Uvod u

kromatografske
tehnike
Aleksandra Vuksanović, 3.l
Sadržaj
• Kromatografija kao pojam
• Povijest
• Podjela kromatografskih tehnika
• Pitanja za ponavljanje

•
Kromatografija kao pojam

KROMATOGRAFIJA -
metoda razdvajanja
Chroma+graphein=
smjese na osnovu različite
kromatografija
raspodjele između
stacionarne i mobilne faze
Povijest
• Prvu kromatografsku tehniku je izumio ruski botaničar
Mihail Cvet 1900. godine tijekom svojega istraživanja
klorofila
• Rabio je stakleni stupac koji je sadržavao kalcijev karbonat
da bi razdvojio biljne pigmente. Metodu je opisao 30.
prosinca 1901. godine
• Mihailovo prezime "Tsvet" na ruskom jeziku znači boja, tako
da je vjerojatno kromatografiju nazvao po svojemu
prezimenu
•
•
Podjela kromatografskih tehnika

1. Plinska 2. Tekućinska 3. Tankoslojna

kromatografija kromatografija kromatografija

4. 6. Superkritična
5. Kromatografija
Ionoizmjenjivačka fluidna
isključenjem
kromatografija kromatografija
 • Metoda razdvajanja i detekcije hlapljivih
organskih spojeva i nekih anorganskih
plinova iz smjese
• Nastala je 1950. godine i danas se razvila u
jednu od temeljnih tehnika u kemijskoj
analizi
• Dolazi do formiranja plinskog uzorka
1. Plinska između inertnog plina kao mobilne faze i
tekuće ili čvrste stacionarne faze
kromatografija • Kao mobilna faza ubotrebljava se dušik,
vodik, helij ili smjesa argona i metana
• Najviše se koristi helij, a izbor plina
najčešće ovisi o uzorku i detektoru
• U početku su se koristili pakoirani stupci,a
danas su u uporabi kapilarni stupci čiji su
zidovi presvučeni čvrstim poroznim
materijalom ili viskoznom tekućinom
Uređaj za plinsku
kromatografiju
2. Tekućinska kromatografija

• Razdvajanje tvari na osnovi razmještanja između čvrste stacionarne faze i tekuće mobilne faze
• Razlikujemo 2 vrste: klasična TK i TK visoke djelotvornosti
• Klasična TK koristi velike stupce, duljine i do 50 cm, pakirane poroznim materijalom dok
mobilna faza prolazi gravitacijski te metoda nije previše učinkovita zbog malog protoka
• TKVD je suvremenija tehnika jer se kod nje mobilna faza dovodi pomoću pumpe
• Stupci za TKVD su punjeni silikatnim ili polimernim materijalom
• Za TKVD najčešće se koristi UV-VIS detektor, a mogu i drugi
• Na osnovi polarnosti razlikuje se TK na normalnim i obrnutim fazama. Razdvajanje na
normalnim fazama podrazumijeva da je stacionarna faza polarna, a mobilna faza nepolarna
Uređaj za
tekućinsku
kromatografij
u
 3. Tankoslojna kromatografija
• Tankoslojna kromatografija koristi tanki sloj (0.10 – 0.25 mm) adsorbcijskog materijala nanijetog na
nosač sačinjen od aluminija stakla ili plastike
• Uzorak otopljen u odgovarajućem otapalu se nanosi u obliku mrlje na jednu stranu ploče, na
udaljenosti 1 cm od ruba
• Ploča se unosi u komoru, a na dnu se nalazi otapalo koje kapilarnim silama prolazi kroz adsorbens
noseći sa sobom komponente uzorka
• Zbog različitog afiniteta, komponente se zaustavljaju na različitim mjestima na ploči, što omogućava
njihovu identifikaciju razvijanjem boje ili promatranjem pod UV lampom
4. Ionoizmjenjivačka kromatografija
• Ionoizmjenjivačka kromatografija odnosno ionska
kromatografija je tehnika koja ima dosta sličnosti TKVD
• Kao stacionarna faza koriste se umrežene polimerne smole te
su na njih kovalentno vezane ionske funkcionalne grupe koje
su neutralizirane ionima suprotnog naboja i mogu biti
zamijenjeni ionima koji su prisutni u ispitivanom uzorku
• Ovisno od afiniteta, ioni će se različito vrijeme zadržavati na
stacionarnoj fazi, što omogućava njihovo razdvajanje.
• Ionoizmjenjivač općenito potiče vezanje iona većeg naboja i
manjeg radijusa
• Kao mobilna faza najčešće se upotrebljavaju tamponi
5. Kromatografija isključenjem
• Metoda kod koje se separacija komponenata temelji na veličini čestica
• Kao stacionarna faza koriste se porozni materijali (silikagel ili
polimerne smole)
• Manje čestice mogu ući u pore stacionarnih faza i zadržavaju se dulje
vrijeme dok veće čestice koje su prisutne u uzorku ne mogu ući u
pore i eliuraju se prije
• Ova vrsta kromatografije se naziva još i gel-filtracija. Engleski naziv je
size exclusion chromatography, pa se koristi akronim SEC
• Ova metoda je pogodna za razdvajanje bjelančevina
6. Superkritična
fluidna kromatografija
• Superkritična fluidna kromatografija- metoda kod
koje je mobilna faza plin na temperaturi i tlaku
iznad kritičnih vrijednosti (pod ovim uvjetima
mobilna faza je superkritični fluid)
• Superkritični fluidi imaju viskoznost sličnu
plinovima pa lako prolaze kroz kapilarne i
pakirane stupce bez potrebe za visokim tlakom
kao kod TKVD metode
• Gustoća superkritičnih fluida je slična tekućinama
pa se ponašaju kao otapala
• Najčešće se koristi CO2. Njegova kritična
temperatura je 31 °C i kritični tlak 72.9 atm što
se relativno lako postiže.
Pitanja za ponavljanje
• Kromatografija je metoda razdvajanja smjese na osnovu:
a) različite raspodjele između stacionarne i mobilne faze
b) različite raspodjele između stacionarne i automatske faze
c) različite raspodjele između homogenizacijske i mobilne faze
Pitanja za ponavljanje
• Plinska kromatografija razvila se:
a) 1960.
b) 1951.
c) 1950.
Pitanja za ponavljanje
• Kromatografija isključenjem metoda kod koje se separacija
komponenata temelji na:
a) gustoći čestica
b) veličini čestica
c) obliku čestica
•