Metode analitike per percaktimin e antioksidantit bisulfit i Na ne formulime farmaceutike me

ane te HPLC

Bisulfiti I Na eshte nje kompnim inorganike I cili perdoret zakonisht si antioksidant ne formulimet
farmaceutike.Antioksidantet jane eksipiente qe perdoren per te permirsuar qendrueshmerine
barnave duke vonuar oksidimin e lendes vepruese dhe eksipienteve te tjere. Anti oksiduesit
ndahen ne 3 grupe:

Antioksiduesit e vertet

Agjentet reduktues

Antioksidantet sinergjike

Struktura kimike e bisulfitit te Na

Bisulfiti i Na eshte nje agjent reduktues i cili perdoret ne industrine kimike dhe farmaceutike. Ai
vepron me oksigjenin duke u konvertuar ne Hidrogjen sulfatin e Na

2NaHSO3 + O2  2NaHSO4

Bisulfiti i Na shtohet ne sisteme tubash te medha per te parandaluar fenomenet e korrozionit.

Vetite antioksiduese jane si rezultat i pranise se grupeve te caktuara te cilat zakonisht jane te
demshme per qelizat e gjalla dhe perdorimi i AO mund te shfaqe efekte te padeshiruara kur
perdoren ne njerez. Prania e AO ne produktin perfundimtar duhet te jete e justifikuar. Se bashku
me produktin perfundimtar te sapo dalur ne treg duhet te perfshihen ne menyre specifike te gjitha
testet e identifikimit dhe percaktimit sasior ,kriteret e permbushura si dhe limiti per secilin AO te
perfshire ne formulim.Rendesia e percaktimit te limitit te AO ne formulim do te thote qe ne forme
doze eshte perfshire sasia e mjaftueshme e AO qe mbron produktin gjate “shelf –life” dhe gjate
peridhes se perdorimit.

Vetite Antioksiduese te SB jane pjese integrale ne formulimin e nje produkti. Duke u bazuar ne
kete koncept u zhvillua nje metode per vleresimin e perdorimit te SB ne industrine kimike dhe
farmaceutike.

Sipase vezhgimit te literatures per percaktimin e SB u pa qe mund te perdoren keto metoda:

Metoda spektroskopike per percaktimin e sulfitit ne permbajtje te nje tretesire duke perdorur
reagentin ELMAN.
Percaktimi i metabisuflitit te Na ne nje formulim parenteral duke perdorur kromatografine jonike
me performance te larte(HPIC)

SB nuk eshte zyrtarisht e perfshire ne nje farmakope deri me tani.

Nuk ka nje metode HPLC te reportuar ne literature qe mund te beje ndarjen dhe analizen sasiore
te SB ne Preparatin per injeksion te Amikacines ndaj u pa e nevojshme zhvillimi i nje metode
analizuse per te percaktuar SB ne formulimet farmaceutike.(konkretisht ne nje pergatese
parenterale)

Kjo metode beri te mundur ndarjen e SB nga sulfati amikacines dhe eksipienteve te tjt ne produkt
brenda 10 minutash. Dhe pas ndarjes se suksesshme kjo metode u vlersua nga ICH dhe eshte
aplikuar gjeresisht ne ndarjen dhe kuantifikimin e SB ne pergatesa parenterale.

Zhvillimi i metodes dhe optimizimi

Kriteri kryesor per te zhvilluar metoden HPLC ne percaktimin e SB si nje komponim inorganike
duke perdorur nje detektor UV ishte:

Te percaktohet sasia e SB ne nje analize te vetme permes nje metode qe eshte me e duhura,e
riprodhueshme,tregon qendrueshmeri,nuk interferohet nga eksipientet e tjere ne formulim dhe
eshte mjaftueshem e pershtatshme per kontrollin e cilesise rutine ne laboratore.

Nje tretesire e SB (660µg/ml) dhe placebo(prove e bardhe) ishin objekt i ndarjes me HPLC.

Ne fillim u perdor uji si faze e levizshme A dhe acetonitrili si faze e lefizshme B ne nje kolone HPLC

(Hypersil BDS-C18).

Fluksi 0.5mL/min

Kolona u mbajt ne temperature 25°C

Ne keto kushte u perftua duke bashkuar piku i placebos me pikun e SB

Duke pare rezultatin e mesiperm u vendos te zvendesohet kolona me nje kolone polare ciano
kolone ZORBAX CN, dhe u perdoren kombinime te ndryshme te fazave te levizshme A dhe B.
Rezultati si me poshte
Tabela

Parametrat e HPLC se optimizuar jane si me poshte:

Faza e levizshme uje/aceto nitril raporti 70/30 v/v

fluksi 0.7mL/min

Temperatura e kolones 30°c

Vellimi i injektuar 10 µl

Tretesire buferike per te stabilizuar pH e fazes se levizshme :

(0.03 M tetrabutylammonium hydrogen sulfate (TBAS) and 0.01 M potassium dihydrogen

orthophosphate in Milli-Q water adjusted to pH 6.0 with orthophosphoric acid) and acetonitrile in
the ratio of 70:30 (v/v) as the mobile phase.

Detektim UV ne gjatesi vale 215nm

Temperatura 30 u pa si me e pershatshme per ndarjen e piqeve dhe formen e tyre si dhe ne

analize nuk kishim interferime nga eksipientet e tjt ne formulim.
Parametrat Analitike dhe vleresimi

Pas zvhvilimit kjo metode ishte subjekt per vlersim nga ICH. Metoda u vlersua e pershtatshme per
qellimin qe kishte .

Pershtatshmeria e sistemit

Perqindja e deviacionit relative standart RSD per 6 injektime te perseritura ishte me pak se 2%.
Vlerat e ulta te RSD tregojne qe metoda ka precizitet te larte.

Ne tabelen e meposhtme jane paraqitur ndryshimet ne parametra dhe si ndikojne ne RSD. Duke
interpretuar tabelen kuptojme se parametrat me te pershtashem per sistemin jane: RSD jo me
shume se 2% , tailing factor for the peak of SB jo me shume se 1.5 dhe pjatat teorike jo me pak se
2000.

Tabela 3

Specifiteti
Studime per degradimin e pershpjetuar per te demostruar selektivitetin dhe qendrueshmerine e
metodes HPLC ne percaktimin e SB.

Kromatograma e mesiperme qe ne kohen e mbajtjes te SB nuk ndikojn eksipientet e tjere.

Nuk u pa ndonje degradime signikativ kur SB ekspozohet ne kushte

:acide,bazike,termike,hidrolitike, rrezatimi UV nderkohe qe u pa degardim domethenes kur SB ju
nenshtrua hidrolizes oksidative

Tabela 4

(3% H2O2, 60°C, 30 minutes) duke cuar ne formimin e hidrogjen sulfatit te Na. HSNa ndahet
shume mire nga SB.

Limiti i kuantifikimit (LOQ)

Vlera e LOQ per SB eshte 10µg/mL ( qe permbush kriterin e ICH)

Dmth perqendrimi me i vogel qe kapet nga detektori.

Tabela 5
Lineariteti

Lineariteti i një metode analitike është aftësia e tij për të nxjerrë rezultatet e testimit ne menyre
drejtpërdrejt, ose nga një transformim matematikor i përcaktuar mirë, proporcional me
përqendrimin e analitit në atë mostër brenda një diapazoni të caktuar.

Përgjigja u konstatua të jetë lineare nga 1.5% në 150% të përqendrimit standard. Statistikat e
regresionit janë paraqitur në Tabelën 6, me kurbën e linearitës për SB të paraqitur në Figurën 5.

Tabela 6
preciziteti

Qëllimi i këtij studimi ishte për të demonstruar besueshmërinë e rezultateve të provës kur kemi
variacione.. Përqindja mesatare (n = 6) e SB ishte 99.8% me RSD prej 1.0%. Rezultatet janë
paraqitur në Tabelën 7, së bashku me të dhënat e ndërmjetme të saktësisë. Vlerat e ulëta të RSD
tregojnë se kjo metodë është e saktë.

Tabela 7

Saktesia

Saktësia e një metode analitike është afërsia e rezultateve të marra nga testimi me nje metodë te
caktuar krahasuar me vlerat e vërteta. Sasia e marre (për perqendrimet 10, 50, 100 dhe 150%)
ishte brenda ± 2% të sasise së shtuar; Për nivelin LOQ, shuma e rikuperuar ishte brenda ± 10% të
shumës së shtuar, duke treguar se metoda është e saktë dhe se nuk ka ndërhyrje për shkak të
ekscipientëve të tjerë të pranishëm në injektim. Rezultatet e analizës së shërimit tregohen në
Tabelën 8.

Tabela
Qendrueshmeria e soluconit te mostres

Qendrueshmeria e barit ne formulimin farmaceutike eshte ne funksion te kushteve te ruajtjes dhe

vetive kimike te SB.

Eksperimentet e qendrueshmerise duhet te zhvillohen ne kushte te tilla qe reflektojne situata qe

mund te hasen gjate trajtimit te mostres dhe analizes. Të dhënat e stabilitetit janë të nevojshme
për të treguar se përqendrimi dhe pastërtia e analitit në mostër në kohën e analizës i
korrespondon përqendrimit dhe pastërtisë së analtitit në kohën e marrjes së mostrave

Një zgjidhje e mostrës nuk tregoi ndonjë ndryshim të dukshëm në vlerën e analizës kur ruhet në
temperaturën e ambientit deri në 24 orë (Tabela 9). Rezultatet nga eksperimentet e stabilitetit t
konfirmuan që e mostra ishte e qëndrueshme deri në 24 orë gjatë procedurës së analizës.

Tabela

Aplikimi i metodes ne studimet e qendruseshmerise

Metoda e mesiperme eshte perdorur ne vleresimin e SB ne nje studim qendrueshmerie.

Rezuktatet jane ne tabele
Konkluzione

Një metodë e re RP-HPLC është zhvilluar me sukses për vlerësimin e bisulfitit të natriumit në
preparatin per injeksion te amikacines.Rezultatet e validimit të metodës kanë vërtetuar se metoda
është selektive, e saktë, e saktë, lineare, e fuqishme dhe tregon qëndrueshmëri. Koha e drejtuar
(10.0 min) lejon përcaktimin e shpejtë të SB. Kjo metodë treguese e stabilitetit mund të zbatohet
për përcaktimin e bisulfitit të natriumit në studimet e stabilitetit të injeksionit te amikacines. Për
më tepër, metoda mund të zbatohet për përcaktimin e SB në materialin bulk, proceset kimike ose
teknikat e kundërta të inxhinierisë për të identifikuar sasitë e reaguara dhe të pa reaguara të SB.