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肉豆蔻八味胶囊对实验动物心脏的保护作用
肉豆蔻八味胶囊对实验动物心脏的保护作用
6年 4月 中 成 药 Apr
il
201
6
第3
8卷 第 4期 Chi
nese
Tr
adi
tional
Pat
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M edi
cine Vo1
.38
No.4
…
(1):1_
5. hype
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oscl
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sis[J].J
Biomed Re
s,201
4,
高丽娟 ,高 娟 ,胡耀 红 ,等.水蛭粉对 高脂血症 大 鼠动 28(1):25-
39.
脉粥样 硬化形 成过 程 的干预 机制 [J].中成药 ,2014,36
Chi
sti
akov D A . Sobeni
n I、
A . Or
ekhov A N. Vascula
r ext
ra—
(9):1
962—
1965.
ce
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s[J].Car
diol
Rev,2
013,21
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E.Ar
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cle[J].Ar
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(6):270-
288.
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cle
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omb
Vas
c Bi
ol,201
4,3
4(1
0):21
75—
2179.
¨n J. Kakkar
V. Lu X. Impact
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Zhang J, Chen
J, Xu C, et
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014, 1
5(4):
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l— 442-453.
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014,63(3):233-
239.
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h muscl
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on,2013,29(1):
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ti
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ros
cler
osi
s[J].BMB
Rep,201
4,47(1):
268-275.
1-
7. 盛晓赞 ,王树人 .血管平滑肌 细胞移行及 表型转换 的分子
Ponti
cos M .Ext
racell
ular
mat
ix synthesi
r s in vascul
ar di
sease:
机制[J].中国动脉硬化杂志 ,2008,16(11):91
7-921.
肉豆蔻 八 昧胶 囊对 实 验动 物 心脏 的保 护作 用
川 吲 …
肖云 峰 ,
李 文妍 ,
王玉 华
(1.天 津 中 医 药 大 学 ,天 津 3001
93;2. 内蒙 古 医科 大 学新 药 安 全 评 价 研 究 中 心 , 内 蒙 古 呼 和 浩 特
01011
0;3.内蒙古 自治 区人 民 医院药 学处 , 内蒙 古 呼和 浩特 01
001
71;4. 内蒙古 医科 大 学 药 学院 , 内蒙
古 呼和 浩特 01
0110)
摘要 :目的 探讨 肉豆蔻八 味胶囊 (肉豆蔻 、沉香 、木香 等 )对 实验动 物心脏 的保护作 用 ,并与原 方散剂 比较药 效
学差异 。方法 采 用常压缺氧模 型和盐酸异丙肾上腺素致心肌缺氧模型 ,记 录小 鼠缺氧死亡 时间 ,研究 受试药物对 小
鼠耐缺氧 的作 用 ;测定 乳酸脱氢酶 (
LDH)、肌酸激酶 (CK)、超氧化物歧化酶 (
SOD)和丙二 醛 (MDA) 等 内源性
物质 的含有量 ,评价受试药 物对垂体后叶素引起大 鼠急性心肌缺血 的保护作用 ;采用 吸入氯仿并快速静 脉注射盐 酸肾
上腺素复制家兔 急性 心律失常模型 ,观察受试药物对心律失常潜伏期和持续期 的影 响。结 果 肉豆蔻八 味胶囊可 以显
著提 高小 鼠耐 缺氧能力 ;改善 LDH、CK、SOD和 MDA在体 内的水平 ,保护心肌受损 细胞 ;延 长心律失 常的潜伏 时间
并缩短持续 时间。肉豆蔻八 味胶囊组与 肉豆蔻八 味散 对照 组 比较 ,没有显著 性差异 (
P>0
.05)。结论 肉豆蔻八 味
胶囊具有抗 缺氧 、保护心肌细胞及抗急性心律失常 的作用 ,且作用与原方散剂相 当。
关键 词 :肉豆蔻八 味胶囊 ;肉豆蔻八味散 ;耐缺氧 ;急性心肌缺血 ;急性心律失常
中 图 分 类 号 :R28
5.5
文 献 标 志 码 :B 文章 编 号 :1
001
—15
28(
201
6)0
4-08
98-
05
doi:1
0.3969/j.i
ssn.1001—
1528.2016.04.039 ・
收 稿 日期 :2015-
05 1
3
基金项 目:国家 自然科学基金项 目 (81
360678);内蒙古 自治区科技计划项 目 (1
405125);内蒙古 自治 区科技创新 引导奖励 资金项 目
(201215
02)
983一 ),男 助理研究员 ,博士生 ,从 事中蒙药药 效物质基 础及药理 毒理 学研究 。Te
作 者 简 介 : 肖云 峰 (1 l: (0471)66531
56,E-
mai
l: xi
aoyunf
engt
M 72@ 126.com
¥通信作者 :王玉华 (1
959一 ),女 (蒙 古 族 ),教 授 ,博 士 ,博 士生 导 师 ,从 事 中蒙 药药 效 物 质 基 础及 质 量 控 制 的研 究 。Te
l
(
0471) 66
531
51,E-
mai
l:yuhu
awa
ng59@ 1
63.c
orn
898
2016年 4月 中 成 药 Apr
il
2016
0.
3 g的胶 囊 。
家兔饲养于普通环境 中,每笼 1只。
心律失常是 由于窦 房结异 常激 动 ,使信 号传导 阻滞 或 实验动物 喂以内蒙 古大学实 验动物 中心 提供 的标准维
传导异常所致 。心绞痛 是 由于冠状 动脉供 血不 足 ,使心 肌 持饲料 , 自由摄水 。在室温 1
9—25℃ ,湿度 40
% 一6
0% 的
暂时缺血 、缺氧所致 。冠 心病是 由于冠 状动 脉 内膜 附着 斑 环境 中适应性饲养 1周后 ,开始试验 。
块 ,使心脏血流受阻 ,心 肌缺 血 、梗死 所致 。以上 病症 均 所有 受 试 药 物均 用 0.
5% CMC-
Na配 制 成 所需 剂 量 ,
与 肉豆蔻八味胶囊祛 “巴达干 ”、镇 “赫依 ”,燥 “协 日乌 使受试药物均匀混悬 。
素”_
2
的功能 主治相关 联 。本实 验采 用经 典 的常压 缺 氧模 1
.4.
2 常压耐缺氧实验 取 7
2只小 鼠 ,随机分 为空 白
型 、盐酸异丙 肾上腺 素致心 肌缺氧 模型 、垂 体后 叶素致 急 对照组 、阳性对照组 (复方丹参滴丸 )、肉豆蔻八 味胶 囊 3
性心肌缺血模 型和氯仿 -
盐 酸肾上腺素致急 性心律失 常模型 个剂量组 (低 、 中、高 ) 和 肉 豆 蔻 八 味 散 对 照 组 ,共 6
对 肉豆蔻八 味胶囊 的药效 学进行研 究 ,并 与原方 散剂 进行 组 ,每 组 1
2 只。空 白 对 照 组 灌 胃 给 予 0.
5% CMC-
Na
对 比,初步探讨该方胶囊对 实验动物心脏的保护作用 。
2
0 mL/(
kg ・d);阳性 对 照 组 灌 胃给 予 复 方 丹 参 滴 丸
1 材 料及 方 法 0
.10
g/(k
g・d)(临床等效量 );肉豆蔻八 味胶囊 3个剂 量
1
.1 动物 家兔 ,4
8只 ,雌 雄各 半 ,体质量 2
.0—2
.4
kg,
组 (
低 、中、高 ) 的给药剂量分别 为 0.
23、0
.46、0.
92
g/
普通级 ,由北京维 通利华 实验动物 技术 有 限公 司提 供 ,实 (k
g・d)(临床等效量 的 1、2、4倍 );肉豆蔻八 味散对 照
验动物生产许 可证 号 :S
CXK (京 )201
0-00
02。
组灌 胃给予肉豆蔻八味散 0.
75
g/(k
g・d) (临床等 效量 )。
昆 明 (KM) 种 小 鼠,1
56只 ,雄 性 ,体 质 量 1
8~ 每天 1次 ,连续 给药 1
0 d。第 1
0天给 药3
0 mi
n后 ,将小 鼠
2
2 g,清洁级 ,由内蒙古 大 学实 验 动物 中心 提 供 ,实 验 动 分别 置 于 含 有 等 量 钠 石 灰 (1
5 瓶 ) 和 等 量 吸 水 纸
物生产许 可证 号 :S
CXK (蒙 )20
02-
0001。
(
0.2
g/瓶) 的同批次 25
0 mL广 口瓶 中 ,用 凡 士林 涂抹 瓶
Wi
st
ar大 鼠,70只 ,雌 雄 各 半 ,体 质 量 1
80~20
0 g,
口并 盖紧瓶盖 ,观察并记录小 鼠存活时间。
清 洁级 ,由内蒙古大学实 验动物 中心 提供 ,实 验动 物生 产 1
.4.3 心肌急 性耐 缺氧实验 取8
4只小 鼠,随机分 为空
许可证 号 :S
CXK (蒙 )20
02-
0001
。 白对 照组 、模 型 对 照组 、阳性 对 照组 (复 方丹 参 滴 丸 )、
1
.2 受试药物及试剂 肉豆蔻八味胶囊 (内蒙古黄河制 药 肉豆蔻八味胶囊 3个剂量组 (低 、中、高 ) 和 肉豆蔻 八味
厂 ,批 号 201
311
10);肉豆 蔻八 味散 (内蒙古 医科 大 学 药 散对照组 ,共 7组 ,每组 1
2只。空 白对照组和模 型对照组
学 院 ,批 号 201
4041
6);复 方丹 参滴 丸 (天 津天 士力 制 药 灌 胃给予 0.
5% CMC—
Na
20
mL/(k
g・d);各给药组 给药剂
集 团股份有 限公 司,批 号 1
3071
9);氯化 钠 注射液 (吉 林 量同 “1
.4.
2”项 。第 1
0天给药 3
0 ai
r n后 ,除空 白对照组
省四平巨能药业有限公司 ,批号 A1
402
0002);盐 酸 肾上 腺 小 鼠皮下注射生理盐水 2
0 mL/k
g外 ,其余 6组小 鼠均皮下
素 (
天津金耀 氨基酸有限公司 ,批号 1
401
352);氯仿 (天 注射盐酸异丙 。
肾上 腺素 1
0 mg
/kg,1
5 r
ain后 ,将小 鼠分别
津市风船化 学试 剂科 技 有 限公 司,批 号 2
013
062
7);盐 酸 置 于 含 有 等 量 钠 石 灰 (1
5 瓶 ) 和 等 量 吸 水 纸
异丙肾上腺 素 (上 海 禾 丰 制药 有 限公 司 ,批 号 1
308
09);
(0
.2
g/瓶 )的同批 次 2
50 mL广 口瓶 中,用凡 士林涂 抹瓶
钠 石 灰 (上 海 五 四化 学 试 剂 有 限 公 司 ,批 号 1
401
30);垂 口并盖紧瓶盖 ,观察并记 录小 鼠存活时 间。
体后叶 素 注 射 液 (天 津 君 安 生 物 制 药 有 限公 司 ,批 号 1
.4.
4 急性心肌缺血损 伤实 验 取 7
0只大 鼠 ,雌雄各
2
0141
125);羧 甲基纤维 素钠 (CMC—
Na) (天 津市 科密 欧 半 ,随机分为空 白对 照组 、模 型对照组 、阳性对 照组 (复
化学试剂 开发 中心 ,批 号 2
0121
030);乳酸 脱氢 酶试 剂 盒 方丹参滴丸 )、肉豆蔻八 味胶囊 3个 剂量组 (低 、中 、高 )
(南京建成生物 工程 研究所 ,批号 201
3031
4);超氧化 物歧 和 肉豆蔻八味散对照组 ,共 7组 ,每组 l
0只。空 白对照组
化酶试剂盒 (南京建成生 物工程研究 所 ,批号 2
013
091
6);
和模型对照组灌 胃给予 0.
5% CMC-
Na
20
mL/(
kg・d);阳
丙二 醛 试 剂 盒 (南 京 建 成 生 物 工 程 研 究 所 ,批 号 性对照组灌 胃给予复方丹 参滴丸 0.
08 (k
g・d) (临床 等
20131
223)。
效量 );肉豆蔻 八味胶 囊 3个 剂量 组 (低 、中、高 )的 给
1.3 仪 器及 实验 机 构 药剂量分别为 0.1
6、0.
32、0.
64 g
/(k
g・d) (临床 等效 量
1
.3.1 仪器 数字 式 多导 生理 信 号记 录 仪 (美 国 Bi
opa
c 的 1、2、4倍 );肉豆蔻八味散对照组灌 胃给予 肉豆蔻八 味
公司 ,型号 MP1
50);电子天 平 (北 京赛 多利 斯仪 器 系统 散 0.
54
g/(k
g・d)(临床 等效 量 )。每 天 1次 ,连续 给 药
有 限公 司,型号 BS
220
2S);低 温冷 冻离 心机 (美 国 S
igma
1
0 d。第 1
0天给药 1
h后 ,除空 白组大 鼠腹腔注 射生理 盐
公 司,型号 3K1
5);双光束 紫外可 见分 光光度 计 (北 京普 水2
0 mL
/kg外 ,其 余 6组 大 鼠 腹 腔 注 射 垂 体 后 叶 素
析通用仪器有 限责任公 司 ,型号 TU一
1901)。
1
0 I
U/kg,1
h后 ,腹主动脉取血 1
0 mL,3
00
0 r
/r
ain离 心
1
.3.
2 实验机构 内蒙 古 医科 大学 新 药安 全评 价 研究 中 1
0 ai
r n,分离血清 ,测定血清 中的 L
DH、CK、S
OD和 MDA
心 ,实验动物使用许可证号 :SYXK (
蒙 )2
014-
000
3。 含有量 。
1.4 方法[
] 1
.4.
5 急性心 律 失常 实验 取 48只家兔 ,雌 雄各 半 ,
1
.4.1
实验动物环境适应与饲 喂 实验动物按级别 分环境 随机分为模 型对 照组 、阳性 对照 组 (复方丹 参 滴 丸 )、肉
饲养 ,大 鼠 、小 鼠分 雌雄 饲养 于 屏 障环境 中 ,每 盒 5只 ;
豆蔻八味胶囊 3个剂量组 (低 、中、高 ) 和 肉豆蔻 八味散
899
2
016年 4月 中 成 药 Apr
il
201
6
显著性差异 (
P<0.
05);高剂量组 没有 显著 性差异 (P> 量降低 ,有显著性 差 异 (P<0.
05,P<0.
01);SOD含 有
0.
05)。与 阳性对照组 比较 ,肉豆蔻八 味胶囊组存 活时间没 量升高 ,有显著性差 异 (
P<0.
05)。与模 型 对 照组 比较 :
有显著性差异 (P>0.
05)。与 肉豆蔻 八 味散对 照 组 比较 ,
低 、中、高剂量组 LDH含 有量升 高 ,有显著性 差异 (P<
模 型 对 照 组 一
602.3
3±1
49.52
1
09
3.23±1
93.3
2 527.
48-
I
-21
.34 6.93±1.
46
肉豆蔻八味胶囊低剂量组 0.16 647.01±151.47 1
157.
27-
I
-184.2
9 467.49±33.83
7.65±1.
37△
肉豆 蔻 八 味 胶 囊 中剂 量 组 0.32 692.37-
I
-190.17△△ 1
163.
06±164.8
2 492.34±27.25
7.28±1.
03
肉豆蔻八味胶囊高剂量组 0.
64 664.5
7±1
73.26
1
20
2.66±1
62.83△ 497.
64±25.62
7.97±1.1
5△△
肉豆 蔻 八 味 散 对 照 组 0.
54 644.98±1
04.83¨ 1
15
9.03±1
84.3
9 469.
26±28.02
z
x#
7.43±1.
29
阳性 对 照 组 0.
08 705.73
4-1
26.83
1
13
6.57±1
82.2
6 492.
04±35.93
7.26±1.
28
注 :与空 白对照组 比较 ,
P<0.0
5, <0.
01;与模 型对照组 比较 ,
P<0.
05,
P<0.
O1;与 阳性对 照组 比较 ,
P<0.05;与肉豆蔻
八 味 散 对 照 组 比较 ,
P<0.0
5
心律失 常潜伏 时间明显增加 (
P<0.
05);低 剂量组 心律 失 达 (
20.
04±7.
35) S
;胶囊低 剂量 组心 律失 常持续 期 缩短
常持续 时间明显缩短 (
P<0.
01)。结果表 明 ,胶囊 3个 剂 至 (
97.1
5±3
5.71)S
。结合 心律 失常潜伏 期和持续 期的结
量组都可 以显著延长心律 失常 潜伏 的时间 ,缩 短心 律失 常 果 比较 ,临床等效量 的前提下 ,胶囊 与散剂 作用 相 当。结
发作 的持续 时间。其 中,胶囊 高剂 量组 心律失 常潜 伏期 长 果见表 4。
表 4 受试药物对 肾上腺素所 致家兔心律失常的影响 (
± ,,
l=8)
孚
为
方
本 使药
需
、
八味药材相伍
。
.
,可以治疗 三
。
、
、
神、 、
冠心病 、心律 失
[
]蓉
。 如
濂,陈修
.药理学
实验方
法学[
M]
.第。
。
… … …
: 出 社 .
常等 心血管疾病 。
[4]
张均田 杜冠华.现代药理实验方 法[M].第 2版 .北京 :
,
本研 究采用耐缺氧模 型 实验 、心 肌缺 血模 型实 验、心 中国协和医科大学出版社 2014.
,
201
5,
果表 明 ,各 给药组都能够不同程度 的缓解疾病模 型的症状 。
21
(5):129—
132 .
1053,
1057.
临床 应 用 研 究 进 展 [J]. 中 国 药 房 ,2011, 1
2(3
5):
[10]
韩 蕾 ,马颖芳 ,袁子民.肉豆蔻挥 发油的药理毒 理研 究 3349.
3351.
刺 五 加 多 糖 下 调 Sur
vivi
n蛋 白 表 达 诱 导 He
La细 胞 凋 亡
靳 神 ,
肖 锋 ,
武均 宜 ,
胡 亚 南 ,
范林 林 ,
王 恩军 h
(1.河北 大 学基础 医学院 ,河北 保 定 071
000;2.中南大 学湘 雅 医学院 ,湖 南 长 沙 41
0000;3.保定 市儿童
医院 ,河北 保定 071
000)
摘要 :目的 观察刺五加多糖对人宫颈癌细胞株 He
La的增殖 、凋亡作用 ,探 索其诱导 细胞凋亡 的可能机 制。方法
四甲基偶 氮唑盐 (MTr)法检测刺五加 多糖对 He
La细胞增殖 活力 的影 响 ,An
nex
in
V—FI
TC/PI双染 法检测刺 五加多糖
对细胞凋 亡的诱 导作用 ,免疫组化 sP法检测凋亡细胞 中存活素 (
Sur
viv
in)蛋 白表达 的变化 。结 果 刺五加 多糖 以剂
量和 时间依赖 的方式抑制 He
La细胞增 殖 ;诱 导细胞凋亡 ;并且 S
urv
ivi
n蛋 白在凋 亡的 He
La细胞 中表达量 降低。结论
刺 五加 多糖通过下调 Su
rvi
vin蛋 白表 达 ,诱 导 He
La细胞凋亡 。
关键 词 :刺五加 ;多糖 ;He
La;宫颈癌 ;凋亡 ;S
urv
ivi
n
中 图 分 类 号 :R28
5.5
文 献 标 志 码 :B 文 章 编 号 :1
001-
152
8(2
016)
04-
0902
-03
doi:
10.3969/j.i
ssn.1
001.
1528.201
6.04.040
刺 五加 多 糖 (
Acan
tho
pan
ax s
ent
i
cos
us p
oly
sac
cha
rid
es)
硫酸法 检测 ,其 多 糖含 有量 约为 75.
12% ,用 生理 盐水
是从 五加科植物刺五加 的根及 根茎 中提取 出 的一 种植物 多 配制成 5
00 mg
/mL的贮备 液 ,高压 灭菌后 4℃ 冰箱保 存 。
糖 ,是刺五加 的主要药效活性成分之一 ¨
。近年来 ,很 多 细胞株 ,He
La细胞 由河北农业 大学 生命科学 学院惠赠。
学者报道 了关于五加科 植物 及刺五加 多糖抗 肿瘤作 用 的研 1
.2 主 要 仪 器 与 试 剂 CO 培 养 箱 (MCO-
5AC, 日本
究 。我们在前期实验研究 中发 现刺 五加多糖对 HeL
a细 S
any
o公司 );净化工作 台 (
SW—
CJ一
1B,上海精密 科学仪 器
胞的增殖有一定抑 制作用 ,表明刺 五加多糖 作为 抗肿瘤 的 有 限公 司);酶标仪 (
ELx
808,美 国 Bi
oTe
k公 司);倒 置显
天然 中草药具有较 好 的开发潜能 。为 了进一 步揭示 刺五 微镜 (CX31, 日本 Ol
ympu
s公 司 );6孔 及 9
6孔 培 养 板
加多糖诱导 He
La细胞 的凋亡 作用 及机制 ,本研究拟检测刺 (
美 国 Co
sta
r公 司);胎牛 血清 、RPMI
一16
40培养 基 (美 国
五加多糖诱 导 He
La细胞 的凋 亡作 用 及存 活 素 (S
urv
ivi
n) Gi
bco公司 );胰蛋 白酶、MTF、二 甲基亚 砜 (DMS
O) (美
的表 达 ,为 刺 五加 多糖 的应 用 提 供 参 考 依 据 。
国S
igma公 司 );An
nex
in
V—FI
TC/P
I双 染 试 剂 盒 (上 海 美
1 材 料 和 方 法 吉 生 物 医 药科 技有 限 公 司 );一 抗 S
urv
ivi
n (美 国 S
ant
a Cr
uz
1
.1 材料 刺五加多糖 ,由河北农业大学生命科学 学院提 公 司);鼠二抗 、兔 二 抗 及 DAB显 色剂 (美 国 I
nvi
tr
oge
n
供 ,原生药 品购 自河 北 安 国 县药 材 公 司,采 用 热水 浸 提 公 司 )。
法 提取 ,原 生药 品加 油醚 提取 ,脱脂 后 将药 品 渣干 燥 ,
1.3 实验 方 法
加蒸馏水 ,8
0℃恒 温浸取 4
h,抽滤 ,滤液蒸 发浓 缩 ,加 1
.3.1
细胞 培养 人 宫颈癌 He
La细胞采用 t
0% 的胎 牛血
入氯仿 ,正 丁醇 ,剧烈振 荡 ,离 心 ,收集 上 清液 。经 透析 清 的 RPMI
一16
40 培 养 基 (含 1
00 U/mL 的 青 霉 素 和
浓缩 后 ,加 入无水 乙醇 静置过 夜 ,抽滤 得 多糖沉 淀 ,沉淀 1
00
U/mL的链霉 素) 于 3
7 o
C、5
% CO,培养箱 中培养 。隔
分别用 95
% 乙醇一 无水乙醇一 丙酮一 乙醚 洗涤 ,干燥 ,其 日换液 1次 ,取对数生长期细胞进行实验 。
水溶 液再 经 H
O 脱 色 、透析后 得刺 五加 多糖 。通 过苯 酚一
1
.3.
2 MTT法检测细胞生存率 细胞 (
2×1
0 /
mL)用胰
收 稿 日期 :2014—
12—
30
基金项 目:河北省中医药管理局科研计划项 目 (2
009061)
作者简介 :靳 神 (1
977一 ),女 ,硕 士 ,副 教 授 ,从 事 抗肿 瘤 中药 及 化 学 生 物 学 研 究。Te
l:138
330316
03,E—
mai
l:j
inyi
2009@
163.tom ’
通信作者 :王恩军 (1
977一 ),男 ,硕士 ,副教授 ,从事肿瘤药理 学研究 。Te
l:13833
061
977,E-
mai
l:wang
enj
un2009@1
63.
com
902