ANTIGEN-ANTITELO

REAKCIJE
 Ag-At reakcije (opte osobine)

Imunoaglutinacija

Imunoprecipitacija

Ag-At reakcije sa obeleenim reagensima

 Ag-At reakcije su laboratorijske reakcije izmeu antigena i
odgovarajuih specifinih antitela

Ispituje se prisustvo ili antigena (korienjem poznatog antitela) ili

antitela (korienjem poznatog antigena) u uzorku (npr. serumu)

Tradicionalno se zovu i seroloke reakcije

Mogu da budu: Rezultat:

1. Kvalitativne POZITIVAN
NEGATIVAN

2. Kvantitativne Ag - KONCENTRACIJA (npr. 2 mg/ml)

At - TITAR (npr. 1/80)

TITAR je mera koliine specifinih antitela i predstavlja vrednost

(recipronu) najveeg razblaenja seruma koji daje pozitivnu reakciju
IMUNOAGLUTINACIJA
IMUNOAGLUTINACIJA je reakcija izmeu korpuskularnog
(nerastvorljivog) antigena i odgovarajuih specifinih antitela

Antigen je najee na povrini elije (npr. bakterije) ili je

solubilan molekul vezan za inertnu nesolubilnu esticu (nosa)

Rezultat reakcije je aglutinat, vidljiva struktura nastala

zgomilavanjem tj. aglutinacijom estica

Optimalno stvaranje aglutinata javlja se u zoni ostvarivanja

ekvivalentnog odnosa izmeu antitela i antigena
 Primena (Primer)

Krajnja identifikacija
Detekcija Ag bakterija
DIREKTNA (enterobakterije)

Detekcija At BAB test

(brucele)

IMUNOAGLUTINACIJA
Detekcija At Lateks RF test
(Ag vezan za nosa) (reumatoidni
faktor)
INDIREKTNA
(pasivna)

Detekcija Ag HBsAg test

(At vezano za nosa) (hepatitis B virus)
IMUNOPRECIPITACIJA
IMUNOPRECIPITACIJA je reakcija izmeu solubilnog
(rastvorljivog) antigena i odgovarajuih specifinih antitela

Antigen je najee neki produkt mikroorganizma (npr. toksin) ili

protein plazme i drugih telesnih tenosti (imunoglobulini, komponente
komlementa itd.)

Rezultat reakcije je precipitat (talog), tj. dolazi do izdvajanja

antigen-antitelo komkpleksa u vidu taloga

Do formiranja precipitata dolazi u zoni ostvarivanja ekvivalentnog

(optimalnog) odnosa koncentracija antitela i antigena
Metodi imunoprecipitacije mogu da se odigravaju u:

tenoj sredini
slobodnom difuzijom (talog se formira posle nekoliko minuta)

poluvrstoj sredini (gelu)

slobodnom difuzijom (talog se formira posle vie dana)

pomou elektrine struje (talog se formira posle nekoliko sati)

 PRIMER

RING test Askolijeva reakcija

(Kvalitativna) (antraks)

U TENOJ SREDINI

Nefelometrija odreivanje
(Kvantitativna) koncentracije
proteina u serumu
IMUNOPRECIPITACIJA (Ig, komponente C)

Dvostruka
imunodifuzija Elekova proba
(difterija)
(Kvalitativna)
U POLUVRSTOJ SREDINI
(GELU)
odreivanje
RID test koncentracije
(Kvantitativna) proteina u serumu
(Ig, komponente C)
Interfacijalni (interfazni) test prstena RING test
(princip)
Nefelometrija
(princip)
 Jednostruka radijalna imunodifuzija RID test
(princip)

2 At u gelu

3 1 Ag u rupice:

1 standard poznate koncentracije

RID 2 standard poznate koncentracije

IgG 3 standard poznate koncentracije

4 uzorak pacijenta
4 5 5 uzorak pacijenta
 Jednostruka radijalna imunodifuzija RID test
(princip)

D2 (mm2)
3

4 5 Ag koncentracija (g/l)
 ANTIGEN-ANTITELO
REAKCIJE SA OBELEENIM
REAGENSIMA
 ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE
SA OBELEENIM ANTITELIMA

M M - marker
At

Fc
Fab

Fab

ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) - marker ENZIM

IMUNOFLUORESCENCIJA (IF) - marker FLUORESCENTNA BOJA

RADIOIMMUNO ASSAY (RIA) - marker RADIOAKTIVNI IZOTOP

 Enzimski imuno-test
(ELISA)

Koristi se za detekciju antigena u tenim uzorcima (npr. serumu) ili

antitela (tipino u serumu)

Marker je enzim, a obeleeno je primarno At (specifino za antigen) ili

sekundarno At (anti-Ig antitelo)

Bazira se na principu promene boje supstrata pod dejstvom enzima

Signal se detektuje kolorimetrijski (pomou spektrofotometra)

Moe da bude kvalitativna ili kvantitativna

Obavlja se u ploama za mikrotitraciju (ploama sa 96 rupica)

 ELISA
(ploa sa pozitivnim uzorcima primer 1)
 ELISA (detekcija Ag u tenom uzorku - SANDWICH ELISA)

uzorak
(serum)
Ag

neobeleena
Ag-specifina
At
ELISA (detekcija Ag u tenom uzorku - SANDWICH ELISA)
12

Ispiranje
Inkubacija
ELISA (detekcija Ag u tenom uzorku - SANDWICH ELISA)
12
obeleena
Ag-specifina
At
E E E
6 E E

Ispiranje
Inkubacija
ELISA (detekcija Ag u tenom uzorku - SANDWICH ELISA)
12
dodavanje
supstrata

6 E E

Kolorimetrijska detekcija
 ELISA detekcija antitela
(detekcija At u serumu pacijenta)

Ispitivani serum

Antigen kojim je
obloena ploa
 ELISA detekcija antitela
(detekcija At u serumu pacijenta)
12

Ispiranje
Inkubacija
 ELISA detekcija antitela
(detekcija At u serumu pacijenta)

Obeleena
Ig-specifina At
E
E
E

E
 ELISA detekcija antitela
(detekcija At u serumu pacijenta)
12

E
E
6 E

Inkubacija
 ELISA detekcija antitela
(detekcija At u serumu pacijenta)

E
E

E E

Ispiranje
12
ELISA detekcija antitela
(detekcija At u serumu pacijenta)

6
E

E E

Kolorimetrijska detekcija
 Imunofluorescencija
(IF)

Koristi se za detekciju antigena u vrstim uzorcima (npr. na ili u

eliji/tkivu) ili antitela (tipino u serumu)

Marker je fluorescentna boja (fluorohrom), a obeleeno je

primarno At (specifino za antigen) ili sekundarno At (anti-Ig antitelo)

Bazira se na principu emitovanja boje pod dejstvom UV svetla

Signal se detektuje pomou fluorescentnog mikroskopa

Moe da bude samo kvalitativna i eventualno semi-kvantitativna

Obavlja se obino na mikroskopskim ploicama

 Detekcija Ag u/na elijama i tkivima

DIREKTNA (DIF) specifinost

(obeleeno primarno At)

IMUNOFLUORESCENCIJA
Detekcija Ag u/na elijama i tkivima

INDIREKTNA (IIF)
(obeleeno sekundarno At) osetljivost

Detekcija At u serumu
 Imunofluorescencija
(primer 1)

Helicobacter pylori Borrelia burgdorferi

Imunofluorescencija
(primer 3)

Glomerulonefritis
 DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija Ag u vrstom uzorku)

F
F obeleena
F F
Ag-specifina
At

fiksirani
uzorak
 DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija Ag u vrstom uzorku)
12

F
F
F F
6

Ispiranje
Inkubacija
DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija Ag u vrstom uzorku)

Ekscitacija

F F

Fluorescencija
 INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija Ag u vrstom uzorku)

neobeleena
Ag-specifina
At

fiksirani
uzorak
 INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija Ag u vrstom uzorku)

Ispiranje
Inkubacija
 INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija Ag u vrstom uzorku)

Obeleena
F
F Ig-specifina At
F

Inkubacija
 INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija Ag u vrstom uzorku)
12

F
F
6 F

Inkubacija
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija Ag u vrstom uzorku)

F
F

F F

Ispiranje
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija Ag u vrstom uzorku)

F Ekscitacija
Fluorescencija

F F
 INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija At u serumu pacijenta)

Ispitivani serum

fiksirani
antigen
 INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija At u serumu pacijenta)

Ispiranje
Inkubacija
 INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija At u serumu pacijenta)

Obeleena
F
F Ig-specifina At
F

Inkubacija
 INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija At u serumu pacijenta)
12

F
F
6 F

Inkubacija
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija At u serumu pacijenta)

F
F

F F

Ispiranje
INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA
(detekcija At u serumu pacijenta)

F Ekscitacija
Fluorescencija

F F
Protoni citofluorimetar
FACS
 Protona citofluorimetrija

Smea elija obeleenih fluorescentnim antitelima

Zelena foto-
Mlaz tenosti koji multiplikatorska
nosi fluorescentno cev (PMT)
obeleene elije
Crvena PMT

Granuliranost

Veliina
 Protona citofluorimetrija

Smea elija obeleenih fluorescentnim antitelima

Zelena foto-
Mlaz tenosti koji multiplikatorska
nosi fluorescentno cev (PMT)
obeleene elije
Crvena PMT

Granuliranost

Veliina
Histogramski prikaz

Dot plot prikaz

 Protona citofluorimetrija (klinika primena)

Imunofenotipizacija (identifikacija i kvantitiranje populacija i subpopulacija

limfocita)

Karakterizacija elija kod limfoproliferativnih bolesti, tumora i

imunodeficijencija

Odreivanje produkcije reaktivnih oblika kiseonika i azota

Odreivanje sadraja DNK (elijski ciklus)

 Radio-imunotest
(RIA)

Koristi se za detekciju antigena u tenim uzorcima (npr. serumu) ili

antitela (tipino u serumu)

Marker je radioaktivni izotop (npr. 125I), a obeleen je ili antigen ili

antitelo

Bazira se na principu radioaktivnosti

Signal se detektuje pomou brojaa (broj raspada)

Vrlo osetljiv kvantitativan test

Problem zbog rada sa radioaktivnou i odlaganja otpada