Inxhinieria gjenetike, e quajtur ndryshe modifikim gjenetik ose manipulim gjenetik, është manipulimi i

drejtpërdrejtë i gjeneve të një organizmi duke përdorur bioteknologjinë. Isshtë një grup teknologjish të
përdorura për të ndryshuar përbërjen gjenetike të qelizave, duke përfshirë transferimin e gjeneve
brenda dhe përtej kufijve të specieve për të prodhuar organizma të përmirësuar ose të rinj. ADN-ja e re
merret duke izoluar dhe kopjuar materialin gjenetik me interes duke përdorur metoda rekombinante të
ADN-së ose duke sintetizuar artificialisht ADN-në. Një konstrukt zakonisht krijohet dhe përdoret për të
futur këtë ADN në organizmin pritës. Molekula e parë rekombinante e ADN-së u bë nga Paul Berg në
1972 duke kombinuar ADN-në nga virusi i majmunit SV40 me virusin lambda. Si dhe futja e gjeneve,
procesi mund të përdoret për të hequr, ose "nokautuar", gjenet. ADN-ja e re mund të futet rastësisht,
ose të drejtohet në një pjesë specifike të gjenomit.

Një organizëm që gjenerohet përmes inxhinierisë gjenetike konsiderohet të jetë i modifikuar gjenetikisht
(GM) dhe entiteti që rezulton është një organizëm i modifikuar gjenetikisht (OMGJ). OMGJ-ja e parë
ishte një bakter i gjeneruar nga Herbert Boyer dhe Stanley Cohen në 1973. Rudolf Jaenisch krijoi kafshën
e parë GM kur futi ADN të huaj në një mi në 1974. Kompania e parë që u përqëndrua në inxhinieri
gjenetike, Genentech, u themelua në 1976 dhe filloi prodhimin e proteinave njerëzore. Insulina
njerëzore e inxhinierizuar gjenetikisht u prodhua në 1978 dhe bakteret prodhuese të insulinës u
komercializuan në 1982. Ushqimi i modifikuar gjenetikisht është shitur që nga viti 1994, me lëshimin e
domates Flavr Savr. Flavr Savr u krijua për të pasur një jetë më të gjatë në ruajtje, por shumica e të
mbjellave aktuale GM janë modifikuar për të rritur rezistencën ndaj insekteve dhe herbicideve. GloFish,
OMGJ-ja e parë e projektuar si kafshë shtëpiake, u shit në Shtetet e Bashkuara në Dhjetor 2003. Në vitin
2016 u shitën salmoni i modifikuar me një hormon të rritjes.Inxhinieria gjenetike është aplikuar në fusha
të shumta duke përfshirë kërkimin shkencor, mjekësinë, bioteknologjinë industriale dhe bujqësinë. Në
hulumtim OMGJ-të përdoren për të studiuar funksionin dhe shprehjen e gjenit përmes humbjes së
funksionit, përfitimit të funksionit, përcjelljes dhe eksperimenteve të shprehjes. Duke trokitur gjenet
përgjegjëse për kushte të caktuara është e mundur të krijohen organizma të kafshëve model të
sëmundjeve njerëzore. Si dhe prodhon hormone, vaksina dhe ilaçe të tjera, inxhinieria gjenetike ka
potencialin për të kuruar sëmundjet gjenetike përmes terapisë gjenike. Të njëjtat teknika që përdoren
për të prodhuar barna mund të kenë gjithashtu aplikime industriale siç janë prodhimi i enzimave për
detergjentin e rrobave, djathrave dhe produkteve të tjera.

Rritja e kulturave të modifikuara gjenetikisht të komercializuara ka siguruar përfitim ekonomik për

fermerët në shumë vende të ndryshme, por gjithashtu ka qenë burimi i shumicës së polemikave përreth
teknologjisë. Kjo ka qenë e pranishme që nga përdorimi i saj i hershëm; provat e para në terren u
shkatërruan nga aktivistët anti-GM. Megjithëse ekziston një konsensus shkencor se ushqimi aktualisht i
disponueshëm që rrjedh nga kulturat GM nuk përbën rrezik më të madh për shëndetin e njeriut sesa
ushqimi konvencional, siguria e ushqimit GM është një shqetësim kryesor për kritikët. Rrjedha e
gjeneve, ndikimi në organizmat jo-shënjestër, kontrolli i furnizimit me ushqim dhe të drejtat e pronësisë
intelektuale janë ngritur gjithashtu si çështje të mundshme. Këto shqetësime kanë çuar në zhvillimin e
një kornize rregullatore, e cila filloi në 1975. Ajo ka çuar në një traktat ndërkombëtar, Protokolli i
Kartagjenës për Biosigurinë, i cili u miratua në vitin 2000. Vendet individuale kanë zhvilluar sistemet e
tyre rregullatore në lidhje me OMGJ, me ndryshimet më të dukshme që ndodhin midis SHBA dhe
Evropës.

Inxhinieria gjenetike është një proces që ndryshon strukturën gjenetike të një organizmi duke hequr ose
futur ADN-në. Ndryshe nga mbarështimi tradicional i kafshëve dhe bimëve, i cili përfshin bërjen e
kryqeve të shumëfishta dhe më pas zgjedhjen e organizmit me fenotipin e dëshiruar, inxhinieria
gjenetike merr gjenin direkt nga një organizëm dhe e dorëzon atë te tjetri. Kjo është shumë më e
shpejtë, mund të përdoret për të futur ndonjë gjen nga çdo organizëm (madje edhe nga ato të fushave
të ndryshme) dhe parandalon gjenet e tjera të padëshirueshme të shtohen gjithashtu.

Inxhinieria gjenetike mund të rregullojë çrregullime të rënda gjenetike te njerëzit duke zëvendësuar
gjenin e dëmtuar me një funksionues. Shtë një mjet i rëndësishëm në kërkime që lejon studimin e
funksionit të gjeneve specifike. Droga, vaksinat dhe produktet e tjera janë mbledhur nga organizmat e
krijuar për t'i prodhuar ato. Janë zhvilluar të mbjellat që ndihmojnë në sigurinë ushqimore duke rritur
rendimentin, vlerën ushqyese dhe tolerancën ndaj streseve mjedisore.

ADN-ja mund të futet drejtpërdrejt në organizmin pritës ose në një qelizë që është shkrirë ose
hibridizuar me strehuesin. Kjo mbështetet në teknikat rekombinante të acidit nukleik për të formuar
kombinime të reja të materialit gjenetik të trashëgueshëm të ndjekur nga përfshirja e këtij materiali ose
indirekt përmes një sistemin vektorial ose drejtpërdrejt përmes mikro-injeksionit, makro-injeksionit ose
mikro-kapsulimit.

Inxhinieria gjenetike normalisht nuk përfshin mbarështimin tradicional, fekondimin in vitro, induksionin
e poliploidisë, mutagjenezës dhe teknikat e shkrirjes së qelizave që nuk përdorin acide nukleike
rekombinante ose një organizëm të modifikuar gjenetikisht në proces. Sidoqoftë, disa përkufizime të
gjera të inxhinierisë gjenetike përfshijnë mbarështimin selektiv. Klonimi dhe hulumtimi i qelizave
burimore, megjithëse nuk konsiderohet inxhinieri gjenetike, janë të lidhura ngushtë dhe inxhinieria
gjenetike mund të përdoret brenda tyre. Biologjia sintetike është një disiplinë në zhvillim që e çon
inxhinierinë gjenetike një hap më tej nga futja e materialit të sintetizuar artificialisht në një organizëm.
ADN-ja e tillë sintetike si Sistemi i Informacionit Gjenetik i Zgjeruar Artificialisht dhe ADN-ja e Hachimoji
është bërë në këtë fushë të re.

Bimët, kafshët ose mikroorganizmat që janë ndryshuar përmes inxhinierisë gjenetike quhen organizma
të modifikuar gjenetikisht ose OMGJ. Nëse strehuesit i shtohet material gjenetik nga një specie tjetër,
organizmi që rezulton quhet transgjenik. Nëse përdoret material gjenetik nga e njëjta specie ose një
specie që mund të shumohet natyrshëm me bujtesin, organizmi që rezulton quhet cisgenic. Nëse
inxhinieria gjenetike përdoret për të hequr materialin gjenetik nga organizmi i synuar, organizmi që
rezulton quhet një organizëm nokaut. Në Evropë modifikimi gjenetik është sinonim i inxhinierisë
gjenetike ndërsa brenda Shteteve të Bashkuara të Amerikës dhe Kanadasë modifikimi gjenetik mund të
përdoret gjithashtu për t'iu referuar metodave më konvencionale të mbarështimit.
Procesi

Teknikat e inxhinierisë gjenetike

Krijimi i një OMGJ është një proces me shumë hapa. Inxhinierët gjenetikë së pari duhet të zgjedhin atë
gjen që dëshirojnë të fusin në organizëm. Kjo drejtohet nga qëllimi që synon për organizmin rezultues
dhe është i bazuar në kërkime të mëparshme. Ekranet gjenetike mund të kryhen për të përcaktuar
gjenet e mundshme dhe teste të mëtejshme më pas përdoren për të identifikuar kandidatët më të mirë.
Zhvillimi i mikro-rrezeve, transcriptomics dhe renditja e gjenomit e ka bërë shumë më të lehtë për të
gjetur gjenet e përshtatshme.

Izolimi dhe klonimi i gjenit

Artikulli kryesor: Klonimi molekular

Hapi tjetër është izolimi i gjenit kandidat. Qeliza që përmban gjen hapet dhe ADN pastrohet. Gjeni
ndahet duke përdorur enzima kufizuese për të prerë ADN-në në fragmente ose reaksion zinxhir
polimerazë (PCR) për të amplifikuar segmentin e gjenit. Këto segmente pastaj mund të nxirren përmes
elektroforezës së xhelit. Nëse gjeni i zgjedhur ose gjenoma e organizmit dhurues është studiuar mirë, ai
mund të jetë i arritshëm nga një bibliotekë gjenetike. Nëse sekuenca e ADN-së dihet, por nuk ka kopje të
gjenit, ajo gjithashtu mund të sintetizohet artificialisht. Sapo të izolohet, gjen lidhet në një plazmid që
futet më pas në një bakter. Plazmidi replikohet kur bakteret ndahen, duke siguruar që të ekzistojnë
kopje të pakufizuara të gjenit.

Para se të futet gjeni në organizmin e synuar, ai duhet të kombinohet me elementë të tjerë gjenetikë.
Këto përfshijnë një rajon promovues dhe terminator, i cili fillon dhe përfundon transkriptimin. Shtohet
një gjen shënues i zgjedhur, i cili në shumicën e rasteve jep rezistencë ndaj antibiotikëve, kështu që
studiuesit mund të përcaktojnë me lehtësi se cilat qeliza janë transformuar me sukses. Geni gjithashtu
mund të modifikohet në këtë fazë për shprehje ose efektivitet më të mirë. Këto manipulime kryhen duke
përdorur teknikat rekombinante të ADN-së, siç janë tretjet me kufizim, ligacionet dhe klonimi molekular.

Futja e ADN-së në gjenomën e bujtësit

Artikulli kryesor: Dorëzimi i gjenit

Një armë gjenike përdor biologjinë për të futur ADN-në në indet bimore
Ekzistojnë një numër teknikash të përdorura për të futur materialin gjenetik në gjenomin e nikoqirit.
Disa baktere mund të marrin natyrshëm ADN-në e huaj. Kjo aftësi mund të induktohet në bakteret e
tjera përmes stresit (p.sh. goditja termike ose elektrike), e cila rrit depërtueshmërinë e membranës
qelizore ndaj ADN-së; ADN-ja e marrë lart ose mund të integrohet me gjenomin ose të ekzistojë si ADN
ekstrakromozomale. ADN-ja zakonisht futet në qelizat shtazore duke përdorur mikroinjeksion, ku mund
të injektohet përmes mbështjellësit bërthamor të qelizës direkt në bërthamë, ose përmes përdorimit të
vektorëve viralë.

Genomat e bimëve mund të inxhinierohen me metoda fizike ose duke përdorur Agrobacterium për
shpërndarjen e sekuencave të strehuara në vektorë binarë të T-DNA. Në bimë ADN-ja shpesh futet duke
përdorur transformimin e ndërmjetësuar nga Agrobacterium, duke përfituar nga sekuenca
Agrobacteriums T-DNA që lejon futjen natyrale të materialit gjenetik në qelizat bimore. Metoda të tjera
përfshijnë biologjinë, ku grimcat e arit ose tungstenit janë të veshura me ADN dhe më pas qëllohen në
qelizat e reja bimore, dhe elektroporimi, i cili përfshin përdorimin e një goditje elektrike për ta bërë
membranën qelizore të përshkueshme nga ADN plazmidike.

Meqenëse vetëm një qelizë e vetme transformohet me material gjenetik, organizmi duhet të
rigjenerohet nga ajo qelizë e vetme. Në bimë kjo arrihet përmes përdorimit të kulturës së indeve. Në
kafshë është e nevojshme të sigurohet që ADN-ja e futur është e pranishme në qelizat burimore
embrionale. Bakteret përbëhen nga një qelizë e vetme dhe riprodhohen në mënyrë klonale, kështu që
rigjenerimi nuk është i nevojshëm. Shënuesit e zgjedhshëm përdoren për të diferencuar lehtësisht
qelizat e transformuara nga qelizat e pa transformuara. Këto shënjues zakonisht janë të pranishëm në
organizmin transgjenik, megjithëse janë zhvilluar një numër strategjish që mund të heqin shënuesin e
zgjedhur nga bima e pjekur transgjenike.

A. tumefaciens duke u bashkangjitur në një qelizë karrote

Testimi i mëtejshëm duke përdorur PCR, hibridizimin Jugor dhe sekuencën e ADN-së është kryer për të
konfirmuar që një organizëm përmban gjenin e ri. Këto teste gjithashtu mund të konfirmojnë
vendndodhjen kromozomale dhe numrin e kopjimit të gjenit të futur. Prania e gjenit nuk garanton se do
të shprehet në nivelet e duhura në indin e synuar, në mënyrë që të përdoren edhe metodat që kërkojnë
dhe matin produktet e gjenit (ARN dhe proteina). Këto përfshijnë hibridizimin verior, RT-PCR sasiore,
njolla Western, imunofluoreshenca, ELISA dhe analiza fenotipike.

Materiali i ri gjenetik mund të futet rastësisht brenda gjenomit të nikoqirit ose të drejtohet në një vend
specifik. Teknika e shënjestrimit të gjeneve përdor rekombinimin homolog për të bërë ndryshimet e
dëshiruara në një gjen specifik endogjen. Kjo ka tendencë të ndodhë me një frekuencë relativisht të ulët
në bimë dhe kafshë dhe në përgjithësi kërkon përdorimin e shënjuesve të zgjedhur. Frekuenca e
shënjestrimit të gjeneve mund të rritet shumë përmes redaktimit të gjenomit. Redaktimi i gjenomit
përdor nukleaza të krijuara në mënyrë artificiale që krijojnë pushime specifike me dy fije në vendet e
dëshiruara në gjenom dhe përdorin mekanizmat endogjenë të qelizës për të riparuar thyerjen e
shkaktuar nga proceset natyrore të rekombinimit homolog dhe bashkimit përfundimtar johomolog.
Ekzistojnë katër familje të nukleazave të inxhinieruara: meganukleaza, nukleaza të gishtit të zinkut,
nukleaza efektore si aktivizuesi i transkriptimit (TALEN) dhe sistemi Cas9-guideRNA (përshtatur nga
CRISPR). TALEN dhe CRISPR janë dy më të përdorurat dhe secila ka të vetat Përparësitë.

Aplikimet
Inxhinieria gjenetike ka aplikime në mjekësi, kërkime, industri dhe bujqësi dhe mund të përdoret në një
gamë të gjerë bimësh, kafshësh dhe mikroorganizmash. Bakteret, organizmat e parë që modifikohen
gjenetikisht, mund të fusin ADN plazmide që përmbajnë gjene të reja që kodojnë për ilaçe ose enzima që
përpunojnë ushqimin dhe substratet e tjera. Bimët janë modifikuar për mbrojtjen e insekteve,
rezistencën ndaj herbicideve, rezistencën ndaj viruseve, ushqimin e përmirësuar, tolerancën ndaj
presioneve mjedisore dhe prodhimin e vaksinave të ngrënshme. Shumica e OMGJ-ve të komercializuara
janë bimë bimore rezistente ndaj insekteve ose rezistente ndaj herbicideve. Kafshët e modifikuara
gjenetikisht janë përdorur për kërkime, modelimin e kafshëve dhe prodhimin e produkteve bujqësore
ose farmaceutike. Kafshët e modifikuara gjenetikisht përfshijnë kafshë me gjen të nokautuar, ndjeshmëri
të shtuar ndaj sëmundjeve, hormone për rritje shtesë dhe aftësinë për të shprehur proteina në
qumështin e tyre

Mjekesi
Inxhinieria gjenetike ka shumë zbatime në mjekësi që përfshijnë prodhimin e ilaçeve, krijimin e kafshëve
model që imitojnë kushtet njerëzore dhe terapinë e gjeneve. Një nga përdorimet më të hershme të
inxhinierisë gjenetike ishte prodhimi masiv i insulinës njerëzore në baktere. Ky aplikacion tani është
aplikuar tek, hormonet e rritjes njerëzore, hormonet stimuluese të gjëndrave (për trajtimin e
infertilitetit), albumina njerëzore, antitrupat monoklonalë, faktorët antihemofilikë, vaksinat dhe shumë
ilaçe të tjera. Hibridomat e miut, qelizat e bashkuara për të krijuar antitrupa monoklonalë, janë
përshtatur përmes inxhinierisë gjenetike për të krijuar antitrupa monoklonalë njerëzorë. Në vitin 2017,
inxhinieria gjenetike e receptorëve kimikë kimikë në qelizat T të vetë pacientit u aprovua nga FDA e
SHBA si një trajtim për kancerin e leukemisë akute limfoblastike. Janë duke u zhvilluar viruse të krijuara
gjenetikisht, të cilat akoma mund të japin imunitet, por nuk kanë sekuenca infektive.

Inxhinieria gjenetike përdoret gjithashtu për të krijuar modele shtazore të sëmundjeve njerëzore. Minjtë
e modifikuar gjenetikisht janë modeli më i zakonshëm i kafshëve të krijuara gjenetikisht. Ata janë
përdorur për të studiuar dhe modeluar kancerin (dhjamëza), mbipesha, sëmundjet e zemrës, diabeti,
artriti, abuzimi i substancave, ankthi, plakja dhe sëmundja Parkinson. Shërimet e mundshme mund të
testohen kundër këtyre modeleve të miut. Gjithashtu derrat e modifikuar gjenetikisht janë edukuar me
qëllim të rritjes së suksesit të transplantimit të organeve njerëzore të derrit.

Terapia gjenike është inxhinieria gjenetike e njerëzve, përgjithësisht duke zëvendësuar gjenet e dëmtuar
me ato efektive. Hulumtimi klinik duke përdorur terapinë e gjenit somatik është kryer me disa
sëmundje, duke përfshirë SCID të lidhur me X, leuceminë limfocitike kronike (CLL) dhe sëmundjen e
Parkinsonit. Në 2012, Alipogene tiparvovec u bë trajtimi i parë i terapisë gjenike që u miratua për
përdorim klinik. [Në 2015 një virus u përdor për të futur një gjen të shëndetshëm në qelizat e lëkurës së
një djali që vuante nga një sëmundje e rrallë e lëkurës, epidermolysis bullosa, në mënyrë që të rritet,
dhe më pas të shartonte lëkurë të shëndetshme në 80 përqind të trupit të djalit i cili ishte prekur nga
sëmundja. .

Terapia e gjeneve Germline do të rezultojë në çdo ndryshim që është i trashëgueshëm, gjë që ka ngritur
shqetësime brenda komunitetit shkencor. Në 2015, CRISPR u përdor për të redaktuar ADN-në e
embrioneve njerëzore jo të qëndrueshme, duke bërë që shkencëtarët e akademive kryesore botërore të
bëjnë thirrje për një moratorium të trashëgueshëm redaktimet e gjenomit njerëzor. Ekzistojnë
gjithashtu shqetësime se teknologjia mund të përdoret jo vetëm për trajtim, por për përmirësimin,
modifikimin ose ndryshimin e pamjes, përshtatshmërisë, inteligjencës, karakterit ose sjelljes së qenieve
njerëzore. Dallimi midis shërimit dhe përmirësimit mund të jetë gjithashtu e vështirë për tu vendosur.
Në nëntor 2018, He Jiankui njoftoi se kishte redaktuar gjenomet e dy embrioneve njerëzore, në
përpjekje për të çaktivizuar gjenin CCR5, i cili kodon për një receptor që HIV përdor për të hyrë në qeliza.
Ai tha se vajzat binjake, Lulu dhe Nana, kishin lindur disa javë më parë. Ai tha se vajzat ende mbanin
kopje funksionale të CCR5 së bashku me CCR5 me aftësi të kufizuara (mozaikizëm) dhe ishin akoma të
ndjeshme ndaj HIV. Puna u dënua gjerësisht si joetike, e rrezikshme dhe e parakohshme. Aktualisht,
modifikimi i linjës germinale është i ndaluar në 40 vende. Shkencëtarët që bëjnë këtë lloj studimi shpesh
do të lejojnë që embrionet të rriten për disa ditë pa e lejuar atë të zhvillohet në një foshnjë.

Studiuesit po ndryshojnë gjenomën e derrave për të nxitur rritjen e organeve njerëzore që do të

përdoren në transplantime. Shkencëtarët po krijojnë "shtysa gjenesh", duke ndryshuar gjenomat e
mushkonjave për t'i bërë ato imune ndaj malaries dhe më pas kërkojnë të përhapin mushkonjat e
ndryshuara gjenetikisht në të gjithë popullatën e mushkonjave me shpresën e eleminimit të sëmundjes.

Kërkime
Minj nokaut
Qelizat njerëzore në të cilat disa proteina janë shkrirë me proteina fluoreshente të gjelbërta për t'i lejuar
ato të vizualizohen Inxhinieria gjenetike është një mjet i rëndësishëm për shkencëtarët e natyrës, me
krijimin e organizmave transgjenike një nga mjetet më të rëndësishme për analizën e funksionit të
gjeneve. Genet dhe informacionet e tjera gjenetike nga një gamë e gjerë e organizmave mund të futen
në baktere për ruajtje dhe modifikim, duke krijuar bakteret e modifikuara gjenetikisht në proces.
Bakteret janë të lira, të lehta për tu rritur, klonale, shumëzohen shpejt, relativisht të lehta për tu
transformuar dhe mund të ruhen në -80 ° C gati për një kohë të pacaktuar. Pasi një gjen të jetë i izoluar,
ai mund të ruhet brenda baktereve duke siguruar një furnizim të pakufizuar për hulumtime. Organizatat
janë të krijuara gjenetikisht për të zbuluar funksionet e gjeneve të caktuara. Ky mund të jetë efekti në
fenotipin e organizmit, ku gjen shprehet ose me cilat gjene të tjera ndërvepron. Këto eksperimente
zakonisht përfshijnë humbje të funksionit, fitim të funksionit, gjurmim dhe shprehje. Humbja e
eksperimenteve të funksionit, të tilla si në një eksperiment të nokautit të gjeneve, në të cilin një
organizëm është krijuar për të mos pasur aktivitetin e një ose më shumë gjeneve. Në një nokaut të
thjeshtë një kopje e gjenit të dëshiruar është ndryshuar për ta bërë atë jo-funksionale. Qelizat staminale
embrionale përfshijnë gjenin e ndryshuar, i cili zëvendëson kopjen funksionale tashmë të pranishme.
Këto qeliza staminale injektohen në blastociste, të cilat mbillen te nënat zëvendësuese. Kjo i lejon
eksperimentuesit të analizojë defektet e shkaktuara nga ky mutacion dhe në këtë mënyrë të përcaktojë
rolin e gjeneve të veçanta. Përdoret veçanërisht shpesh në biologjinë e zhvillimit. Kur kjo bëhet duke
krijuar një bibliotekë gjenesh me mutacione pikësore në çdo pozicion në zonën e interesit, apo edhe çdo
pozicion në tërë gjenin, kjo quhet "mutageneza skanuese". Metoda më e thjeshtë, dhe e para që do të
përdoret, është "skanimi i alaninës", ku çdo pozicion nga ana tjetër shndërrohet në aminoacid alaninë jo
reaktive. Fitimi i eksperimenteve të funksioneve, homologu logjik i nokauteve. Këto ndonjëherë kryhen
së bashku me eksperimentet me nokaut për të vendosur më imtësisht funksionin e gjenit të dëshiruar.
Procesi është shumë i njëjtë me atë në inxhinierinë e nokautit, përveç që konstrukti është krijuar për të
rritur funksionin e gjenit, zakonisht duke siguruar kopje shtesë të gjenit ose duke nxitur sintezën e
proteinës më shpesh. Fitimi i funksionit përdoret për të treguar nëse një proteinë është e mjaftueshme
ose jo për një funksion, por nuk do të thotë gjithmonë që kërkohet, veçanërisht kur keni të bëni me
tepricë gjenetike ose funksionale. Eksperimentet e gjurmimit, të cilat kërkojnë të marrin informacion në
lidhje me lokalizimin dhe ndërveprimin e proteinës së dëshiruar. Një mënyrë për ta bërë këtë është
zëvendësimi i gjenit të tipit të egër me një gjen 'fusion', i cili është një ballafaqim i gjenit të tipit të egër
me një element raportues siç është proteina fluoreshente e gjelbër (GFP) që do të lejojë vizualizimin e
lehtë të produkteve të modifikimit gjenetik. Ndërsa kjo është një teknikë e dobishme, manipulimi mund
të shkatërrojë funksionin e gjenit, duke krijuar efekte dytësore dhe ndoshta duke vënë në pikëpyetje
rezultatet e eksperimentit. Tani janë në zhvillim teknika më të sofistikuara që mund të ndjekin produktet
e proteinave pa zbutur funksionin e tyre, të tilla si shtimi i sekuencave të vogla që do të shërbejnë si
motive lidhës për antitrupat monoklonalë. Studimet e shprehjes synojnë të zbulojnë se ku dhe kur
prodhohen proteina specifike. Në këto eksperimente, sekuenca e ADN-së para ADN-së që kodon për një
proteinë, e njohur si promovues i një gjeni, rivendoset në një organizëm me rajonin e kodimit të
proteinave të zëvendësuar nga një gjen raportues si GFP ose një enzimë që katalizon prodhimin e një
ngjyre. . Kështu mund të vërehet koha dhe vendi ku prodhohet një proteinë e veçantë. Studimet e
shprehjes mund të bëhen një hap më tej duke ndryshuar promovuesin për të gjetur se cilat pjesë janë
thelbësore për shprehjen e duhur të gjenit dhe në të vërtetë lidhen nga proteinat e faktorit të
transkriptimit; ky proces njihet si bashing i promovuesit.

Industriale

Produktet e inxhinierisë gjenetike

Organizmat mund të transformojnë qelizat e tyre me një gjen që kodifikon një proteinë të dobishme, siç
është një enzimë, në mënyrë që ato të shprehin tepër proteinë e dëshiruar. Sasitë masive të proteinave
mund të prodhohen më pas duke rritur organizmin e transformuar në pajisjet e bioreaktorit duke
përdorur fermentimin industrial, dhe më pas duke pastruar proteinën. Disa gjene nuk funksionojnë mirë
në bakteret, kështu që maja, qelizat e insekteve ose qelizat e gjitarëve mund të përdoren gjithashtu.
Këto teknika përdoren për të prodhuar ilaçe të tilla si insulina, hormoni i rritjes njerëzore dhe vaksinat,
shtesa të tilla si triptofani, ndihma në prodhimin e ushqimit (kimosina në prodhimin e djathit) dhe lëndët
djegëse. Zbatime të tjera me baktere të inxhinierisë gjenetike mund të përfshijnë bërjen e tyre të
kryejnë detyra jashtë ciklit të tyre natyror, të tilla si bërja e biokarburanteve, pastrimi i derdhjeve të
naftës, karbonit dhe mbetjeve të tjera toksike dhe zbulimi i arsenikut në ujin e pijshëm. Disa mikrobe të
modifikuara gjenetikisht mund të përdoren gjithashtu në biomining dhe bioremediation, për shkak të
aftësisë së tyre për të nxjerrë metale të rënda nga mjedisi i tyre dhe për t'i përfshirë ato në përbërje që
janë më lehtë të rikuperueshme.

Në shkencën e materialeve, një virus i modifikuar gjenetikisht është përdorur në një laborator kërkimor
si një skelë për montimin e një baterie litium-jon më miqësore me mjedisin. Bakteret gjithashtu janë
krijuar për të funksionuar si sensorë duke shprehur një proteinë fluoreshente në kushte të caktuara
mjedisore

Bujqësia

Bt-toksinat e pranishme në gjethet e kikirikut (figura e poshtme) e mbrojnë atë nga dëmtimet e mëdha
të shkaktuara nga larvat më të vogla të trarëve të trungut të misrit (imazhi i sipërm).

Një nga zbatimet më të njohura dhe të diskutueshme të inxhinierisë gjenetike është krijimi dhe
përdorimi i kulturave të modifikuara gjenetikisht ose bagëtive të modifikuara gjenetikisht për të
prodhuar ushqim të modifikuar gjenetikisht. Të mbjellat janë zhvilluar për të rritur prodhimin, për të
rritur tolerancën ndaj streseve abiotike, për të ndryshuar përbërjen e ushqimit ose për të prodhuar
produkte të reja.

Të korrat e para që u lëshuan komercialisht në një shkallë të gjerë siguruan mbrojtje nga dëmtuesit e
insekteve ose tolerancë ndaj herbicideve. Kulturat kërpudhore dhe rezistente ndaj viruseve gjithashtu
janë zhvilluar ose janë në zhvillim. Kjo e bën më të lehtë administrimin e insekteve dhe barërave të
këqija dhe indirekt mund të rrisë rendimentin e kulturave. Të korrat GM që përmirësojnë drejtpërdrejt
rendimentin duke përshpejtuar rritjen ose duke e bërë bimën më të guximshme (duke përmirësuar
tolerancën ndaj kripës, të ftohtit ose thatësirës) janë gjithashtu nën zhvillim. Në 2016 Salmoni është
modifikuar gjenetikisht me hormone të rritjes për të arritur madhësinë normale të të rriturve shumë më
shpejt.

Janë zhvilluar OMGJ që modifikojnë cilësinë e prodhimit duke rritur vlerën ushqyese ose duke siguruar
cilësi ose sasi më të dobishme industriale. Patatja Amflora prodhon një përzierje më shumë të dobishme
të amidonit. Farat e sojës dhe kanola janë modifikuar gjenetikisht për të prodhuar më shumë vajra të
shëndetshëm. Ushqimi i parë i komercializuar GM ishte një domate që kishte vonuar pjekjen, duke rritur
jetëgjatësinë e saj.

Bimët dhe kafshët janë inxhinieruar për të prodhuar materiale që normalisht nuk i bëjnë. Farming
përdor të lashtat dhe kafshët si bioreaktorë për të prodhuar vaksina, ndërmjetësues të ilaçeve, ose vetë
ilaçe; produkti i dobishëm pastrohet nga të korrat dhe më pas përdoret në procesin standard të
prodhimit farmaceutik. Lopët dhe dhitë janë përpunuar për të shprehur ilaçe dhe proteina të tjera në
qumështin e tyre, dhe në 2009 FDA miratoi një ilaç të prodhuar në qumësht dhie.

Aplikime të tjera

Inxhinieria gjenetike ka zbatime të mundshme në ruajtjen dhe menaxhimin e zonës natyrore.

Transferimi i gjenit përmes vektorëve viralë është propozuar si një mjet për të kontrolluar speciet
invazive, si dhe vaksinimin e faunës së kërcënuar nga sëmundja. Pemët transgjenike janë sugjeruar si një
mënyrë për të dhënë rezistencë ndaj patogjenëve në popullatat e egra. Me rritjen e rreziqeve të keq
adaptimit në organizma si një rezultat i ndryshimit të klimës dhe shqetësimeve të tjera, përshtatja e
lehtësuar përmes shkuljes së gjeneve mund të jetë një zgjidhje për uljen e rreziqeve të zhdukjes.
Zbatimet e inxhinierisë gjenetike në ruajtje deri më tani janë kryesisht teorike dhe ende nuk janë vënë
në praktikë.Inxhinieria gjenetike po përdoret gjithashtu për të krijuar art mikrobik. Disa baktere janë
përpunuar gjenetikisht për të krijuar fotografi bardh e zi. Sende të reja si karafila me ngjyrë livando,
trëndafila blu dhe peshq të ndezur janë prodhuar gjithashtu përmes inxhinierisë gjenetike.

Procesi

1.Klonimi molekular
Klonimi molekular është një grup metodash eksperimentale në biologjinë molekulare që përdoren për të
mbledhur molekulat e ADN-së rekombinante dhe për të drejtuar replikimin e tyre brenda organizmave
pritës. Përdorimi i fjalës klonim i referohet faktit se metoda përfshin replikimin e një molekule për të
prodhuar një popullatë qelizash me molekula identike të ADN-së. Klonimi molekular në përgjithësi
përdor sekuencat e ADN-së nga dy organizma të ndryshëm: speciet që janë burimi i ADN-së që do të
klonohet, dhe speciet që do të shërbejnë si bujtesi i gjallë për replikimin e ADN-së rekombinante.
Në eksperimentet standarde të klonimit molekular, klonimi i çdo fragment ADN-je në thelb përfshin
shtatë hapa: (1) Zgjedhja e organizmit pritës dhe vektori i klonimit, (2) Përgatitja e ADN-së vektoriale, (3)
Përgatitja e ADN-së që do të klonohet, (4) i ADN-së rekombinante, (5) Futja e ADN-së rekombinante në
organizmin pritës, (6) Përzgjedhja e organizmave që përmbajnë ADN-në rekombinante, (7) Shfaqja e
kloneve me futje të dëshiruara të ADN-së dhe vetitë biologjike
Zgjedhja e organizmit pritës dhe vektori i klonimit

Megjithëse janë në përdorim një numër shumë i madh i organizmave pritës dhe vektorëve të klonimit
molekular, pjesa më e madhe e eksperimenteve të klonimit molekular fillojnë me një tendosje
laboratorike të bakterit E. coli (Escherichia coli) dhe një vektor të klonimit të plazmideve. Vektorët E. coli
dhe plazmid janë në përdorim të zakonshëm sepse ata janë teknikisht të sofistikuar, të gjithanshëm, të
disponueshëm gjerësisht dhe ofrojnë rritje të shpejtë të organizmave rekombinante me pajisje
minimale. coli dhe bakteret e lidhura kanë aftësinë për të transferuar ADN-në përmes konjugimit ose
transduksionit bakterial, i cili lejon që materiali gjenetik të përhapet horizontalisht përmes një popullate
ekzistuese. Procesi i përcjelljes, i cili përdor virusin bakterial të quajtur bakterofag (Një bakterofag është
një virus që infekton dhe replikohet brenda baktereve dhe arkeave) është vendi ku përhapja e gjenit që
kodifikon toksinën Shiga nga bakteret Shigella në E. coli ndihmoi në prodhimin E. coli O157: H7, lloji i E.
coli-prodhues i toksinës. Nëse ADN-ja që do të klonohet është jashtëzakonisht e madhe (qindra mijëra
deri në miliona çifte bazash), atëherë shpesh zgjidhet një kromozom artificial bakterial ose vektor
kromozom artificial maja.

Aplikacionet e specializuara mund të kërkojnë sisteme të specializuara të vektorit host. Për shembull,
nëse eksperimentistët dëshirojnë të korrin një proteinë të veçantë nga organizmi rekombinant, atëherë
zgjidhet një vektor shprehje që përmban sinjale të përshtatshme për transkriptim dhe përkthim në
organizmin e dëshiruar pritës. Përndryshe, nëse dëshirohet kopjimi i ADN-së në specie të ndryshme (për
shembull, transferimi i ADN-së nga bakteret në bimë), atëherë mund të zgjidhet një vektor i shumëfishtë
i strehuesit (i quajtur edhe vektori i anijes). Në praktikë, megjithatë, eksperimentet e specializuara të
klonimit molekular zakonisht fillojnë me klonimin në një plazmid bakterial, të ndjekur nga nënklonimi në
një vektor të specializuar.

Cilado qoftë kombinimi i hostit dhe vektorit që përdoret, vektori pothuajse gjithmonë përmban katër
segmente të ADN-së që janë shumë të rëndësishme për funksionin e tij dhe dobinë eksperimentale:
Origjina e replikimit të ADN-së është e nevojshme që vektori (dhe sekuencat e tij të lidhura
rekombinante) të replikohen brenda organizmit pritës.
Një ose më shumë vende unike të njohjes së endonukleazës kufizuese për të shërbyer si vende ku mund
të futet ADN e huaj.
Një gjen i përzgjedhur i shenjave gjenetike që mund të përdoret për të mundësuar mbijetesën e qelizave
që kanë marrë sekuenca vektoriale.
Një gjen i etiketës që mund të përdoret për të kontrolluar qelizat që përmbajnë ADN-në e huaj

Përgatitja e ADN-së vektoriale

Vektori i klonimit trajtohet me një endonukleazë kufizuese për të çarë ADN-në në vendin ku do të futet
ADN-ja e huaj. Enzima kufizuese zgjidhet për të gjeneruar një konfigurim në vendin e copëtimit që është
i pajtueshëm me skajet e ADN-së së huaj. Në mënyrë tipike, kjo bëhet duke çarë ADN-në vektoriale dhe
ADN-në e huaj me të njëjtën enzimë kufizuese, për shembull EcoRI. Shumica e vektorëve modernë
përmbajnë një larmi vendesh të përshtatshme copëtimi që janë unike brenda molekulës vektoriale
(kështu që vektori mund të copëtohet vetëm në një vend të vetëm) dhe janë të vendosura brenda një
gjeni (shpesh beta-galaktozidaza), inaktivizimi i të cilit mund të përdoret për të dalluar rekombinant nga
organizmat jo-rekombinues në një hap të mëvonshëm të procesit. Për të përmirësuar raportin e
organizmave rekombinant me jo-rekombinant, vektori i copëtuar mund të trajtohet me një enzimë
(fosfataza alkaline) që defosforilon skajet e vektorit. Molekulat vektoriale me skajet e defosforiluara nuk
janë në gjendje të replikohen, dhe replikimi mund të rikthehet vetëm nëse ADN e huaj është e integruar
në vendin e copëtimit

Përgatitja e ADN-së që do të klonohet

ADN-ja për klonimin zakonisht prodhohet duke përdorur PCR. ADN-ja e modelit është e përzier me bazat
(blloqet ndërtuese të ADN-së), abetaret (pjesë të shkurtra të ADN-së plotësuese të njëfishtë) dhe një
enzimë të polimerazës së ADN-së që ndërton zinxhirin e ADN-së. Përzierja kalon nëpër cikle të ngrohjes
dhe ftohjes për të prodhuar sasi të mëdha të ADN-së së kopjuar.

Për klonimin e ADN-së gjenomike, ADN-ja që do të klonohet nxirret nga organizmi. Pothuajse çdo burim
indi mund të përdoret (madje edhe indet nga kafshët e zhdukura), për sa kohë që ADN nuk është
degraduar gjerësisht. DNA pastaj pastrohet duke përdorur metoda të thjeshta për të hequr proteinat
ndotëse (nxjerrja me fenol), ARN (ribonukleaza) dhe molekulat më të vogla (reshjet dhe / ose
kromatografia). Metodat e reaksionit zinxhir polimerazë (PCR) shpesh përdoren për amplifikimin e
sekuencave specifike të ADN-së ose ARN-së (RT-PCR) para klonimit molekular.

ADN për eksperimente të klonimit mund të merret gjithashtu nga ARN duke përdorur transkriptazë të
kundërt (klonim plotësues i ADN-së ose cDNA), ose në formën e ADN-së sintetike (sinteza e gjenit
artificial). Klonimi i cDNA-së përdoret zakonisht për të marrë klone përfaqësuese të popullatës së ARN-
së të qelizave me interes, ndërsa ADN-ja sintetike përdoret për të marrë ndonjë sekuencë precize të
përcaktuar nga projektuesi. Një sekuencë e tillë e projektuar mund të kërkohet kur lëvizin gjenet nëpër
kodet gjenetike (për shembull, nga mitokrondria në bërthamë) ose thjesht për rritjen e shprehjes
përmes optimizimit të kodonit.

ADN-ja e pastruar trajtohet më pas me një enzimë kufizuese për të gjeneruar fragmente me skaje të afta
të lidhen me ato të vektorit. Nëse është e nevojshme, segmente të shkurtër me dy fije të ADN-së (lidhës)
që përmbajnë vendet e dëshiruara të kufizimit mund të shtohen për të krijuar struktura fundore që janë
në përputhje me vektorin.

Krijimi i ADN-së rekombinante me ADN-ligazën

Krijimi i ADN-së rekombinante është në shumë mënyra hapi më i thjeshtë i procesit të klonimit
molekular. ADN-ja e përgatitur nga vektori dhe burimi i huaj thjesht përzihen së bashku në përqendrime
të përshtatshme dhe ekspozohen ndaj një enzime (ADN-ligaza) që lidh kovalentisht skajet së bashku. Ky
reaksion bashkues shpesh quhet ligation. Përzierja e ADN-së që rezulton dhe përmban skajet e
bashkuara rastësisht, atëherë është gati për futje në organizmin pritës.

Ligaza e ADN-së njeh dhe vepron vetëm në skajet e molekulave lineare të ADN-së, zakonisht duke
rezultuar në një përzierje komplekse të molekulave të ADN-së me skaje të bashkuara rastësisht.
Produktet e dëshiruara (ADN vektoriale të lidhura kovalente me ADN-në e huaj) do të jenë të pranishme,
por sekuencat e tjera (p.sh. ADN e huaj e lidhur me vetveten, ADN vektoriale e lidhur me vetveten dhe
kombinime të rendit më të lartë të ADN vektoriale dhe të huaj) janë gjithashtu zakonisht të pranishme.
Kjo përzierje komplekse renditet në hapat pasues të procesit të klonimit, pasi përzierja e ADN-së të futet
në qeliza.

hyrja e ADN-së rekombinante në organizmin pritës

Përzierja e ADN-së, e manipuluar më parë in vitro, zhvendoset përsëri në një qelizë të gjallë, referuar si
organizmi pritës. Metodat e përdorura për të futur ADN-në në qeliza janë të larmishme dhe emri i
aplikuar në këtë hap në procesin e klonimit molekular shpesh do të varet nga metoda eksperimentale që
është zgjedhur (p.sh. transformimi, përcjellja, transfektimi, elektroporimi).

Kur mikroorganizmat janë në gjendje të marrin dhe replikojnë ADN-në nga mjedisi i tyre lokal, procesi
quhet transformim dhe qelizat që janë në një gjendje fiziologjike të tillë që të mund të marrin ADN-në
thuhet se janë kompetente. Në kulturën e qelizave të gjitarëve, procesi analog i futjes së ADN-së në
qeliza zakonisht quhet transfektim. Si transformimi ashtu edhe transfektimi zakonisht kërkojnë
përgatitjen e qelizave përmes një regjimi të veçantë të rritjes dhe procesit të trajtimit kimik që do të
ndryshojë me speciet specifike dhe llojet e qelizave që përdoren.

Elektroporimi përdor impulse elektrike të tensionit të lartë për të zhvendosur ADN-në nëpër
membranën qelizore (dhe murin qelizor, nëse është e pranishme). Në të kundërt, përcjellja përfshin
paketimin e ADN-së në grimca të rrjedhura nga virusi dhe përdorimin e këtyre grimcave të ngjashme me
virusin për të futur ADN-në e kapsuluar qeliza përmes një procesi që i ngjan infeksionit viral. Megjithëse
elektroporimi dhe përcjellja janë metoda shumë të specializuara, ato mund të jenë metodat më efikase
për të lëvizur ADN-në në qeliza.

Përzgjedhja e organizmave që përmbajnë sekuenca vektoriale

Cilado metodë që përdoret, futja e ADN-së rekombinante në organizmin pritës të zgjedhur është
zakonisht një proces me efikasitet të ulët; domethënë vetëm një pjesë e vogël e qelizave në të vërtetë
do të marrin ADN. Shkencëtarët eksperimentalë merren me këtë çështje përmes një hapi të
përzgjedhjes artificiale gjenetike, në të cilën qelizat që nuk kanë marrë ADN vriten në mënyrë selektive
dhe vetëm ato qeliza që mund të kopjojnë në mënyrë aktive ADN-në që përmban gjenin e shënjuesve të
zgjedhshëm të koduar nga vektori janë në gjendje të mbijetojnë.Kur qelizat bakteriale përdoren si
organizma mikpritës, shënjuesi i zgjedhshëm është zakonisht një gjen që i jep rezistencë një antibiotiku
që përndryshe do të vriste qelizat, zakonisht ampicilinën. Qelizat që strehojnë plazmidin do të
mbijetojnë kur të ekspozohen ndaj antibiotikut, ndërsa ato që nuk kanë arritur të marrin sekuencat e
plazmideve do të vdesin. Kur përdoren qelizat e gjitarëve (p.sh. qelizat njerëzore ose të miut), përdoret
një strategji e ngjashme, përveç se gjeni shënues (në këtë rast tipikisht i koduar si pjesë e kasetës
kanMX) i jep rezistencë antibiotikut Geneticin.

Kontrollimi i kloneve me futje të dëshiruar të ADN-së dhe vetitë biologjike

Vektorët modernë të klonimit bakterial (p.sh. pUC19 dhe derivatet e mëvonshëm duke përfshirë
vektorët pGEM) përdorin sistemin e skanimit blu-të bardhë për të dalluar kolonitë (klonet) e qelizave
transgjenike nga ato që përmbajnë vektorin prindëror (d.m.th. ADN-ja vektoriale pa futur sekuenca
rekombinante). Në këta vektorë, ADN-ja e huaj futet në një sekuencë që kodifikon një pjesë thelbësore
të beta-galaktozidazës, një enzimë aktiviteti i së cilës rezulton në formimin e një kolonie me ngjyrë blu
në mjedisin e kulturës që përdoret për këtë punë. Futja e ADN-së së huaj në sekuencën e kodimit beta-
galaktozidaza pamundëson funksionimin e enzimës, në mënyrë që kolonitë që përmbajnë ADN të
transformuar të mbeten pa ngjyrë (e bardhë). Prandaj, eksperimentistët janë lehtësisht të aftë të
identifikojnë dhe kryejnë studime të mëtejshme mbi klonet bakteriale transgjenike, ndërsa injorojnë ato
që nuk përmbajnë ADN rekombinante.

Popullsia totale e kloneve individuale të marra në një eksperiment të klonimit molekular shpesh quhet
biblioteka e ADN-së. Bibliotekat mund të jenë shumë komplekse (si kur klonon ADN-në e plotë
gjenomike nga një organizëm) ose relativisht të thjeshta (si kur zhvendosni një fragment të ADN-së të
klonuar më parë në një plazmid të ndryshëm), por është pothuajse gjithmonë e nevojshme të
ekzaminoni një numër klonesh të ndryshme për të qenë të sigurt që të merret konstrukti i dëshiruar i
ADN-së. Kjo mund të arrihet përmes një game shumë të gjerë të metodave eksperimentale, duke
përfshirë përdorimin e hibridizimeve të acidit nukleik, sondave të antitrupave, reaksionit zinxhir
polimerazë, analizës së fragmentit kufizues dhe / ose sekuencave të ADN-së

Organizimi i gjenomit dhe shprehja e gjenit

Klonimi molekular ka çuar drejtpërdrejt në sqarimin e sekuencës së plotë të ADN-së të gjenomeve të një
numri shumë të madh të specieve dhe në një eksplorim të larmisë gjenetike brenda specieve
individuale, punë që është bërë më së shumti duke përcaktuar sekuencën e ADN-së të një numri të
madh rastësisht fragmente të klonuara të gjenomit dhe mbledhjen e sekuencave të mbivendosura.

Në nivelin e gjeneve individuale, klonet molekulare përdoren për të gjeneruar sonda që përdoren për të
ekzaminuar sesi gjenet shprehen dhe se si kjo shprehje është e lidhur me procese të tjera në biologji,
duke përfshirë mjedisin metabolik, sinjalet jashtëqelizore, zhvillimin, mësimin, plakjen dhe vdekja
qelizore. Gjenet e klonuara gjithashtu mund të sigurojnë mjete për të ekzaminuar funksionin biologjik
dhe rëndësinë e gjeneve individuale, duke lejuar hetuesit të inaktivizojnë gjenet, ose të bëjnë mutacione
më delikate duke përdorur mutagenezën rajonale ose mutagenezën e drejtuar nga faqja. Gjenet e
klonuar në vektorë shprehës për klonimin funksional sigurojnë një mjet për të kontrolluar gjenet në bazë
të funksionit të proteinës së shprehur.

Reaksioni zinxhir i polimerazës (PCR) është një metodë e përdorur gjerësisht për të bërë miliona deri në
miliarda kopje të një mostre specifike të ADN-së, duke lejuar shkencëtarët të marrin një mostër shumë
të vogël të ADN-së dhe ta amplifikojnë atë në një sasi mjaft të madhe për ta studiuar në detaje. Duke
përdorur PCR, kopjet e sasive shumë të vogla të sekuencave të ADN-së përforcohen në mënyrë
eksponenciale në një seri ciklesh të ndryshimeve të temperaturës. PCR tani është një teknikë e
zakonshme dhe shpesh e domosdoshme e përdorur në kërkimet laboratorike mjekësore për një larmi të
gjerë aplikimesh, përfshirë kërkimin biomjekësor dhe kriminalistikën kriminale.
Shumica e metodave të PCR mbështeten në çiklizmin termik. Cikli termik ekspozon reaktantët ndaj
cikleve të përsëritura të ngrohjes dhe ftohjes për të lejuar reagime të ndryshme të varura nga
temperatura - specifikisht, shkrirja e ADN-së dhe replikimi i ADN-së i drejtuar nga enzimat. PCR punëson
dy reagjentë kryesorë - abetaret (të cilat janë fragmente të shkurtër të ADN-së me një fillesë të njohur si
oligonukleotide që janë një sekuencë plotësuese në rajonin e synuar të ADN-së) dhe një polimerazë të
ADN-së. Në hapin e parë të PCR, dy fijet e spiralit të dyfishtë të ADN-së janë të ndara fizikisht në një
temperaturë të lartë në një proces të quajtur denatyrimi i acidit nukleik. Në hapin e dytë, temperatura
ulet dhe abetaret lidhen me sekuencat plotësuese të ADN-së. Dy fijet e ADN-së pastaj bëhen shabllone
për polimerazën e ADN-së për të mbledhur enzimatikisht një fije të re të ADN-së nga nukleotidet e lira,
blloqet ndërtuese të ADN-së. Ndërsa PCR përparon, ADN-ja e gjeneruar përdoret vetë si një model për
replikim, duke vënë në lëvizje një reaksion zinxhir në të cilin modeli origjinal i ADN-së shumëzohet në
mënyrë eksponenciale.

Zbatimet e teknikës përfshijnë klonimin e ADN-së për sekuencimin, klonimin dhe manipulimin e gjeneve,
mutagjenezën e gjeneve; ndërtimi i filogjenive të bazuara në ADN, ose analiza funksionale e gjeneve;
diagnostikimi dhe monitorimi i sëmundjeve trashëgimore; amplifikimi i ADN-së antike; analiza e
gjurmëve gjenetike të gishtërinjve për profilizimin e ADN-së (për shembull, në shkencën forenzike dhe
testimin e prindërve); dhe zbulimin e patogjenëve në testet e acidit nukleik për diagnostikimin e
sëmundjeve infektive.

2.
kundërthënie

Polemikat ushqimore të modifikuara gjenetikisht

Kritikët kanë kundërshtuar përdorimin e inxhinierisë gjenetike në disa arsye, përfshirë shqetësimet
etike, ekologjike dhe ekonomike. Shumë nga këto shqetësime përfshijnë të korrat GM dhe nëse ushqimi
i prodhuar prej tyre është i sigurt dhe çfarë ndikimi do të ketë rritja e tyre në mjedis. Këto polemika kanë
çuar në çështje gjyqësore, mosmarrëveshje tregtare ndërkombëtare dhe protesta dhe në rregullimin
kufizues të produkteve tregtare në disa vende.

Akuzat që shkencëtarët "po luajnë Zot" dhe çështje të tjera fetare i janë përshkruar teknologjisë që nga
fillimi. Çështje të tjera etike të ngritura përfshijnë patentimin e jetës, përdorimin e të drejtave të
pronësisë intelektuale, nivelin e etiketimit në produkte, kontrollin e furnizimit me ushqim dhe
objektivitetin e procesit rregullator. Megjithëse dyshimet janë ngritur, ekonomikisht shumica e
studimeve kanë gjetur rritje të GM të korrat të jenë të dobishme për fermerët.

Rrjedha e gjenit midis kulturave GM dhe bimëve të përputhshme, së bashku me rritjen e përdorimit të
herbicideve selektive, mund të rrisin rrezikun e zhvillimit të "super-barërave". Shqetësime të tjera
mjedisore përfshijnë ndikime të mundshme në organizmat jo-shënjestër, duke përfshirë mikrobet e
tokës, dhe një rritje të sekondare dhe rezistente dëmtuesit e insekteve. Shumë prej ndikimeve
mjedisore në lidhje me të mbjellat GM mund të duhen shumë vite për tu kuptuar dhe janë gjithashtu të
dukshme në praktikat bujqësore konvencionale. Me komercializimin e peshqve të modifikuar
gjenetikisht ka shqetësime se cilat do të jenë pasojat mjedisore nëse shpëtojnë.
Ekzistojnë tre shqetësime kryesore mbi sigurinë e ushqimit të modifikuar gjenetikisht: nëse ato mund të
provokojnë një reaksion alergjik; nëse gjenet mund të transferohen nga ushqimi në qelizat njerëzore;
dhe nëse gjenet e pa aprovuara për konsum njerëzor mund të tejkalojnë kulturat e tjera. Ekziston një
konsensus shkencor që ushqimi aktualisht i disponueshëm që rrjedh nga kulturat GM nuk paraqet rrezik
më të madh për shëndetin e njeriut sesa ushqimi konvencional, por që secili ushqim i GM duhet të
testohet në një rast pas rasti para prezantimit. Sidoqoftë, anëtarët e publikut kanë më pak të ngjarë se
shkencëtarët t'i perceptojnë ushqimet GM si të sigurta.