Skripsi Kedelai

POTENSI TERBENTUKNYA KALUS EMBRIOGENIK PADA BEBERAPA VARIETAS
KEDELAI (Glycine max (L.) Merill) TOLERAN TERHADAP KONDISI

HIPOKSIA SECARA IN VITRO
SKRIPSI
OLEH:
SOPA PUTRI TANJUNG

120301045
AET- PEMULIAAN TANAMAN
PROGRAM STUDI AGROEKOTEKNOLOGI

FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
2016
Universitas Sumatera Utara

POTENSI TERBENTUKNYA KALUS EMBRIOGENIK PADA BEBERAPA VARIETAS
KEDELAI (Glycine max (L.) Merill) TOLERAN TERHADAP KONDISI
HIPOKSIA SECARA IN VITRO
SKRIPSI
OLEH:
SOPA PUTRI TANJUNG

120301045
AET- PEMULIAAN TANAMAN
Skripsi Sebagai Salah Satu Syarat Untuk Mendapatkan Gelar Sarjana

di Program Studi Agroekoteknologi di Fakultas Pertanian
Universitas Sumatera Utara, Medan
PROGRAM STUDI AGROEKOTEKNOLOGI

FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS SUMATERA UTARA
2016

Judul Penelitian : Potensi Terbentuknya Kalus Embriogenik pada Beberapa
Varietas Kedelai (Glycine max (L.) Merill Toleran
terhadap Kondisi Hipoksia secara In Vitro
Nama : Sopa Putri Tanjung
NIM : 120301045
Program Studi : Agroekoteknologi
Minat : Pemuliaan Tanaman
Disetujui Oleh:
Komisi Pembimbing
(Ir. Revandy I.M.Damanik, M.Si., M.Sc., P.hD.) (Luthfi Aziz Mahmud Siregar, S.P., M.Sc., P.hD.)
Ketua Anggota
Diketahui Oleh:
(Prof. Dr. Ir. T. Sabrina, M. Sc.)

Ketua Program Studi Agroekoteknologi

ABSTRACT
Sopa Putri Tanjung, 2016: Potential formation in some variety embryogenic

callus soybean (Glycine max (L.) Merill) tolerant of hypoxia conditions for in
vitro. Under the supervision of Revandy I. M. Danamik and Luthfi Aziz M.
Siregar.
This study aims to determine the growth response and identification of
embryogenic callus on several varieties of soybean (Glycine max (L.) Merrill)
tolerant to hypoxic conditions in vitro. This research was conducted at the Tissue
Culture Laboratory and the Laboratory of Food Technology Faculty of
Agriculture, University of North Sumatra, Medan from March to September 2016,
design used was a completely randomized design (CRD) factorial with 2 factors.
The first factor is soybean varieties which consists of three levels ie baluran,
Gepak yellow, Wilis. The second factor is the media with growth regulators which
consists of three levels ie 2,4-D, NAA, IAA 10 mg/l. The parameters measured
were the percentage of explants forming embryogenic callus, color callus,
structure callus, types of development callus, histological analysis of callus fresh
weight callus total, the measurement of chlorophyll content in total, measurement
of protein concentration, measuring the value of the activity of enzyme Super
oxide dismutase (SOD) and measurement value of the activity of peroxidase
(POD).
The results showed that the interaction Gepak kuning and Wilis varieties
by administering PGR 2,4-D 10 mg/l affect the growth of embryogenic callus,
callus fresh weight of total, total chlorophyll content, protein concentration, the
value of the enzyme activity of Super Oxide Dismutase (SOD) and value
peroxidase enzyme activity (POD), but the treatment of the three types of varieties
baluran PGR and PGR treatment of NAA and IAA 10 mg/l to the three types of
varieties no effect on all parameters observed
Keywords: Identification of Soybean embryogenic callus, PGR 2,4 D, IAA, NAA,

Inundation.

ABSTRAK
Sopa Putri Tanjung, 2016: POTENSI TERBENTUKNYA KALUS

EMBRIOGENIK PADA BEBERAPA VARIETAS KEDELAI (Glycine max (L.)
Merill.) TOLERAN TERHADAP KONDISI HIPOKSIA SECARA IN VITRO,
dibimbing oleh Revandy I. M. Damanik dan Luthfi Aziz M.Siregar.
Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui respon pertumbuhan dan
identifikasi kalus embriogenik pada beberapa varietas kedelai (Glycine max (L.)
Merill) toleran terhadap kondisi hipoksia secara in vitro. Penelitian ini
dilaksanakan di Laboratorium Kultur Jaringan dan Laboratorium Teknologi
Pangan Fakultas Pertanian Universitas Sumatera Utara, Medan dari bulan Maret
sampai September 2016, Rancangan yang digunakan adalah rancangan acak
lengkap (RAL) faktorial dengan 2 faktor perlakuan. Faktor pertama adalah
varietas kedelai yang terdiri dari 3 taraf yaitu Baluran, Gepak kuning, Wilis.
Faktor kedua adalah media dengan zat pengatur tumbuh yang terdiri dari 3 taraf
yaitu 2,4-D, NAA, IAA 10 mg/l. Parameter yang diamati adalah persentase
eksplan membentuk kalus embriogenik, warna kalus, struktur kalus, tipe
perkembangan kalus, analisis histologi kalus, bobot segar kalus total, pengukuran
kandungan klorofil total, pengukuran konsentrasi protein, pengukuran nilai
aktifitas enzim Super Oksida Dismutase (SOD) dan pengukuran nilai aktivitas
enzim peroksidase (POD).
Hasil penelitian menunjukkan bahwa interaksi varietas Gepak kuning dan
Wilis dengan pemberian ZPT 2,4-D 10 mg/l berpengaruh terhadap pertumbuhan
kalus embriogenik, bobot segar kalus total, kandungan klorofil total, konsentrasi
protein, nilai aktivitas enzim Super Oksida Dismutase (SOD) dan nilai aktivitas
enzim Peroksidase (POD), tetapi perlakuan varietas Baluran terhadap ketiga jenis
ZPT dan perlakuan ZPT NAA dan IAA 10 mg/l terhadap ketiga jenis varietas
tidak berpengaruh terhadap semua parameter yang diamati
Kata kunci : Identifikasi Kalus Embriogenik Kedelai, ZPT 2,4 D, IAA,

NAA, Penggenangan.

KATA PENGANTAR
Puji dan syukur penulis ucapkan kehadirat Tuhan Yang Maha Esa, karena
berkat rahmat dan karunia-Nya penulis dapat menyusun skripsi ini. Adapun judul
dari skripsi adalah “ Potensi Terbentuknya Kalus Embriogenik pada
Beberapa Varietas Kedelai (Glycine max (L.) Merill) ) Toleran terhadap
Kondisi Hipoksia secara In Vitro”. Skripsi ini merupakan syarat untuk dapat
melakukan penelitian di Program Studi Agroekoteknologi Fakultas Pertanian
Universitas Sumatera Utara, Medan.
Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih
kepada Bapak Ir. Revandy I. M. Damanik, M.Si., M.Sc., P.hD. selaku ketua
komisi pembimbing dan Bapak Luthfi Aziz Mahmud Siregar, S.P., M.Sc., P.hD.
selaku anggota komisi pembimbing yang telah membimbing dan membantu
dalam menyelesaikan skripsi ini.
Skripsi ini merupakan tahap awal yang belum banyak didukung oleh
kajian teori, untuk itu penulis mengharapkan kritik dan saran yang bersifat
membangun demi kesempurnaan skripsi ini. Akhir kata penulis mengucapkan
terima kasih.
Medan, Desember 2016
Penulis

DAFTAR ISI
Hal.
ABSTRACT .................................................................................................... i
ABSTRAK ...................................................................................................... ii
RIWAYAT HIDUP ........................................................................................ iii
KATA PENGANTAR ................................................................................... iv
DAFTAR ISI ................................................................................................. v
DAFTAR TABEL .......................................................................................... vi
DAFTAR GAMBAR ...................................................................................... vii
DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. viii
PENDAHULUAN
Latar Belakang ........................................................................................ 1
Tujuan Penelitian .................................................................................... 3
Hipotesis Penelitian ................................................................................. 3
Kegunaan Penelitian ............................................................................... 3
TINJAUAN PUSTAKA
Botani Tanaman ...................................................................................... 4
Varietas ................................................................................................... 6
Pengaruh Lahan Tergenang terhadap Tanaman Kedelai ........................ 7
Mekanisme Toleransi Fisiologi dan Biokimia Tanaman Kedelai
terhadap Kondisi Hipoksia ..................................................................... 9
Kultur In Vitro ........................................................................................ 11
Kultur kalus ............................................................................................ 12
Peran Zat Pengatur Tumbuh dalam Kultur In Vitro ............................... 14
Pertumbuhan Kalus Tanaman Kedelai Secara In vitro ........................... 15
BAHAN DAN METODE PENELITIAN

Tempat dan Waktu Penelitian ................................................................ 17
Bahan dan Alat Penelitian ...................................................................... 17
Metode Penelitian ................................................................................... 18
PELAKSANAAN PENELITIAN
Tahap 1: Pembentukan Kalus Embriogenik ......................................... 20
Sterilisasi Alat ............................................................................... 20
Pembuatan Media .......................................................................... 20
Persiapan Ruang Kultur ................................................................ 21
Sterilisasi Eksplan ......................................................................... 21

Penanaman .................................................................................... 22
Pemeliharaan ................................................................................. 23
Tahap 2: Identifikasi Kalus Toleran Genangan.................................... 23
Pengukuran Kadar Klorofil (mg/l) ............................................... 23
Pengukuran Konsentrasi Protein (%) ........................................... 24
Pengukuran Aktivitas Enzim Super Oksida Dismutase
(SOD) (unit/mg/l) .......................................................................... 25
Pengukuran Aktivitas Enzim Peroksidase (POD) (unit/mg/l) ...... 26
Peubah Amatan .................................................................................... 27
Persentase Eksplan Membentuk Kalus (%) .................................. 27
Warna Kalus .................................................................................. 27
Tekstur Kalus ................................................................................ 27
Analisis Histologi Kalus Embriogenik.......................................... 28
Bobot Segar Kalus Total (g) ......................................................... 28
Pengukuran Kadar Klorofil (mg/l) ................................................ 28
Pengukuran Konsentrasi Protein (%) ........................................... 29
Pengukuran Aktivitas Enzim Super Oksida Dismutase
(SOD) (unit/mg/l) .......................................................................... 29
Pengukuran Aktivitas Enzim Peroksida (POD) (unit/mg/l) .......... 29
HASIL DAN PEMBAHASAN

Hasil ..................................................................................................... 30
Tahap 1: Pembentukan Kalus Embriogenik .................................. 30
Persentase Eksplan Membentuk Kalus (%) ......................... 30
Keadaan Visual Kalus.......................................................... 31
Histologi Kalus Embriogenik .............................................. 36
Tahap 2: Identifikasi Kalus Toleran Genangan ............................ 38
Bobot Segar Kalus Total (g) ................................................ 38
Jumlah Klorofil Total (mg/l) ............................................... 38
Konsentrasi Protein (%) ...................................................... 39
Nilai Aktivitas Enzim Super Oksida Dismutase
(SOD) (unit/mg/l) ................................................................ 40
Nilai Aktivitas Enzim Peroksidase (POD) (unit/mg/l) ........ 41
Pembahasan .......................................................................................... 43
Respon Pertumbuhan Kalus Embriogenik pada Beberapa
Varietas Kedelai terhadap Pemberian Beberapa Zat
Pengatur Tumbuh .......................................................................... 43
Respon Bobot Segar Kalus Total, Kandungan Klorofil
Total, Konsentrasi Protein, Nilai Aktivitas Enzim SOD
dan POD Akibat Perlakuan Penggenangan ................................... 45
KESIMPULAN DAN SARAN

Kesimpulan........................................................................................... 50
Saran ..................................................................................................... 50
DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 51
LAMPIRAN .................................................................................................... 55

DAFTAR TABEL
No. Hal.
1. Tabel 1 : Persentase Esplan Membentuk Kalus (%)……………………….. 30

2. Tabel 2 : Penampilan Visual Kalus pada umur 8 MST……….……………. 31

DAFTAR GAMBAR
No. Hal.
1. Gambar 1. Aplikasi penggenangan kalus dengan MS0 cair……………... 23
2. Gambar 2. Penampang melintang kalus embriogenik friable

pada (a) varietas Gepak kuning (b) varietas Wilis
dengan media ZPT 2,4 -D 10 mg/l. SM = Sel
Meristem, SE = Sel Embriogenik. Perbesaran
obj. 16x……………………………………….……………… 36
3. Gambar 3. Rataan bobot segar kalus total (g) dari genotipe

kedelai varietas Gepak kuning (V2) dan Wilis (V3)
yang diinduksi pada media dengan ZPT 2,4-D
10 mg/l (A1) sebelum dan setelah penggenangan……..… 38
4. Gambar 4. Rataan kandungan klorofil total (mg/l) dari

genotipe kedelai varietas Gepak kuning (V2) dan
Wilis (V3) yang diinduksi pada media dengan ZPT
2,4-D 10 mg/l (A1) sebelum dan setelah
penggenangan………………………………………….……. 39
5. Gambar 5. Rataan konsentrasi protein ( % ) dari genotipe

kedelai varietas Gepak kuning (V2) dan Wilis (V3)
yang diinduksi pada media dengan ZPT 2,4-D
10 mg/l (A1) sebelum dan setelah penggenangan…..….. 40
6. Gambar 6. Rataan Nilai Aktivitas Enzim SOD (unit/mg/l) dari

Wilis (V3) yang diinduksi pada media dengan
ZPT 2,4-D 10 mg/l (A1) sebelum dan setelah
penggenangan………………………………………………. 41
7. Gambar 7. Rataan Nilai Aktivitas Enzim POD (unit/mg/l) dari

Wilis (V3) yang diinduksi pada media dengan
ZPT 2,4-D 10 mg/l (A1) sebelum dan setelah
penggenangan………………………………………………. 42

DAFTAR LAMPIRAN
No. Hal.
1. Lampiran 1. Bagan Penelitian ...................................................................... 55
2. Lampiran 2. Kegiatan Penelitian .................................................................. 56
3. Lampiran 3. Deskripsi Varietas Kedelai ...................................................... 58
4. Lampiran 4. Komposisi Medium Murashige dan Skoog (MS) .................... 61
5. Lampiran 5. Prosedur Proses Penggenangan ............................................... 62
6. Lampiran 6. Keadaan visual Kalus .............................................................. 64
7. Lampiran 7. Data Pengamatan Warna Kalus ............................................... 67
8. Lampiran 8. Data Pengamatan Tekstur Kalus.............................................. 68
9. Lampiran 9. Data Pengamatan Tipe Perkembangan Kalus .......................... 69
10. Lampiran 10. Data Pengamatan Bobot Segar Kalus Total (g) ................... 70
11. Lampiran 11. Data Pengamatan Kandungan Klorofil Total (mg/l) ........... 71
12. Lampiran 12. Data Pengamatan Konsentrasi Protein (%) ......................... 72
13. Lampiran 13. Data Pengamatan Nilai Aktivitas Enzim Super

Oksida Dismutase (SOD) (Unit/mg/l) ................................ 73
14. Lampiran 14. Data Pengamatan Nilai Aktivitas Enzim Peroksidase

(POD) (Unit/mg/l) .............................................................. 74
15. Lampiran 15. Pembuatan Larutan Super Oksida Dismutase (SOD) .......... 75
16. Lampiran 16. Pembuatan Larutan Peroksidase (POD) .............................. 77
17. Lampiran 17. Pembuatan Reagen Bradford ............................................... 79

PENDAHULUAN
Latar Belakang
Tanaman kedelai (Glycine max (L.) Merill) merupakan salah satu tanaman
pangan yang sudah lama dibudidayakan oleh masyarakat Indonesia. Tanaman ini
mempunyai arti penting untuk memenuhi kebutuhan pangan dalam rangka
perbaikan gizi masyarakat, karena merupakan sumber protein nabati yang relatif
murah bila dibandingkan sumber protein lainnya seperti daging, susu, dan ikan.
Di samping itu kedelai juga mengandung mineral seperti kalsium, posfor, besi,
vitamin A dan B (Mapegau, 2006).
Kedelai merupakan sumber protein nabati yang sangat dibutuhkan oleh
masyarakat Indonesia,sehingga dengan meningkatnya jumlah penduduk dan
kesadaran akan kebutuhan protein berdampak pada kebutuhan akan kedelai terus
meningkat dari tahun ke tahun. Rata-rata kebutuhan kedelai setiap tahunnya
sebesar ± 2,2 juta ton biji kering, akan tetapi kemampuan produksi dalam negeri
saat ini baru mampu memenuhi sebanyak 779.992 ton (BPS, 2013) atau 33,91 %
dari kebutuhan sedangkan berdasarkan ARAM II tahun 2014 baru mencapai
921.336 ton atau 40,06% (Kementerian Pertanian, 2015).
Selain itu, pemanasan global yang menyebabkan peningkatan curah hujan
dan kenaikan permukaan laut dapat mengakibatkan banyak lahan pertanian yang
tergenang. Tersedianya varietas kedelai yang adaptif pada kondisi tersebut akan
memberikan arti penting dalam rangka percepatan peningkatan produksi kedelai
di dalam negeri. Peluang perakitan varietas kedelai toleran genangan sangat
terbuka dengan tersedianya sumber-sumber gen dan metode skrining yang
sederhana, mudah, dan cepat. Kerja sama dengan lembaga internasional terutama

dalam pertukaran sumber gen akan mempercepat program pemuliaan kedelai
toleran genangan di Indonesia (Hapsari dan Adie, 2010).
Genangan berpengaruh terhadap proses metabolisme pada tanaman yaitu
akan terjadi gangguan pada proses fisiologis dan biokimiawi yaitu respirasi,
permeabilitas akar, penyerapan air dan hara, penyematan N. Genangan
menyebabkan kematian akar di kedalaman tertentu dan hal ini akan memacu
pembentukan akar adventif pada bagian di dekat permukaan tanah pada tanaman
yang tahan genangan. Kematian akar menjadi penyebab kekahatan N dan
cekaman kekeringan fisiologis. Kondisi jenuh air tadi akan menghambat
perkembangan dan pertumbuhan tanaman. Tanaman juga dapat mengalami
kekeringan fisiologis yang efeknya lebih parah dari kekeringan fisik
(Harjanti, 2012).
Pengembangan kedelai toleran genangan tidak hanya bermanfaat bagi
pengembangan kedelai di lahan sawah, tetapi juga prospektif bagi wilayah yang
sering mengalami cekaman genangan seperti lahan pasang surut. Luas lahan
pasang surut di Indonesia mencapai 20,10 juta ha, sekitar 20−30% di antaranya
berpotensi sebagai lahan pertanian (Suriadikarta dan Sutria, 2007). Untuk
mendukung peningkatan produksi kedelai tersebut melalui penanaman varietas
unggul toleran genangan diantaranya varietas Baluran, Gepak kuning dan Wilis
maka produksi kedelai pada lahan tersebut di Indonesia dapat dioptimalkan.
Salah satu alternatif untuk mengatasi kendala diatas adalah dengan
melakukan perbanyakan tanaman secara vegetatif melalui teknik kultur in vitro,
sebagai contoh kultur kalus (Fauziyyah et al., 2012). Gunawan (1987),
mengatakan salah satu tujuan teknik in vitro adalah membantu dalam seleksi dan

pemuliaan tanaman dalam pengembangan varietas-varietas baru yang toleran
terhadap stres lingkungan. Metode kultur jaringan yang pada mulanya hanya suatu
penelitian fisiologis, dewasa ini menduduki posisi yang penting dalam
perkembangan pertanian.
Tujuan penelitian
Untuk mengetahui respon pertumbuhan dan identifikasi kalus embriogenik
pada beberapa varietas kedelai (Glycine max (L.) Merill) toleran terhadap
kondisi hipoksia secara in vitro.
Hipotesis penelitian
1. Ada perbedaan pertumbuhan kalus embriogenik dari beberapa varietas kedelai.
2. Ada pengaruh beberapa jenis auksin terhadap pertumbuhan kalus
embriogenik dari beberapa varietas kedelai.
3. Ada perbedaan pertumbuhan kalus embriogenik dari beberapa varietas
kedelai pada kondisi hipoksia.
4. Ada pengaruh beberapa jenis auksin terhadap pertumbuhan kalus
embriogenik dari beberapa varietas kedelai pada kondisi hipoksia.
5. Ada interaksi beberapa jenis auksin dengan beberapa varietas kedelai terhadap
pertumbuhan kalus embriogenik pada kondisi hipoksia.
Kegunaan Penelitian
Sebagai salah satu syarat untuk mendapatkan gelar sarjana di Fakultas
Pertanian Universitas Sumatera Utara, Medan dan sebagai bahan informasi bagi
pihak yang membutuhkan.

TINJAUAN PUSTAKA
Botani Tanaman
Menurut Steenis (2005) klasifikasi tanaman kedelai adalah sebagai
berikut: Kingdom :Plantae; Divisi: Spermatophyta; Subdivisi: Angiospermae;
Kelas: Dicotyledonae; Ordo: Rosales; Famili: Papilionaceae; Genus: Glycine;
Species : Glycine max (L.) Merill.
Sistem perakaran kedelai terdiri dari 2 macam, yaitu akar tunggang dan
akar sekunder (serabut) yang tumbuh dari akar tunggang. Pertumbuhan akar
tunggang dapat mencapai panjang sekitar 2 m atau lebih pada kondisi yang
optimal, sementara akar serabut dapat tumbuh pada kedalaman tanah sekitar 20-30
cm. Akar serabut ini mula-mula tumbuh di dekat ujung akar tunggang, sekitar 3-4
hari stelah berkecambah dan akan semakin bertambah banyak dengan
pembentukkan akar-akar muda yang lain (Irwan, 2006).
Batang berbentuk pesergi dengan rambut coklat yang menjauhi batang
atau mengarah ke bawah. Pertumbuhan batang terdiri dari dua tipe yaitu
determinate dan interdeterminate yang didasarkan keberadaan bunga pada pucuk
batang (Steenis, 2005).
Bentuk daun kedelai yaitu bulat (oval) dan lancip (lanceolate). Tanaman
kedelai mempunyai dua bentuk daun yang dominan, yaitu stadia kotiledon yang
tumbuh saat tanaman masih berbentuk kecambah dengan dua helai daun tunggal
dan daun bertangkai tiga (trifoliate leaves) yang tumbuh selepas masa
pertumbuhan. Daun mempunyai bulu dengan warna cerah dan jumlahnya
bervariasi (Irwan, 2006).

Bunga kedelai berada di ketiak daun, atau segugusan terminal dari batang
utama dan cabang, masing-masing satu gugus bunga memiliki 2-35 bunga kecil,
berwarna putih atau ungu pucat. setiap bunga yang terdiri dari dua bracteoles,
memiliki kelopak berbulu sebanyak lima sepal bersatu disekitar berukuran
setengah panjangnya; dua lobus kelopak atas berada di balik kelopak standar dan
tiga di bawah lunas, salah satu ditengah memiliki panjang melebihi lunas
(Cobley, 1976)
Polong kedelai pertama kali terbentuk sekitar 7-10 hari setelah munculnya
bunga pertama. Panjang polong muda sekitar 1 cm. Jumlah polong yang terbentuk
pada setiap ketiak tangkai daun sangat beragam, antara 1-10 buah dalam setiap
kelompok. Pada setiap tanaman, jumlah polong dapat mencapai lebih dari 50,
bahkan ratusan. Kecepatan pembentukan polong dan pembesaran biji akan
semakin cepat setelah proses pembentukan bunga berhenti. Ukuran dan bentuk
polong menjadi maksimal pada saat awal periode pemasakan biji. Hal ini
kemudian diikuti oleh perubahan warna polong, dari hijau menjadi kuning
kecoklatan pada saat masak (Irwan, 2006).
Biji kedelai berkeping dua, terbungkus kulit biji dan tidak mengandung
jaringan endosperma. Embrio terletak diantara keping biji. Warna kulit biji
kuning, hitam, hijau, coklat. Pusar biji (hilum) adalah jaringan bekas biji melekat
pada dinding buah. Bentuk biji kedelai umumnya bulat lonjong, tetapi ada pula
yang bundar atau bulat agak pipih. Biji kedelai yang kering akan berkecambah
bila memperoleh air yang cukup. Kecambah kedelai tergolong epigeous, yaitu
keping biji muncul diatas tanah. Warna hipokotil, yaitu bagian batang kecambah
dibawah keping, ungu atau hijau yang berhubungan dengan bunga. Kedelai yang

berhipokotil ungu berbunga ungu, sedangkan yang berhipokotil hijau berbunga
putih. Kecambah kedelai dapat digunakan sebagai sayuran (Usaman, 2014).
Penampilan bentuk tanaman dikendalikan oleh sifat genetik tanaman di
bawah pengaruh faktor-faktor lingkungan. Faktor lingkungan dan faktor genetik
tetua khususnya kisaran variabilitas genetik sangat menentuk keberhasilan upaya
mendapatkan varietas unggul. Semakin luas kisaran variabilitas genetik antar
tetua, semakin besar peluang terbentuknya genotipe yang potensial. Varietas baru
yang dihasilkan harus memiliki sifat yang lebih baik yang sesuai harapan
sehingga dapat diterima oleh produsen serta konsumen dan dapat memberikan
nilai tambah ekonomi. Hal ini dapat diusahakan dengan cara seleksi terhadap
populasi tertentu dari perbendaharaan klon yang ada dan introduksi klon yang
baru atau perbaikan beberapa sifat keturunan tanaman yang sudah diusahakan
(Arifin,2013).
Varietas
Varietas adalah kelompok tanaman dalam jenis atau spesies tertentu yang
dapat dibedakan dari kelompok lain berdasarkan suatu sifat atau sifat-sifat
tertentu. Pada umumnya tanaman memiliki perbedaan fenotip dan genotip yang
sama. Perbedaan varietas cukup besar mempengaruhi perbedaan sifat dalam
tanaman. Keragaman penampilan tanaman terjadi akibat sifat dalam tanaman
(genetik) atau perbedaan lingkungan kedua-duanya. Perbedaan susunan genetik
merupakan salah satu faktor penyebab keragaman penampilan tanaman
(Liptan, 2000).
Varietas memegang peranan penting dalam perkembangan penanaman
kedelai karena untuk mencapai produktivitas yang tinggi sangat ditentukan oleh

potensi daya hasil dari varietas unggul yang ditanam. Potensi hasil biji di
lapangan masih dipengaruhi oleh interaksi antara faktor genetik varietas dengan
pengelolaan kondisi lingkungan tumbuh. Bila pengelolaan lingkungan tumbuh
tidak dilakukan dengan baik, potensi daya hasil biji yang tinggi dari varietas
unggul tersebut tidak dapat tercapai (Irwan, 2006).
Disamping upaya pencarian varietas yang memiliki karakter toleran
terhadap hal tersebut di atas, dalam konteks budidaya tanaman perlu dilakukan
penelitian yang berupaya meningkatkan kemampuan tanaman dalam kondisi
tergenang/terendam melalui berbagai teknik agronomi. Kegiatan ini diharapkan
dapat meningkatkan vigor bibit pada saat akan ditanam di lapang. Oleh karena itu,
proses pembibitan yang optimal sesuai dengan kondisi lahan rawa perlu dicari dan
di teliti (Suwignyo, 2007).
Pengaruh Lahan Tergenang Terhadap Tanaman Kedelai
Kekurangan maupun kelebihan air tidak baik untuk tanaman karena akan
mengganggu proses metabolisme dari tanaman. Jumlahnya terlalu banyak
(menimbulkan genangan) sering menimbulkan cekaman aerasi. Pada kondisi
jenuh air, pori makro pada tanah terisi oleh air, padahal idealnya pori makro tanah
terisi oleh udara. Pori makro tanah berfungsi sebagai tempat berdifusinya CO 2
dari akar tanaman ke dalam tanah yang nantinya akan dilepas ke udara. Jika pori
makro terisi air, maka akar tanaman akan tergenang air dan CO 2 tidak dapat
berdifusi. Dampak genangan air adalah menurunkan pertukaran gas antara tanah
dan udara yang mengakibatkan menurunnya ketersediaan O 2 bagi akar,
menghambat pasokan O 2 bagi akar dan mikroorganisme (mendorong udara keluar
dari pori tanah maupun menghambat laju difusi). Genangan selain menimbulkan

penurunan difusi O 2 masuk ke pori juga akan menghambat difusi gas lainnya,
misal keluarnya CO 2 dari pori tanah. CO 2 terakumulasi di pori, pada tanah yang
baru saja tergenang 50% gas terlarut adalah CO 2 , sebagian tanaman tidak mampu
menahan keadaan tersebut (Harjanti, 2012). Menurut Damanik et al. (2012)
Dalam kondisi kultur jaringan yang diisolasi dan dalam kondisi perendaman
tanaman (bentuk paling ekstrim dari stres banjir) adanya perbedaan dalam hal
pembatasan dalam difusi gas dan zat terlarut yang biasa ditemui di seluruh
jaringan (mis akar, rimpang, dan umbi-umbian), sebagian besar hilang ketika
bekerja dengan sel-sel yang terisolasi.
Di tanah jenuh air, banyak fotosintat yang digunakan untuk pertumbuhan
bagian tanaman di dalam tanah terutama bintil. Ini berakibat aktivitas bintil mulai
lebih awal dan dengan laju lebih cepat. Meskipun demikian penyerapan nitrogen
menurun terutama karena akar bagian bawah yang berada dalam tanah jenuh mati,
sehingga luas permukaan akar menurun. Dengan genangan dalam parit, sampai
minggu kedua tanaman menunjukkan warna daun lebih muda
(Indradewa et al., 2004).
Dampak kondisi jenuh air dapat diketahui dengan melihat akar tanaman
yang lebih pendek dari tanaman yang tumbuh dengan kondisi kapasitas air lapang,
batang tanaman yang tumbuh di kondisi jenuh juga lebih pendek daripada batang
tanaman yang tumbuh dengan kondisi kapasitas air lapang. Hal ini terjadi karena
akar tanaman awalnya tergenang air sehingga akarnya tidak dapat menancap ke
dalam tanah dengan baik sehingga menghambat suplai unsur hara yang
digunakan untuk proses pertumbuhan tanaman (Harjanti, 2012).

Mekanisme Toleransi Fisiologi dan Biokimia Tanaman Kedelai terhadap
Cekaman Genangan
Hipoksia merupakan keadaan ketika kadar oksigen berada dalam kisaran
dibawah kadar normal (20-21%) (Ivanovic, 2009). Keadaan hipoksia ini akan
memberikan efek lebih lanjut berupa cedera jaringan sebagai akibat berkurangnya
aktivitas respirasi aerob; yang jika dibiarkan berlanjut dapat menimbulkan efek
paling berat berupa kematian sel. Setiap sel dalam tubuh makhluk hidup memiliki
kemampuan untuk melakukan adaptasi dalam keadaan ini sampai batas hipoksia
tertentu dengan melakukan produksi energi melalui glikolisis anaerob
(Murach dan Erlykina, 2012).
Oksigen berfungsi sebagai akseptor elektron dalam jalur fosforilasi
oksidatif yang menghasilkan ATP yang merupakan sumber energi utama dalam
metabolisme seluler. Proses fermentasi menyebabkan jumlah energi yang
dihasilkan menjadi lebih sedikit (pada fermentasi dihasilkan hanya 2 mol ATP
untuk setiap mol glukosa, sedangkan pada proses metabolisme oksidatif
dihasilkan 36 mol). Dalam kondisi anoksia, jaringan padi mensintesis lebih
banyak solubel protein. Sebagian besar anaerobik protein ini adalah enzim yang
terlibat dalam metabolisme karbohidrat (alkohol dehidrogenase, aldolase, glukosa
phosphat isomerase, sukrosa synthase, piruvat decarboksilase, gliserol phosphat
dehidrogenase). Protein tersebut akan diproduksi beberapa jam setelah anoksia
(Suwignyo, 2007).
Di dalam sel, Reaktif Oksigen Spesies (ROS) diproduksi secara terus-
menerus sebagai akibat reaksi biokimia. Apabila produksi ROS dan radikal bebas

yang lain melebihi kapasitas penangkapan oleh antioksidan, maka akan
menimbulkan suatu keadaan yang disebut stress oksidatif. Adanya stres oksidatif
akan merusak lipid seluler, protein maupun DNA dan menghambat fungsi normal
sel (Kohen dan Nyska, 2002).
Sel yang normal mempunyai sejumlah enzim pertahanan yang beraksi
sebagai antioksidan endogen untuk mendetoksifikasi radikal bebas dan mencegah
kerusakan sel. Kerentanan suatu jaringan terhadap kerusakan oksidatif tergantung
pada mekanisme pertahanan oksidatifnya, antara lain oleh aktivitas dan
kandungan enzim antioksidan endogen. Peningkatan radikal bebas dalam tubuh
akan meningkatkan pemakaian enzim antioksidan intrasel sehingga menyebabkan
penurunan aktivitas enzim SOD sebagai salah satu sistem antioksidan endogen
dalam tubuh (Astuti, 2008).
SOD merupakan sistem pertahanan pertama dalam menanggulangi
kerusakan yang disebabkan oleh AOS dengan mengkatalisis O 2 menjadi H 2 O 2 .
Di tanaman, terdapat tiga SOD, yaitu Fe-SOD, Mn-SOD, CuZn-SOD. CuZn-SOD
adalah yang paling banyak dan ditemukan di sitosol, peroksisom, kloroplas dan
apoplas. Mn-SOD terdapat di matriks mitokondria dan peroksisom
(Alscher et al. 2002). Fe-SOD lebih banyak ditemukan di tanaman dikotil. Fe-
SOD terdapat di kloroplas, dan pada tembakau berasosiasi dengan tilakoid.
Askorbat peroksidase (APX) berperan penting dalam detoksifikasi H 2 O 2 . APX
terdapat di stroma kloroplas, membran tilakoid, badan mikro, sitosol, dan
mitokondria.
Enzim peroksidase (POD) merupakan salah satu enzim tanaman yang
mempunyai hubungan dengan proses ketahanan. Untuk mengetahui kepekaan dan

ketahanan tanaman terhadap serangan penyakit dipergunakan pendekatan
mengenai pengaruh stres lingkungan terhadap proses fisiologi tanaman. Cekaman
lingkungan dapat mempengaruhi aktivitas gen dan menentukan kapan, bagaimana
dan berapa banyak suatu enzim/protein dapat diproduksi dalam organ atau
jaringan tanaman (Imelda et al., 2001).
Menurut Ritawati (2001) menyatakan bahwa aktivitas enzim peroksidase
punya korelasi positif yang terbatas pada tanaman dewasa, sedangkan pada
tanaman muda korelasi tersebut kurang pasti atau tidak ada. Hasil penelitian
menunjukkan bahwa aktivitas peroksidase dipengaruhi oleh faktor genetik dan
faktor lingkungan. Selanjutnya Agrios (2005), mengemukakan bahwa pada
tanaman yang tahan terjadi peningkatan aktivitas peroksidase, sedangkan pada
tanaman yang peka tidak ada perubahan atau bahkan turun dibandingkan dengan
keadaan sehat.
Kultur In Vitro
Kultur jaringan merupakan salah satu perbanyakan tanaman secara
vegetatif dengan cara menumbuhkan bagian-bagian tertentu dari tanaman, seperti
sel, jaringan dan organ dalam kondisi yang aseptik dan secara in vitro. Kultur
jaringan juga dapat didefinisikan sebagai suatu teknik menumbuh
kembangbiakkan bagian tanaman dalam kondisi aseptik secara in vitro, yang
dicirikan oleh kondisi kultur yang aseptik, penggunaan media kultur buatan
dengan kandungan nutrisi yang lengkap dan zat pengatur tumbuh serta kondisi
ruang kultur yang suhu dan pencahayaannya terkontrol (Mirsadiq, 2013).
Dalam perbanyakan tanaman melalui kultur jaringan dapat ditempuh
melalui dua jalur, yaitu organogenesis dan embriogenesis somatik. Jalur

embriogenesis somatik di masa mendatang lebih mendapat perhatian karena bibit
dapat berasal dari satu sel somatik sehingga bibit yang dihasilkan dapat lebih
banyak dibandingkan melalui jalur organogenesis. Di samping itu, sifat
perakarannya sama dengan bibit asal biji (Lestari, 2011).
Melalui kultur jaringan tanaman dapat diperbanyak setiap waktu sesuai
kebutuhan karena faktor perbanyakannya yang tinggi. Bibit dari varietas unggul
yang jumlahnya sangat sedikit dapat segera dikembangkan melalui kultur
jaringan. Pada tanaman perbanyakan melalui kultur jaringan, bila berhasil dapat
lebih menguntungkan karena sifatnya akan sama dengan induknya (seragam) dan
dalam waktu yang singkat bibit dapat diproduksi dalam jumlah banyak dan bebas
penyakit (Mirsadiq, 2013).
Kelembaban ruang kultur yang dikehendaki adalah sekitar 70%, di dalam
botol kultur sebaiknya lebih tinggi lagi. Eksplan yang dikulturkan menghendaki
suhu ruang kultur yang optimum agar tetap segar, seperti pucuk tanaman Peach
akan tetap segar pada suhu 21oC hingga 24oC (80-90%), sedangkan pada suhu
28oC hanya 7% yang segar. Kultur kalus juga menunjukkan laju pertumbuhan
yang berbeda karena suhu (Haloho, 2004).
Kultur Kalus
Kalus dapat diinisiasi dari hampir semua bagian, tetapi organ yang
berbeda menunjukkan kecepatan pembelahan sel yang berbeda pula. Jenis
tanaman yang menghasilkan kalus meliputi dikotil berdaun lebar, monokotil
gymnospermae, pakis, dan juga moss. Bagian tanaman seperti embrio muda,
hipokotil, kotiledon, dan batang muda, merupakan bagian yang mudah untuk
dediferensiasi dan menghasilkan kalus (Gunawan, 1987).

Kalus dipacu dengan penambahan auksin dengan konsentrasi yang relatif
tinggi, Nitrogen erat kaitannya dengan sintesis klorofil dan sintesis protein
maupun enzim. Enzim (rubisco) berperan sebagai katalisator dalam fiksasi CO2
yang dibutuhkan tanaman untuk fotosintesis. Penurunan kadar nitrogen tanaman
berpengaruh terhadap fotosintesis baik lewat kandungan klorofil maupun enzim
fotosintetik (Kumianjani, 2015).
Kultur kalus bertujuan untuk memperoleh kalus dari eksplan yang diisolasi
dan ditumbuhkan dalam lingkungan terkendali. Kalus diharapkan memperbanyak
dirinya (massa selnya) secara terus menerus. Sel-sel menyusun kalus adalah sel-
sel parenkhima yang mempunyai ikatan yang renggang dengan sel-sel lain. Dalam
kultur in vitro, kalus dapat dihasilkan dari potongan organ yang telah steril dalam
media yang mengandung auksin dan kadang-kadang juga sitokinin. Bila eksplan
yang digunakan mengandung kambium, maka kalus dapat terbentuk tanpa
perlakuan zat pengatur tumbuh. Pembentukan kalus pada eksplan yang ada
kambium ini serupa dengan kejadian pencangkokan dan penyetekan
(Gunawan, 1987).
Sel yang mempunyai kemampuan menjadi embriogenik sangat tergantung
pada tingkat awal diferensiasi sel serta kondisi lingkungan yang mendukungnya
terutama interaksi kandungan hormon endogen dengan konsentrasi zat pengatur
tumbuh eksogen yang diberikan sehingga konsentrasi zat pengatur tumbuh di
dalam sel berubah. Perubahan konsentrasi tersebut merupakan triggering factor
atau faktor pemicu yang dapat mempengaruhi ekspresi gen dalam menentukan
embriogenesis somatik (Rusdianto dan Indrianto, 2012).

Kalus embriogenik dapat terbentuk secara langsung atau melalui subkultur
berulang baik pada perlakuan yang sama maupun pada perlakuan yang berbeda.
Kalus embriogenik mempunyai struktur friabel, noduler dan berwarna putih atau
kekuningan (Yelnititis dan Komar, 2010)
Keuntungan embriogenensis antara lain: berasal dari sel tunggal sehingga
efektif digunakan untuk modifikasi genetik seperti transfer gen dan fusi protoplas,
jumlah regenerasi yang diperoleh lebih banyak sehingga efektif untuk multiplikasi
secara in vitro, memudahkan konservasi plasma nutfah, mempermudah pertukaran
plasma nutfah serta merupakan material yang baik untuk studi biokimia maupun
biologi molekuler (Armaniar, 2002).
Peran Zat Pengatur Tumbuh dalam Kultur In Vitro
Auksin di dalam kultur jaringan berperan dalam pembentukan kalus,
morfogenesis akar dan tunas serta embriogenesis. Auksin 2,4-D sering digunakan
untuk inisiasi kalus maupun pembentukanembrio somatik, tetapi untuk tanaman
tertentu diperlukan auksin lain seperti NAA, IAA, 4-CPA dan Picloram
(Haloho, 2004).
Hormon auksin akan menginduksi sekresi ion H+ keluar sel melalui
dinding sel. Pengasaman dinding sel menyebabkan K+ diambil dan pengambilan
ini megurangi potensial air dan sel, akibatnya air masuk ke dalam sel dan sel
membesar. Auksin juga mempengaruhi metabolisme RNA yang juga berarti
metabolisme protein melalui transkripsi (Gunawan, 1987)
Pendekatan yang umum digunakan dalam menginduksi embrio somatik
adalah mengkulturkan jaringan tanaman dalam medium yang mengandung auksin,
misalnya 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D). Respon awal eksplan terhadap

2,4-D adalah pembentukan kalus sebagai wujud dediferensiasi. Kalus merupakan
massa sel yang tidak terorganisir yang awalnya merupakan jaringan penutup luka,
dimana sel-sel yang pada awalnya dorman (quiescent) terdiferensiasi kembali
(dediferensiasi). Dediferensiasi terjadi karena sel-sel tumbuhan (jaringan), yang
secara alamiahnya bersifat autotrof dikondisikan menjadi heterotrof dengan cara
memberikan nutrisi yang cukup kompleks di dalam medium kultur, sehingga sel-
sel membelah secara tidak terkendali membentuk massa sel yang tidak
terorganisir (kalus) (Rusdianto dan Indrianto, 2012).
Zat pengatur tumbuh dibuat agar tanaman memacu pembentukan
fitohormon (hormon tumbuhan) yang sudah ada di dalam tanaman atau
menggantikan fungsi dan peran hormon bila tanaman kurang dapat memproduksi
hormon dengan baik. produksi auksin endogen memerlukan energi yaitu ATP dan
ATPase aktif, sehingga untuk perkembangan sel yang mendapatkan pasokan
energi yang rendah membutuhkan penambahan auksin sintetis. Pemilihan jenis
auksin sintetik dan konsentrasinya bergantung dari tipe pertumbuhan yang
dikehendaki, level auksin endogen, kemampuan jaringan mensintesa auksin,
pengaruh golongan zat tumbuh lain (Lestari, 2011).
Pertumbuhan Kalus Tanaman Kedelai Secara In vitro
Dalam kultur sel, massa sel yang disebut kalus merupakan materi yang
pertama dibutuhkan. Selanjutnya kalus disuspensikan dalam media cair yang
mengandung berbagai nutrisi dan senyawa-senyawa yang dibutuhkan untuk
pertumbuhan optimal yang menyebabkan sel menjadi tidak terdiferensiasi.
Suspensi sel tersebut selanjutnya diletakkan di atas shaker (mesin
penggoyang/pemutar) yang menyebabkan agregat sel menjadi kumpulan sel-sel

kecil dan sel tunggal yang tersebar merata dalam media cair. Sel-sel tersebut akan
tumbuh terus sampai salah satu faktor menjadi pembatas menyebabkan
pertumbuhan sel lambat. Sebelum hal tersebut terjadi, sel-sel dapat dipindahkan
dalam media yang mengandung hormon yang dapat mengaktifkan pertumbuhan
spesifik. Misalnya media yang mengandung auksin, dapat mengaktifkan
pertumbuhan akar-akar adventif, sedangkan media yang mengandung sitokinin
dapat memacu proliferasi tunas aksilar dan tunas adventif dan mengatur
diferensiasi. Setelah tanaman berkembang sempurna, selanjutnya dapat
dipindahkan ke tanah untuk tumbuh lebih lanjut (Hutami, 2009).
Suatu sifat yang diamati dalam jaringan yang membentuk kalus adalah
bahwa pembelahan sel tidak terjadi pada semua sel dalam jaringan asal, tetapi
hanya sel di lapisan periphery yang membelah terus-menerus, sedangkan sel-sel di
tengah tetap quiescent (Gunawan, 1987).
Beberapa kalus ada yang mengalami pembentukan lignifikasi sehingga
kalus tersebut mempunyai tekstur yang keras dan kompak. Namun ada kalus yang
tumbuh terpisah-pisah menjadi fragmen-fragmen yang kecil, kalus yang demikian
dikenal dengan kalus remah (friable). Warna kalus dapat bermacam-macam
tergantung dari jenis sumber eksplan itu diambil, seperti warna kekuning-
kuningan, putih, hijau, kuning kejingga-jingaan (karena adanya pigmen antosianin
ini terdapat pada kalus kortek umbi wortel) (Shofiyah dan Purnawanto, 2010).

BAHAN DAN METODE PENELITIAN
Tempat dan Waktu Percobaan
Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Kultur Jaringan dan
Laboratorium Teknologi Pangan Fakultas Pertanian Universitas Sumatera Utara,
Medan dengan ketinggian tempat ± 25 m dpl pada bulan Maret sampai dengan
September 2016.
Bahan dan Alat
Bahan yang akan digunakan dalam penelitian ini meliputi bahan eksplan:
biji kedelai yang diperoleh dari koleksi Balai Penelitian Tanaman Kacang-
kacangan dan Umbi-umbian (Balitkabi) Malang meliputi benih kedelai varietas
Baluran, Gepak kuning dan Wilis, berupa kotiledon yang telah dipisahkan dari
bagian embrio. Bahan kimia: larutan stok makronutrien medium MS; larutan stok
mikronutrien, sukrosa, vitamin, asam amino, larutan stok zat pengatur tumbuh
2,4-D, NAA dan IAA, akuades steril; agar; bahan sterilisasi yaitu alkohol 70%,
spiritus, detergen, Dithane, Benlate, Chlorox dan Iodine . Buhan buffer pH:
NaOH 0,1 N dan HCL 0,1 N. kertas label, kertas saring, kertas payung, kertas
tissu, korek, aluminium foil.; bahan larutan analisa histologi kalus yaitu
Acetocarmin 2%, alkohol 96% dan Asam asetat; bahan larutan analisa klorofil
yaitu aseton 85%, kertas saring; bahan larutan analisa protein yaitu H 2 SO 4 pekat
katalis (CuSO4:K2SO4 dengan perbandingan 1:1), akuades, NaOH 40%, metil
merah 0.02%, metil biru 0.02% dan alkohol; bahan larutan analisa Enzim SOD
yaitu PVPP, nitrogen cair, buffer ekstrak, buffer potassium phosphate, EDTA,
L-Methionin, NBT, dan riboflavin ; bahan larutan analisa Enzim POD yaitu
PVPP, nitrogen cair, CaCl, fenol, Amino antiphirine, dan buffer MES pH 6.

Alat yang akan digunakan dalam penilitian ini meliputi alat-alat gelas:
gelas ukur, erlenmeyer, cawan petri, batang pengaduk, botol kultur, alat-alat
diseksi (scalpel, pinset, gunting), Laminar Air Flow Cabinet (LAFC), timbangan
analitik, pipet tetes, alat sterilisasi (autoklaf, lampu spiritus, dan penyemprot
alkolhol (hand sprayer), pH meter, lemari pendingin, rak kultur, termometer,
lampu fluourescenst, hot plate, magnetic stirrer, mortar, alu, mikroskop cahaya,
mikropipet, tube, tips (biru , kuning), sentrifuse, vortex, cuvet, spektrofotometer
UV-Vis, waterbath, oven,labu kjedhal,alat destilasi,kondensor dan kamera.
Metode Penelitian
Penelitian ini dilakukan dalam 2 tahap yaitu: (1) Tahap pembentukan
kalus embriogenik; (2) Tahap identifikasi kalus toleran genangan. Rancangan
penelitian yang digunakan yaitu Rancangan Acak Lengkap (RAL) faktorial terdiri
dari dua faktor yaitu sebagai berikut :
Faktor I : Verietas yang diuji.
V1 : Baluran
V2 : Gepak kuning
V3 : Wilis
Faktor II : Media dengan Zat Pengatur Tumbuh yang diuji
A1 : MS + 2,4-D 10 mg/L
A2 : MS + NAA 10 mg/L
A3 : MS + Picloram 10 mg/L
Kombinasi Perlakuan ada 9, yaitu
V1A1 V1A2 V1A3
V2A1 V2A2 V2A3

V3A1 V3A2 V3A3
Jumlah ulangan : 3 Ulangan
Jumlah perlakuan : 9 Kombinasi
Jumlah Varietas : 3 Varietas
Jumlah eksplan tiap tabung uji : 1 Tanaman
Jumlah seluruh eksplan : 27 Eksplan
Jumlah seluruh Botol : 27 Botol Kultur
Jumlah sampel/Botol : 1 Sampel
Data hasil penelitian dianalisis dengan sidik ragam model sebagai berikut :
Y ijk = µ + α i + β j + (αβ) ij + ε ijk
i = 1, 2, 3 j = 1, 2, 3 k = 1, 2, 3, 4, 5, 6
Dimana :
Y ijk = nilai pengamatan sampel ke-l yang memperoleh kombinasi perlakuan
ke-i (taraf perlakuan faktor V) dan ke-j (taraf perlakuan faktor A)
μ = rataan umum
αi = pengaruh aditif taraf ke-i dari faktor V
βj = pengaruh aditif taraf ke-j dari faktor A
(αβ) ij = pengaruh interaksi taraf ke-i faktor V dan taraf ke-j faktor A
ε ijk = pengaruh galat percobaan pada sampel ke-l yang memperoleh kombinasi
perlakuan ke-ij
Jika perlakuan (Varietas yang diuji, jenis ZPT auksin dan interaksi)
berbeda nyata dalam sidik ragam maka dilanjutkan dengan Uji Jarak Berganda
Duncan (DMRT) pada α = 5% (Steel dan Torrie, 1995). Analisis dilakukan
menggunakan software Costat for Window dan Microsoft Excel 2007.

PELAKSANAAN PENELITIAN
Tahap 1: Pembentukan Kalus Embriogenik
Sterilisasi Alat
Untuk menghindari kontaminasi dalam kultur jaringan alat-alat yang
digunakan dilakukan sterilisasi. Semua alat seperti botol kultur, petridis, gelas
ukur, erlenmeyer, cawan petri, pipet ukur, pinset, scalpel, dan alat-alat gelas
lainnya terlebih dahulu direndam dalam deterjen dicuci bersih dan dibilas dengan
air mengalir, selanjutnya dikeringkan. Kemudian alat-alat seperti scalpel, pipet
ukur, pinset dan cawan petri dibungkus dengan kertas sampul coklat, sedangkan
untuk erlenmeyer dan gelas ukur untuk permukaannya ditutup dengan aluminium
foil. Setelah itu, semua botol kultur dan alat-alat dimasukkan kedalam autoclave
pada tekanan 17.5 psi, dengan suhu 121 0C selama 60 menit. Kemudian alat-alat
tersebut dimasukkan ke dalam oven kecuali botol kultur.
Pembuatan Media
Media yang digunakan dalam penelitian ini adalah media MS dengan
menggunkan zat pengatur tumbuh yaitu 2,4-D, NAA dan IAA dengan konsentrasi
10 mg/L. Perhitungan dilakukan seberapa banyak media yang akan dibuat
sehingga stock yang akan diambil untuk dicampurkan dapat diketahui dan
dituliskan volume masing-masing stock yang akan dipipet. Media dibuat dalam
1 L, semua stock media disiapkan diatas meja kerja dari porselin.
Untuk membuat media 1 liter, dituangkan aquadest 500 ml dalam gelas
beker 1 liter, dengan batang magnetik di dalamnya. Ditimbang dan ditambahkan
30 g glukosa dan o.1 g Myo-inositol. Dan ditambahkan 50 ml larutan stok makro
dan 5 ml untuk larutan stok mikro. Setelah itu ditambahkan larutan Iron sebanyak

10 ml dan larutan vitamin 5 ml. Kemudian ditambahkan zat pengatur tumbuh
pada masing-masing perlakuan yang digunakan sebanyak 10 ml. Dijadikan
volume larutan hingga mendekati tanda 1 liter dengan menambahkan aquadest,
diukur pH pada 5.6-5.8. Lalu dituang medium ke dalam erlenmeyer 2 liter dan
ditambahkan agar 7 g. Dipanaskan hingga agar larut. Setelah itu ditunggu hingga
larutan tampak bening maka larutan siap untuk dijadikan larutan media.
Didiamkan beberapa saat terlebih dahulu larutan media yang telah di
hot plate. Sambil menunggu larutan media dingin botol kultur yang sudah
disterilkan disiapkan dan aluminium foil dipotong sesuai dengan ukuran mulut
botol. Lalu larutan media yang sudah dingin dimasukkan kedalam botol kultur dan
ditutup dengan aluminium foil. Media disterilisasi dengan autoclave pada 15 psi,
121 oC selama kurang lebih 30 menit. Setelah itu media didinginkan didalam
laminar dan disimpan di ruang kultur.
Persiapan Ruang Kultur
Seluruh permukaan LAFC sebelumnya dibersihkan terlebih dahulu dan
disemprot menggunakan alkohol 70% kumudian dilap. Lalu blower dihidupkan
dan disterilkan dengan sinar ultra violet selama 1 jam sebelum proses penanaman
dilakukan, semua alat yang akan dipakai harus disemprot dengan alkohol 70%
sebelum dimasukkan ke dalam LAFC yang berguna untuk menghindari alat-alat
tersebut terkontaminasi.
Sterilisasi Eksplan
Bahan tanam yang digunakan dalam penelitian ini adalah benih kedelai
varietas Baluran, Gepak kuning dan Wilis. Benih kedelai yang digunakan

sebaiknya bermutu tinggi baik secara genetik, fisik dan fisiologi. Daya tumbuh
tinggi yaitu lebih dari 90% dan toleransi terhadap genangan.
Sterilisasi eksplan dilakukan dengan perendaman benih kedelai tersebut
selama 50 menit. Biji-biji kedelai kemudian direndam 30 menit dengan deterjen
sambil digojok, setelah itu dibilas dengan air mengalir sebanyak 3 kali. Pekerjaan
selanjutnya dilakukan di LAFC yang sudah disterilkan dengan alkohol 70%.
Eksplan yang sudah bersih direndam dalam larutan fungisida Dithane M-45 2 g/L,
kemudian digojok selama 30 menit, kemudian dibilas dengan aquadest steril
minimal 3 kali. Lalu direndam kembali dalam larutan Benlate kemudian digojok
selama 30 menit. selanjutnya dibilas dengan aquadest steril minimal sebanyak 3
kali. Setelah itu eksplan direndam dalam larutan Chlorox 10% selama 15 menit
sambil digojok, kemudian dibilas dengan aquadest steril minimal 3 kali. Eksplan
direndam dengan larutan Iodine selama 10 menit sambil digojok kemudian dibilas
dengan aquadest minimal sebanyak 3 kali.
Penanaman
Penanaman eksplan dilakukan di LAF yang telah disterilkan dengan
alkohol 70%. Eksplan yang akan di tanam adalah kotiledon kedelai, Eksplan yang
akan dikulturkan kedalam media tanam diletakkan di petridish, dimana kotiledon
dipisahkan dari bagian embrio. Kemudian eksplan ditanamkan ke dalam botol
media sesuai dengan perlakuan. Setiap botol media sesuai dengan perlakuan.
Setiap botol kultur terdiri dari 1 eksplan. Botol kultur diletakkan di Rak Kultur
dibawah cahaya.

Pemeliharaan
Botol-botol kultur yang telah ditanami eksplan pada rak-rak kultur
didalam ruangan kultur setiap hari disemprot dengan alkohol 70% agar bebas dari
mikroorganisme (bakteri dan jamur) yang menyebabkan terjadinya kontaminasi.
Suhu ruang kultur yang digunakan adalah 18-22 0C dan intensitas cahaya sebesar
2000 lux.
Tahap 2: Identifikasi Kalus Toleran Genangan
Identifikasi kalus dilakukan secara 2 tahap, yaitu tahap 1, sebelum
dilakukan aplikasi penggenangan dan tahap 2, yaitu setelah dilakukan aplikasi
penggenangan.
Aplikasi Penggenangan terhadap kalus dilakukan dengan memberikan
MS0 cair pada kalus yang tumbuh sampai kalus tertutupi oleh media tersebut
selama 48 jam.
Gambar 1. Aplikasi penggenangan kalus dengan MS0 cair
Adapun analisis yang dilakukan pada kegiatan identifikasi kalus toleran
genangan, antara lain:
Pengukuran Kadar Klorofil (mg/l)
Pengukuran kandungan klorofil total menggunakan metode Arnon (1949)
diukur dengan spektrofotometri. Kalus segar digerus dengan mortar, kemudian
serbuk kalus diukur beratnya sebanyak 1 g. Sampel yang sudah digerus (slurry)
kemudian diekstraksi dengan 100 mL aseton 85%, Lalu didiamkan selama 1

malam di dalam kulkas. Ekstrak tersebut disaring dengan kertas saring. Filtrat
yang didapat ditempatkan dalam cuvet untuk selanjutnya diukur kandungan
klorofil total dengan alat spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang 645
nm, dan 663 nm. Kadar klorofil total dihitung dengan rumus:
Klorofil Total = 8,02 (A.663) + 20,2 (A.645) mg/l
Pengukuran Konsentrasi Protein (%)
Pengukuran konsentrasi protein menggunakan metode Kjedhal AOAC,
(1995). Sampel disiapkan dengan mengeringkan kalus segar dalam oven selama
24 jam. Sampel lalu diambil sebanyak 0,2 g yang telah dihaluskan dimasukkan ke
dalam labu kjedhal 30 ml selanjutnya ditambahkan dengan 2,5 ml H 2 SO 4 pekat, 2
g katalis (CuSO 4 : K 2 SO 4 dengan perbandingan 1:1). Sampel dididihkan selama
1-1,5 jam atau sampai cairan bewarna jernih. Labu beserta isinya didinginkan lalu
ditambahkan dengan 10 ml akuades dan isinya dipindahkan ke dalam erlenmeyer.
Erlenmeyer dipindahkan ke alat destilasi dan ditambahkan 10 ml larutan NaOH
40%. Erlenmeyer berisi H 2 SO 4 0,02 N sebelumnya ditambahkan ke dalamnya 2 –
4 tetes indikator (campuran metil merah 0,02% dalam alkohol dan metil biru
0,02% dalam alkohol dengan perbandingan 2 :1) diletakkan dibawah kondensor.
Ujung tabung kondensor harus terendam dalam labu larutan H 2 SO 4 , kemudian
dilakukan destilasi hingga sekitar 125 ml destilat dalam labu erlenmeyer. Ujung
kondensor kemudian dibilas dengan sedikit air destilat dan ditampung dalam
erlenmeyer lalu dititrasi dengan NaOH 0,02 N sampai terjadi perubahan warna
hijau menjadi ungu. Penetapan blanko dilakukan dengan cara yang sama.
Kadar protein (%bb) =

Keterangan:
A = ml NaOH untuk titrasi blanko
B = ml NaOH untuk titrasi sampel
N = Normalitas NaOH
FK = Faktor Konversi
Pengukuran Aktifitas Enzim Super Oksida Dismutase (SOD) (unit/mg/l)
Pengujian aktivitas enzim SOD diukur dengan menggunakan metode
Beauchamp dan Erodovich (1971) yang dimodifikasi. Setelah kalus sebagai bahan
sampel digerus dengan menambahkan PVPP secukupnya dan nitrogen cair maka
akan didapat bahan sampel dalam bentuk serbuk lalu ditimbang sebanyak 0.1 g.
Setelah itu buffer ekstrak disiapkan sebanyak 1 ml pada tube 1.5 ml. Lalu bahan
sampel yang telah diukur tersebut dimasukkan kedalam tube yang berisi buffer
ekstrak tersebut.
Buffer Ekstrak dibuat dengan penambahan 50 mM buffer Potassium
Phosphate (pH 7.5) dan 1 mM EDTA, dimana untuk mendapatkan hasil yang
homogen disentrifius pada kecepatan 10.000 rpm dengan suhu 4o C selama 15
menit. Pada reaksi penyangga diekstrak 50 mM Buffer Potassium Phosphate
sebanyak 750 µM, 13 mM L-Methionin sebanyak 50 µM, 75 mM NBT sebanyak
50 µM, 0.1 mM EDTA sebanyak 150 µM, 100 mL estrak enzim sebanyak 100
µM, 2mM Riboflavin sebanyak 50 µM lalu tabung ditempatkan pada ruang
dibawah cahaya 15 watt dan dibiarkan 15 menit. Setelah itu terakhir ditambahkan
aquadest sebanyak 350 µM dengan total volume 1.5 mL lalu larutan divortex
hingga larut dan dibaca oleh spektrofotometer UV-Vis dengan absorbansi 560 nm.

Satu unit enzim aktivitas SOD didefenisikan sebagai aktivitas SOD mg protein.
Penetapan blanko dilakukan dengan cara yang sama.
Aktivitas enzim SOD =
Nilai Aktivitas enzim SOD =
Pengukuran Aktifitas Enzim Peroksidase (POD) (unit/mg/l)
Pengujian aktivitas enzim POD diukur dengan pembacaan panjang
gelombang di spektrofotometer UV-Vis, berdasarkan metode pada Standart
Operating Procedures (1994) yang dimodifikasi dimana sebelumnya bahan
analisis yaitu kalus sebagai bahan sampel digerus dengan menambahkan PVPP
secukupnya dan nitrogen cair maka akan didapat bahan sampel dalam bentuk
serbuk lalu ditimbang sebanyak 0.1 g. Setelah itu larutan CaCl disiapkan
sebanyak 1 ml pada tube 1.5 ml. Lalu bahan sampel yang telah ditimbang tersebut
dimasukkan kedalam tube tersebut dan dihomogenkan menggunakan sentrifius
dengan kecepatan 10000 rpm, dengan suhu 40 C selama 15 menit. Dimana
perbandingan sampel dengan volume pengenceran adalah 1: 10. Pembuatan
larutan A phenol-aminoantipirine (larutan Fenol 810 mg dan amino antiphirine 25
mg dalam 50 ml air) dan larutan B dengan mencampurkan 30% H 2 O,
ditambahkan dengan lariutan buffer MES pH 6 perbandingan 1:100 dengan
konsentrasi akhir 0.01 M. Larutan A dan B tidak dapat dijadikan larutan stok
sehingga pemakaiannya tidak dapat digunakan berulang kali. Pengukuran POD
menggunakan spektrofotometer dengan absorban 510 nm dengan menambahkan
1.4 ml larutan A dan1.5 ml larutan B kedalam kuvet 3 ml yang telah di waterbath

250 C lalu ditambahkan 200 µl ekstrak kedalam kuvet lalu diaduk. Perhitungan
aktifitas peroksida dihitung dengan rumus:
A510 = Af-Al
Aktivitas enzim peroksidase =
Keterangan:
A510 = Unit POD dengan panjang gelombang 510 nm
Af = Pembacaan peroksidase akhir (final)
Al = Pembacaan peroksidase awal (initial)
Peubah Amatan
Persentase Eksplan Membentuk Kalus (%)
Pengamatan terbentuknya kalus dilakukan pada umur 4 dan 8 MST,
dengan menghitung jumlah eksplan membentuk kalus.
Persentase eksplan membentuk kalus =
Warna Kalus
Pengamatan dilakukan secara visual terhadap penampakan kalus. Dimana
warna kalus diamati pada tiap perlakuan dalam suatu botol kultur.
Tekstur Kalus
Pengamatan dilakukan secara visual terhadap penampakan kalus. Tekstur
kalus yang diamati yaitu kalus yang remah/friabel, kalus kompak dan ada
tidaknya nodul yang terbentuk
Analisis Histologi Kalus Embriogenik
Histologi kalus embriogenik diamati sebelum dilakukan tahap identifikasi
kalus embriogenik toleran genangan. Preparat histologi dibuat dari kalus

embriogenik friable bewarna putih kekuning-kuningan yang diperoleh dari
masing-masing perlakuan. Pengirisan dilakukan dengan silet tajam, dan diiris
tipis. Pewarnaan menggunakan Acetocarmin 2% yang dilarutkan dengan alkohol
96% sebanyak 25 ml dan Asam asetat sebanyak 25 ml. Preparat histologi diamati
di bawah mikroskop cahaya dan dipotret menggunakan kamera.
Bobot Segar Kalus Total (g)
Bobot kalus segar total ditimbang pada akhir pengamatan pertumbuhan
yaitu pada umur 8 MST dengan cara menimbang kalus dengan timbangan analitik
pada tiap perlakuan dalam satu botol kultur.
Pengukuran Kandungan Klorofil (mg/l)
Kandungan klorofil diukur pada akhir identifikasi kalus embriogenik
toleran genangan. Pengukuran kadar klorofil secara spektrofotometrik didasarkan
pada hukum Lamber – Beer. Metode yang dilakukan untuk menghitung kadar
klorofil pada penelitian ini adalah Metode Arnon (1949), dalam Kumianjani
(2015) yaitu dengan menggunakan palarut aceton 85 % dan mengukur nilai
absorbansi larutan klorofil pada panjang gelombang (λ) = 663 dan 645 nm.
Pengukuran Konsentrasi Protein (%)
Konsentrasi protein diukur pada akhir identifikasi kalus embriogenik
toleran genangan. Pengukuran konsentrasi protein menggunakan metode Kjedhal
AOAC, (1995) dengan melakukan 3 proses tahapan yaitu proses destruksi, proses
destilasi dan tahap titrasi.
Pengukuran Aktifitas Enzim Super Oksida Dismutase (SOD) (unit/mg/l)
Pengukuran aktivitas enzim SOD diukur pada akhir identifikasi kalus
embriogenik toleran genangan. Pengukuran ini menggunakan metode Beauchamp

dan Erodovich (1971) yang dimodifikasi dengan mengukur absorbansi larutan
sampel kemudian dibaca oleh spektrofotometer UV-Vis pada panjang gelombang
560 nm. Satu unit enzim aktivitas SOD didefenisikan sebagai aktivitas SOD mg
protein.
Pengukuran Aktifitas Enzim Peroksidase (POD) (unit/mg/l)
Pengukuran aktivitas enzim peroksidase diukur pada akhir identifikasi
kalus embriogenik toleran genangan. Pengukuran ini menggunakan Standart
Operating Procedures (1994) yang dimodifikasi dengan mengukur absorbansi
larutan sampel kemudian dibaca oleh spektrofotometer pada panjang gelombang
510 nm menggunakan spektrofotometer UV-Vis, diukur pada 0 detik dan 60 detik
setelah didiamkan. Aktivitas satu unit enzim peroksidase dapat dilihat dari
peningkatan absorbansi 0.01/menit.

HASIL DAN PEMBAHASAN
Hasil
Tahap 1
Persentase Eksplan Membentuk Kalus (%)
Data hasil pengamatan terhadap persentase pertumbuhan eksplan dapat
dilihat pada Lampiran 7, 8 dan 9. Rataan persentase eksplan membentuk kalus
akibat pemberian beberapa jenis ZPT dapat dilihat pada Tabel 1.
Tabel 1. Persentase Eksplan Membentuk Kalus (%)

Perlakuan 4 MST 8 MST Rataan
V1A1 0.00 0.00 0.00
V1A2 0.00 0.00 0.00
V1A3 0.00 0.00 0.00
V2A1 100.00 100.00 100.00
V2A2 0.00 0.00 0.00
V2A3 0.00 0.00 0.00
V3A1 100.00 100.00 100.00
V3A2 0.00 0.00 0.00
V3A3 0.00 0.00 0.00
Keterangan: V1 (Varietas Baluran); V2 (Varietas Gepak kuning); V3
(Varietas
Wilis); A1 ( ZPT 2,4-D 10 mg/l); A2 (ZPT NAA 10 mg/l); A3 ( ZPT
IAA 10 mg/l)
Pada Tabel 1. terlihat bahwa pemberian ZPT 2,4-D 10 mg/l pada eksplan
varietas Gepak kuning dan Wilis telah terbentuk kalus pada umur 4 dan 8 MST,
sedangkan untuk pemberian ZPT NAA dan IAA 10 mg/l kalus belum juga
terbentuk pada kedua umur tersebut, dikarenakan untuk tujuan induksi kalus
embriogenik ZPT NAA dan IAA tunggal dengan konsentrasi tersebut belum bisa
digunakan karena tidak menginduksi terbentuknya kalus. Sedangkan pada varietas
Baluran juga tidak menunjukkan pertumbuhan eksplan, dikarenakan eksplan tidak
respon terhadap media yang diberikan hal ini mungkin akibat konsentrasi zat

pengatur tumbuh eksogen yang diberikan belum sesuai, disamping itu
kemungkinan juga lebih dipengaruhi oleh keadaan hormon endogen.
Keadaan Visual Kalus
Data hasil pengamatan terhadap keadaan visual kalus embriogenik dapat
dilihat pada Lampiran 7, 8 dan 9. atas pengaruh pemberian beberapa jenis ZPT
terhadap keadaan visual kalus beberapa jenis varietas kedelai.
Tabel 2. Penampilan Visual Kalus pada umur 8 MST.

Perla Ula Penampilan Visual Kalus
kuan ngan Warna Tekstur Nodul Gambar
V1A1 1 - - -
2 - - -
3 - - -
V1A2 1 - - -

2 - - -
3 - - -
V1A3 1 - - -
2 - - -
3 - - -
V2A1 1 Hijau Kompak Terbentuk

kekuning- nodul
kuningan

2 Putih Friable Tidak
tipe I terbentuk
nodul
3 Hijau Kompak Terbentuk

kekuning- nodul
kuningan
V2A2 1 - - -
2 - - -
3 - - -
V2A3 1 - - -

2 - - -
3 - - -
V3A1 1 Kekuning- Friable Terbentuk

kuningan tipe II nodul
2 Kekuning- Kompak Terbentuk

kuningan nodul
3 putih Friable Terbentuk

tipe II nodul
V3A2 1 - - -

2 - - -
3 - - -
V3A3 1 - - -
2 - - -
3 - - -
Keterangan: Friable tipe I : kalus yang teksturnya seperti kapas; friable tipe II
: kalus yang teksturnya mudah pecah dan berbutir seperti pasir;
- : tidak terbentuknya kalus.

Histologi Kalus Embriogenik
Data hasil pengamatan terhadap analisis histologi kalus embriogenik dapat
dilihat pada Gambar 2. atas pengaruh pemberian ZPT 2,4-D 10 mg/l terhadap
keadaan histologi kalus varietas Gepak kuning dan Wilis.
SM SE
SM
SE
SE
SM
SM
SE
(a) (b)
Gambar 2. Penampang melintang kalus embriogenik friable pada (a) varietas

Gepak kuning (b) varietas Wilis dengan media ZPT 2,4 -D 10 mg/l.
(SM= Sel Meristem, SE= Sel Embriogenik. Perbesaran obj. 16x.
Pada Gambar 1. dan 2. menunjukkan bahwa kalus pada varietas Gepak
kuning dan Wilis dengan pemberian ZPT 2,4-D 10 mg/l menunjukkan telah
terdapat sel-sel embriogenik. Kalus yang telah memperlihatkan ciri-ciri visual
sebagai kalus embriogenik dijadikan sebagai preparat penampang histologi kalus
untuk melihat adanya reaksi pertumbuhan sel-sel embrioid pada jaringan kalus
tersebut.
Dari hasil pertumbuhan kalus yang terbentuk pada tiap perlakuan pada
tahap I, hanya perlakuan V2A1 dan V3A1 yang respon membentuk kalus
sehingga pada tahap II hanya kedua perlakuan tersebut yang dijadikan sebagai
bahan analisa pada tahap II yaitu identifikasi kalus toleran genangan. Karena
jumlah kalus yang dihasilkan pada tahap induksi masih terbatas maka pada setiap

perlakuan yang berhasil membentuk kalus untuk masuk pada tahap identifikasi
dilakukan komposit (1 ulangan perlakuan terdiri dari 3 botol kultur dengan
perlakuan yang sama).
Pada tahap II, data hasil penelitian tidak dilakukan pengolahan data
menggunakan Rancangan Acak Lengkap (RAL) faktorial dan dilanjutkan dengan
perhitungan menggunakan Microsoft Excel 2007.

Tahap 2
Bobot Segar Kalus Total (g)
Data pengamatan dari bobot kalus segar total dapat dilihat pada
Lampiran 10. Hasil uji beda rataan bobot kalus segar total sebelum dan setelah
penggenangan dapat dilihat pada Gambar 3.
Gambar 3. Rataan bobot segar kalus total (g) dari genotipe kedelai varietas
Gepak kuning (V2) dan Wilis (V3) yang diinduksi pada media dengan
ZPT 2,4-D 10 mg/l (A1) sebelum dan setelah penggenangan.
Jumlah Klorofil Total (mg/l)
Data pengamatan dari jumlah klorofil total dapat dilihat pada Lampiran
11. Dari data hasil analisa menunjukkan bahwa perlakuan pemberian media
ZPT 2,4-D pada beberapa jenis varietas kedelai dan interaksinya keduanya
memberikan respon perbedaan hasil terhadap jumlah klorofil total saat sebelum
dan setelah penggenangan. Dengan jumlah klorofil total tertinggi terdapat pada
varietas gepak kuning dengan media ZPT 2,4-D 10 mg/l sebelum dan setelah
penggenangan. Hasil uji beda rataan klorofil total dapat dilihat pada Gambar 4.

Gambar 4. Rataan jumlah klorofil total (mg/l) dari genotipe kedelai varietas
Konsentrasi Protein (%)
Data pengamatan dari jumlah konsentrasi protein dapat dilihat pada
Lampiran 12. Dari data hasil analisa menunjukkan bahwa perlakuan pemberian
media ZPT 2,4-D pada beberapa jenis varietas kedelai dan interaksinya keduanya
memberikan respon perbedaan hasil terhadap jumlah konsentrasi protein saat
sebelum dan setelah penggenangan. Dengan jumlah konsentrasi protein tertinggi
terdapat pada varietas Gepak kuning dengan media ZPT 2,4-D 10 mg/l sebelum
dan setelah penggenangan. Hasil uji beda rataan konsentrasi protein dapat dilihat
pada Gambar 5.

Gambar 5. Rataan jumlah konstrasi protein (%) dari genotipe kedelai varietas
Nilai Aktivitas Enzim Super Oksida Dismutase (SOD) (unit/mg/l)
Data pengamatan dari jumlah Nilai Aktivitas Enzim SOD dapat dilihat
pada Lampiran 13. Dari data hasil analisa menunjukkan bahwa perlakuan
pemberian media ZPT 2,4-D pada beberapa jenis varietas kedelai dan interaksinya
keduanya memberikan respon perbedaan hasil terhadap jumlah nilai aktivitas
enzim SOD saat sebelum dan setelah penggenangan. Dengan jumlah nilai
aktivitas enzim SOD tertinggi terdapat pada varietas Wilis dengan media ZPT
2,4-D 10 mg/l sebelum dan setelah penggenangan. Hasil uji beda rataan nilai
aktivitas enzim SOD dapat dilihat pada Gambar 6.

Gambar 6. Rataan jumlah nilai aktivitas enzim SOD (unit/mg/l) dari genotipe
kedelai varietas Gepak kuning (V2) dan Wilis (V3) yang diinduksi
pada media dengan ZPT 2,4-D 10 mg/l (A1) sebelum dan setelah
penggenangan.
Nilai Aktivitas Enzim Peroksidase (POD) (unit/mg/l)
Data pengamatan dari jumlah nilai aktivitas enzim POD dapat dilihat pada
Lampiran 14. Dari data hasil analisa menunjukkan bahwa perlakuan pemberian
media ZPT 2,4-D pada beberapa jenis varietas kedelai dan interaksinya keduanya
memberikan respon perbedaan hasil terhadap nilai aktivitas enzim POD saat
sebelum dan setelah penggenangan. Dengan jumlah nilai aktivitas enzim POD
tertinggi terdapat pada varietas Wilis dengan media ZPT 2,4-D 10 mg/l sebelum
dan setelah penggenangan. Hasil uji beda rataan nilai aktivitas enzim POD saat
sebelum dan setelah penggenangan dapat dilihat pada Gambar 7.

Gambar 7. Rataan jumlah nilai aktivitas enzim POD (unit/mg/l) dari genotipe
kedelai varietas Gepak kuning (V2) dan Wilis (V3) yang diinduksi
pada media dengan ZPT 2,4-D 10 mg/l (A1) sebelum dan setelah
penggenangan.

Pembahasan
Respon Pertumbuhan Kalus Embriogenik pada Beberapa Varietas Kedelai

terhadap Pemberian Beberapa Zat Pengatur Tumbuh
Berdasarkan pengamatan terhadap persentase terbentuknya kalus terlihat
perlakuan 2,4-D 10 mg/l terhadap varietas Gepak kuning dan Wilis telah mampu
membentuk kalus pada 4 dan 8 MST. Kalus yang terbentuk umumnya berwarna
putih kekuning-kuningan dan bertekstur friable. Berbeda dengan perlakuan NAA
dan IAA pada Tabel 1. terlihat bahwa tidak adanya eksplan kotiledon pada tiap
varietas kedelai yang mampu membentuk kalus baik itu pada 4 dan 8 MST. Hal
ini disebabkan karena ZPT 2,4-D merupakan auksin yang mampu menginduksi
kalus sebagai respon awal dari pertumbuhan eksplan. Hal ini sesuai dengan
pendapat Rusdianto dan Indrianto (2012) yang menyatakan bahwa respon awal
eksplan terhadap 2,4-D adalah pembentukan kalus sebagai wujud dediferensiasi.
Kalus merupakan massa sel yang tidak terorganisir yang awalnya merupakan
jaringan penutup luka, dimana sel-sel yang pada awalnya dorman (quiescent)
terdiferensiasi kembali (dediferensiasi). Dediferensiasi terjadi karena sel-sel
tumbuhan (jaringan), yang secara alamiahnya bersifat autotrof dikondisikan
menjadi heterotrof dengan cara memberikan nutrisi yang cukup kompleks di
dalam medium kultur, sehingga sel-sel membelah secara tidak terkendali
membentuk massa sel yang tidak terorganisir (kalus).
Hasil pengamatan pada peubah warna kalus secara keseluruhan
menunjukkan bahwa warna kalus cenderung berwarna putih kekuning-kuningan,
dan pada sebagian perlakuan juga ditemukan warna hijau pada kalus yang
terbentuk. Warna kalus yang terbentuk menunjukkan bahwa terjadinya aktivitas
pembelahan pada kalus. Hal ini sesuai dengan pendapat Shofiyah dan Purnawanto

(2010) yang menyatakan bahwa warna kalus dapat bermacam-macam tergantung
dari jenis sumber eksplan itu diambil, seperti warna kekuning-kuningan, putih,
hijau, kuning kejingga-jingaan. Hasil yang sama dari penelitian Rusdianto dan
Indrianto (2012) yang menyatakan bahwa kalus yang berwarna putih bening atau
kekuningan merupakan kalus yang dapat mengikuti pola embriogenik.
Pada peubah tekstur kalus Tabel 2. menunjukkan bahwa pada umur 8 MST
kalus yang terbentuk pada perlakuan V2A1 dominan bertekstur kompak bernodul
sedangkan pada perlakuan V3A1 pada umur 8 MST memiliki tekstur dominan ke
friable tipe II bernodul. Hal ini diduga karena medium, konsentrasi ZPT maupun
varietas kedelai mempengaruhi perbedaan struktur kalus yang terbentuk. Hal ini
sesuai dengan pendapat Shofiyah dan Purnawanto (2010) yang menyatakan
bahwa beberapa kalus ada yang mengalami pembentukan lignifikasi sehingga
kalus tersebut mempunyai tekstur yang keras dan kompak. Namun ada kalus yang
tumbuh terpisah-pisah menjadi fragmen-fragmen yang kecil, kalus yang demikian
dikenal dengan kalus remah (friable). Hasil yang sama dari penelitian Capuana
dan Debergh (1997) menunjukkan bahwa kalus yang dihasilkan dari perlakuan
2,4-D mempunyai tekstur remah dan berwarna kekuningan..
Berdasarkan analisa histologi kalus embriogenik pada kedua varietas
kedelai menunjukkan bahwa pemberian ZPT 2,4-D 10 mg/l telah terdapat kalus
embriogenik. Pada kedua kalus tersebut terlihat sel-sel meristem yang sangat rapat
dan sel-sel embriogenik pada bagian tepi memiliki ruang antar sel yang lebih
besar dibandingkan sel meristem. Hal ini sesual dengan hasil penelitian Kasi dan
Sumaryono (2008) yang menyatakan bahwa sel meristematik pada umumnya
terdapat di bagian tengah sedangkan sel embriogenik terdapat di bagian tepi. Sel

embriogenik mempunyai ruang antar sel yang tidak dijumpai pada sel meristem,
sehingga sel-sel meristem lebih rapat. Di antara kedua jaringan tersebut terdapat
sekelompok sel yang mempunyai vakuola yang besar dan bersifat paren-kimatis
(yang nantinya akan membentuk jaringan parenkim dan seperti yang dinyatakan
oleh Vajrabhaya (1990) sel-sel embriogenik mempunyai ciri-ciri inti sel besar,
sitoplasma padat dan dinding sel yang tebal.
Rusdianto dan Indrianto (2012) menyatakan sel yang mempunyai
kemampuan menjadi embriogenik sangat tergantung pada tingkat awal
diferensiasi sel serta kondisi lingkungan yang mendukungnya terutama interaksi
kandungan hormon endogen dengan konsentrasi zat pengatur tumbuh eksogen
yang diberikan sehingga konsentrasi zat pengatur tumbuh di dalam sel berubah.
Perubahan konsentrasi tersebut merupakan triggering factor atau faktor pemicu
yang dapat mempengaruhi ekspresi gen dalam menentukan embriogenesis
somatik.
Respon Bobot Segar Kalus Total, Kandungan Klorofil Total, Konsentrasi

protein, Nilai Aktivitas Enzim SOD dan POD Akibat Perlakuan
Penggenangan
Pada Gambar 3. terlihat bahwa pada kedua perlakuan tersebut
menunjukkan peningkatan bobot segar kalus total setelah dilakukan
penggenangan namun belum menunjukkan perubahan hasil yang signifikan,
dimana rataan bobot segar kalus total tertinggi terdapat pada perlakuan V3A1.
Setiap varietas mempengaruhi produktivitas dari hasil tanaman, dimana untuk
mencapai produktivitas yang tinggi sangat dipengaruhi oleh varietas yang
ditanam. Hal ini sesuai dengan pendapat Irwan (2006) yang menyatakan bahwa
varietas memegang peranan penting dalam perkembangan penanaman kedelai

karena untuk mencapai produktivitas yang tinggi sangat ditentukan oleh potensi
daya hasil dari varietas unggul yang ditanam. Potensi hasil biji di lapangan masih
dipengaruhi oleh interaksi antara faktor genetik varietas dengan pengelolaan
kondisi lingkungan tumbuh. Bila pengelolaan lingkungan tumbuh tidak dilakukan
dengan baik, potensi daya hasil biji yang tinggi dari varietas unggul tersebut tidak
dapat tercapai.
Berdasarkan hasil analisis terhadap kandungan klorofil total diketahui
bahwa perlakuan V2A1 merupakan perlakuan dengan kandungan klorofil total
tertinggi baik pada saat sebelum dan setelah penggenangan dibandingkan dengan
perlakuan V3A1. Pada Gambar 4. terlihat pada kedua perlakuan tersebut
menunjukkan penurunan kandungan klorofil total setelah dilakukan proses
penggenangan. Hal ini disebabkan karena kalus setelah dilakukan penggenangan
mengalami gangguan metabolisme sehingga proses fotosintesis terganggu. Hal ini
sesuai dengan pendapat Bidwell (1979) yang menyatakan bahwa gangguan
terhadap metabolisme akibat anaerobik akan menghambat produksi ATP,
Pengaruh CO 2 juga di dalam kultur jaringan berkaitan erat dengan kebutuhan bagi
proses fotosintesis. Secara umum diduga bahwa CO 2 merupakan syarat mutlak
untuk kultur jaringan tanaman tingkat tinggi dibawah kondisi cahaya.
Pada hasil analisis terhadap konsentrasi protein Gambar 5. menunjukkan
adanya perbedaan pengaruh pemberian ZPT yang diberikan kepada kedua varietas
kedelai dimana perlakuan V2A1 dengan konsentrasi protein tertinggi mengalami
kenaikan konsentrasi protein setelah penggenangan. Berbeda halnya dengan
perlakuan V3A1 terlihat pada perlakuan ini memberikan respon penurunan
konsentrasi protein setelah dilakukan proses penggenangan. Adanya perbedaan

hasil akhir konsentrasi ini diduga bahwa varietas Gepak kuning pada perlakuan
V2A1 menunjukkan sifat tahan terhadap kondisi penggenangan secara in vitro.
Sedangkan pada varietas Wilis pada perlakuan V3A1 mengalami penurunan
konsentrasi, hal tersebut diduga karena varietas ini tidak tahan terhadap kondisi
penggenangan sehingga terjadi proses denitrifikasi. Hal ini sesuai dengan
pendapat Bloom dalam Dennis et al. (2000) yang menyatakan bahwa unsur hara
nitrogen berperan penting dalam pembentukkan klorofil karena nitrogen
merupakan unsur penyusun asam amino yang merupakan prekursor metabolit
sekunder. Proses denitrifikasi adalah proses dimana nitrat diubah menjadi
Nitrogen (N 2 ), nitrogen Oksida (NO), dinitrit oksida (N 2 O), atau nitrogen
dioksida (NO 2 ) yang menguap atau teroksidasi. Penyerapan nitrogen oleh
tumbuhan bisa dalam bentuk NH 4 + dan NO 3 -. Keberadaan karbohidrat yang tinggi
akan meningkatkan penyerapan NH 4 +. karbohidrat yang ada dapat dipakai sebagai
sumber energi dan sumber karbon untuk membentuk metabolit sekunder.
Konsentrasi karbohidrat yang rendah menyebabkan penyerapan NH 4 + menjadi
terhambat sehingga sumber nitrogen yang banyak digunakan adalah NO 3 - .
Berdasarkan Gambar 6. terlihat bahwa rataan nilai aktivitas enzim SOD
tertinggi terdapat pada perlakuan V3A1 baik pada saat sebelum dan setelah
penggenangan. Pada saat sebelum penggenangan rataan nilai aktivitas enzim SOD
tertinggi sebesar 0.62 unit/mg/l sedangkan pada perlakuan V2A1 nilai rataan
sebesar 0.31 unit/mg/l. Dan setelah penggenangan nilainya semakin menurun
pada kedua perlakuan, dengan rataan tertinggi tetap pada perlakuan V3A1 yaitu
sebesar 0.41 unit/mg/l sedangkan perlakuan V2A1 sebesar 0.13 unit/mg/l. Hal ini
disebabkan karena akibat terjadinya penggenangan sel-sel pada kalus mengalami

kerusakan oksidatif akibat adanya kelompok O 2 reaktif seperti: O 2 -, H 2 O 2 dan
OH, sehingga enzim-enzim antioksidan endogen pada sel kalus tersebut terpakai
sehingga terjadi penurunan nilai aktivitas enzim SOD pada kalus tersebut. Hal ini
sesuai dengan pendapat Astuti (2008) yang menyatakan bahwa sel yang normal
mempunyai sejumlah enzim pertahanan yang bereaksi sebagai antioksidan
endogen untuk mendetoksifikasi radikal bebas dan mencegah kerusakan sel.
Kerentanan suatu jaringan terhadap kerusakan oksidatif tergantung pada
mekanisme pertahanan oksidatifnya, antara lain oleh aktivitas dan kandungan
enzim antioksidan endogen. Peningkatan radikal bebas dalam tubuh akan
meningkatkan pemakaian enzim antioksidan intrasel sehingga menyebabkan
penurunan aktivitas enzim SOD sebagai salah satu sistem antioksidan endogen
dalam tubuh.
Jadhav et al. (1996) dalam Astuti (2008) menyatakan bahwa dalam cairan
intraseluler, enzim yang berperan pada proses degradasi senyawa ROS meliputi
enzim superoksida dismutase (SOD) yang mengkatalisis dismutasi radikal anion
superoksida (O 2 -) menjadi H 2 O 2 dan molekul oksigen; enzim katalase
mendegradasi H 2 O 2 menjadi air dan oksigen; serta enzim glutation peroksidase
yang mengkatalisis reduksi H 2 O 2 menjadi H 2 O dengan menggunakan glutation
tereduksi (GSH) dan glutation teroksidasi (GSSG) sebagai kofaktor. Nutrisi
memainkan peranan kunci dalam menjaga pertahanan enzim tubuh terhadap
radikal bebas. Beberapa mineral seperti Mn, Cu, Zn dan Se terlibat dalam
aktivitas katalitik enzim antioksidan tersebut dan diperlukan untuk mengendalikan
radikal bebas yang terbentuk pada tahap awal.

Pada hasil analisis terhadap nilai aktivitas enzim POD, Gambar 7. terlihat
bahwa rataan tertinggi terdapat pada perlakuan V3A1 baik pada saat sebelum dan
setelah penggenangan. Pada saat sebelum penggenangan rataan nilai aktivitas
enzim POD tertinggi sebesar 25.42 unit/mg/l sedangkan pada perlakuan V2A1
sebesar 11.20 unit/mg/l. Dan setelah penggenangan nilainya semakin menurun
pada kedua perlakuan, dengan rataan tertinggi tetap pada perlakuan V3A1 yaitu
sebesar 1.27 unit/mg/l sedangkan perlakuan V2A1 sebesar 0.13 unit/mg/l.
Penurunan nilai aktivitas enzim POD ini diduga bahwa kedua varietas pada
perlakuan ini belum dapat menunjukkan varietas yang tahan terhadap kondisi
penggenangan. Hal ini sesuai dengan pendapat Agrios (2005) yang menyatakan
bahwa pada tanaman yang tahan terjadi peningkatan aktivitas peroksidase,
sedangkan pada tanaman yang peka tidak ada perubahan atau bahkan turun
dibandingkan dengan keadaan sehat. Selanjutnya Astuti (2008) menyatakan
bahwa pada keadaan patologik diantaranya akibat terbentuknya radikal bebas
dalam jumlah berlebihan, enzim-enzim yang berfungsi sebagai antioksidan
endogen dapat menurun aktivitasnya. Oleh karena itu, jika terjadi peningkatan
radikal bebas dalam tubuh, dibutuhkan antioksidan eksogen dalam jumlah yang
lebih banyak untuk mengeliminir dan menetralisir efek radikal bebas.

KESIMPULAN DAN SARAN
Kesimpulan
1. Berdasarkan hasil penelitian pada varietas Gepak kuning dan Wilis merupakan
varietas yang responsif terhadap pertumbuhan kalus embriogenik atas
pemberian media, sedangkan varietas Baluran tidak menunjukkan aktivitas
pertumbuhan.
2. Hasil pengamatan terhadap pertumbuhan kalus embriogenik, pemberian
ZPT 2,4-D 10 mg/l terhadap eksplan kotiledon kedelai memberikan hasil
terbaik dibandingkan dengan ZPT NAA dan IAA 10 mg/l.
3. Pada kondisi hipoksia interaksi varietas Gepak kuning dengan ZPT 2,4-D
memberikan hasil terbaik terhadap kandungan klorofil total dan konsentrasi
protein sedangkan interaksi varietas Wilis dengan ZPT 2,4-D memiliki hasil
terbaik pada bobot segar kalus total, nilai aktivitas enzim SOD dan POD.
Saran
Perlunya dilakukan penelitian lebih lanjut terhadap pertumbuhan dan
perkembangan kalus sampai terbentuk kalus embriogenik yang sempurna pada
setiap perlakuan, sehingga dapat diperoleh kalus embriogenik yang diharapkan
sebagai bahan identifikasi ketahanan terhadap penggenangan.

DAFTAR PUSTAKA
Agrios, G. N. 2005. Plant Pathology. Ed ke-5. Academic Press, San Diego.
Alscher, R.G., N. Erturk, and L.S. Heath, 2002. Role of superoxide dismutases
(SODs) in controlling oxidative stress in plants. J. Exp. Bot. 53:1331-
1341.
AOAC. 1995. Official Methods of analysis of the association of official analytical

chemist washington ; AOAC.
Arifin, Z. 2013. Deskripsi sifat agronomik berdasarkan seleksi genotipe

tanaman
kedelai dengan metode multivariat. Universitas Islam Madura, Pamekasan.
Armaniar. 2002. Induksi kalus dan embriogenesis somatik jati

(Tectona grandis L.F) pada media MS modifikasi. Tesis. Universitas
Sumatera Utara, Medan.
Arnon, D.I. 1949. Copper enzymes in isolated chloroplasts, polyphenoxidase in

beta vulgaris. Plant physiology 24 (1): 1-15.
Astuti, S. 2008. Isoflavon kedelai dan potensinya sebagai penangkap radikal

bebas. Fakultas pertanian Universitas Lampung. J.Teknologi Industri dan
Hasil Pertanian. 13(2):126-136.
Bradford, M.M. 1976. A rapid and sensitive method for the quantitation of
microorganisms quantities of protein in utilizing the principle of
protein‐dye binding. Anal. Biochem 72:248‐254.
Bidwell, R. G. 1979. Plant Physiology 2nd edition. New York Macmillan

Publishing.
Capuana M. dan P. C Debergh. 1997. Improvement of the maturation and

germination of horse chesnut somatic embryos. Plant Cell Tiss. Org.Cult.
48:23-29.
Cobley, L.S. 1976. An introduction to the botany of tropical crops. Longman

Group (FE) Ltd, London.
Constabel, F. 1984. Callus Cultur Induction and Maintennance in Vasil, I.K (Eds)
Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, Academic Press, Inc.
Orlando, Florida. 1: 27-42.
Damanik, R.I., M.R.Ismail, Z.Shamsuddin, S.Othman, A.M.Zain and M.Maziah.

2012. Response of antioxidant systems in oxygen derived suspension
cultures of rice (Oryza sativa L.). Plant Growth Regul 67:83-92.

Dennis, ES, R. Dolferus, M. Ellis, M. Rahman, Y. Wu, F.U. Hoeren, A. Grover,
K.P. Ismond, A.G. Good, and W.J. Peacock. 2000. Molecular strategies
for improving waterlogging tolerance in plants. J. Exp. Bot. 51(342):89-97
Fauziyyah, D., T.Hardiyati dan Kamsinah. 2012. Upaya memacu pembentukan

kalus eksplan embrio kedelai (Glycine max (L.) Merill) dengan pemberian
kombinasi 2,4-D dan sukrosa seacara kultur in vitro. Fakultas Biologi
Universitas Jenderal Soedirman , Purwokerto. Jurnal Pembangunan
Pedesaan 12(1): 30-37.
Gunawan, L.W. 1987. Teknik kultur jaringan tumbuhan. IPB-Press, Bogor.
Haloho, A. N. 2004. Induksi kalus dan embriogenesis kemiri

(Aleurites moluccana L. Wild) dengan kombinasi auksin dan sitokinin.
Tesis. Universitas Sumatera Utara, Medan.
Hapsari, R. T. dan M. M. Adie. 2010. Peluang perakitan dan pengembangan

kedelai toleran genangan. Balai Penelitian dan Pengembangan Tanaman
Kacang-kacangan dan Umbi-umbian. Bogor. Jurnal Litbang Pertanian,
29(2).
Harjanti, R. A. 2012. Sistem pengairan Intermittern pada System Rice of

Intensification (SRI) terhadap pertumbuhan dan hasil padi
(Oryza sativa L.) Makalah Seminar Umum (PNB 4080) Fakultas
Pertanian Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta.
Hutami, S. 2009. Penggunaan suspensi sel dalam kultur in vitro. Balai Besar
Penelitian dan Pengembangan Bioteknologi dan Sumberdaya Genetik
Pertanian, Bogor. Jurnal AgroBiogen 5(2): 84-92.
Imelda, M., Estiati, A. and Hartati, N.S. 2001. Induction of mutation through
gamma irradition in three cultivars of banana. J. Annalaes Bogorienses
7(2): 75-82.
Indradewa, D., S.Sastrowinoto, S,Notoha disuwarno, dan H. Prabowo. 2004.

metabolisme nitrogen pada tanaman kedelai yang mendapat genangan
dalam parit. Universitas Gadjah Mada, Yogyakarta. Ilmu Pertanian.
11(2):68-75.
Irwan, A.W. 2006. Budidaya tanaman Kedelai (Glycine max (L.) Merill).
Fakultas Pertanian Universitas Padjadjaran, Jatinangor.
Ivanovic, Z. 2009. Hypoxia or in situ normoxia: The Stem Cell Paradigm. J. Cell
Physiol. 5:219-271.
Kemeterian Pertanian. 2015. Pedoman teknis pengelolaan produksi kedelai tahun

2015. Direktorat Budidaya Aneka Kacang dan Umbi. Direktorat Jenderal
Tanaman Pangan, Kementerian Pertanian.
Kohen, R., and A.Nyska. 2002. Oxidation of biological system: oxidative stress
phenomen, antioxidants, redox reactions, and methods for their
quantification. Toxicology Pathology. 30(6):620-650.
Kasi, D. dan Sumaryono. 2008. Perkembangan kalus embriogenik sagu

(Metroxylon sagu Rottb.) pada tiga sistem kultur in vitro. Balai Penelitian
Bioteknologi Perkebunan Indonesia, Bogor.
Kumianjani, A. 2015. Pengaruh pemberian ZPT 2,4 D terhadap pertumbuhan dan

metabolit kalus kedelai pada proses hypoxyda. Skripsi. Universitas
Sumatera Utara, Medan.
Lestari, E. G. 2011. Peranan Zat Pengatur Tumbuh dalam Perbanyakan Tanaman

melalui Kultur Jaringan. Jurnal AgroBiogen. 7(1):63-68.
Liptan, 2000. www.pustaka.litbang.deptan.go.id/agritek.com. Diunduh Pada

Tanggal 21 Februari 2016.
Mapegau. 2006. Pengaruh Cekaman Air terhadap Pertumbuhan dan Hasil

Tanaman Kedelai (Glycine max L. Merr). Fakultas Pertanian Universitas
Jambi, Jambi. Jurnal Ilmiah Pertanian Kultura. 41(1):43-51.
Mirsadiq, L. 2013. Teknik kultur jaringan.Fakultas Pertanian Universitas Sebelas

Maret, Surakarta.
Murach, E. and E. Erlykina. 2012. The Principles of protective effects formation

using different hypoxic preconditioning modes. Biomedical Investigations.
Ritawati, L. 2001. Polimorfisme Isoenzim beberapa tetua dan Hasil

persilangan
Karet serta hubungan dengan sifat ketahanan tanaman lada terhadap
infeksi Phytoptora palmivora. Jurnal Berkala Penelitian Pascasarjana
UGM 467-471.
Rusdianto dan A. Indrianto. 2012. Induksi kalus embriogenik pada wortel

(Daucus carota L.) menggunakan 2,4-dichlorophenoxyacetic acid
(2,4-D).Fakultas Biologi Universitas Gadjah Mada Yogyakarta. Jurnal
Bionature.13(2):136-140.
Shofiyah, A. dan A. M. Purnawanto. 2010. Pengaruh kombinasi 2,4-D dan Benzil

Amino Purin (BAP) terhadap pembentukan kalus pada eksplan daun
Kencur (Kaemferia galangi L.) secara in vitro. Laporan Penelitian Dosen
Muda. Fakultas Pertanian. Universitas Muhammadiyah Purwokerto,
Purwokerto.

Standart Operating Procedures. 1994. Plant peroxidase activity determination.
Serras, US.
Steel, R.G.D dan J.H. Torrie. 1995. Prinsip Dan Prosedur Statistika. Penterjemah
Bambang Sumantri. Gramedia Pustaka, Jakarta.
Steenis, C. G. G. J. V. 2005. Flora. PT Pradnya Paramita, Jakarta.
Suriadikarta, D.A. dan M.T. Sutriadi. 2007. Jenis-jenis lahan berpotensi untuk
pengembangan pertanian di lahan rawa. Jurnal Penelitian dan
Pengembangan Pertanian 26(3): 115−122.
Suwignyo, R.A. 2007. Ketahanan tanaman padi terhadap kondisi terendam:

pemahaman terhadap karakter fisiologis untuk mendapatkan kultivar padi
yang toleran di lahan rawa lebak. Kongres Ilmu Pengetahuan Wilayah
Indonesia Bagian Barat.Fakultas Pertanian Universitas Sriwijaya,
Palembang.
Usaman, A. A. 2014. Fluktuasi populasi dan tingkat kerusakan wereng daun

empoasa terminalis distant (Homoptera: Cicadelliadae) pada 12 varietas
kedelai (Glycine max). Skripsi. Universitas Hasanuddin, Makassar.
Vajrabhaya, M. 1990. Somatic embryogenesis, training course on advanced

techniques of tissue culture fortree improvement, Bogor.
Yelnititis dan T.E.Komar. 2010. Upaya induksi kalus embriogenik dari potongan
daun ramin. Pusat Penelitian dan Pengembangan Hutan dan Konservasi
Alam. Kementrian Kehutanan, Bogor.

Lampiran 1. Bagan Penelitian
Ulangan I Ulangan II Ulangan III
A1V1 A1V1 A1V1
A1V2 A1V2 A1V2
A1V3 A1V3 A1V3
A2V1 A2V1 A2V1
A2V2 A2V2 A2V2
A2V3 A2V3 A2V3
A3V1 A3V1 A3V1
A3V2 A3V2 A3V2
A3V3 A3V3 A3V3

Lampiran 2. Kegiatan Penelitian
Jenis Kegiatan Minggu Ke-

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
Tahap 1: Pembentukan Kalus
Embriogenik
Sterilisasi Alat X
Pembuatan Media X
Persiapan Ruang Kultur X
Sterilisasi Eksplan X
Penanaman X
Pemeliharaan X X X X X X X X
Peubah Amatan
- Persentase Eksplan X
Membentuk Kalus
- Warna Kalus X
- Tekstur Kalus X
- Analisis Histologi Kalus X

Tahap 2: Identifikasi Kalus
Embriogenik Toleran Genangan
- Bobot Segar Kalus Total X

- Aplikasi Penggenangan X
terhadap Kalus
- Bobot Segar Kalus Total X

- Pengukuran Konsentrasi X X X
Protein
- Pengukuran Kandungan
Klorofil
- Pengukuran Aktifitas Enzim X

SOD
- Pengukuran Aktifitas Enzim X

POD

Lampiran 3. Deskripsi Varietas Kedelai
Varietas Baluran
Dilepas tahun : 15 April 2002

SK Mentan : 275/Kpts/TP.240/4/2002
Nomor galur : GC 88025-3-2
Asal : Persilangan AVRDC
Daya hasil : 2,5–3,5 t/ha
Warna hipokotil : Ungu
Warna epikotil : Hijau
Warna daun : Hijau
Warna bulu : Coklat
Warna bunga : Ungu
Warna kulit biji : Kuning
Warna polong masak : Coklat
Warna hilum : Coklat muda
Bentuk biji : Bulat telur
Tipe tumbuh : Determinit
Umur berbunga : 33 hari
Umur polong masak : 80 hari
Tinggi tanaman : 60–80 cm
Bobot 100 biji : 15–17 g
Kandungan protein : 38–40%
Kandungan lemak : 20–22%
Ketahanan thd hama :-
Ketahanan thd penyakit :-
Pemulia : Suyono, T. Adisarwanto, dan I. Hartana

Varietas Gepak Kuning
Dilepas Tahun : 2008

Nama Calon Varietas : Gepak Kuning
Asal : Seleksi varietas lokal Gepak Kuning
Tipe Pertumbuhan : Determinite
Warna epikotil : Hijau
Warna daun : Hijau
Warna bulu batang : Coklat
Warna bunga : Ungu
Warna kulit biji : Kuning muda-kehijauan
Warna polong tua : Coklat
Warna hilum biji : Coklat
Bentuk daun : Lonjong
Percabangan : Agak tegak
Umur berbunga : 28 hari
Umur polong masak : 73 hari
Tinggi tanaman : 55 cm
Bobot 100 biji : 8,25 gram
Rata-rata hasil : 2,22 ton/ha
Potensi hasil : 2,86 ton/ha
Kandungan protein : 35,38%
Kandungan lemak : 15,10%
Ketahanan terhadap hama dan penyakit :
- Hama : - Agak tahan terhadap ulat grayak, Aphis sp.,
penggulung daun, Phaedonia sp.
- Penyakit :-
Daerah sebaran/adaptasi : Beradaptasi baik di lahan sawah dan tegal, baik
pada musim hujan maupun kemarau
Sifat-sifat lain : - Kadar rendemen tahu tinggi
Pemulia : M. Muchlish Adie
Peneliti : Soenardi, Mohammad Maksum, Soepriyanto, Yudi
Nasrul, Suparman Yudi Hartono, Soni Sapta
Mawardi, Susanto, Paulus Iwan Sutadi, Noor
Sasongko, Romodhon.
Pengusul : Pemerintah daerah Kabupaten Ponorogo, Jawa
Timur

Varietas Wilis
Dilepas tahun : 21 Juli 1983

SK Mentan : TP240/519/Kpts/7/1983
Nomor induk : B 3034
Asal : Hasil seleksi keturunan persilangan Orba x No.
1682
Hasil rata-rata : 1,6 t/ha
Warna batang : Hijau
Warna daun : Hijau - hijau tua
Warna bulu : Coklat tua
Warna bunga : Ungu
Warna kulit biji : Kuning
Warna polong tua : Coklat tua
Warna hylum : Coklat tua
Tipe tumbuh : Determinit
Umur berbunga : ± 39 hari
Umur matang : 85–90 hari
Tinggi tanaman : ± 50 cm
Bentuk biji : oval, agak pipih
Bobot 100 biji : ± 10 g
Kandungan protein : 37,0%
Kandungan minyak : 18,0%
Kerebahan : Tahan rebah
Ketahanan thd penyakit : Agak tahan karat daun dan virus
Benih penjenis : Dipertahankan di Balittan Bogor dan Balittan
Malang
Pemulia : Sumarno, Darman M Arsyad., Rodiah, dan Ono
Sutrisno
Sumber : Pusat Penelitian dan Pengembangan Tanaman Pangan

Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian

Lampiran 4. Komposisi Medium Murashige dan Skoog (MS)
Stok Senyawa Pemakaian per liter media

(mg/l)
A Makronutrien
NH4NO3 1.650,000
KNO3 1.900,000
CaCl3.2HO 400,000
MgSO4.7H2O 370,000
KH2PO4 170,000
B Mikronutrien
MnSO4.4H2O 22,300
ZnSO4.7H2O 8,600
H3BO3 6,200 0,830
KI 0,025
CuSO4. 5H2O 0,025
CoCl2 . 6H2O 0,250
Na2MoO4.2H2O 440,000
C Iron
FeSO4.7H2O 27,000
NaEDTA 37,300
D Vitamin
Myo-inositol 0,100
Nicotinic Acid 0,005
Prydoxine HCl 0,005
Thiamine HCl 0,100
Glycine 0,002
Sukrosa 30.000.000
Agar 7.000,000

Lampiran 5. Prosedur Proses Penggenangan
MS 0 Bunsen, aquades, alkohol dan dissecting Kalus
set

Proses Penggenangan
Sebelum Penggenangan Penggenangan 2 Hari setelah Penggenangan

Lampiran 6. Keadaan Visual Kalus
Perlakuan MST Saat Penggenangan Setelah Penggenangan

4 8
V1A1 - -
Pertumbuhan kalus terhenti Kalus tidak tumbuh

V1A2 - -
Tidak terdapat pertumbuhan Tidak terdapat

eksplan pertumbuhan eksplan
V1A3 - -

eksplan pertumbuhan eksplan

V2A1
Kompak, putih kekuningan, Kompak bernodul, kuning Kalus menjadi lebih

globular kehijauan, globular mudah pecah dan warna
menjadi lebih gelap
V2A2 - -

kalus pertumbuhan kalus
V2A3 - -

V3A1
Friable tipe I, putih Friable tipe II, putih Kalus menjadi lebih

kekuningan, globular kekuningan, globular mudah pecah dan warna
menjadi lebih gelap
V3A2 - -

V3A3 - -


Lampiran 7. Data Pengamatan Warna Kalus
(4 MST)
Perlakuan Ulangan
1 2 3
V1A1 0 0 0
V1A2 0 0 0
V1A3 0 0 0
V2A1 1 1 2
V2A2 0 0 0
V2A3 0 0 0
V3A1 2 2 2
V3A2 0 0 0
V3A3 0 0 0
(8 MST)
Perlakuan Ulangan
1 2 3
V1A1 0 0 0
V1A2 0 0 0
V1A3 0 0 0
V2A1 3 1 3
V2A2 0 0 0
V2A3 0 0 0
V3A1 2 2 1
V3A2 0 0 0
V3A3 0 0 0
Ket: Eksplan mati atau tidak terbentuk kalus =0

Putih =1
Kekuning-kuningan =2
Hijau kekuning-kuningan =3
Kuning =4
Coklat =5
Hitam =6

Lampiran 8. Data Pengamatan Tekstur Kalus
(4 MST)
Perlakuan Ulangan
1 2 3
V1A1 0 0 0
V1A2 0 0 0
V1A3 0 0 0
V2A1 2 1 2
V2A2 0 0 0
V2A3 0 0 0
V3A1 1 2 1
V3A2 0 0 0
V3A3 0 0 0
(8 MST)
Perlakuan Ulangan
1 2 3
V1A1 0 0 0
V1A2 0 0 0
V1A3 0 0 0
V2A1 2 1 2
V2A2 0 0 0
V2A3 0 0 0
V3A1 3 2 3
V3A2 0 0 0
V3A3 0 0 0
Ket : 0 = Eksplan mati atau tidak terbentuk kalus

1 = Terbentuk kalus friable tipe I (kalus yang teksturnya
seperti kapas)
2 = Terbentuk kalus kompak
3 = Terbentuk kalus friable tipe II yaitu kalus yang teksturnya
mudah pecah dan berbutir seperti pasir

Lampiran 9. Data Pengamatan Tipe Perkembangan Kalus
(4 MST)
Perlakuan Ulangan
1 2 3
V1A1 0 0 0
V1A2 0 0 0
V1A3 0 0 0
V2A1 1 1 1
V2A2 0 0 0
V2A3 0 0 0
V3A1 1 1 1
V3A2 0 0 0
V3A3 0 0 0
(8 MST)
Perlakuan Ulangan
1 2 3
V1A1 0 0 0
V1A2 0 0 0
V1A3 0 0 0
V2A1 1 1 1
V2A2 0 0 0
V2A3 0 0 0
V3A1 1 1 1
V3A2 0 0 0
V3A3 0 0 0
Ket: 0 = Eksplan mati atau tidak terbentuk kalus

1 = Globular
2 = Hati
3 = Torpedo
4 = Planlet Muda

Lampiran 10. Data Pengamatan Persentase Bobot Segar Kalus Total (g)
(Sebelum Penggenangan)
Ulangan
Perlakuan Total Rataan
I II III
V1A1 - - - - -
V1A2 - - - - -
V1A3 - - - - -
V2A1 4.70 4.90 4.80 14.40 4.80
V2A2 - - - - -
V2A3 - - - - -
V3A1 6.00 7.40 6.70 20.10 6.70
V3A2 - - - - -
V3A3 - - - - -
Total 10.70 12.30 11.50 34.50
Rataan 5.35 6.15 5.75 5.75
(Setelah Penggenangan)
Ulangan
I II III
V1A1 - - - - -
V1A2 - - - - -
V1A3 - - - - -
V2A1 5.10 5.20 5.10 15.40 5.13
V2A2 - - - - -
V2A3 - - - - -
V3A1 6.50 7.90 7.30 21.70 7.23
V3A2 - - - - -
V3A3 - - - - -
Total 11.60 13.10 12.40 37.10
Rataan 1.29 1.46 1.38 6.18

Lampiran 11. Data Pengamatan Kandungan Klorofil Total (mg/l)
Ulangan
I II III
V1A1 - - - - -
V1A2 - - - - -
V1A3 - - - - -
V2A1 5.24 3.31 3.82 12.37 4.12
V2A2 - - - - -
V2A3 - - - - -
V3A1 2.05 1.75 1.68 5.48 1.83
V3A2 - - - - -
V3A3 - - - - -
Total 7.29 5.06 5.50 17.85
Rataan 3.64 2.53 2.75 2.98
Ulangan
I II III
V1A1 - - - - -
V1A2 - - - - -
V1A3 - - - - -
V2A1 3.03 3.54 3.43 10.00 3.33
V2A2 - - - - -
V2A3 - - - - -
V3A1 1.58 2.29 0.94 4.81 1.60
V3A2 - - - - -
V3A3 - - - - -
Total 4.61 5.83 4.36 14.80
Rataan 2.31 2.91 2.18 2.47

Lampiran 12. Data Pengamatan Konsentrasi Protein (%)
Ulangan
I II III
V1A1 - - - - -
V1A2 - - - - -
V1A3 - - - - -
V2A1 11.96 12.40 11.51 35.87 11.96
V2A2 - - - - -
V2A3 - - - - -
V3A1 12.35 11.04 10.93 34.32 11.44
V3A2 - - - - -
V3A3 - - - - -
Total 24.31 23.45 22.44 70.19
Rataan 12.15 11.72 11.22 11.70
Ulangan
I II III
V1A1 - - - - -
V1A2 - - - - -
V1A3 - - - - -
V2A1 12.44 11.64 12.59 36.68 12.23
V2A2 - - - - -
V2A3 - - - - -
V3A1 11.23 11.04 11.10 33.38 11.13
V3A2 - - - - -
V3A3 - - - - -
Total 23.68 22.69 23.69 70.06
Rataan 11.84 11.34 11.85 11.68

Lampiran 13. Data Pengamatan Nilai Aktivitas Enzim Super Oksida
Dismutase (SOD) (Unit/mg/l)
Ulangan
I II III
V1A1 - - - - -
V1A2 - - - - -
V1A3 - - - - -
V2A1 0.38 0.29 0.28 0.94 0.31
V2A2 - - - - -
V2A3 - - - - -
V3A1 0.76 0.69 0.41 1.86 0.62
V3A2 - - - - -
V3A3 - - - - -
Total 1.14 0.98 0.69 2.80
Rataan 0.57 0.49 0.35 0.47
Ulangan
I II III
V1A1 - - - - -
V1A2 - - - - -
V1A3 - - - - -
V2A1 0.12 0.13 0.14 0.39 0.13
V2A2 - - - - -
V2A3 - - - - -
V3A1 0.41 0.34 0.46 1.22 0.41
V3A2 - - - - -
V3A3 - - - - -
Total 0.53 0.47 0.60 1.61
Rataan 0.27 0.24 0.30 0.27

Lampiran 14. Data Pengamatan Nilai Aktivitas Enzim Peroksida (POD)
(Unit/mg/l)
Ulangan
I II III
V1A1 - - - - -
V1A2 - - - - -
V1A3 - - - - -
V2A1 6.47 11.62 9.09 27.18 9.06
V2A2 - - - - -
V2A3 - - - - -
V3A1 7.40 36.17 32.68 76.25 25.42
V3A2 - - - - -
V3A3 - - - - -
Total 13.87 47.79 41.77 103.43
Rataan 6.93 23.90 20.89 17.24
Ulangan
I II III
V1A1 - - - - -
V1A2 - - - - -
V1A3 - - - - -
V2A1 1.47 1.30 1.03 3.80 1.27
V2A2 - - - - -
V2A3 - - - - -
V3A1 16.73 9.03 7.85 33.61 11.20
V3A2 - - - - -
V3A3 - - - - -
Total 18.20 10.34 8.87 37.41
Rataan 9.10 5.17 4.44 6.23

Lampiran 15. Pembuatan Bahan Larutan Superokside Dismutase (SOD)
1. Buffer Phospate (100mM) : ditimbang KH2PO4 sebanyak 1,3609gr
dicampurkan aquadest sebanyak 80mL(sebagai larutan A) dan K2HPO4
sebanyak 1,7418gr dicampurkan dengan aquadest sebanyak 80mL (sebagai
larutan B), lalu keduanya A +B dituang secara bersamaan dan diukur pH
sampai dengan pH 7,5 dan selanjutnya ditera dengan aquadest hingga volume
200mL dilabu ukur
Pengenceran buffer phospat 50mM
V1n1 = V2n2
X . 100 = 50 . 50
X = 250/100
X = 2,5 mL
2. Buffer Ekstrak : diambil buffer phospat 50 mM sebanyak 100mL dan
dicampurkan dengan EDTA 1 mM sebanyak 20 mL dan ditera sebanyak
200mL.
3. NBT 2,25 mM (2250µm) : ditimbang sebanyak 36,792 mg lalu dilarutkan
dengan aquadest sebanyak 20 mL dan divortex.
Pengenceran NBT 75mM
V1n1 = V2n2
X . 2,25 = 50 . 75
X = 3750/2250
X = 1,666 mL
4. Methionin 390mM : ditimbang methionin sebanyak 1,163gr dan dilarutkan
dengan aquadest steril sebanyak 20mL dan divortex.

Pengenceran Methionin 13mM
V1n1 = V2n2
X . 390 = 50 . 13
X = 650/390
X = 1,666 mL
5. EDTA 10 mM : ditimbang sebanyak 74,446 mg = 0,074446 gr ditambahkan
aquadest sebanyak 100 mL dan divortex.
Pengenceran EDTA 0,1 mM
V1n1 = V2n2
X . 10 = 50 . 0,1
X = 5/10
X = 0,5 mL
6. Riboflavin 180mM : ditimbang sebanyak 0,001356 gr dan dilarutkan dengan
aquadet sebanyak 20 mL dan divortex.
Pengenceran Riboflavin 2 mM
V1n1 = V2n2
X . 180 = 50 . 2
X = 100/180
X = 0,555 mL

Lampiran 16. Pembuatan Bahan Larutan Peroksidase (POD)
1. Persiapan larutan
a. CaCl2 0.5 M
Ditimbang CaCl2 sebanyak 5.55 g dan dilarutkan dengan 100 ml akuades.
b. Larutan A
- Ditimbang fenol sebanyak 1.458 g
- Ditimbang 4-aminoantipirin sebanyak 0.045 g
- Kemudian dilarutkan ke dalam akuades 90 ml
c. Buffer MES
= Ditimbang MES sebanyak 0.293 g dan dilarutkan 75 ml akuades
- Dibagi tiga bagian masing-masing 25 ml
- Dioptimalkan pada pH 5.5, 6.0, 6.5, dengan penambahan NaOH 1 M
- Diuji aktivitas peroksidase dengan spektrofotometer
d. Buffer HEPES
- Ditimbang HEPES 0.357 g ke dalam akuades 75 ml
- Dibagi tiga bagian masing-masing 25 ml
- Dioptimalkan pada pH 7.0, 7.5, 8.0 dengan menggunakan NaOH 1 M
- Diuji aktivitas peroksidasenya
e. Larutan B
- Disiapkan larutan H202 30% sebanyak 1.5 ml.
- Uji aktivitas peroksidase dari HEPES dan MES, didapatkan hasil yang tertinggi
adalah laruta buffer MES pH 5.5 dengan aktivitas peroksidase 0.79
- Ditimbang MES 0.375 g dan dilarutkan dalam 75 ml akuades
- Dioptimalkan pada pH 5.5

- Dicampurkan dengan larutan H2O2 dan buffer MES dengan konsentrasi akhir
0.01 M
2. Tahap analisis
a. Dimasukkan CaCl2 1 ml kedalam tube
b. Ditimbang kalus sebanyak 0.1 g
c. Digerus dengan N2 cair dan ditambahkan PVP 0.1 g sampai menjadi serbuk
d. Dimasukkan ke dalam tube berisi CaCl2. Disimpan dalam kondisi dingin.
Disentrifuse 10.000 rpm, 10 menit, 4oC
e. Disiapkan tabung reaksi
f. Dimasukkan larutan A 1.4 ml dan larutan B 1.5 ml
g. Dimasukkan sampel 200 µl
h. Dibaca dengan spektrofotometer UV/VIS pada panjang gelombang 510 nm
pada 0 menit dan 2 menit

Lampiran 17. Pembuatan Reagen Bradford
Untuk 50 sampel (2 Balnko dan 48 sampel).
Etanol = 5 mL
Phosporic acid = 10 mL
Comassine Blue = 0,01 gr
Semua bahan dicampurkan dalam wadah yang sudah dilapisi karbon atau plastik
hitam atau yang lainnya agar menghindari dari pancaran sinar matahari yang
masuk kemudian disaring lalu ditambahkan dengan aquadest sebanyak 75 mL.
Cara kerja :
1. Bahan (kalus) diambil 100µl dan dimasukkan ke tube berisi buffer ekstrak
(ekstrak enzim)
2. Disentrifuge selama 15 menit kecepatan 1000 rpm pada suhu 40C
4. Dimasukkan reagen Bradford sebanyak 2,5 mL kedalam setiap tabung reaksi
5. Dimasukkan pada ruang gelap pada suhu kamar
6. Dimasukkan enzim ekstrak sebanyak 100µl kedalam tabung reaksi
7. Divorteks ditunggu 10 menit lalu dibaca spektrofotometer absorbansi λ595 nm.


Skripsi Kedelai

Uploaded by

Document Information

Original Description:

Original Title

Copyright

Available Formats

Share this document

Share or Embed Document

Sharing Options

Did you find this document useful?

Is this content inappropriate?

Copyright:

Available Formats

Skripsi Kedelai

Uploaded by

Copyright:

Available Formats

POTENSI TERBENTUKNYA KALUS EMBRIOGENIK PADA BEBERAPA VARIETAS

KEDELAI (Glycine max (L.) Merill) TOLERAN TERHADAP KONDISI

SOPA PUTRI TANJUNG

PROGRAM STUDI AGROEKOTEKNOLOGI

Universitas Sumatera Utara

SOPA PUTRI TANJUNG

Skripsi Sebagai Salah Satu Syarat Untuk Mendapatkan Gelar Sarjana

PROGRAM STUDI AGROEKOTEKNOLOGI

Universitas Sumatera Utara

(Prof. Dr. Ir. T. Sabrina, M. Sc.)

Universitas Sumatera Utara

Sopa Putri Tanjung, 2016: Potential formation in some variety embryogenic

Keywords: Identification of Soybean embryogenic callus, PGR 2,4 D, IAA, NAA,

Universitas Sumatera Utara

Sopa Putri Tanjung, 2016: POTENSI TERBENTUKNYA KALUS

Kata kunci : Identifikasi Kalus Embriogenik Kedelai, ZPT 2,4 D, IAA,

Universitas Sumatera Utara

dari skripsi adalah “ Potensi Terbentuknya Kalus Embriogenik pada

Beberapa Varietas Kedelai (Glycine max (L.) Merill) ) Toleran terhadap

melakukan penelitian di Program Studi Agroekoteknologi Fakultas Pertanian

Universitas Sumatera Utara, Medan.

Pada kesempatan ini penulis mengucapkan terima kasih

selaku anggota komisi pembimbing yang telah membimbing dan membantu

dalam menyelesaikan skripsi ini.

membangun demi kesempurnaan skripsi ini. Akhir kata penulis mengucapkan

Medan, Desember 2016

Universitas Sumatera Utara

RIWAYAT HIDUP ........................................................................................ iii

KATA PENGANTAR ................................................................................... iv

DAFTAR ISI ................................................................................................. v

DAFTAR TABEL .......................................................................................... vi

DAFTAR GAMBAR ...................................................................................... vii

DAFTAR LAMPIRAN .................................................................................. viii

BAHAN DAN METODE PENELITIAN

Universitas Sumatera Utara

HASIL DAN PEMBAHASAN

KESIMPULAN DAN SARAN

DAFTAR PUSTAKA ..................................................................................... 51

Universitas Sumatera Utara

1. Tabel 1 : Persentase Esplan Membentuk Kalus (%)……………………….. 30

Universitas Sumatera Utara

1. Gambar 1. Aplikasi penggenangan kalus dengan MS0 cair……………... 23

2. Gambar 2. Penampang melintang kalus embriogenik friable

3. Gambar 3. Rataan bobot segar kalus total (g) dari genotipe

4. Gambar 4. Rataan kandungan klorofil total (mg/l) dari

5. Gambar 5. Rataan konsentrasi protein ( % ) dari genotipe

6. Gambar 6. Rataan Nilai Aktivitas Enzim SOD (unit/mg/l) dari

7. Gambar 7. Rataan Nilai Aktivitas Enzim POD (unit/mg/l) dari

Universitas Sumatera Utara

1. Lampiran 1. Bagan Penelitian ...................................................................... 55

2. Lampiran 2. Kegiatan Penelitian .................................................................. 56

3. Lampiran 3. Deskripsi Varietas Kedelai ...................................................... 58

4. Lampiran 4. Komposisi Medium Murashige dan Skoog (MS) .................... 61

5. Lampiran 5. Prosedur Proses Penggenangan ............................................... 62

6. Lampiran 6. Keadaan visual Kalus .............................................................. 64

7. Lampiran 7. Data Pengamatan Warna Kalus ............................................... 67

8. Lampiran 8. Data Pengamatan Tekstur Kalus.............................................. 68

9. Lampiran 9. Data Pengamatan Tipe Perkembangan Kalus .......................... 69

12. Lampiran 12. Data Pengamatan Konsentrasi Protein (%) ......................... 72

13. Lampiran 13. Data Pengamatan Nilai Aktivitas Enzim Super

14. Lampiran 14. Data Pengamatan Nilai Aktivitas Enzim Peroksidase

16. Lampiran 16. Pembuatan Larutan Peroksidase (POD) .............................. 77