟﻴﻞ ﻣﻊ‬
‫ﺍﻻﺷﻌﺎﻝﺍﻟﻌﺎﻟﻤﻲ ﺍﻟﻤﺴﻤﻰ ﺑـ ‪ PCR‬ﻋﺎﻟﻲ ﺍﻹﻧﺘﺎﺟﻴﺔ ﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ‪ SNP‬ﺍﻟﺘﻨﻤﻴﻂ‬
‫‪.‬ﻣﺮﺍﻗﺒﺔﺍﻟﺘﺄﻟﻖ ﺍﻟﻤﺴﺘﻤﺮ ﻟﺘﻀﺨﻴﻢ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﺍﻟﺴﺮﻳﻊ ﻟﻠﺪﻭﺭﺓ‪ .‬ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺎﺕ‬ ‫ﺍﻟﺠﻴﻨﻲ‪Myakishev، MV، Khripin Y.، Hu، S. and Hamer DH 2001.‬‬
‫ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‪، MG، Moss، AA and Rasmussen، RP 1997. 138-22:130#‬‬
‫‪Wittwer، CT، Herrmann‬‬
‫‪.‬ﺗﻨﺴﻴﻖﺃﻧﺒﻮﺏ ﻣﻐﻠﻖ ﻟﺘﻀﺨﻴﻢ ﻭﺍﻛﺘﺸﺎﻑ ﺍﻟﺤﻤﺾ ﺍﻟﻨﻮﻭﻱ ﻋﻠﻰ ﺃﺳﺎﺱ ﻧﻘﻞ‬
‫ﺍﻟﻄﺎﻗﺔ‪.‬ﺃﺑﺤﺎﺙ ﺍﻷﺣﻤﺎﺽ ﺍﻟﻨﻮﻭﻳﺔ ﺭﻗﻢ ‪، RJ 1997. 2521-25:2516‬‬
‫‪Nazarenko، IA، Bhatnagaer، SK and Hohman‬‬

‫ﻣﻠﺨﺺ‪:‬‬

‫ﻳﺘﻨﺎﺳﺐﻣﻊ ﻛﻤﻴﺔ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﺍﻟﻤﻨﺘﺠﺔ ﺃﺛﻨﺎء ﺗﻔﺎﻋﻞ ‪ .PCR‬ﻷﻧﻪ‬ ‫ﺃﺻﺒﺤﺖﺗﻘﻨﻴﺔ ‪ PCR‬ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ ﺃﻛﺜﺮ ﺷﻴﻮﻋﺎً ﻓﻲ‬
‫ﻳﺘﻢﺇﺟﺮﺍﺅﻩ ﻋﻤﻮﻣﺎً ﺑﺎﺳﺘﺨﺪﺍﻡ ﺃﻧﻈﻤﺔ ﺍﻷﻧﺎﺑﻴﺐ ﺍﻟﻤﻐﻠﻘﺔ ﻭﻻ‬ ‫ﻣﺨﺘﻠﻒﻗﻄﺎﻋﺎﺕ ﺍﻟﻨﺸﺎﻁ‪ .‬ﺗﻌﺘﻤﺪ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ ﻋﻠﻰ ﺍﻟﻜﺸﻒ‬
‫ﻳﺘﻄﻠﺐﻫﺬﺍ ﺍﻟﻘﻴﺎﺱ ﺍﻟﻜﻤﻲ ﺃﻱ ﺗﻀﺨﻴﻢ ﻻﺣﻖ‬ ‫ﻭﺍﻟﻘﻴﺎﺱﺍﻟﻜﻤﻲ ﻟﻤﺮﺍﺳﻞ ﺍﻟﻔﻠﻮﺭﺳﻨﺖ ﺍﻟﺬﻱ ﻳﻜﻮﻥ ﺍﻧﺒﻌﺎﺛﻪ‬
‫ﻣﺒﺎﺷﺮﺍً‬

‫‪/http://www.rbmc.qc.ca/reviews‬‬
‫‪11‬‬ ‫ﺍﻟﻘﺲ‪.‬ﺑﻴﻮﻝ‪ .‬ﺍﻟﺘﻜﻨﻮﻟﻮﺟﻴﺎ ﺍﻟﺤﻴﻮﻳﺔ‪.‬‬

‫ﺗﺤﻠﻴﻼﺕﺍﻹﻧﺘﺎﺟﻴﺔ‪ .‬ﺗﻘﺪﻡ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﻮﺭﻗﺔ ﻭﺻﻔﺎً ﻟﻠﻤﺒﺎﺩﺉ ﺍﻟﻤﻌﺘﻤﺪﺓ‬ ‫ﻋﻨﺪﺍﻟﻤﻌﺎﻟﺠﺔ‪ ،‬ﻳﺘﻢ ﺗﻘﻠﻴﻞ ﻣﺨﺎﻃﺮ ﺍﻟﺘﻠﻮﺙ ﺑﻌﺪ ﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ‬
‫ﻋﻠﻰﺗﻔﺎﻋﻞ ﺍﻟﺒﻮﻟﻴﻤﻴﺮﺍﺯ ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞ ﻓﻲ ﺍﻟﻮﻗﺖ ﺍﻟﺤﻘﻴﻘﻲ‪،‬‬ ‫ﺍﻟﻤﺘﺴﻠﺴﻞﺑﻮﺍﺳﻄﺔ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻧﺎﺕ ﺑﺸﻜﻞ ﻛﺒﻴﺮ‪ .‬ﺗﺘﻢ ﺍﻟﻌﻤﻠﻴﺔ‬
‫ﻭﺗﻘﻨﻴﺎﺕﺍﻟﻜﺸﻒ ﻋﻦ ﺍﻷﻣﺒﻠﻴﻜﻮﻥ ﺍﻟﻤﺨﺘﻠﻔﺔ ﻭﺃﻣﺜﻠﺔ ﻟﻠﺘﻄﺒﻴﻘﺎﺕ‬ ‫ﺑﺄﻛﻤﻠﻬﺎﺗﻠﻘﺎﺉﻴﺎً ﻣﻦ ﺍﻟﺒﺪﺍﻳﺔ ﺇﻟﻰ ﺍﻟﻨﻬﺎﻳﺔ‪ ،‬ﻣﻤﺎ ﻳﺠﻌﻞ ﻫﺬﻩ ﺍﻟﺘﻘﻨﻴﺔ‬
‫‪.‬‬ ‫ﺍﻟﺤﺎﻟﻴﺔ‪.‬‬ ‫ﻋﺎﻟﻴﺔﺍﻷﺩﺍء ﻟﻠﻐﺎﻳﺔ‬

‫‪/http://www.rbmc.qc.ca/reviews‬‬