14.

Živné půdy a očkování MO, izolace a selekce MO

živné půdy
∙ substráty, které slouží ke kultivaci, propagaci, izolaci a identifikaci MO
∙ musí obsahovat veškeré základní živiny (C, N, biotika, minerální látky)
∙ musí mít vhodné pH a vhodnou teplotu
∙ pro zjištění zda je půda sterilní se dělá slepý pokus

dělení:

- dle konzistence (skupenství)

1) pevné ( např. krajíc chleba)
2) tekuté
→ používají se pro pomnožování MO a k orientačním kontrolám MK
např. mladina, sladina, melasová zápara, vysterilované pivo
3) ztužené
→ do tekuté živné půdy se přidává ztužovalo
např. agar – z mořských řas
- má perfektní ztužovací vlastnosti
- bod tání 95°C
- polysacharid
- sterilace až při 140°C
- negativa: vysoká cena, uvolňuje vláhu (obrácení misek)
želatina – bílkovina → z kopyt, šlach, kůže
- nízká pořizovací cena
- neuvolňuje agarovou vodu
- ztekucována proteolytickými MO
- negativa: nízký bod tání 25°C, snadno se připálí

- dle převládajícího obsahu

1) cukernaté půdy
2) bílkovinné půdy (bujóny)
3) škrobnaté půdy
4) tukové půdy

- dle použití
1) obecné půdy → SA – kvasinky, plísně
- sacharotické bakterie
→ MPA – ostatní bakterie

SA + MPA → celkový počet MO

bakterie: 24 – 48 hodin např. CPM(SA) = 10zárodků/1ml (72 hod.)

kvasinky: 48 – 72 hodin
plísně: 3 – 7 dní
2) diagnostické půdy
∙ obecná půda + indikátor
∙ indikátor reaguje s metabolitem předpokládané kultury → ta se probarví, prokáže přítomnost
popř. rod MO
3) selektivní půdy
∙ obsahují inhibitor → ten potlačí růst určitých MO nebo je usmrtí
∙ př. coliforní bakterie → obecná půda + žlučové soli
∙ vyrostou pouze neprobarvené (očekávané) kolonie

4) diagnosticko – selektivní půdy

∙ žlučové soli + fuchsin + obecná půda
∙ vyrostou pouze očekávané a probarvené kolonie

Očkování MO
∙ očkování je aseptické přenášení MO do nového živného prostředí
→ sterilní nádoby, autokláv (ostrá, horká pára)
→ sterilní pomůcky
→ sterilní živné půdy

aseptické prostředí – 2 zapálené kahany

- laminární box
- germicidní výbojky

způsoby očkování
1) očkování na Petriho misky
→ frakcinované rozočkování (slouží k izolaci, identifikaci) → buď klasický způsob, nebo
čárkování
→ nalévání (zalévání)

2) očkování do tekuté živné půdy

∙ k prokázání → křísotvorných, zákalotvorných, kyselotvorných MO
→ k pomnožování
→ sterilní očkovací kličkou převedeme z Petriho misky do lahvičky s půdou
→ pipetou

3) očkování do biologické zkumavky

→ vpichem

→ šikmé agary

Izolace
∙ izolovat znamená vypěstovat a oddělit od všech ostatních MO, ať už stejného nebo jiného
druhu. Cílem izolace je čistá kultura . Každá propagace začíná izolací.
∙ důvod pro použití: → rychlé rozkvášení
→ hluboké prokvašení
→ čisté kvašení
Selekce = výběr MO

Pro pivovar → vhodné MO pro technologický záměr

→ schopnost prokvášet určité cukry, které jsou v živném substrátu

→ schopnost vydržet vyšší koncentrace alkoholu
→ schopnost snášet chmelové látky, teplotu, vyšší tlak

1) makroskopická → čtení plotny

2) mikroskopická → nativní, fixovaný preparát
→ hodnotíme: ∙ morfologii buněk = tvar, velikost
∙ morfologickou vyrovnanost – přibližně jeví stejnou velikost
a tvar
∙ velikost vakuol → podle velikosti vakuoly poznáme stáří
∙ pučící buňky
→ bílkovina + tuk X volutin + glykogen
(stará) (mladá)