‫‪07/03/07‬‬

‫ביוכימיה– שיעור ‪3‬‬

‫יש חומצות שמעדיפות להסתדר בצורה ‪ ,‬בצורה ‪ ‬או ב‪.Rev. turn -‬‬
‫העדפה זו לסידור לא אומרת שלא נמצא את החומצות האלה מסודרות‬
‫בצורה אחרת‪.‬‬
‫ניתן לראות אותו רצף חומצות אמינו שבחלבון אחד יסתדר בצורה ‪‬‬
‫ובחלבון אחר בצורה ‪.‬‬

‫התארגנות חלבונים בצורה לא נכונה )‪(Protein misfolding‬‬

‫‪ – 1977‬סטנלי פרוסינר – טען שמחלות יכולות לעבור גם לא ע"י‬
‫חיידק או נגיף‪.‬‬

‫חיידק – בקטריה )‪ – (bacteria‬בעלי דופן‪ DNA ,‬מעגלי‪ ,‬גדלים על מצע‪.‬‬

‫נגיף – וירוס )‪ – (viruses‬בעלי ‪ DNA‬ו‪ ,RNA -‬מעטפת חלבונית‪ ,‬חיים‬
‫בתוך תאים כטפילים‪ ,‬מתרבים ויוצאים מהתא‪.‬‬
‫אנטיביוטיקה – מטפלת רק בחידקים‪.‬‬

‫מחלת הפרה המשוגעת‬

‫זוהה שהמחלה עוברת בחלבון שנקרא פריאון )‪ (prions‬שנמצא גם‬
‫בתאים נורמלים‪ .‬מסיבות לא ברורות הם עוברים אגריגציה )יצירת‬
‫צבר( והופכים לאמילואיד )‪ ,(amyloid‬צורת החלבון משתנה מעשירות‬
‫בצורה ‪ ‬לעשירות בצורה ‪.‬‬

‫המעבר מחלבון רגיל לחלבון לא מקופל הוא מהיר‪,‬‬

‫כשמתחיל הפירוק הוא עובד כמו דומינו‪.‬‬
‫בשלב הביניים חלק מהחלבונים מקופלים וחלק לא‪.‬‬

‫קיפול חלבונים‬
‫אם חלבון היה צריך לעבור את כל האופציות‬
‫התקפלות שלו עד שהיה מגיע לצורה הנכונה שלו‪ ,‬היה‬
‫לוקח לו המון זמן להתקפל‪.‬‬
‫לכן קיפול החלבון קורה כך שכשחלק מסויים מגיע‬
‫למצב הנכון שלו הוא נשאר ככה ושאר החלבון ממשיך להתארגן‬
‫לצורה שלו‪.‬‬

‫מודיפיקציה‬
‫הוספת קבוצה גורמת לשינוי בתפקוד או בעמידות החלבון‪.‬‬

‫‪-1-‬‬
‫‪07/03/07‬‬
‫ביוכימיה– שיעור ‪3‬‬
‫קבוצה אצטית – מגדילה את עמידות החלבון לפירוק‪.‬‬ ‫‪.1‬‬
‫קבוצה הידרוקסילית – מייצבת חלבונים כמו קולגן‪.‬‬ ‫‪.2‬‬
‫פוספורציה – העברת אותות‪.‬‬ ‫‪.3‬‬

‫‪ – Cleavage‬קציצה‪ ,‬רוב החלבונים עוברים קציצה וחיתוך לאחר שהם‬

‫מסונתזים‪.‬‬

‫‪-2-‬‬
 ‫‪07/03/07‬‬
‫ביוכימיה– שיעור ‪3‬‬
‫חקירת חלבונים‬
‫הדם בגוף מורכב מתאים ונוזל )‪.(plasma‬‬
‫‪ – Plasma‬נוזל הדם כולל גורמי קרישה‪.‬‬
‫‪ – Serum‬נוזל הדם ללא גורמי קרישה‪.‬‬

‫לחלבונים יש תכונות שונות שאנו משתמשים בהם כדי להפריד את‬

‫החלבון ולהוציא אותו‪.‬‬
‫הפעולה הראשונה שיש לעשות כדי להפריד את החלבון היא פתיחת‬
‫התא‪.‬‬
‫ניתן לפתוח את התא בדרכים הבאות‪:‬‬
‫שוק אוסמוטי‪ :‬הנחת התא בתמיסה היפוטונית )ריכוז‬ ‫‪.1‬‬
‫מלחים‬
‫חיצוני נמוך(‪ ,‬מים נכנסים לתא‪ ,‬התא מתנפח ומתפוצץ‪.‬‬

‫סוניקציה‪ :‬הפעלת גלי קול בתדר מסויים שמפוצצת את‬ ‫‪.2‬‬

‫ממברנת‬
‫התא‪.‬‬
‫כתישה‪ :‬כתישה מכנית של התא‪ ,‬לא בשימוש כמעט‪.‬‬ ‫‪.3‬‬
‫דטרגנית‪ :‬תמיסה סבונית‪ ,‬פירוק הממברנה‪ ,‬שליפת‬ ‫‪.4‬‬
‫הליפידים‪.‬‬

‫הפרדת חלבונים מתבססת על מטען החלבון‪ ,‬גודל‪ ,‬יכולת התקשרות‬

‫ומסיסות‪.‬‬

‫‪Assay‬‬
‫‪ Assay‬הוא מבחן שמאפשר זיהוי של חלבון מסויים )לכל חלבון יש את‬
‫ה‪ assay -‬שמזהה אותו(‪.‬‬

‫לדוגמא‪:‬‬
‫יש לנו אנזים שעובד על מצע ) קרקע מזון – ‪(substrate‬‬
‫ומוציא תוצר שניתן למדוד‪.‬‬

‫‪O.D.‬‬
‫‪ (O.D. – (optical density‬כמה אור נבלע ‪ /‬עובר בתמיסה‪.‬‬
‫כלל‬ ‫‪ – Specific activity‬היחס בין הדחיסות האופטית למספר החלבונים‪,‬‬
‫החלבונים‬
‫ככל שנוציא מהתמיסה יותר חלבונים לא קשורים‪ ,‬היחס יעלה‪.‬‬

‫‪ – Homogenate‬תערובת החומרים שהוצאנו מהתא‪.‬‬

‫סירכוז‬
‫)הפרדת נוזלים בצנטריפוגה(‬
‫צנטריפוגה – מכשיר שמסובב מבחנות במהירות )‪ (RPM‬ומפעיל ‪g‬‬
‫על ההומוגנט‪.‬‬
‫ע"פ מהירות הסיבוב‪ ,‬יופרדו )ישקעו( החומרים‪.‬‬

‫‪-3-‬‬
‫‪07/03/07‬‬
‫ביוכימיה– שיעור ‪3‬‬
‫ע"י סירכוז ניקינו את החומרים שאנחנו לא צריכים ויש לנו את‬
‫החלבון הרצוי‪.‬‬

‫החלבון יכול להיות במשקע בתחתית המבחנה‬

‫)‪ (pellet‬או שיצוף במבחנה )‪.(supernatant‬‬

‫‪-4-‬‬