Μικροσκόπια φθορισμού

Μικροσκόπια φθορισμού

Τα μικροσκόπια που χρησιμοποιούνται για να παρατηρήσουμε το ορατό φως του ανοσοφθορισμού είναι
διαφορετικά από τα κοινά μικροσκόπια που διαβιβάζουν το φως. Τα μικροσκόπια φθορισμού διαθέτουν φωτεινή
πηγή υψηλής ενέργειας για την διέγερση των φθοριοχρωμάτων καθώς και φίλτρα διέγερσης και φίλτρα φραγμούς.
Σαν πηγή φωτεινής ενέργειας χρησιμοποιούν λυχνίες υδραργύρου ή αλογόνου. Η λυχνία υδραργύρου είναι
μεγάλης έντασης και κατάλληλη για τεχνικές διπλής χρώσης.
Τα φίλτρα διέγερσης επιτρέπουν την δίοδο από την φωτεινή πηγή ακτινοβολίας που το μήκος κύματός της είναι
κοντά στην περιοχή μεγίστης διέγερσης του φθοριοχρώματος.
Τα προστατευτικά φίλτρα φραγμοί επιτρέπουν τη δίοδο μόνο της ακτινοβολίας που εκπέμπεται από το
φθοριόχρωμα και απορροφούν το υπόλοιπο της διεγείρουσας ακτινοβολίας
Τα μικροσκόπια φθορισμού διακρίνονται σε μικροσκόπια με διερχόμενο φωτισμό και σε μικροσκόπια με
προσπίπτοντα φωτισμό.
Τα μικροσκόπια με διερχόμενο φωτισμό μοιάζουν με τα κοινά μικροσκόπια διαθέτουν όμως φωτεινή πηγή υψηλής
ενέργειας, φίλτρα και συμπυκνωτή. Ένας ανακλαστήρας φωτός και συγκεντρωτικοί φακοί προβάλουν την
ακτινοβολία από τη φωτεινή πηγή στο φίλτρο διέγερσης, απ’ όπου εξέρχεται μόνο η κατάλληλη για τη χρωστική
ακτινοβολία, που στη συνέχεια αντανακλάται σε κάτοπτρο και αφού διέλθει από συγκεντρωτικό φακό συναντά το
δείγμα. Ο φθορισμός που εκπέμπεται περνά από φίλτρο φραγμό που βρίσκεται στον αντικειμενικό φακό και στη
συνέχεια φθάνει στον προσοφθάλμιο.
Τα μικροσκόπια με προσπίπτοντα φωτισμό διαθέτουν φωτεινή πηγή υψηλής ενέργειας (λάμπα υδραργύρου),
φίλτρα, διχρωϊκό κάτοπτρο ως ανακλαστήρα ενώ ο αντικειμενικός φακός λειτουργεί ως συμπυκνωτής. Η φωτεινή
δέσμη κατευθύνεται στο φίλτρο διέγερσης και από εκεί στο διχρωϊκό κάτοπτρο απ’ όπου περνούν επιλεγμένα μήκη
κύματος και κατευθύνονται προς το δείγμα δια μέσου του αντικειμενικού φακού που δρα ως συμπυκνωτής. Μετά
την αντίδραση η φωτεινή δέσμη αντανακλά στο διχρωϊκό κάτοπτρο και ο φθορισμός αφού διέλθει από
προστατευτικό φίλτρο φθάνει στον προσοφθάλμιο.
Τα τελευταία χρόνια χρησιμοποιούνται περισσότερο τα μικροσκόπια προσπίπτοντος φωτισμού γιατί έχουν
ορισμένα πλεονεκτήματα κυρίως σε τομές ιστών. Δίνουν καλύτερη εικόνα σε μεγάλες μεγεθύνσεις για τη μελέτη
των κυττάρων και ακόμη έχουν τη δυνατότητα ανίχνευσης δύο διαφορετικών φθοριοχρωμάτων ταυτόχρονα.