‫מעבדה מספר ‪ 6‬אופרון הלקטוז‬

‫בניסוי זה רצינו לבודד ולאפיין את הגנים המבטאים את חלבון אופרון הלקטוז‪ ,‬בתא פרוקריוטי‪.‬‬
‫אופרון הלקטוז בנוי מארבעה גנים‪:‬‬
‫‪ – Lac-Z‬מקודד לאנזים בטא‪-‬גל‪ .‬שתפקידו לבקע את מולקולת הלקטוז לגלוקוז וגלקטוז‪.‬‬
‫‪ – Lac-Y‬מקודד לפרמאז‪ .‬משאבת לקטוז על ממבראנת התא‪.‬‬
‫‪ – Lac-A‬מקודד לאנזים טרנסאצטילאז‪ .‬אשר לא ידוע תפקידו באופרון‪.‬‬
‫‪ – Lac-I‬מקודד ל ‪) Repressor‬דכאן( המדכא את פעילות האופרון ומונע ביטוי הגן‪ .‬גן זה הוא קונסטטיבי ונמצא‬
‫מחוץ לאופרון‪.‬‬
‫במעבדה זו קיבלנו ארבעה טיפוסים שונים של אי‪-‬קולי‪ ,‬טיפוס הבר ושלושה מוטנטים‪ ,‬אשר בכל אחד מהם‬
‫פגום גן אחד מהשלושה )‪ (lac-Z\Y\I‬המרכיבים את מערכת אופרון הלקטוז‪.‬‬
‫אופרון הלקטוז הוא גן מושרה‪ ,‬כלומר נכנס לפעילות כתוצאה משינוי מסויים בתנאי הסביבה‪ .‬לכן הכנו בניסוי‬
‫ארבע מצעים שונים‪ ,‬שיהוו סביבות שונות‪ ,‬ובכך נוכל לאפיין את ביטוי הגן ולבודד את המוטציות בכל טיפוס של‬
‫חיידק‪.‬‬

‫האופרון יתבטא ויפעל‬ ‫‪ 120‬מק"ל לקטוז‬

‫‪ 120‬מק"ל מים‬
‫ניצול קודם של הגלוקוז‪ ,‬וביטוי בזאלי של האופרון‬ ‫‪ 120‬מק"ל לקטוז‬
‫‪ 120‬מק"ל גלוקוז‬
‫‪ TMG‬הוא אנאלוג ללקטוז הוא נכנס לתא גם דרך הפרמאז וגם ע"פ מפל‬ ‫‪ 120‬מק"ל ‪TMG‬‬
‫‪ 120‬מק"ל גליצרול הריכוזים‪ .‬לכן האופרון יבוטא בהתאם לריכוזו‪.‬‬
‫מצע ביקורת‪ ,‬אינו משפיע על המערכת‪ ,‬לכן צפוי ביטוי בכמות בזאלית של האופרון‪.‬‬ ‫‪ 120‬מק"ל מים‬
‫‪ 120‬מק"ל גליצרול‬

‫האינדקציה שלנו לביטוי של האופרון בניסוי היא ע"י שימוש ב ‪ ONPG -‬אשר מתפרק ע"י ‪ β- gal‬ל‪ -‬גלקטוז‬
‫ו– ‪OrthoNitroPhenyl‬בעל צבע צהוב‪ .‬לאחר שעה ב ‪ ,370c‬הוצאנו את המבחנות עם מצעי הגידול השונים‬
‫וטיפוסי החיידק השונים‪ .‬הוספנו בופר ‪ -PH 7‬כדי לאפשר לחלבונים להמשיך לפעול גם מחוץ לתא החיידק‪ ,‬ופוצצנו‬
‫את ממבראנת התא‪ .‬לאחר‪ ,‬הוספנו את ה‪ ONPG -‬וחיכינו ‪ 5‬דק' לייצירת ריאקציות‪ ,‬הוספנו סודיום קרבונאט כדי‬
‫להדגיש את הצבע הצהוב והנחנו את המבחנות להשוואה בעין של רמת הצבע‪.‬‬
 ‫דף תוצאות מעבדה ‪ – 6‬אופרון הלקטוז‪ ,‬יש לצרף לדוח!‬
‫מלא את הטבלה לפי התוצאות בכל אחד מהטיפולים‬
‫דרג את הצבע הצהוב לפי עוצמתו‪:‬‬
‫שקוף‬ ‫)‪(-‬‬
‫)‪ (+‬צהוב חלש‬
‫)‪ (++‬צהוב בינוני‬
‫)‪ (+++‬צהוב חזק‬

‫‪.A=W.T‬‬ ‫‪B=-Z‬‬ ‫‪C=-I‬‬ ‫‪D=-Y‬‬

‫‪ 120‬מק"ל לקטוז ‪ 120‬מק"ל מים‬ ‫‪+++‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪+++‬‬ ‫‪+‬‬
‫‪ 120‬מק"ל לקטוז ‪ 120‬מק"ל גלוקוז‬ ‫‪+‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪+++‬‬ ‫‪+‬‬
‫‪ 120‬מק"ל ‪ TMG 120‬מק"ל גליצרול‬ ‫‪+++‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪+++‬‬ ‫‪++‬‬
‫‪ 120‬מק"ל מים ‪ 120‬מק"ל גליצרול‬ ‫‪+‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪+++‬‬ ‫‪+‬‬
‫גנוטיפ‬

‫שאלות בעקבות המעבדה‪:‬‬

‫הסבר לתוצאות‪:‬‬ ‫‪.1‬‬
‫מניתוח הטבלא ניתן לזהות בברור שני טיפוסי מוטנטים‪.‬‬
‫‪ – C‬הוא המוטנט בגן ‪ .Lac-I‬גן זה מקודד לרפרסור‪ ,‬הדכאן‪ ,‬אשר נקשר לאופרטור‪ .‬כתוצאה מכך שהדכאן לא‬
‫נמצא הרנ"א‪-‬פולימראז יכול לתעתק כל הזמן‪ .‬לכן יש ביטוי‪ ,‬קוסטיטיבי של הגנים באופרון‪.‬‬
‫‪ – B‬הוא המוטנט בגן ‪ .Lac-Z‬כיווון שאין בתמיסה ‪ ,β- gal‬לא היה פירוק של ‪ ONPG‬ל‪OrthoNitroPhenyl -‬‬
‫בעל הצבע הצהוב‪.‬‬
‫‪ – D‬זה הוא המוטנט בגן ‪ .Lac-Y‬ביטוי של גן זה יוצר פרמאז‪ ,‬משאבת לקטוז‪ .‬בהעדרו יהיה ביטוי בזאלי של‬
‫האופרון כיוון שרק מולק' מעטות ייכנסו לתא בשל "כשלים" מכאניים של הרפרסור‪ .‬במקרה זה כאשר הכנסנו‬
‫לתמיסה ‪ ,TMG‬מולקולה שיכולה להיכנס לתא ללא הפרמאז התקבל ביטוי של האופרון ברמה בינונית‪ ,‬המשקפת‬
‫את כמות ה ‪ TMG‬שהכנסנו לתמיסה )‪ TMG‬נכנס ע"פ מפל ריכוזים(‪.‬‬
‫‪ – A‬טיפוס הבר‪ .‬ניתן לראות כי בזן זה ביטוי הצבע מבטא ביחס ישר את כמות ה‪ ONPG -‬המפורקת בתמיסה‪,‬‬
‫בהתאם לכמות ה ‪ β- gal -‬שתועתק במהלך יצירת החלבון‪ .‬טיפוס הבר מראה כי אופרון הלקטוז הוא גן מושרה‪,‬‬
‫ונכנס לפעילות לפי תנאי הסביבה‪.‬‬

‫מהו דיכוי של פעילות אופרון הלקטוז על ידי גלוקוז‬ ‫‪.2‬‬

‫) ‪ (glucose repression‬תאר בקצרה את המנגנון‪ .‬העזר בספרי הלימוד או באתרים מהימנים באינטרנט !‬
‫ציין את המקור שבו נעזרת במפורט‪.‬‬

‫‪.3‬לאיזה תוצאה תצפה אם היה מתווסף לניסוי זן עם שתי מוטציות אחת ב ‪ Z‬והשניה ב ‪ I‬שגודל במצע‬
‫לגליצרול בלבד‪ .‬הסבר‪.‬‬