Trường Đại học Sư phạm Thành phố Hồ Chí Minh

Khoa Hóa Học

_____oOo_____

SEMINAR

“SẮC KÝ KHÍ”
Các kỹ thuật tiêm mẫu

Học phần: Một số phương pháp phân tích hóa lý

Mã LHP: CHEM102504.
GV: Nguyễn Ngọc Hưng
Họ và tên SV nhóm 2:
1. Châu Quốc Cường. MSSV: 43.01.106.014
2. Đỗ Văn Tiến Dũng. MSSV: 42.01.106.089
3. Đặng Hữu Đạt. MSSV: 43.01.106.016
4. Hồ Trung Đức. MSSV: 41.01.201.014
5. Phạm Ngọc Gấm MSSV: 43.01.106.022

Học kỳ II – NH: 2019 – 2020

T r a n g 1 | 19
T r a n g 2 | 19
Mục lục Trang

Nô ̣i dung
I. ỐNG TIÊM....................................................................................................4
II. MỤC ĐÍCH TIÊM MẪU VÀ THỂ TÍCH TIÊM.......................................5
1. Mục đích tiêm mẫu ....................................................................................5
2. Thể tích tiêm...............................................................................................5
III. CÁC KỸ THUẬT TIÊM MẪU....................................................................5
III.1. Kỹ thuật tiêm gián tiếp ..............................................................................5
1. Kỹ thuật tiêm gián tiếp và chia dòng (split).............................................5
2. Kỹ thuật tiêm gián tiếp và không chia dòng (splitless)...........................7
III.2. Kỹ thuật tiêm trực tiếp ..............................................................................9
III.3. Kỹ thuật tiêm mẫu headspace trong phân tích sắc ký khí GC.............11
IV. CÁC KỸ THUẬT SỬ DỤNG TIÊM – SYRINGLE.................................12
IV.1. Kỹ thuật kim nóng và kỹ thuật kim lạnh.................................................13
1, Kỹ thuật kim nóng......................................................................................14
2. Kỹ thuật kim lạnh.......................................................................................16
IV.2. Kĩ thuật đẩy dung môi...............................................................................17
IV.2. Kĩ thuật kim đầy........................................................................................17
V. TÀI LIỆU THAM KHẢO...........................................................................17

T r a n g 3 | 19
I. ỐNG TIÊM.

Hình 1: Ống tiễm mẫu lỏng và mẫu khí; và sơ đồ cắt của ống tiêm mẫu khí.

Plunger-in-needle type: loại piston trong kim.

“Plunger-in-needle” needle: kim “piston trong kim”
Plunger grip: Kẹp piston; Syringe barel: ống tiêm.
Plunger-in-barrel type: loại piston trong ống tiêm
“open” needle: Kim “mở”

B
A

T r a n g 4 | 19
 Hình 2: Sơ đồ cắt của hệ thống của một bộ bơm mẫu kiểu: A: chia/không chia dòng
split/splitless; B: không chia dòng splitless.

End of the syringe: đầu mút của tiêm;
Rubber septum: vách ngăn cao su;
Carrier gas inlet: Đầu vào khí mang;
làm
Septum purge valve: Van thanh lọc vách ngăn;
Split outlet: chia ổ cắm;
injection:
O-ring niêm phong ống tiêm kim tiêm.
Glass liner (insert): lót kính (chèn);
Vapourisation chamber: Buồng hơi;
Screw top: đầu vít;
Septum: vách ngăn:
A septum made of silicon rubber: vách ngăn
bằng cao su silicon
Barrel of the injector: ống bơm của kim phun
O-ring who seals the syringe needle during
Metal block: Khối kim loại.
Capillary column: cột mao quản .

II. MỤC ĐÍCH TIÊM MẪU VÀ THỂ TÍCH TIÊM:

1. Mục đích tiêm
Mẫu trong hầu hết các trường hợp là chất lỏng, được cho vào một buồn được làm
nóng sẵn, lớp lót, nơi mà quá trình bay hơi nhanh diễn ra. Việc tiêm mẫu có 2 mục đích
[1]:
 Để làm bay hơi nhanh, giảm thời gian trong lớp lót dẫn đến một đầu phun nhỏ.
 Việc tách làm giảm kích thước của mẫu xuống một lượng tương thích với cột mao
quản, để cải thiện sự pha trộn giữa mẫu bốc hơi và khí mang người ta thường dùng nút
bông sợi thủy tinh.
2. Thể tích tiêm
Phương pháp tiêm mẫu phổ biến nhất là sử dụng microsyringer.
Chọn thể tích tiêm phụ thuộc vào đáp ứng của phép phân tích, detector sử dụng, hiệu
lực cột và toàn bộ hiệu năng của hệ thống sắc ký. Khi không có chỉ dẫn, thường dùng thể
tích tiêm là 1 μL, tuy nhiên cần kiểm tra sự thích hợp trong điều kiện cụ thể. [2]
III. CÁC KỸ THUẬT TIÊM MẪU:

Trước khi vào cột tách, thông thường mẫu được đi vào buồng bay hơi rồi dùng dòng
khí mang đưa vào cột. Trong sắc ký mao quản, lượng mãu rất ít (cỡ nanogram) và lưu
lượng khí mang cũng rẩ nhỏ (0,5  5 mL/phút) nên mẫu có thể được đưa vào cột theo các
hình thức: [3]
 Gián tiếp và chia dòng (split).
 Gián tiếp và không chia dòng (splitless).
 Trực tiếp.

III.1. Kỹ thuật tiêm mẫu gián tiếp

1. Kĩ thuật tiêm mẫu gián tiếp chia dòng (split)
T r a n g 5 | 19
 a. Đặc điểm
Việc tách một dòng khí thành hai phần được xác định trước đòi hỏi mẫu phải đồng
nhất tại điểm phân tách. Sự hóa hơi không hoàn toàn của mẫu có thể dẫn đến sự phân bố
mẫu không đồng nhất tại điểm phân chia. Mặc dù lưu lượng tách và lưu lượng cột được
giữ không đổi, tỷ lệ giữa lượng mẫu vào cột và lượng thoát qua lỗ thông hơi sẽ khác nhau
giữa tiêm và tiêm. Một minh họa sơ đồ của sự hóa hơi khác nhau được diễn ra trong tiêm
chia dòng được mô tả trong Hình 3. [2]

Hình 3: Sự khác biệt sơ đồ giữa sự hóa hơi khác nhau có thể diễn ra trong
một tiêm chia dòng. A: phân phối đồng nhất của mẫu hóa hơi. B & C: Phân
phối mẫu không đồng nhất
 Hình 3A, trường hợp lý tưởng trong đó mẫu được bốc hơi hoàn toàn trước khi đạt
đến điểm phân tách, dẫn đến tỷ lệ phân chia chính xác.
 Hình 3B, mẫu không bị bay hơi và phản lực lỏng hoàn toàn bỏ sót cột, gây ra tỷ lệ
phân chia vô hạn.
 Hình 3C, toàn bộ mẫu vào cột, với tỷ lệ phân chia bằng không.
Trong cả 3B và 3C, tỷ lệ phân chia do người vận hành đặt ra không ảnh hưởng đến
tỷ lệ phân chia thực tế, do mẫu không tự phân phối theo hai luồng khí. Cả 3B và 3C đều
không hiển thị đung một quy trình, mà là hai trường hợp cực đoan có thể xảy ra khi mẫu
không bị bay hơi trước khi đạt đến điểm phân tách.
Ở giữa A, B và C có nhiều khả năng xảy ra; một hỗn hợp của mẫu bốc hơi và chất
lỏng. Tính ngẫu nhiên liên quan đến quỹ đạo của phản lực lỏng gây ra một lượng mẫu
khác nhau đến cột, dẫn đến độ lặp lại rất kém. Tình hình có hơi khác nhau ở những mũi
tiêm không chia đôi, nhưng có được sự hóa hơi hoàn toàn vẫn rất quan trọng, như sẽ được
giải thích trong phần sau.
Tốc độ tiêm.

T r a n g 6 | 19
 Phải tiêm càng nhanh càng tốt để tránh sự phân tán của dải tiêm. Do nhiệt độ cột
trong phun không chia nhỏ hơn nhiệt độ sôi của dung môi, nên bẫy dung môi sẽ xảy
ra. Do đó, toàn bộ quá trình bay hơi và tốc độ bay hơi không ảnh hưởng đến độ rộng của
dải tiêm. Do đó, một mũi tiêm có thể được thực hiện từ từ, do đó cải thiện việc định
lượng. [4]

Hình 4: Sơ đồ cắt của một bộ bơm mẫu kiểu chia dòng

b. Tính chất
 Tốt nhất cho những mẫu phân tích có nồng độ cao hoặc phân tích khí, nhưng phân
tích định lượng có thể có các cấu tử khó bay hơi bị mất trong suốt quá trình tiêm mẫu.
 Tiêm mẫu chia dòng cung cấp độ phân giải cao và có thể xử lý những mẫu bẩn nếu
nhồi vào ống trong bộ tiêm mẫu một chất hấp phụ thích hợp.
 Các hợp chất không bền nhiệt có thể phân hủy trong suốt quá trình tiêm mẫu ở
nhiệt độ cao.
 Mẫu tiêm sau khi hóa hơi được thông với dòng khí mang tỷ lệ dòng khoảng 50 –
100 mL/phút.
- Toàn bộ khí chia làm hai phần theo tỷ lệ khoảng 1:20 hay 1:500. Trong đó chỉ có phần
nhỏ đi vào cột.
2. Kĩ thuật tiêm mẫu gián tiếp không chia dòng (splitless)
a. Đặc điểm
 Trong kỹ thuật này, khoảng 2mL dung dịch mẫu pha loãng được bơm vào buồng
bay hơi mẫu. Nhiệt độ của buồng bay hơi mẫu được đặt rất thấp (tương đượng nhiệt độ
phòng). Sau một thời gian nhất định thì mở bộ chia dòng (splitter). Và sau khi pic dung
môi xuất hiện, mới bắt đầu khởi động chương trình nhiệt độ. Kỹ thuật bơm mẫu kiểu này

T r a n g 7 | 19
làm cho pic dung môi nhỏ đi rất nhiều so với bình thường và do vậy các pic ra ngay sau
pic dung môi sẽ không bị xen phủ mất. Lý do là vì sau khi mẫu được bơm vào, toàn bộ
mẫu được tích lại ở buồng bay hơi gần bộ chia dòng vì nhiệt độ ở đây rất thấp. Khi bộ
chia dòng được mở ra, phần lớn lượng dung môi được khí mang đưa thoát ra ngoài. Lúc
đó các cấu tử và lượng dung môi còn sót lại mới được đưa vào cột mao quản . Nhờ vậy,
có thể phân tích được các mẫu pha rất loãng trong dung môi mà không sợ cột bị quá tải do
lượng cung môi lớn gây ra. Hiện tượng trên được Grob phát hiện và gọi là “ hiệu ứng
dung môi” (solvent effect). Kỹ thuật bơm mẫu kiểu này còn được gọi là bơm mẫu
chia/không chia (split/spitless injection ). Hình 2A trình bày sơ đồ của một bộ phận bơm
mẫu kiểu này theo thiết kế của Grob. Điều cần lưu tâm duy nhất trong kỹ thuật này là thời
gian lưu lại của mẫu trong buồng bay hơi mẫu khá lớn, có thể dẫn đến khả năng hấp phụ .
Để hạn chế bớt điều đó , trong nhiều trường hợp bộ chia dòng không hoàn toàn bịt mà vẫn
mở, nhưng tỷ lệ chia rất nhỏ, khoảng 1:5 đến 1:10. [3]
 Mẫu được giữ trong buồng hóa hơi trong thời gian dài hơn nhiều so với ở chế độ
phân tách, tạo ra nhiều thời gian hơn để mẫu bay hơi và đồng nhất hóa trước khi vào cột.
Mẫu chất lỏng bắn qua lối vào cột trong quá trình tiêm, như trong Hình 5B, vẫn có thể
tiếp cận lối vào cột; hoặc bằng cách bắn vào đáy buồng bốc hơi và ném nảy ngược vào
trong ống lót hoặc bằng cách ở dưới đáy buồng và bốc hơi từ đó. [1]
 Tuy nhiên, không phải tất cả các chất phân tích nằm ở dưới cùng của buồng hóa
hơi đều có khả năng tiếp cận lối vào cột như nhau: [1]
 Các chất phân tích sôi cao đòi hỏi nhiều thời gian hơn để bay hơi so với các chất
phân tích sôi thấp.
 Các chất phân tích sôi thấp và dung môi bay hơi trước, để lại các chất phân tích
sôi cao ở phía dưới.
 Dung môi và chất phân tích sôi thấp có cơ hội hình thành đám mây hơi đủ lớn để
vượt lên trên lối vào cột so với hơi từ các chất phân tích sôi cao hơn, xem Hình 4. Thời
gian lâu hơn để phân tích sôi cao để bay hơi cũng làm tăng nguy cơ chúng bị tuôn ra khi
buồng hóa hơi bị thanh trừng. Các phân tích sôi cao do đó bị phân tích sai khác, dẫn đến
định lượng sai lệch.

T r a n g 8 | 19
 Hình 5. Sự bay hơi của vật liệu ngưng tụ ở đáy buồng hóa hơi. A: Mẫu chất
lỏng được định vị ở dưới cùng của lớp lót. B: Dung môi và chất phân tích sôi
thấp bay hơi, tạo thành đám mây hơi đủ lớn để mở rộng trên lối vào cột. C:
Đám mây hơi hình thành từ các chất phân tích sôi cao không đủ lớn để đạt đến
một vị trí phía trên lối vào cột.

Việc hạ thấp cột có thể được coi là một giải pháp rõ ràng cho vấn đề được mô tả
trong Hình 5. Tuy nhiên, các mảnh vụn của vách ngăn, được hình thành khi kim đâm vào
vách ngăn, và dư lượng không bay hơi đôi khi có thể tích tụ dưới đáy buồng hóa hơi.
Định vị lối vào cột thẳng hàng với đáy buồng bốc hơi có nghĩa là các chất phân tích phải
đi qua các mảnh vụn. Các mảnh vụn vùng kín có thể hoạt động như một pha tĩnh và giữ
lại các chất phân tích sôi cao ở mức độ cao hơn so với các mảnh sôi thấp, cũng có thể gây
ra sự sai khác.

Tốc độ tiêm.

Trong tiêm không chia dòng, tốc độ tiêm khác nhau đáng kể so với tiêm trực tiếp và
tiêm dòng.  Toàn bộ mẫu bay hơi phải vừa trong ống lót. Việc này sẽ dễ dàng hơn nếu
mẫu được tiêm từ từ vào một ống lót rộng. Tuy nhiên, dẫn đến việc trộn lẫn nghiêm trọng
hơi dung môi với khí mang. Điều này lần lượt làm phức tạp việc tái sử dụng dung môi
trong cột. Vì lý do đó, lót lỗ khoan hẹp được sử dụng. Việc tiêm chậm để tránh sự bốc hơi
và nhiễu loạn giống như vụ nổ sẽ dẫn đến việc trộn lẫn. [4]

b. Tính chất
 Thích hợp cho những dung dịch rất loãng và lượng vết những cẩu tử có nồng độ
nhỏ hơn 0,01% mẫu.
 Nó cung cấp độ phân giải tốt nhưng trong phân tích định lượng có thể có các hợp
chất kém bay hơi bị mất trong quá trình tiêm.

T r a n g 9 | 19
  Nó tốt hơn chế độ tiêm mẫu chia dòng đối với những hợp chất có độ bền nhiệt
trung bình bởi vì nhiệt độ tiêm mẫu hạ thấp hơn.
 Tiêm mẫu không chia dòng giới thiệu mẫu vào cột chậm vì vậy bẫy dung môi và
bẫy lạnh được đòi hỏi và chỉ có khoảng 80 % mẫu được giới thiệu vào cột.
 Các mẫu chứa mỗi chất phân tích ít hơn 100 ppm có thể được phân tích trong
những cột có chiều dày lớp phim < 1μm với chế độ tiêm mẫu không chia dòng.
 Những mẫu có mỗi chất phân tích từ 100-1000 ppm đòi hỏi lớp phim dày hơn
1μm.
III.2. Kỹ thuật tiêm mẫu trực tiếp

 Kỹ thuật này cho phép đưa mẫu trực tiếp vào đầu cột mao quản nên loại trừ hoàn
toàn khả năng hấp phụ trong phần bay hơi mẫu cũng như loại trừ được “sự phân biêt đối
xử" đối với các cấu tử có trong mẫu. So với các kỹ thuật khác, bơm mẫu trực tiếp có ưu
điểm nhất và trung thành nhất với thành phần mẫu ban đầu xem hình 6. [3]
 Tuy nhiên cần phải thấy rằng, kỹ thuật đưa mẫu vào cột theo kiểu này đòi hỏi một
thiết kế đặc biệt đối với bộ phận bơm mẫu. Hình 6 trình bày sơ đồ nguyên lý hoạt động
của bộ phận bơm mẫu theo nguyên tắc này. [3]

Hình 6. Sơ đồ cắt dọc của bộ phận bơm máu theo kiểu trực tiếp (on-
column) của hãng Carlo Erba.
1. Cột mao quản; 2. Lối vào của khí mang;
3. Nón trung tâm; 4. Van chặn;
5. Rãnh địa hướng thay cho septum; 6. Cần gạt van chặt;
7. Lối vào cho không khí thổi nguội; 8. Tấm cách nhiệt.
 Phương pháp bơm mẫu trực tiếp cũng như phương pháp bơm mẫu không chia cho
sắc ký mao quản phụ thuộc vào quá trình bẩy lạnh hoặc “hiệu ứng dung môi" nhằm làm
giàu mẫu tại đầu cột tách so với kỹ thuật bay hơi chớp nhoáng. [3]

T r a n g 10 | 19
  Ưu điểm: [3]
 Mẫu được đưa trực tiếp vào một tách nên khả năng phân hủy mẫu được giảm đến
tối thiểu.
 Mẫu không bị chia (trong sắc ký mao quản thường dùng bộ chia dòng) nên loại trừ
được sự phân biệt đối xử của bộ chia, có thể tái tạo trung thành dược mẫu ban đầu, nhất là
đối với các cấu tử có điểm sôi cao
 Không cần thiết phải dùng nhiều dung môi để hòa tan và bay hơi triệt để như trong
kỹ thuật bơm trước đây nên tránh được sự xen phủ của pic dung môi đối với các cấu tử có
thời gian lưu nhỏ .
 Vì kim của xyranh rất mạnh và hầu như không có thể tích chết đối với mẫu nền sự
phân biệt đối xử của đầu kim được loại trừ - đó là một trong những nguồn gây lỗi lớn nhất
trong phân tích định lượng đối với các mẫu có khoảng điểm sôi rộng.
 Phương pháp này không cần septum nên đỡ tốn kém, tránh bị hở gây dao động
đường nền và tránh nhiễm bẩn cột tách .
 Trong phương pháp tiêu mẫu trực tiếp, người ta sử dụng cột có đường kính trong
tương đối lớn (0.32 nm) rồi tiêm trực tiếp mẫu phân tích vào cột mà không có sự hóa hơi
ở buồng tiêm, do đó thành phần của mẫu mà khi được tiêm vào cột ít thay đổi so với mẫu
ban đầu và có độ lặp cao.
 Phương pháp này yêu cầu việc sử dụng loại kim tiêm phải có đầu kim nhỏ để việc
đưa mẫu vào cột diễn ra dễ dàng hơn. Tuy nhiên, đây cũng là một nhược điểm khiến cho
phương pháp này khó thực hiện hơn phương pháp tiêm mẫu không chia dòng mặc dù
phương pháp này được xem là tốt nhất trong số các kỹ thuật tiêm mẫu vào cột mao quản.

III.3. Kỹ thuật tiêm mẫu headspace trong phân tích sắc ký khí GC
Tiêm mẫu pha hơi (headspace) trong phân tích GC có 02 hình thức phổ biến: [5-6]
 Tiêm mẫu headspace tĩnh: Hệ thống bao gồm buồng chứa có khả năng ổn định và
kiểm soát nhiệt độ. Ngoài ra thiết bị còn được gắn các lọ chứa mẫu rắn hoặc lỏng được
đặt trong buồng đến khi thành phần bay hơi đạt cân bằng giữa các pha với nhau thì mới
nạp mẫu khí vào máy sắc ký.

T r a n g 11 | 19
 Hình 7: Sơ đồ cắt của hệ thống tiêm mẫu headspace tĩnh
 Tiêm mẫu headspace động: Hệ thống chứa các bộ phận thực hiện công đoạn
nhúng chìm buồng chứa mẫu trong hỗn hợp các chất bay hơi trong cột hấp phụ ở điều
kiện nhiệt thấp; sau đó tiến hành giải hấp các chất lưu giữ vào pha động thông qua việc
làm nóng nhanh cột hấp phụ.

Hình 8: Sơ đồ của hệ thống tiêm mẫu headspace động.

 Ưu điểm:

 Tối ưu hóa năng suất phân tích GC thông qua việc loại bỏ các quy trình chuẩn bị
mẫu chồng cheo;
 Gia tăng hiệu suất lấy mẫu pha hơi (headspace) với chức năng tiền xử lý mẫu;
 Tích hợp công nghệ kết nối không dây đã được cấp bằng sáng chế Machine to
Machine (M2M);
 Cung cấp khả năng chuyển động quỹ đạo và chuyển động dao động cho các khối
SPME incubator;
 Vượt trội với khả năng điều chỉnh can thiệp line-by-line mà không làm gián đoạn
trình tự;

T r a n g 12 | 19
  Tích hợp khay hiệu chuẩn tự động và phụ kiện để giảm thiểu thời gian thiết lập;
 Không cần mua các bản nâng cấp phần mềm, mọi chức năng đều tích hợp sẵn
trong gói tiêu chuẩn đi kèm với thiết bị;
 Khả năng hoạt động độc lập với bất kỳ hệ thống phân tích nào trên thị trường;
 Quá trình nghiên cứu, phát triển và sản xuất sản phẩm diễn ra hoàn toàn tại Mỹ.

 Lĩnh vực ứng dụng

 Thực phẩm & Đồ uống

 Hương liệu
 Dược phẩm
 Thảo dược

IV. CÁC KỸ THUẬT SỬ DỤNG TIÊM (SYRINGE)

Các kim của xylanh thông thường có “thể tích chết” khoảng 1L (thể tích chính của
đầu kim), gây ra sự phân biệt đối xử khá lớn. Để khắc phục điều này, một số kỹ thuật bơm
mẫu khác nhau đã được đề xuất như : kỹ thuật bơm kim dầy, kim lạnh, kim nóng, đẩy
dung môi. Trong đó , kỹ thuật bơm kim nóng là khả quan nhất nhưng vẫn kém kỹ thuật
bơm trực tiếp. Hình 9 cho thấy sự khác nhau đó. [3]

Hình 9: So sánh các kỹ thuật bơm

IV.1. Kỹ thuật “kim nóng” và Kỹ thuật “kim lạnh”
Tiêm và không chia dòng (split/splitless injections) có chung 1 nguyên nhân của sự
phân biệt đối xử; bay hơi mẫu một phần trong kim ống tiêm khi nó nóng lên trong đầu
vào sắc ký khí. Kim có thể chứa một khối lượng mẫu đáng kể, thường là khoảng 0,5 -

T r a n g 13 | 19
2L, không bao gồm trong thể tích đọc trên ống. Lấy mẫu đến “1 L” trên một ống trong
tổng số hơn 1,5 mẫu trong ống tiêm. Kim nóng lên nhanh chóng khi nó được đưa vào
đầu vào, gây ra sự bay hơi của dung môi và chất phân tích sôi thấp. Khi nhấn piston, 1 L
chất lỏng thoát ra khỏi kim và phần còn lại nằm trong kim. Sau sự suy yếu của piston,
dung môi và chất phân tích sôi thấp bắt đầu bay hơi khỏi kim loại trong khi để lại chất
phân tích sôi cao hơn phía sau, dẫn đến sự phân biệt đối xử, xem Hình 10. [1]

Hình 10. Sự bay hơi một phần trước và sau khi tiêm từ kim dẫn đến sự phân
biệt đối xử (không theo tỷ lệ). A: Trước khi tiêm, dung môi và chất phân tích
sôi thấp bắt đầu bay hơi ngay khi kim được đưa vào. B: Chất phân tích sôi
thấp bắt đầu bay hơi từ kim sau khi tiêm. C & D: Chất phân tích sôi thấp
tiếp tục bay hơi, để lại chất phân tích sôi cao trong kim.
plunger: piston; original sample: mẫu ban đầu;
Sample enriched in high boiling analytes: Mẫu làm giàu trong phân tích sôi cao;
Heated inlet: Đầu vào nóng;
Solvent + low boiling analytes: Dung môi + phân tích sôi thấp.

Vấn đề phân biệt các chất phân tích sôi cao đã được giải quyết theo hai cách khác
nhau: tiêm “kim lạnh” (“hot needle” injection) và tiêm “kim nóng” (“cold needle”
injection) Hai kỹ thuật và trạng thái của mẫu trong mỗi kỹ thuật đã được Grob nghiên cứu
kỹ lưỡng.[1]
1. Kỹ thuật “kim nóng” (“hot needle”)

T r a n g 14 | 19
 Kỹ thuật kim tiêm nóng là kỹ thuật làm nóng đầu kim một vài giây trước khi nhấn
piston. [7-8] Các bước tiến hành như sau:
 Đầu tiên mẫu được rút vào nòng của ống tiêm để không bay hơi khỏi kim trong
quá trình gia nhiệt kim.
 Sau đó, kim được đưa vào đầu vào và giữ ở đó trong 3-5 giây.
 Cuối cùng, piston bị nén nhanh chóng và mẫu chất lỏng được đưa qua kim nóng và
được bốc hơi một phần trên bề mặt kim nóng. Sự hóa hơi này dẫn đến sự tăng áp suất trên
chất lỏng gây nên “vụ nổ” ở đầu kim. Chất lỏng tạo thành một giọt nhỏ, được làm chậm
lại do ma sát với khí mang và do đó được cho nhiều thời gian hơn để bay hơi trước khi
đến lối vào cột. Có thể xem diện tích bề mặt của các giọt nhỏ cũng góp phần tăng tốc độ
truyền nhiệt.
 Nhược điểm [7-8]:
 Vẽ mẫu chất lỏng vào thùng trước khi tiêm sẽ tránh bay hơi trước khi tiêm, nhưng
không làm giảm sự bay hơi sau tiêm từ kim vì kim được để lại trong đầu vào trong một
khoảng thời gian sau khi tiêm.
 Kỹ thuật kim nóng bị giới hạn bởi khả năng nhiệt của kim. Sự bay hơi của mẫu cần
thiết để tạo thành bình xịt làm mát kim.
 Tiêm quá lớn hoặc tiêm dung môi sôi cao có thể làm mát kim đến nhiệt độ dưới
mức cần thiết để tạo thành bình xịt (nó gọi là nebulization: kiểu như phun sương). Bất kỳ
mẫu nào còn lại trong kim sau khi hết nhiệt sau đó sẽ rời khỏi ống tiêm dưới dạng một
dải. Vì kim loại bên trong kim hoạt động như buồng hóa hơi, nên sẽ gặp phải một số vấn
đề bề mặt kim loại có thể hoạt động xúc tác, có thể làm suy giảm chất phân tích và bên
trong kim là không thể để kiểm tra sự tích tụ của dư lượng mẫu không bay hơi, do đó
không thể sử dụng lại tiêm hoặc sử dụng cho mẫu khác.

Hơi hóa một phần bên trong kim

Chất lỏng mẫu phát nổ

Những giọt nhỏ làm chậm tốc độ khí

Bốc hơi mà không tiếp xúc với bề mặt

lót

T r a n g 15 | 19
 Hình 11: Sự bay hơi mẫu liên quan đến việc
phun sương ở lối ra kim.

2. Kỹ thuật “kim lạnh” (“cold needle”)

 Quá trình thêm, tiêm, và rút kim được thực hiện rất nhanh trong 0,1 giây, do đó
triệt tiêu sự nóng lên của kim và dẫn đến sự bay hơi phân biệt của các chất. [7-8]
 Chất lỏng được bơm qua kim lạnh ở tốc độ cao sẽ vẫn là chất lỏng và để lại kim
ống tiêm dưới dạng dãy. Chất lỏng sẽ đi qua khoan hóa hơi, trong một phần nhỏ của giây
sẽ chạm vào đáy của khoan. Nhiệt truyền vào mẫu chất lỏng từ thành ống lót và khí mang
trong thời gian ngắn trước khi chạm đáy thường không đủ để gây ra sự bay hơi hoàn toàn.
Do đó không thể đạt được sự đồng nhất và một lượng mẫu khác sẽ đi vào cột khi tiêm, tùy
thuộc vào lượng chất lỏng đập vào đầu cột. [7-8]
.

Các mẫu trong dung môi dễ bay hơi không

thể chạm vào tường chèn, nhưng rơi vào
một nút len.

Hình 12: Chất lỏng mẫu không được

phun sương phải được dừng lại bằng len
thủy tinh hoặc thạch anh.
 Để tăng sự hóa hơi, tăng sự đồng nhất người ta tăng sự truyền nhiệt sang chất lỏng;
bằng cách: [7-8]
 Tăng thời gian chất lỏng trong buồn hóa hơi tăng ở trong buồn hóa hơi bằng cách
đặt vào đó một miếng bông thủy tinh. Chất lỏng sau đó được bắt vào len và giữ ở đó đủ
lâu để bay hơi. Bản thân sợi thủy tinh không cung cấp nhiều nhiệt , nó chỉ giữ cho chất
lỏng đứng yên để cho phép truyền nhiệt từ khí mang và tường thủy tinh xung quanh. Một
nhược điểm của bông thủy tinh là nó có thể chứa các bề mặt hoạt động bất lợi, trên đó các
chất phân tích nhất định có thể bị biến chất.
 Đưa chất lỏng tiếp xúc với bình chứa nhiệt lớn hơn khí mang (tức là thành ống
lót). Buộc chất lỏng tiếp xúc với thành ống nơi mà nhiệt độ rất cao. Vấn đề với phương
T r a n g 16 | 19
pháp này là thực tế là chất lỏng có thể tạo thành một lớp hơi khi tiếp xúc với bề mặt có
nhiệt độ cao hơn nhiệt độ sôi của chất lỏng, được gọi là hiện tượng Leidenfrost. Do đó,
chất lỏng này được bảo vệ bởi các bề mặt nóng và vượt qua các sự co thắt mà không bị
bay hơi theo kiểu nhanh chóng cần thiết trong một mũi tiêm GC.

Bảng 1: Khối lượng và cột mẫu tiêu chuẩn cho từng phương pháp tiêm.
Phương pháp Tiêm nóng Tiêm lạnh
tiêm Lập trình
Tổng khối Tiêm lạnh
Split splitless hóa hơi
lượng trên cột
nhiệt độ
Mẫu lỏng Có Có Có Có Có
Mẫu khí Có Có Có - -
Thể tích tiêm Mẫu chất lỏng: 2 µL Mẫu chất lỏng: 0.5 đến 2
tối đa 2 Lít. max. tối đa 2 Lít. µL
1 đến 8 µL
Mẫu khí: tối đa Mẫu khí: tối đa
1 mL. 0,5 mL.

IV.2. Kỹ thuật “đẩy dung môi” (“push solvent”)

Đây là một thủ thuật nhỏ nhằm khống chế lượng bơm nhỏ hơn lL, trong khi chính
thể tích đầu kim đã là lL. Trước tiên, hút vào xylanh một loại dung môi thích hợp có thể
hòa tan mẫu, rồi để piston đẩy hết toàn bộ mẫu ra chỉ còn đúng lL dung môi nằm ở trong
đầu kim. Sau đó, đưa kim nhúng vào ống dựng mẫu và hút lên một lượng chất mong
muốn. trên sắc tố đồ sẽ cho các pic dung môi ứng với lL và các pic của các cấu tử cần
xác định. [3]
IV.3. Kỹ thuật “kim đầy” (“filled needle”)
Đây là phương pháp hay được sử dụng nhất hiện nay. Với kỹ thuật này, mẫu luôn
còn lại trong kim nên khi đâm kim qua septum dù chưa đẩy piston thì mẫu ở đầu kim đã
chạy ra dưới tác dụng của nhiệt độ . Như vậy, sự bay hơi này tương tự như quá trình
chưng cất, nghĩa là có sự phân biệt đối xử giữa các cấu tử dể và khó bay hơi, các cấu tử
nặng ở lại trong kim nhiều nhất nên trên sắc đồ không thể hiện toàn lượng. [3]
V. TÀI LIỆU THAM KHẢO

[1] Jonas Bonn, Improved Techniques for Sampling and Sample Introduction in Gas
Chromatography. Royal Institute of Technology, Stockholm, 2008.
[2] Dược điển Việt Nam. https://duocdienvietnam.com/phuong-phap-sac-ky-khi/,
2018.
[3] Phạm Hùng Việt, Cơ sở lý thuyết của phương pháp sắc ký khí, NXB Khoa học và
Kỹ thuật, Hà Nội, 2003.

T r a n g 17 | 19
[4] Chemisstry-LibreTexts,
https://chem.libretexts.org/Bookshelves/Analytical_Chemistry/Supplemental_Mod
ules_(Analytical_Chemistry)/Chromedia/01Gas_Chromotography_(GC)/Gas_Chro
motography%3A_In_Practice/02Gas_Chromatography
%3A_Injection_techniques_and_principles/23Splitless_injection, 2019.
[5] Tegent, https://www.tegent.com.vn/vi/tin-tuc/blog-tin-tuc/255-thiet-bi-tiem-
headspace-sac-ky.html, 2020.
[6] Kremser, A., Jochmann, M. A., & Schmidt, T. C. (2016). Systematic comparison
of static and dynamic headspace sampling techniques for gas chromatography.
Analytical and Bioanalytical Chemistry, Vol. 408, no. 24, pp. 6567–6579.
[7] Grob, K. (1992). Sample evaporation in conventional GC split/splitless injectors.
Part 1: Some quantitative estimates concerning heat consumption during
evaporation. Journal of High Resolution Chromatography, Vol. 15, no. 3, pp. 190–
194.
[8] Grob, K., & Wagner, C. (1993). Inserts providing complete sample evaporation
above the column entrance in vaporizing GC injectors. Journal of High Resolution
Chromatography, Vol. 16, no. 7, pp. 429–432.
[9] Restek Corporation, https://www.youtube.com/watch?v=dWsEsDikpHA, 2018.
[10] Restek Corporation, https://www.youtube.com/watch?v=TaLOF_jVRno, 2020.

T r a n g 18 | 19
HẾT

T r a n g 19 | 19