Генна та клітинна інженерія

Генна інженерія
 хромосомна ДНК
Наприкінці 1960-х років було відкрито ендонуклеази
розрізання рестрикції, або рестриктази, що дають змогу
рестриктазою розрізати молекули ДНК у місцях розташування
певних послідовностей.
«липкі» зшивання
кінці ДНК-лігазою

1967 року був відкритий ще один фермент — ДНК-

лігаза, яка зшиває окремі молекули ДНК між собою.

розрізання
1970 року Говард Темін і Девід Балтімор відкрили
рестриктазою зворотну транскриптазу — вірусний фермент, здатний
синтезувати ДНК на матриці РНК (раніше вважалося,
кільцева ДНК - що це неможливо).
плазміда

У 1972 році у лабораторії Пола Берга створено першу рекомбінантну ДНК

 Суть методів генної інженерії – введення в організм нового гена

Гени білка

Етапи генної інженерії бактерій:

1. Виділення копії потрібного гена серед інших генів організму.
2. Вбудовування гена в бактеріальний вектор.
3. Введення вектора в клітину.
4. Відбір клітин із чужорідною ДНК.
5. Клонування гена.
 Етапи генної інженерії бактерій
Кількість білок-
Хромосома Всього основ Кількість генів кодуючих генів

1. Виділення копії потрібного гена серед інших генів 22

21
51304566
48129895
855
450
507
246

організму 20
19
63025520
59128983
891
2066
561
1492
18 78077248 557 289
17 81195210 1773 1209
16 90354753 1326 883

У каріотипі здорової людини 46 хромосом, які 15

14
102531392
107349540
1249
1532
615
862

містять приблизно 22 000 – 23 000 структурних генів 13

12
115169878
133851895
720
1714
331
1068
11 135006516 2168 1914
10 135534747 1391 774
9 141213431 1534 823
8 146364022 1315 702
7 159138663 1882 979
6 171115067 2057 1051
5 180915260 1633 896
4 191154276 1444 767
3 198022430 1926 1077
2 243199373 2368 1329
1 249250621 3511 2076

X-
155270560 1672 837
хромосома

Y-
59373566 429 76
хромосома

Всього 3 079 843 747 36463 21364

 Етапи генної інженерії бактерій

1. Виділення копії потрібного екзон інтрон екзон інтрон екзон

гена серед інших генів організму ДНК

транскрипція
Використання ревертази –
незріла
зворотньої транскриптази про-іРНК
сплайсинг – вирізання
інтронів і зшивання екзонів

зріла іРНК

зріла іРНК
виділення з клітини
і додавання ревертази
комплементарна ДНК без інтронів
 Етапи генної інженерії бактерій

1. Виділення копії потрібного

гена серед інших генів організму

Синтез штучного гена

білок

амінокислотні послідовності
Ген соматостатину синтезований на основі
амінокислотних послідовностей білка
триплети нуклеотидів РНК

послідовність нуклеотидів ДНК

 Етапи генної інженерії бактерій

1. Виділення копії потрібного

гена серед інших генів організму
ДНК
Багатократне розрізання ДНК
рестриктазами для пошуку
рестриктази
потрібного фрагмента

«липкі кінці»
 Етапи генної інженерії бактерій

2. Вбудовування гена в бактеріальний вектор

Вектор – це молекула ДНК, в яку потрібно вбудувати ген
Поширені вектори:
- плазміди – кільцеві ДНК бактерій - бактеріофаги (найчастіше фаг λ)
хромосомна ДНК плазміди
ДНК фага

центральний кластер ДНК

ДНК вектор містить

вбудовану ДНК вбудовування чужорідної ДНК

вектор містить
вектор
вбудовану ДНК
 Етапи генної інженерії бактерій

3. Введення вектора в клітину

Плазмідний вектор додають у пробірку з Фаговий вектор вводять шляхом
культурою кишкової палички Escherichia coli інфікування культури бактерій

тепловий
шок

тимчасові
пори в
мембрані

Процес введення нової ДНК в бактеріальну

клітину називається трансформацією
 Етапи генної інженерії бактерій

4. Відбір клітин, у які ввійшла

чужорідна ДНК переносять
клітини до розчин
Генетичний маркер - фрагмент ДНК, який фільтр містить
фільтра
може бути використаний для ідентифікації зонд
зонд
маркер додають
у фільтр зонд
обробка
клітин для
вбудована ДНК відділення чужорідна
ДНК ДНК
авторадіографія

культура засвічування в
Зонд - фрагмент ДНК, бактерій містить місцях
який комплементарний чужорідну ДНК зв’язаного
до ділянки гена і зонда
зв’язується з ним
 Етапи генної інженерії бактерій

5. Розмноження клітин – продукування білка

 Використання бактерій, отриманих
методами генної інженерії

• ІНСУЛІН – гормон
підшлункової залози, що розрізана плазміда
інсулін
регулює рівень глюкози в
крові
вектор

У 1921 році Бантінг і Бест

вперше виділили
тваринний інсулін
інсулін
 Використання бактерій, отриманих
методами генної інженерії
фрагмент гена
соматотропіну розрізання рестриктазами

гель-елекрофорез
• СОМАТОТРОПІН – очистка від гелю потрібної
гормон гіпофіза, що послідовності
регулює ріст плазміда

ген соматотропіну промотор

трансформація в
кишкову паличку
 Створення синтетичного генома

Вибух нафтової платформи «Deepwater

Horizon» — аварія сталася 20 квітня 2010 року в
80 кілометрах від узбережжя штату Луїзіана в
Мексиканській затоці, і з часом переросла в
техногенну катастрофу спочатку локального,
потім регіонального масштабу, з негативними
наслідками для екосистеми регіону на багато
десятиліть вперед
 Створення синтетичного генома
Синтія – синтетична бактерія
Mycoplasma mycoides jcvi-syn1.0:

- створена на основі
генома
Mycoplasma mycoides

- cинтетичний геном
вбудований в бактерію
Mycoplasma capricolum
Синтія
 Створення синтетичного генома

Синтія – синтетична бактерія

Mycoplasma mycoides jcvi-syn1.0:
Клітинна інженерія
Суть методів клітинної інженерії –
конструювати клітини нового типу
Основні методи сучасної клітинної інженерії:

• метод гібридизації соматичних клітин - поєднання

соматичних клітин різних тканин або організмів для
отримання нових комбінацій ознак

Гібридома – гібрид пухлинних клітин і нормальних клітин лейкоцитів

1 імунізація тварин
2 виділення В-лімфоцитів із селезінки
3 культура клітин мієломи
4 злиття клітин
5 виділення клітинних ліній
6 селекція ліній, що виробляють антитіла
7 розмноження гібридоми
8 отримання антитіл
 Суть методів клітинної інженерії –
конструювати клітини нового типу
Основні методи сучасної клітинної інженерії:

• метод злиття ембріонів на ранніх стадіях - для

створення химерних організмів
Суть методів клітинної інженерії –
конструювати клітини нового типу
Основні методи сучасної клітинної інженерії:

• метод культури клітин (тканин) - виділення й

перенесення клітин з організму на поживні
середовища для отримання культури клітин
 Суть методів клітинної інженерії –
конструювати клітини нового типу
Основні методи сучасної клітинної інженерії:

метод клонування організмів - отримання із застосуванням нестатевих

способів розмноження клонів, що складаються з генетично однорідних
клітин