Ivan Belir M1 13579

ELISA je enzimska proba sa vrstom fazom koja

se bazira na primeni antitela ili antigena
obeleenih enzimom (peroksidaza ,alkalna
fosfataza).
Enzim moe biti vezan za :
Specifino antivirusno antitelo
Antihumano imunoglobulinsko antitelo
Antigen, koji se nalaze nerastvorni, adsorbovani
za zidove epruveta, odnosno u vrstoj fazi.

Sastoji se od dve faze:

1) Imunska faza - dolazi do formiranja
kompleksa antigen-antitelo obeleeno
enzimom.
2) Hemijska faza - dodaje se odgovarajui
supstrat ,pri emu dolazi do hemijske
reakcije enzim-supstrat.
Koliinu vezanog enzima odreujemo
kolorimetrijski,merenjem koliine
produkta nastalog razgradnjom supstrata.

Koriste se u dijagnostici virusnih infekcija,od

posebnog su znaaja u dijagnostici oboljenja
izazvanih virusima koji se ne mogu kultivisati
(HBV,rotavirus)
ELISA metodom mogu se odrediti pojedine klase
imunoglobulina (IgM,IgG) ,to nam koristi za
brzo postavljanje seroloke dijagnoze akutnih
virusnih infekcija iz jednog uzorka seruma.

Elisa testovi su automatizovani, visoko specifini i osetljivi

i iskljuuju subjektivnost pri oitavanju rezultata (za
razliku od IF metode).
Dve osnovne varijante ELISA tehnike su:
1. Kada se poznati antigen nalazi u vrstoj fazi (indirektna
ELISA, inhibiciona ELISA )
2. Kada se poznato antitelo nalazi u vrstoj fazi (direktna
sendvi ELISA, kompetitivna ELISA, viestepena
sendvi ELISA).

INDIREKTNA ELISA
Koristi se za detekciju antivirusnih antitela. Poznati virusni
antigen se nalazi u vrstoj fazi. U bazeni unosimo
ispitivani serum. Ukoliko su prisutna antitela iz seruma
e se vezati za antigen u vrstoj fazi i formirati kompleks
antigen-antitelo. Vrimo ispiranje preparata.
Zatim dodajemo antihumani imunoglobulin obeleen
enzimom (konjugat). On se vezuje za specifino antitelo
iz prethodno formiranog kompleksa. Dodavanjem
supstrata dolazi do reakcije enzim-supstrat I degradacije
supstrata.

INHIBICIONA ELISA
Koristi se za detekciju virusnih antigena iz bolesnikog
materijala. Poznati virusni antigen se nalazi u vrstoj
fazi. Uzorku dodajemo specifino antitelo obeleeno
enzimom, za koje se vezuje virusni antigen iz ispitivanog
uzorka (zbog veeg afiniteta za vezivanje od antigena u
vrstoj fazi).

DIREKTNA SENDVI ELISA

Virusni antigen, koji se detektuje u ispitivanom uzorku se
nalazi u sendviu izmeu poznatog specifinog
antitela u vrstoj fazi i specifinog antitela obeleenog
enzimom.
Dodavanjem supstrata dolazi do njegove enzimske
degradacije i promene boje.

KOMPETITIVNA ELISA
Koristi se za detekciju virusnih antigena u ispitivanom
uzorku koja se vezuje za poznato specifino antivirusno
antitelo koje se nalazi u vrstoj fazi .Dodaje se antigen
obeleen enzimom, i on se ispiranjem odstrani zbog ega
je izostanak boje pozitivna reakcija.

VIESTEPENA SENDVI ELISA

Koristi se za detekciju IgM antitela
u ispitivanom serumu.Ona se
vezuju u kompleks sa
antihumanim IgM antitelom u
vrstoj fazi.
Dodaje se poznati virusni antigen i
specifino antitelo obeleeno
enzimom ,koji se pridruuju
kompleksu.
Dodavanjem supstrata dolazi do
njegove degradacije.

HVALA NA PANjI !