國立高雄科技大學

儀器分析實驗報告
 
實驗十一: 咖啡因含量之測量
(高效液相層析儀)
組別:第十組

主筆姓名學號: C109146115 李華雄

組員姓名學號: C109146106 許乃文
C109146114 鄭弘章
C109146138 游博霖

實驗日期:111 年 10 月 03 日

數據結果整理
a. 以電腦繪製檢量線(X 軸:標準品濃度，Y 軸:面積值)
樣品 20 mg/L 標準品 50 mg/L 標準品 80 mg/L 標準品 未知溶液樣品
咖啡因滯留時間(min) 7.879 7.932 7.928 7.850
面積值 706295 1876981 2987431 3715084

b.以最小平方法迴歸之線性線性方程式為: Y=38019X+(-44044)
c. R2 = 0.9998
d.利用檢量線查出咖啡溶液樣品中咖啡因濃度為:98.87mg/L(此為
20mL 濾液稀釋至 100mL 之濃度)
e.未知咖啡因之濃度:98.87ppm
 問題與討論
1. 各樣品的滯留時間是否一致?影響的原因為何?
滯留時間並非一致。
本次的操縱變因為固定相的濃度(Cs)，由分配係數公式 KC = Cs Cm ，得知
Cs 和分配係數(KC)成正比。又由 K′= KC × KV = tR−tM/ tM 公式得出 Cs 和滯
留時 間成正比，得出固定相的濃度(Cs)越高，滯留時間(tR)越長。
tM: (通常是空氣)為不滯留在管柱填充物內的物種。
KV:靜相和動相之體積比。

2. 為何檢量線以波峰面積值(peak area) 迴歸，而不是以波峰高度

(peak height)為之?
層析圖譜的積分基線決定了波峰的高度與面積值，會影響定性與定量之準
確性，因此積分基線能否準確切割重疊峰或準確決定基線的終起點，成為相當
重要的工作。層析圖譜積分時常會遇到多波峰（基線飄移）、單一波峰加雜訊、
基線連線不準等問題，因此需要使用波峰面積值回歸。
用面積回歸才能得知整個滯留段時間，如果用波峰高度的話只能得出一個點的
時段。

3. 在本實驗中，為何偵檢器波長設定在 272nm?如果改用 254nm 有何

優勢?
 因為本實驗偵測的咖啡因在紫外線吸收光譜 272nm 有一強烈的吸收峰，因
此本 實驗中 UV 偵檢器的波長設定在 272nm，大多數溶劑不吸收波長 254nm 的紫
外線。

4. 為何層析圖中峰的數目不一定等於樣品中成分的數目?
相同的分析條件，會具有相同滯留時間的物種應不只一種，也就是說，在
一張層析圖上其波峰所代表的意義僅具有時間與量（面積值或高度），並不具
物種的任何資訊。我們可以利用在不同的分析條件分析樣品檢視其分析結果仍
是一致，當改變分析物濃度見其波峰也會隨之變動，由此可以得知滯留時間係
物種定性上的佐證，而非峰數表示樣品成分中的物種數目。

參考資料
1. https://highscope.ch.ntu.edu.tw/wordpress/?p=63412
2. http://www.ncyu.edu.tw/files/site_content/ctrlrd/39%E9%AB
%98%E6%95%88%E6%B6%B2%E7%9B%B8%E5%B1%A4%E6%9E
%90%E8%B3%AA%E8%AD%9C%E5%84%80.pdf
3. https://ymctaiwan.com/hplc%E5%8E%9F%E7%90%86/