Professional Documents
Culture Documents
כלים 6
כלים 6
בתרגיל זה נכיר מספר מאגרים שמרכזים אינפורמציה על דומיינים ,ארכיטקטורה של חלבונים ,משפחות של
חלבונים וסופר משפחות .חשיבות הנושאים האלו הוזכרה בהרצאה המקדימה לתרגיל .דומיין הוא יחידת מבנה
עצמאית שיכולה להופיע בחלבונים שונים וביחד עם הרכבים של דומיינים שונים .כאשר אתם חוקרים חלבון מסוים
חשוב לדעת מאיזה דומיינים הוא מורכב .מספר הדומיינים וסידורם יכול לעזור בהבנת התפקידים שיכול החלבון
לבצע ובנוסף ,יכול לעזור לכם לתכנן ניסויים שבהם תרצו לבטא חלקים יציבים מן החלבון ,לסמן אותו או לבצע בו
מוטציות/איחויים עם רצפים אחרים .כך למשל ,לא תקצרו חלבון באמצע של דומיין כלשהו משום שהדבר יפגע מן
הסתם בקיפול נכון ובתפקוד כללי נכון של שאר חלקי החלבון .לעומת זאת ,ניתן להוריד דומיינים שלמים באופן
שלא מחייב פגיעה בחלקים אחרים של החלבון – בגלל האופי העצמאי של כל דומיין.
בחלון שעולה לחצו על הלינק show all chainsובחלון שנפתח לחצו על .RUNהמתינו להעלאת תמונת
החלבון ב JMOL. JMOL-היא אחת מן התוכנות הנפוצות ביותר להצגה גרפית של מבנים של מולקולות
ביולוגיות .החלבון שעולה צבוע כולו באפור בהיר חוץ מן המולקולה האורגנית ששימשה כמעכב לאתר
הפעיל .מתחת לתמונת החלבון בדף ישנה אינפורמציה לגבי הדומיינים של החלבון ,כפי שהיא מסוכמת
מתוך מאגר ( SCOPנמצא ליד הכותרת .)SCOP DOMAIN ASSIGNMENTזהו אחד מן המאגרים המרכזיים
לארגון דומיינים ,משפחות ו FOLDS-של חלבונים .מאגר PDBמקשר בין האינפורמציה הקיימת במאגר
SCOPלבין מבני החלבונים .לפי האינפורמציה הרשומה – כמה דומיינים ישנם בחלבון? 3לחצו על שם
הדומיין הראשון (השם צבוע במלבן בצבע תכלת) והסתכלו על תמונת החלבון .מה קרה בתמונה? הודגש
הדומיין הספציפי אותו בחרנו בצבע חום .העתיקו את תמונת החלבון לתרגיל בעזרת .PRINT SCREEN
לפי האינפורמציה שמתקבלת ממאגר זה – איך נקרא הדומיין ה C-טרמינלי? 1ddta03האם מספר
חומצות האמינו בו זהה להגדרת דומיין זה במאגר ?SCOPלא הוא יותר ארוך ( 187ח"א).
נכיר מאגרים נוספים ודרכים אחרות להצגתם כעת :עברו למאגר CONSERVED DOMAINSשל NCBI .4
בלינק .http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgiהקישו את שם החלבון ( )1ddtבחלון
החיפוש ולחצו על .SUBMITהעתיקו את דף התוצאות שעולה לתרגיל בעזרת PRINT SCREENובעזרת
התוצאות ענו על השאלות הבאות:
מה אורכו של החלבון? 535כמה דומיינים שמורים ניתן לראות בחלבון? 3מה שמותיהם? ADP_ribosyl
Diphtheria_T super family Diphtheria_R super familyהיכן ממוקם כל דומיין בחלבון? -ADP_ribosyl
בקצה ה Nטרמינלי בערך מח"א – Diphtheria_T super family 15-150באמצע Diphtheria_R 200-375
– super familyקצה Cטרמינלי 375-535בעזרת העברת העכבר על שם הדומיין והתמונה המתקבלת
ענו – איזה מבנה שניוני מאפיין את ?ADP_RIBOSYL SUPERFAMILYמשטחי בטא איזה את
? DIPHTERIA_T SUPERFAMILYסלילי אלפא מי מהדומיינים מאפשר לטוקסין לעבור אינטגרציה לתוך
הממברנה של האנדוזום? Diphtheria_T super famiylאיזה מן הדומיינים הוא היחידה הקטליטית של
החלבון? ADP_ribosyl
דרך מצוינת להתחיל להסתכל על מבנה חלבונים והדומיינים בהם היא בעזרת מאגר STRUCTUREב- .5
.NCBIמאגר זה מכיל רק חלק מהמבנים שנמצאים ב PDB-אבל כל מבנה שנכנס למאגר STRUCTURE
מכיל אינפורמציה רבה מעבר למבנה התלת מימדי – כמו אנאליזה של דומיינים ,קישורים למבנים דומים
ואפשרות להצגה גרפית של האינפורמציה בעזרת תוכנה שקשורה למאגר זה ונקראת .Cn3Dעברו ל-
NCBIבלינק /http://www.ncbi.nlm.nih.govבחרו במאגר STRUCTUREמבין רשימת המאגרים של
NCBIורישמו 1ddtבחלון החיפוש .לחצו על SEARCHכפי שניתן לראות בתמונה:
לפי התוצאה המתקבלת ועוד לפני שממשיכים – האם אתם יכולים לקבוע אם מבנה החלבון נקבע
באמצעות NMRאו X RAY? X-RAY
לחצו על תמונת החלבון המוקטנת על מנת להיכנס לרשומת STRUCTUREעבור החלבון .בחלק הראשון .6
של הרשומה יש תמונה גדולה יותר של מבנה החלבון .מבלי ללחוץ כרגע על התמונה ענו – באיזה צבע
מסומנים משטחי בטא?חרדל באיזה צבע מסומנים סלילי אלפא?ירוק באיזה צבע מסומנים אזורים חסרי
מבנה שניוני מוגדר ( ?)RANDOM COILSתכלת
רדו בהמשך דף התוצאות .בחלק התחתון של הרשומה מחולק מבנה החלבון לדומיינים .כפי שניתן .7
לראות בתמונה כל דומיין מסומן בצבע אחר וניתן לקשר בין מיקום הדומיין במבנה החלבון ובין מיקומו
ברצף הראשוני של החלבון (ראו תמונה להלן):
עיברו עם העכבר על הקווים המסומנים במספרים ומייצגים דומיינים ברצף הראשוני של החלבון וענו :מהו
מיקום חומצות האמינו בחלבון עבור כל דומיין?
1:1-171
2:172-382
3:383-536
שימו לב שבהמשך הרשומה (לקראת סוף הדף) יש גם אינפורמציה על מולקולות שהן לא חלק מן החלבון
אבל נמצאות במבנה .במקרה זה מבנה החלבון נפתר ביחד עם מולקולת מעכב .מבנה מולקולת המעכב
נמצא מתחת לאינפורמציה לגבי הדומיינים בחלבון .לחיצה על מבנה זה תעביר אתכם למאגר הקשור
למבנים של מולקולות אורגניות בשם .PUBCHEM
כעת ,לחצו על תמונת החלבון כפי שהיא מופיעה ליד פירוט הדומיינים .בחלון שנפתח לחצו על OPENעל .8
מנת לפתוח את מבנה החלבון בתוכנה .Cn3Dאתם אמורים לראות שני חלונות – חלון אחד שמציג את
מבנה החלבון וחלון שני שמציג את רצף החלבון .בעזרת העכבר הזיזו את מבנה החלבון כך שצבעי
הדומיינים יהיו מסודרים בהתאם למיקומם על פני רצף החלבון –דומיין 1בקצה האמיני מצד שמאל,
דומיין 2במרכז התמונה ודומיין שלישי בקצה הקרבוקסילי בצד ימין .העתיקו את התמונה לתרגיל.
ננסה לבדוק כעת באילו חלבונים אחרים אפשר למצוא את הדומיינים שנמצאים בחלבון הדיפטריה .9
טוקסין .לשם כך ,חיזרו לרשומת STRUCTUREעל החלבון ולחצו על הקו הורוד המייצג את דומיין 1
(הדומיין הקטליטי) ברצף הראשוני של החלבון ,כפי שניתן לראות בתמונה:
אתם עוברים לדף שמייצג תוצאות VASTעבור הדומיין VAST .הוא קיצור של Vector Alignment
. Search Toolזוהי תוכנה שמאפשרת השוואה של מבנים תלת-מימדיים לקבלת אינפורמציה על מידת
הדימיון בין דומיינים באופן גרפי .על פי האינפורמציה ,כמה מבנים ישנם שיש ביניהם ובין דומיין 1דימיון
מבני כלשהו? 106כמה מבנים מייצגים נבחרו על ידי תוכנת VASTלהצגה עבורכם בדף התוצאות?
16הסתכלו על רשימת המבנים שהתקבלו מתחת למבנה של .DDT1מהו שמו (שם לפי )PDBשל המבנה
הראשון המוצג ברשימה? 1DTPהעבירו את העכבר על שם המבנה .קראו את התיאור שעולה וכתבו –
מה מייצג מבנה זה? זהו הדומיין הקטליטי של הדיפטריה טוקסין .איזה עקרון בהגדרה של המושג
"דומיין" ניתן להסביר באמצעות מבנה זה? אזור בחלבון שהוא יחידה בפני עצמה עם רצף בעל תכונה
מסוימת .סמנו את הריבוע הקטן המופיע ליד שם הדומיין ולחצו על View 3D alignmentבחלק העליון של
הדף כפי שניתן לראות בתמונה הבאה:
בחלון שנפתח לחצו על .OPENמה לדעתכם אתם רואים בחלון המבנה? את החפיפה בין החלבון לדומיין
ובחלון הרצף? השוואה בין רצף החלבון לרצף הדומיין .האם לדעתכם מבנה הדומיין כיחידה עצמאית
(במבנה )DTP1דומה למבנה הדומיין כאשר הוא חלק מחלבון גדול יותר? דומה אך יש מעט שינויים.
הסבירו כיצד קבעתם את תשובתכם בתמונה התלת מימדית ניתן לראות שאכן הרב חופף אך ישנם
איזורים בהן הדומיין מעט שונה מהחלבון.
חזרו לדף התוצאות ולחצו על שם החלבון .DTP1ברשומת STRUCTUREשעולה עבור חלבון זה רדו .10
למטה ולחצו על תמונת החלבון ליד פירוט הדומיין (בצבע הסגול) .לחצו על OPENכדי לפתוח את תמונת
החלבון הזה כפי שפתחתם את תמונת הדומיינים בחלבון הדיפטריה טוקסין .סובבו את תמונת החלבון
עד שתגיעו למצב שבו האוריאנטציה של דומיין ה DTP1-זהה לזו של אותו דומיין בחלבון דפטריה טוקסין
כפי שהעתקם את התמונה בסעיף .7בעזרת PRUNT SCREENהעתיקו את התמונה החדשה ואת
התמונה הקודמת זו ליד זו לתוך התרגיל .השוו את שני הדומיינים מבחינה ויזואלית.
האם הם זהים לחלוטין? לא לגמרי האם כל סלילי אלפא שבדומיין DTP1נמצאים גם בדומיין זה בחלבון
הדיפטריה? לא ניתן לזהות 2סלילי אלפא נוספים בדומיין 1DTPשלא היו קיימים בדיפטריה .העזרו
בצבעים השונים של כל דומיין כדי לענות על שאלה זו.
חזרו לדף התוצאות עבור מבנים דומים לדומיין הקטליטי של חלבון הדיפטריה .העבירו את העכבר על .11
שמות של מבנים נוספים – באילו אורגניזמנים נמצאים דומיינים בעלי דימיון מבני לדומיין הקטליטי של
דיפטריה טוקסין? בני אדם ,אי קולי,חיידקים נוספים כעת ,לחצו על הריבוע שליד השם Y5X2ובקשו
לראות .ALIGNMENT D3הסתכלו על תמונת החפיפה שעולה ועל חפיפת הרצפים .מה לדעתכם מסמנות
חומצות שמסומנות באדום? איזורים חופפים ,חומצות אמינו הזהות בין הדומיינים השונים .בתכלת?
איזורים לא חופפים ,באפור? שאר החלבון שלא כולל את הדומיין הנל.
כדי להסתכל על הדומיין השני – DIPHTHERIA T SUPERFAMILYנעבור למאגר מרכזי אחר – .INTERPRO .12
פנו ללינק . /http://www.ebi.ac.uk/interproהקישו 1ddtבחלון החיפוש ולחצו על סימן ה <-שלידו.
מתקבלות 4תוצאות עיקריות – עבור החלבון כולו ועבור על אחד מן הדומיינים שלו .כל תוצאה מתחילה
באותיות IPRשהן תוצאות של . InterProהמשך הדף מכיל סטטיסטיקה כללית על המאגר .מבין 4
התוצאות ,מהו לדעתכם מספר הגישה של הדומיין שאתם מתרכזים בו כעת ( ?)T SUPERFAMILY
IPR022405
לחצו על מספר הגישה של דומיין זה.
בדף התוצאות שעולה הכותרת הראשונה בטבלה נקראת .PROTEIN MATCHESלפי חלק זה ,כמה .13
התאמות ישנן לדומיין זה? 14לחצו על ARCHITECTURESכפי שרואים בתמונה:
לפי התוצאות המתקבלות – האם ישנם חלבונים שבהם הדומיין מופיע בחלק אחר מאשר במרכז
החלבון? כן ניתן לראות שהוא גם בקצה ה Nטרמינלי.
חזרו לדף התוצאות המרכזי של הדומיין (הדף הקודם) .קראו את ה ABSTRACT-שמופיע מתחת לכותרת .14
.InterPro Annotationלפי האבסטרקט ,לאיזו FOLDכללי שייך דומיין Tשל החלבון? סלילי אלפא (FOLD
הוא הטופולוגיה הכללית של יחידת מבנה בחלבון .הטופולוגיה מתייחסת לסידור של סלילי אלפא ו/או
משטחי בטא זה לזה ביחידת הדומיין .להסבר מפורט יותר ודוגמאות נוספות אתם יכולים לגשת ללינק
)http://www.cryst.bbk.ac.uk/PPS95/course/8_folds/index.html
לחצו על המספר המאפיין את הדומיין במאגר CATHליד הכותרת STRUCTURAL LINKSכפי שרואים .15
PDB Chain
ModBase
SCOP
Domain
CATH Domain
על מנת ללמוד על הדומיין השלישי נחזור ל NCBI-למאגר ) CDD (CONSERVED DOMAIN DATABASE .18
בלינק .http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/cdd.shtmlבחלון החיפוש בחלק העליון של דף
הבית של המאגר רישמו את שם הדומיין השלישי ( )diphtheria Rוהקישו .GOכמה תוצאות קיבלתם? 1
מה שם הדומיין לפי מאגר PFAM ? pfam01324לחצו על תמונת הדומיין וענו על פי האינפורמציה
המתקבלת :מה תפקידו של הדומיין בקצה ה C-טרמינלי
נקשר לרצפטור על פני קרום התא ,מאפשר לטוקסין להיכנס לתא על ידי אנדוציטוזה.
לחצו על סימן +ליד LINKSבדף התוצאות כפי שמסומן בתמונה: .19
לחצו על PFAMבהרחבה של פירוט .LINKSאתם עוברים למאגר PFAMשבו בוצעה הגדרת הדומיין
במקור .בחלק התחתון של הדף לחצו על הלינק לSCOP (STRUCTURAL CLASIFICATION OF-
) .PROTEINSמהו השם שמופיע בלינק של ( SCOP?1ddtשם חלבון הדיפטריה כפי שהכרנו ב.)PDB-
בדף שאליו אתם עוברים ניתן לראות שמאגר SCOPמחלק את חלבון הדיפטריה ל 3-דומיינים .לחצו על
הדומיין השלישי (הקצה ה C-טרמינלי) .לפי מאגר SCOPלאיזה CLASSשייך הדומיין מבחינת אופי
המבנה השניוני שלו? All beta proteinsכמה משטחי בטא יש בדומיין? 2לאיזה סוג של FOLDכללי
שייך דומיין זה? Common fold of diphtheria toxin/transcription factors/cytochrome fמהו שם ה-
PDBשל המבנה המייצג הראשון שניתן בתור דוגמה לדומיין? ( 1f0lעוד לפני המבנה ) 1ddt
הדבר האחרון שתעשו יהיה להסתכל על מבנה מייצג לדומיין ה C-טרמינלי בתוכנה גרפית ידועה נוספת .20
להצגת מבנה חלבונים שנקראת .FirstGlance in Jmolהתוכנה נמצאת בלינק
. /http://molvis.sdsc.edu/fgijהעלו את התוכנה והקישו את שם המבנה ה PDB-של הדומיין שזיהיתם
בסעיף הקודם בחלון החיפוש .לחצו על .SUBMITהמתינו לתמונת החלבון שתעלה ואז לחצו על
SECONDARY STRUCTUREמשמאל על מנת להציג על החלבון את סלילי האלפא ומשטחי הבטא.
בנוסף ,לחצוע על FINDובחלון שנוסף לכם כיתבו .383-535זהו מיקום החומצות בחלבון הדיפטריה
טוקסין שמאפיין את הדומיין השלישי .לחצו על ENTERאחרי כתיבת המספרים .איזה אזור הואר
בחלבון? האיזור של הדומיין השלישי הרצוי האם סוג המבנה השניוני של אזור זה מתאים למה שתואר
עבור אופי הדומיין במאגר ?SCOPכן לחצו על CLEAR HALOSעל מנת להוריד את הכדורים שמילאו
את אזור המודל .נסו לסובב את המודל בעזרת העכבר על מנת לראות אם אתם אכן רואים 9משטחי
בטא בדומיין השלישי .העתיקו את תמונת החלבון לתרגיל בעזרת .PRINT SCREEN