UNIVERZITET U

B E O G R A D U Katedra za mikrobiologiju
MEDICINSKI
F A K U L T E T

Bakteriološka dijagnostika infekcija

izazvanih bakterijama rodova
Streptococcus i Enterococcus
 Rod Streptococcus

Gram pozitivne koke

raspoređene u lancima i/ili parovima
nepokretne
asporogene
nutritivni izbirači (krvni agar)
fakultativno anaerobne
neke vrste su deo fiziološke
mikroflore
 Klasifikacija streptokoka

Odnos prema kiseoniku

Aerobi Anaerobi
Fakultativni anaerobi
Peptostreptococcus spp.
Rast na krvnom agaru

α hemoliza β hemoliza γ hemoliza

nekompletna hemoliza kompletna hemoliza odsustvo hemolize

Grupisanje po Lensfildovoj
(na osnovu grupno specifičnog C
ugljenohidratnog Ag)

S.viridans (oralne) Grupe streptokoka A–U Enterococcus spp.

S. pneumoniae (>20 grupa) Grupa D streptokoka
(nemaju grupno specifični Ag)
 Podela streptokoka prema
izgledu hemolize
Beta hemolitične streptokoke (BHS): prozračna
zona hemolize (potpuna razgradnja eritrocita na
krvnom agaru)

Alfa-hemolitične: zelena zona hemolize (nepotpuna

razgradnja eritrocita, hemoglobin do biliverdina)

Gama-hemolitične anhemolitične
(odsustvo hemolize)
Tipovi hemolize

Streptococcus pneumoniae
viridans streptokoke

Streptococcus pyogenes
Streptococcus agalactiae

Enterococcus spp. – najčešće

nema hemolizu
 Antigenske osobine streptokoka
(grupno specifični C polisaharid)

• Streptokoke se klasifikuju u 21 grupu (A-K i H-V)

• U jednoj grupi može biti više od jedne vrste
• Klasifikacija je bazirana na građi C- ugljenohidratnog antigena u
ćelijskom zidu
– Streptokoke koje su klasifikovane u grupe (uglavnom BHS)
• A, B i D (češći izolati)
• C, G i F (ređi izolati)

Streptokoke koje ne poseduju C-Ag i nisu grupisane

• S. pneumoniae (respiratorne infekcije i meningitis)
• viridans streptokoke (npr. S. mutans - kariogeni potencijal)
 Beta hemolitične streptokoke

Podela BHS prema građi grupno specifičnog C

polisaharida

Streptococcus spp.

Klasifikacija prema R. Lancefield

Grupa A Grupa B Druge grupe

Grupa C Grupa D
S. pyogenes S. agalactiae (E-U)

Enterococcus
spp.
 Streptococcus pyogenes
(BHS grupe A)

Oboljenja:

1. piogena oboljenja

2. toksemična oboljenja

3. poststreptokokne, nesupurativne sekvele

 Infekcije gornjih delova respiratornog trakta

Najčešća infekcija:
tonzilofaringitis Uvećane,
(angina) otečene
tonzile -
tonzilitis

Streptokok grupe A je
najčešća bakterijska
vrsta koja izaziva
anginu Zapaljenje
guše –
faringitis
 Infekcije kože

Impetigo
Erizipel Celulitis
 Nekrotizirajući fascitis
Teške infekcije
izazvane
streptokokom
grupe A

Može se komplikovati
toksičnim šok
sindromom, ako soj
produkuje toksin
Scarlatina (šarlah) – toksemično oboljenje
 Scarlatina (šarlah)

Početak bolesti
Kraj bolesti
 Reumatska groznica
(poststreptokokne sekvele)
 Uzorci za mikrobiološku dijagnozu oboljenja
koja izaziva S. pyogenes

Piogena Toksemična
Sekvele
oboljenja oboljenja

• brisevi sluznica i • retko se • krv za serološke

kože (bris grla) dijagnostikuju analize (ASO test)
• bioptati potvrdom dokazivanje At na
• punktati toksina u uzorku egzoprodukt
bakterije
• aspirati (streptolizin)
• krv za hemokulturu
 Direktno dokazivanje antigena S. pyogenes u
uzorku pacijenta
Brza metoda, bez izolacije

Detekcija grupno specifičnog Ag S. pyogenes u brisu grla

Streptococcus agalactiae
(BHS grupe B)

Neonatalne infekcije:
• neonatalna sepsa
• neonatalna pneumonija
• neonatalni meningitis

Ostale infekcije:
• urinarne
• infekcije rana
• bakterijemija
Infekcije češće kod trudnica, starijih ljudi i imunokompromitovanih pacijenata
 Obavezni „skrining“ na S. agalactiae u
poslednjem trimestru trudnoće

Uveden u razvijenim zemljama, u cilju identifikacije

trudnica koje imaju vaginalno-rektalnu kolonizaciju
grupom B streptokoka

Uzimanje vaginalno-rektalnog brisa svim

trudnicama u periodu od 35.-37. nedelje
trudnoće

Kolonizovanim ženama se parenteralno

daje antibiotik tokom porođaja
(intrapartalna antibiotska profilaksa)
Uzorci za mikrobiološku dijagnozu infekcija koje
izaziva Streptococcus agalactiae
(BHS grupe B)

• bris sluznica (vaginalni, cervikalni, rektalni, uretralni,

grla, nosa)
• urin
• krv
• likvor
• punktati, aspirati
 Streptococcus spp. – direktni preparat

Ima smisla praviti preparat samo iz materijala koji potiču iz sterilnih

regija, ne iz kolonizovanih regija (npr. brisa grla)
β hemoliza na krvnom agaru

S. pyogenes

S. agalactiae
 Streptococcus spp. - preparat sa kulture

Gram pozitivne
koke,
raspoređene u
lancima

Mikroskopske karakteristike S. pyogenes, S. agalactiae i većine

drugih streptokoka su iste
Algoritam za identifikaciju beta hemolitičnih
streptokoka

Beta hemolitičke kolonije na KA

bacitracin

osetljiv rezistentan

Streptococcus pyogenes CAMP test ili hidroliza hipurata

(grupa A)

Streptococcus agalactiae Neke ređe vrste streptokoka

(grupa B)
Bacitracinski test

S. pyogenes - osetljiv
ostale β-hemolitične
streptokoke - rezistentne
Dodatni potvrdni test za S. pyogenes
Pyr test

negativan pozitivan

S. pyogenes - pozitivan test

ostale β-hemolitične streptokoke - negativan test
Test hidrolize hipurata CAMP test

pozitivan negativan

S. agalactiae - pozitivni testovi

ostale β-hemolitične streptokoke - negativni testovi
 Potvrda identifikacije streptokoka koje
poseduju grupno specifični antigen
Streptokokni antigen se detektuje korišćenjem seruma
koji sadrži specifična antitela - imunoaglutinacija

Grupa A streptokoka (pozitivno)

 Poststreptokokne sekvele:
serološka dijagnostika - ASO test

+ hemoliza

streptolizin O eritrocit

+ + nema hemolize

anti-streptolizin O
specifična antitela

ASO (anti-streptolizin O) test zasniva se na principu

neutralizacije toksina (streptolizina O)
 Poststreptokokne sekvele:
serološka dijagnostika - ASO test
Titar
1/320 1/1280
1/5 1/10 1/20 1/40 1/80 1/160 1/640 1/2560 Titar antitela
Kotrola
Serum + - u serumu
pacijenta: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 pacijenta:
1 A 10

2 B 80

3 C 1280

4 D 40

5 E <5

6 F <5

7 G 320

8 H 20

= eritrocitno dugme = hemoliza eritrocita

 Alfa hemolitične streptokoke

• Streptococcus pneumoniae

• Oralne streptokoke (viridans grupa)

S. mutans, S. salivarius, S. mitis, S. sanguis
 Streptococcus pneumoniae

• α hemolitični streptokok

Oboljenja:
• meningitis
• otitis media
• sinuzitis
• pneumonija

Asimptomatska kolonizacija
Uzorci za bakteriološku dijagnostiku oboljenja
koja izaziva Streptococcus pneumoniae

• bris grla
• sputum
• bronhoalveolarni lavat
• aspirati i punktati
• likvor
• Krv
Direktni preparat likvora pacijenta sa gnojnim
menigitisom i sputuma pacijenta sa
pneumonijom
 Direktna detekcija antigena S. pneumoniae

Direktna imunofluorescencija likvora: detekcija pneumokoknih

Streptococcus pneumoniae (koke u parovima) Ag u urinu
Direktna detekcija species specifičnog gena – PCR
metoda
Uzorci: likvor, krv
Gel elektroforeza u agaroznom gelu
detekcija lytA gena kod S. pneumoniae
1 2 3 4 5 6
Traka 1 – DNK standard
Traka 2 – negativna kontrola
Traka 3 – pozitivna kontrola

200bp
Rezultati PCR metode za uzorke 4, 5, 6?

Trake 4 i 5 – pozitivni uzorci

Traka 6 – negativan uzorak
 Oralne streptokoke
(viridans grupa)
• α hemolitične streptokoke
• deo fiziološke mikroflore usne duplje i gornjih
respiratornih puteva

Oportunističke infekcije:
• započinju stvaranje dentalnog
plaka (S. mutans)
• bakterijski endokarditis
 Mikroskopske karakteristike alfa
hemolitičkih streptokoka

Streptococcus pneumoniae
• diplokoke, oblika lancete
• polisaharidna kapsula (serotipizacija)

Preparat pneumokoka sa kulture

Oralne streptokoke:
Gram pozitivne koke, raspoređene u kraćim ili dužim lancima
 Alfa hemoliza na krvnom agaru

S. pneumoniae

Viridans streptokoke
na krvnom agaru
 Algoritam identifikacije alfa hemolitičkih
Identification Schema
streptokoka
Alfa hemoliza na KA
Razlikovanje S. pneumoniae
od Schema
viridanstostreptokoka
differentiate S. Optohinski test
pneumoniae from other a-
hemolytic streptococci osetljiv
rezistentan
Streptococcus pneumoniae
Hidroliza eskulina

6,5% NaCl/PYR Viridans

Viridans streptokoke
streptokoke

Enterococcus spp. Grupa D streptokoka

 Optohinski test

S. pneumoniae - osetljiv
ostale α-hemolitične
streptokoke - rezistentne

Viridans Streptococcus
streptokoke pneumoniae
 Rod Enterococcus
• vrste od medicinskog značaja - E. faecalis i E. faecium
• lako stvaraju biofilm na kateterima i lako razvijaju
rezistenciju na antibiotike
• infekcije urinarnog trakta, infekcije rana,
endokarditis, sepsa ...
značaj u bolničkoj sredini
 Uzorci za bakteriološku dijagnostiku
oboljenja koja izazivaju enterokoke

• urin
• bris rane
• krv
• ...
Enterococcus spp. - kolonije na krvnom
agaru
Enterococcus spp. - preparat sa kulture
 Algoritam za identifikaciju enterokoka
Identification Schema
Nema hemolize na KA

Razlikovanje enterokoka
od drugih nehemolitičkih Hidroliza eskulina
streptokoka +

6,5% NaCl Nehemolitičke streptokoke

+ -

Enterococcus spp. Grupa D streptokoka

Schema to differentiate Enterococcus and Group D
streptococci from other nonhemolytic streptococci
Test hidrolize eskulina u prisustvu visokih
koncentracija soli

Enterococcus spp. -
pozitivan (crna boja)
streptokoke - negativan
(žuta boja)

VRE-vankomicin rezistentan enterokok

Bolnički patogen
Identifikacija streptokoka i enterokoka

Gram+ koke raspoređene u lancima ili parovima

Katalaza -

bakterijska vrsta hemoliza test

S. pyogenes - BHS grupa A β Bacitracin S, PYR +

S. agalactiae - BHS grupa B β Bacitracin R, hipurat +

Enterococcus spp. γ Hidroliza eskulina u

prisustvu žuči +, PYR +

S. pneumoniae α Optohin S

Viridans grupa streptokoka α Optohin R

 Gram pozitivne koke

katalaza

Rast na krvnom agaru

Beta Alfa
hemoliza hemoliza

bacitracin optohin

osetljiv rezistentan osetljiv rezistentan

Druge BHS Druge alfa hemolitičke

streptokoke