이론

- introduction

차와 커피는 고대부터 알려진 인기 음료이다. 둘 다 카페인, 중추신경계, 호흡기와 심장

자극제가 풍부하다. 카페인은 또한 이뇨제이며 신경질, 불면증, 심장 박동을 일으킬 수 있다.
이번 실험에서는 차에 있는 카페인을 분리 및 추출하는 과정을 통해 유기화합물, 그
중에서도 알칼로이드를 분리하는 방법을 이해한다.

- 알칼로이드

알칼로이드는 천연에 존재하는 질소를 포함하는 화합물이다. 일반적으로 대부분

알칼로이드는 산과 반응하여 염을 형성하여 수용성으로 변한다. 이들 알칼로이드는
전구체인 다양한 아미노산으로부터 파생되거나 아미노기 전달 반응에 의하여 만들어진다.
알칼로이드의 생리활성은 매우 다양하다. 광범위한 약리학적 효능이 있으며 독성도
존재한다.

만가지가 넘는 알칼로이드 중 퓨린은 헤테로고리 화합물이다. 우리가 추출할 카페인도

퓨린의 유사체이다. 카페인 외에도 퓨린 유사체는 잔틴, 요산 등이 있다.

- 카페인

카페인은 커피나 녹차 같은 일부 식물의 열매, 잎, 씨앗 등에 함유된 알칼로이드 화합물이다.

앞에서 잠깐 설명했지만, 다양한 약리 활성을 지니고 있는 물질로, 기관지 확장이나 이뇨
등의 작용을 관장하는 중추신경 자극제로 알려져 있다.

9H-퓨린의 1,3,7 번 질소에 메틸기가 치환된 구조이다.

- Rotary evaporator

Rotary evaporator 는 화학 장비로서 농축이나 용매를 제거하고자 하는 용액을 둥근

플라스크에 넣고 감압 농축기에 연결한 뒤 온도를 제어할 수 있는 Heating bath 와
접촉시키며 진공펌프를 이용하여 감압하는 형태로 이용된다. 액체를 담은 용기 내부의
 압력을 낮게 하면 액체의 끓는 점이 낮아진다. Rotary evaporator 는 기기 내부의 압력을
낮게 유지하여 용매의 끓는점을 낮추기 때문에 용매를 대상 시료에서 제거하는 과정에서
시료를 지나친 열에 노출하는 것을 피할 수 있다. 따라서 유기화학실험이나 천연물분리
과정에서 얻어지는 민감한 물질의 분리에 효과적이다.

사용방식

섞여 있는 물질을 분리하기 위해 섞여 있는 물질 중 가장 낮은 물질의 끓는점을

세팅하고, Rotary evaporator 내부를 진공상태로 만들어 준다.

그리고 Evaporating Flask 가 계속회전하면서 플라스크의 전체적인 부분에 온도를

조절해주고, condenser coil 에 냉매를 순환하게 하여 증류되는 물질을 액체로 만들어
receiving flask 에 회수한다. 이러한 방식으로 사용한다.

실험과정

1. 결합된 methylene chloride 추출물을 125mL 분리 깔때기에 붓고 대부분의 잔류 aqueous

layer 이 위로 분리될 때까지 몇 분 더 기다린다.

2. 다음 두 가지의 분리 절차 중 하나에 대해 essentially clear lower layer 을 사용한다.

① 125mL 삼각 플라스크에서 결합된 methylene chloride 추출물에 boiling chip 을

넣고 약한 가열이 가능한 후드에서 몇 밀리리터의 용매를 제외한 모든 용매를
조심스럽게 증발시킨다.

② 몇 밀리리터를 제외한 모든 methylene chloride 층을 Rotary evaporator 를 이용해

여러 부분으로 증발시킨다. 100mL 둥근 바닥 플라스크는 사용하기 편리한
크기이지만 증발할 용매로 3 분의 1 이상 채워서는 안 된다.

3. 필터 피펫으로 농축된 용액을 소형 승화 장치로 옮긴다.

4. 승화 장치의 상단을 열고 side arm 에 연결된 diaphragm pump 또는 aspirator 호스를

사용하여 승화 장치 하단을 부드럽게 가열(히트램프 또는 마이크로 버너 사용)하여
methylene chloride 을 조심스럽게 증발시킨다.

5. 승화 장치의 측면에 있는 카페인을 spatula 를 사용해 바닥 중앙으로 긁어낸다.

6. Cold finger 를 이용하여 승화 장치를 수직 위치로 고정한다. 그리고 diaphragm pump 또는

aspirator 를 side arm 에 연결하고 전원을 킨다.

7. Cold finger 에 얼음물을 채우고, 카페인이 차가운 표면으로 가라앉을 때까지 작은 불꽃(
마이크로 버너)으로 데운다. 카페인 증기가 더 이상 보이지 않을 때까지 계속한다.
 8. Aspirator 를 끄고 장치를 몇 분 동안 식도록 한 다음 승화물의 극히 일부가 승화 장치 바닥의
잔여물로 다시 떨어지도록 Cold finger 를 조심스럽게 제거한다.

9. 승화물을 계량지에 긁어내고 작은 바이알에 넣는다. 찻잎의 추정 무게(10g)를 기준으로

회수된 카페인의 대략적인 백분율을 계산한다.

시약

- 물(H2O)

분자량 18.02g/mol / 밀도 1.0 g/cm3 (4 ℃) / 녹는점 0.00 ℃ / 끓는점 100.00 ℃(1 기압)

- 염화 메틸렌(CH2Cl2)

분자량 84.93g/mol / 밀도 1.33 g/cm3 / 녹는점 -94.8℃ / 끓는점 39.95℃

- 무수황산나트륨(Na2SO4)

화학식량 142.05g/mol / 밀도 2.664g/cm3 / 녹는점 884℃ / 끓는점 1429℃

- 규조토(SiO2)

분자량 60.08g/mol / 밀도 0.47 g/cm3 / 녹는점 1400~1650℃ / 끓는점 2200℃

출처

1. Alkaloids, M Hesse, Wiley-VCH, 2002.

2.  https://en.wikipedia.org/wiki/Purine

3.  https://en.wikipedia.org/wiki/Caffeine

4. 화학대사전, 세화, 세화편집부, 2001.05.20