ENZIMI

Istorijski razvoj

Objanjenje enzimskih procesa - kraj XVIII veka.

Fermentatio - burno vrenje
Fermentacija- katalizovana reakcija kojoj podlee bioloki
materijal.
Ferment- pokreta promena unutar ivog organizma.
Rastvaranje skroba pomou sokova proklijalog jema i
alkoholno vrenje ( Lavoisier , 1798)
C6H12 O6 = 2 C2H5OH + 2CO2 (Gay -Lussac, 1810)
Hidroliza skroba u eer delovanjem pljuvake.
Diastaza - razlae skrob (Payen i Persoz, 1833)
Pepsin - izolovan iz eluca praseta( Schwan, l836)
Lipaza iz pankreasa ( Claude Bernard), invertaza iz kvasca
(Berthelot) i tripsin iz pankreasa (Kuhne) druga polovina XIX
veka.

Jakob Berzelius : fermentacija je jedan vid katalize .

Kuhne : svi rastvorljivi fermenti su enzimi.
Ostwald : katalizator je supstancija, koja menja brzinu
izvesne reakcije i ne menja konanu ravnoteu.
Schmit - hipoteza odreivanja aktivnosti enzima u krvi.
Wohlegemut - metoda za odreivanje aktivnosti
dijastaze (amilaze) u krvi i u urinu.
Sorenseon - aktivnost enzima zavisi od koncentracije
vodonikovih jona.
Michaelis I Menten-ova - teorija o formiranju
intermedijernog jedinjenja izmeu enzima i supstrata.
Sumner - ureaza u kristalnom obliku.

Enzimi - biokatalizatori
Energetski profil nekatalizovane i katalizovane reakcije

Efikasnost -(pr. enzim

Energetski
nivoi
aktivnog
stanja

katalaza katalizuje degradaciju

H2O2 brzinom od 5 x 10 6
molekula/min.)
Specifinost
Specifinost dejstva
Glu

Ea1=50 KJ.mol -1
Ea8,48,4 KJ .
mol -1

Inicijalno
stanje
Krajnje stanje

Glutamin
GABA
Ketoglutarna kiselina

Ea1=75 KJ.mol -1

H2 O2
G

Reakcija:H2O+ O2

Specifinost prema
supstratu :visoka sepecifinost

(ureaza) i niska specifinost

(organski estri fosforne kiseline)
Podloni kontroli i regulaciji.

u odsustvu katalizatora

u prisustvu platine kao neorganskog katalizatora

u prisustvu enzima katalaze

ENZIMI
ENZIMI
Protein
Protein enzimi
enzimi
Hidrolizom
Hidrolizom daju
daju samo
samo
aminokiseline
aminokiseline

Proteid
Proteid enzimi
enzimi
Proteinski
Proteinski
deo
deo

Neproteinski
Neproteinski
deo
deo

Apoenzim
Apoenzim +
+

koenzim
koenzim

enzim
enzim
Koenzim
Koenzimkovalentno
kovalentnoiipermanentno
permanentnovezan
vezanza
zaapoenzim
apoenzim=
=prostetina
prostetinagrupa
grupa
Koenzim
Koenzimpovremeno
povremenovezan
vezanza
zaapoenzim
apoenzim=
=kosupstrat.
kosupstrat.

Hemijska ravnotea i
hemijska energija
A+B

E+S

k1
k2
k1
k2

C+D

K- konstanta hemijske ravnotee

ES

K>1
reakcija spontana
reverzibilna
egzergona

K = [C]x[D] / [A]x[B]

k3

E+P

K<1
reakcija nije spontana
endergona

K1
reakcija

Energetska barijera
Energija aktivacije
Termodinamika ravnotea
(zatvoreni sistemi ; fizikohemijski sistemi)
Dinamika ravnotea (otvoreni
sistemi -ivi sistemi)

Mehanizam enzimske
katalize
Aktivno mesto
supstrat

Vezivanje supstrata za aktivno mesto emzima

- kontaktne aminokiseline odreuju specifinost enzima reagujui sa hemijskim
grupama supstrata.
- katalitike aminokiseline deluju na odreenu hemijsku vezu u supstratu.
- aminokiseline koje odravaju trodimenzionalnu strukturu proteina.

Kinetika enzimskih reakcija

Vremenska kriva enzimske
reakcije
y
V

(mol)
x-vreme (min)
y- koliina nastalog produkta (mol)

Vo
t1

Uticaj pH na aktivnost
enzima
Aktivnost
enzima

pepsin

Alkalna

Najvei
broj
enzima

fosfataza i
arginaza

10
pH

Uticaj temperature na
aktivnost enzima
Aktivnost
enzima

10

20

30 40
50
Temperatura ( 0C)

60

Kinetika enzimskih reakcija;

uticaj koncentracije
supstrata
Vmax

V(mol/min)

1/2 Vmax

S (mmol/l)

Lineveawer-Burkov dijagram

za izraunavanje Michaelisove konstante

(Km) i maksimalne brzine enzimske
reakcije (Vmax)
1/V (nmol/min) -1
Nagib =Km/Vmax

1/Vmax
-1/Km
1/S (mmol/l) -1

Reverzibilna inhibicija enzima

kompetitivna
1/V (nmol/min) -1
Sa inhibitorom

Inhibicija enzima

ireverzibilna reverzibilna

Bez inhibitora

-1/Km

1/Vmax

1/S (mmol/l) -1

kompetitivna
nekompetitivna
akompetitivna

Reverzibilna inhibicij a enzima

nekompetitivna
1/V (nmol/min) -1
Sa inhibitorom

Bez inhibitora
-1/Km

1/Vmax

1/S (mmol/l) -1

Povreda krvnog suda

Plazmini faktori

Razgoliena
kolagena vlakna
ADP

Tkivni faktori

Kontaktni faktor

Dezintegracija Tr

akt. XII

Neak. XI

Adhezija trombocita
Reverzibilna agregacija
trombocita

Neak. XII

Trombocitni faktori
Trombocitni
tromboplastin

akt. XI

Neak.IX
Ak.VIII

Trombin.glukoza

akt.IX

Plazmin tromboplastin

Ca ++ I Ak.V

tromboplastin tkiva
Neak.VII u Ak.VII
Neak. X u ak. X

monomer

Ca ++ +X+V

tromboplastin tkiva

Ireverzibilna
agregacija trombocita
fibrinogen
Pojaana glikoliza
aktivnih trombocita

Aktivni tromboplastin krvi III

Trombin II

ATP

Retrakcija
koaguluma

Definitivan
tromb

ATP-aza
trombostein
ADP

F1 T
Protrombinaza

Ca ++
Ak.VII

energija

fibrinoliza

Ca ++

Akativni

Fibrin

Fibrin polimeri

nek. VIII

Nekativni

Protrombin II

Aktivacija enzima
AKTIVATORI

INHIBITORI

EFEKTORI ENZIMA
(LIGANDI)
Joni magnezijuma, mangana ,
kalcijuma

KATJONI

kreatin fosfokinazu

Joni kalcijuma

lipazu

Joni mangana, nikla i

kobalta
arginazu
Joni cinka
alkoholdehidrogenazu,
karboksipeptidazu i glutamat dehidrogen

AKTIVATORI
ANJONI

Joni gvoa sukcinat dehidrogenazu i

aldehid oksidazu
Joni hlora

amilazu

Neorganski fosfat, ATP,ADP,GTP,GDP

Aktivacija enzima
ENZIM
AKTIVAN OBLIK

NEAKTIVAN OBLIK
(PROENZIM)

Pepsinogen

Tripsinogen

H+
H

+ aktivirani pepsin

Pepsin + peptid

ENETROKINAZA

Tripsin +heksapeptid

AKTIVIRANI TRIPSIN

Protrombin

Aktivna trombokinaza krvi (tromboplastin)

Trombin

Povreda krvnog suda

Plazmini faktori

Razgoliena
kolagena vlakna
ADP

Tkivni faktori

Kontaktni faktor

Dezintegracija Tr

akt. XII

Neak. XI

Adhezija trombocita
Reverzibilna agregacija
trombocita

Neak. XII

Trombocitni faktori
Trombocitni
tromboplastin

akt. XI

Neak.IX
Ak.VIII

Trombin.glukoza

akt.IX

Plazmin tromboplastin

Ca ++ I Ak.V

tromboplastin tkiva
Neak.VII u Ak.VII
Neak. X u ak. X

monomer

Ca ++ +X+V

tromboplastin tkiva

Ireverzibilna
agregacija trombocita
fibrinogen
Pojaana glikoliza
aktivnih trombocita

Aktivni tromboplastin krvi III

Trombin II

ATP

Retrakcija
koaguluma

Definitivan
tromb

ATP-aza
trombostein
ADP

F1 T
Protrombinaza

Ca ++
Ak.VII

energija

fibrinoliza

Ca ++

Aktivni

Fibrin

Fibrin polimeri

nek. VIII

Neaktivni

Protrombin II

Regulacija aktivnosti enzima

fosforilacijom i
defosforilacijom
ADP

ATP

protein kinaza

enzim
OH

Pi

enzim
protein fosfataza
P

H2O

Inhibicija enzima
INHIBICIJA ENZIMA
IREVERZIBILNA

REVERZIBILNA

Teki metali (bakar, iva)

Organofosforna jedinjena
vezuju se za OH grupu serina
u aktivnom mestu enzima
(tripsin, acetilholin esteraza
R1O

P
R2O

X- acil ostatak (fluor)

R1, R2 - radikali (alkil , estarski)
Toplota
Sredstva za taloenje proteina (TCA)

KOMPETITIVNA
NEKOMPETITIVNA
AKOMPETITIVNA

Struktura tiazofurina i ciljno mesto

delovanja aktivnog metabolita

H2N
(6)

TIAZOFURIN
S
HO

OH
H

OH

CH2
H

OH

OH

O
N
O

CH2

(6)

H2N

O
P

N H2

OH
N

OH
N

CH2
H

TAD

O
H

OH

OH

(6)

NAD

IMPDH

IMP

Inhibicija enzima

Reverzibilna inhibicija enzima

kompetitivna

Inhibicija enzima

ireverzibilna reverzibilna

kompetitivna
nekompetitivna
akompetitivna

1/V (nmol/min) -1
Sa inhibitorom

Bez inhibitora

-1/Km

1/Vmax

1/S (mmol/l) -1

Tip inhibitora

Uticaj velike[S]

Uticaj inhibitora na Vmax

Uticaj inhibitora na Km

Kompetitivan

Spreava inhibiciju

Ne menja V max

Poveava Km

Nekompetitivan

Ne menja dejstvo inh Smanjuje Vmax

Ne menja Km

Akompetitivan

Ne menja dejstvo inh Smanjuje Vmax

Smanjuje Km

Inhibicija enzima

Reverzibilna inhibicij a enzima

nekompetitivna

Inhibicija enzima

ireverzibilna reverzibilna

1/V (nmol/min) -1

kompetitivna
nekompetitivna
akompetitivna

Sa inhibit orom

Bez inhibitora
-1/Km

1/Vmax

1/S (mmol/l) -1

Tip inhibitora

Uticaj velike[S]

Uticaj inhibitora na Vmax

Uticaj inhibitora na Km

Kompetitivan

Spreava inhibiciju

Ne menja V max

Poveava Km

Nekompetitivan

Ne menja dejstvo inh Smanjuje Vmax

Ne menja Km

Akompetitivan

Ne menja dejstvo inh Smanjuje Vmax

Smanjuje Km

Inhibicija enzima

Reverzibilna inhibicija enzima

nekompetitivna

Inhibicija enzima

ireverzibilna reverzibilna

kompetitivna
nekompetitivna
akompetitivna

1/V (nmol/min) -1
Sa inhibitorom

Bez inhibitora
-1/Km

1/Vmax

1/S (mmol/l) -1

Tip inhibitora

Uticaj velike[S]

Uticaj inhibitora na Vmax

Uticaj inhibitora na Km

Kompetitivan

Spreava inhibiciju

Ne menja V max

Poveava Km

Nekompetitivan

Ne menja dejstvo inh Smanjuje Vmax

Ne menja Km

Akompetitivan

Ne menja dejstvo inh Smanjuje Vmax

Smanjuje Km

Regulacija enzimske
aktivnosti

Mehanizam povratne sprege (feedback

inhibition)

Alosterini enzimi(regulatorni,kljuni)
sigmoidna kriva
katalizuju biohemijske reakcije koje su lokalizovane na
poetku metabolikog procesa ili se nalaze na mestu
ukrtanja metabolikih procesa
alosterijski inhibitori deluju po tipu negativne povratne
sprege.