Sản xuất protein huỳnh quang màu xanh lá cây cho Gfp.

- Trong quá trinh lên men Gfb cần bổ sung một loại kháng sinh
để bảo vệ độ tinh kiết của lô và một chất sinh hóa để bật lên
gen Gfb.
- Vật liệu:
+ Giống VSV là E.coli đã được cải tiến về mặt di truyền để
tạo ra GFB.
+ Thành phần cơ bản cho môi trường tương thích: dinh
dưỡng, chất ổn định kháng sinh kháng sinh, chất chống tạo
bọt và IPTG là chất cảm ứng sinh hóa kích hoạt gen GFP,
- Thiết bị sử dụng: bao gồm lò phản ứng sinh học 300 lít, máy
đo quang phổ uv-vis để theo dõi mật độ quang học, thước đo
nồng độ tế bào trong lò phản ứng sinh học, máy phân tích
glucose để đo lượng glucose, máy đo pH ngoại tuyến để trợ
giúp theo dõi cân bằng axit-bazơ và điều chỉnh các phép đo
trực tuyến nếu cần và bể chứa nước dùng cho sản phẩm cuối
cùng, lò phản ứng sinh học được trang bị áo khoác nước xung
quanh bình để điều chỉnh nhiệt độ, một cảm biến tích hợp để
theo dõi các yếu tố môi trường chính bao gồm oxy hòa tan
pH bên trong nhiệt độ áo nước nhiệt độ và áp suất bình lò
phản ứng cũng có một cổng chuyên dụng của máy khuấy để
thêm hạt giống và thành phần môi trường Các cổng riêng biệt
cho axit và bazơ bổ sung bộ lọc không khí để cung cấp và xả
khí và các van để lấy mẫu và để thu hoạch hầu hết các chức
năng lên men và giám sát có thể được được quản lý từ bộ
điều khiển quy trình chuyên dụng của lò phản ứng sinh học
trước khi lên men.
- quy trình có thể bắt đầu bằng cách loại bỏ thiết bị và vật liệu
sẽ không được sử dụng trong quy trình làm sạch và vệ sinh
khu vực và thiết bị theo yêu cầu của quy trình vận hành tiêu
 chuẩn SOP khử trùng được sử dụng để loại bỏ các vi sinh vật
không mong muốn có thể phát triển một cách tự nhiên trong
môi trường lên men và thiết bị xử lý, tất cả các vật liệu và tài
liệu cần thiết phải được thu thập và chuẩn bị và tất cả phần
mềm kiểm soát quy trình phải được tải và xác minh. quy trình
từng bước với mỗi bước yêu cầu đăng xuất và tách biệt xác
minh hồ sơ này cũng bao gồm các khoảng trống để ghi lại các
hoạt động và thời điểm quan trọng trong quá trình lên men.
Quá trình lên men
 Các bước của quy trình này:

Quy trình này bao gồm các bước: lên men  tách/thu hồi và
tinh sạch  sản phẩm. Video này mô tả quy trình mà một sản
phẩm sinh học—trong trường hợp này là các phân tử Protein
Huỳnh quang Xanh (GFP)—được phục hồi từ các tế bào e coli
của vật chủ.

(1) Khử trùng các thiết bị và các khu vực theo nguyên tắc
SOP để ngăn ngừa VSV tạp nhiễm.
(2) - Chuẩn bị giống ecoli đã biến đổi đặc biệt ra khỏi tủ
đông và rã đông.
-Chuẩn bị môi trường nhân giống.
-Chuẩn bị môi trường dinh dưỡng.
(3) Nhân giống: vsv được cấy một lượng nhỏ vào môi
trường nhân giống  khi số lượng tế bào đã đạt đến số
lượng mục tiêu (trong gian doạn này ta sửa dụng môi
trường dinh dưỡng đã chuẩn bị từ trước để cung cấp
thêm vào cho vsv tăng trưởng hơn)
(4) Lên men: trong giai đoạn này tế bào phát triển mạnh đã
sẵn sàng cho quá trình lên men.
Lúc này người vận hành sẽ kiểm tra toàn bộ tất cả các
thiết bị quan trọng như nắp van,đường ống được siết
chặt chưa, áp suất có bị rò rỉ hay không. Nếu tất cả được
thông qua thì sẽ tiến hành quá trình trộn để lên men. Các
thành phần được bổ sung chiết xuất men tryptic nước
dùng đậu nành ammonium clorua natri bằng photphat
monokali photphat và chất chống bọt hợp chất một khi
tất cả các thành phần ban đầu có trong mười kilôgam
khác nước có độ tinh khiết cao được thêm vào, tất cả các
cổng và van được đóng lại, tất cả nước ngưng tụ các van
được mở và lò phản ứng sinh học bắt đầu chu trình khử
trùng SI p tại chỗ mục tiêu khử trùng là 121 độ C trong
30 phút ngay sau khi khi nhiệt độ tăng lên đến nhiệt độ
mục tiêu, nước ngưng các van được đóng lại và chu trình
SI P tự động hoàn thành cả bình và phương tiện hiện đã
vô trùng và chúng tôi sẵn sàng thêm các thành phần cuối
cùng vào phương tiện truyền thông của chúng tôi ống
glucose được gắn vào tàu kết nối được hấp để khử trùng
nó và dung dịch kháng sinh glucose được khử trùng
riêng được bơm vào bình sau đó đọc pH thủ công của
môi trường và lò phản ứng sinh học được thiết lập cho
chu trình lên men của nó sau khi cấy vòi được kết nối
với lò phản ứng và hấp trong 20 phút hạt giống mở rộng
được bơm vào lò phản ứng có chứa phương tiện truyền
thông quá trình lên men bây giờ bắt đầu, người vận hành
đọc số giờ bằng 0 và bắt đầu thường xuyên theo dõi nhiệt
độ mẻ khuấy RPMs mức oxy hòa tan pH áp suất bình
mật độ quang học tốc độ dòng khí và nồng độ glucose
quang học mật độ và nồng độ glucose được quan tâm đặc
 biệt vì vậy chúng được vẽ đồ thị cũng như được ghi lại
khi mức glucose và quang mục tiêu đã đạt được mật độ,
đã đến lúc thêm iptg vào bình để kích hoạt hoặc biến về
sự biểu hiện của protein phát huỳnh quang màu lục trong
các tế bào sau khi cho phép đủ thời gian để các tế bào tạo
ra protein huỳnh quang màu xanh lá cây thông thường 5
giờ nữa các bài đọc cuối cùng được thực hiện và một
mẫu được rút ra để kiểm tra phần trăm chất rắn tế bào
sản phẩm bây giờ được gọi là nước dùng nước dùng
chứa môi trường đã qua sử dụng và các tế bào được hoàn
thiện khi chất dinh dưỡng chính là glucose được tiêu thụ
gần hết và lô đã đạt được nồng độ mong muốn lô sau đó
được làm mát xuống bơm vào bể chứa nước dùng và
được dán nhãn lô số khối lượng thời gian và ngày quá
trình lên men đã hoàn tất nước dùng được thu hoạch bây
giờ sẽ di chuyển xuống hạ lưu quy trình thu hồi nơi các
tế bào sẽ bị phá vỡ để giải phóng protein huỳnh quang
màu xanh lá cây và protein sẽ được tách ra khỏi các
thành phần nước dùng từ quá trình nên men.

Video 2
 Quá trình thu hồi protein huỳnh quang xanh lá cây.
(1) Tách tế bào (tách tế bào E.coli ra khỏi môi trường lỏng
(2) Phá vỡ Tế Bào bằng Homogenized (máy phá vỡ tế bào).
Bằng cách sử dung một hợp chất dồng nhất.
(3) Phân lập sản phẩm thông qua việc loại bỏ mảnh vụn tế bào
và các tạp chất khác. 
- Các công cụ được sử dụng để thực hiện các bước này bao
gồm máy ly tâm ngăn xếp đĩa để tách chất rắn ra khỏi chất
 lỏng, máy phá và một hợp chất dồng nhất đễ phá vỡ tế bào
và bộ vi lọc 0,22 micro để tách các chất rắn còn lại trong
dung dịch..

Video 3:
 Quá trình thanh lọc protein huỳnh qua xanh lá cây.
- Thông qua 2 quy trình cơ bản sắc kí và lọc.
Nói chính xác là 3 video là trình tự một Quy trình công nghệ lên
men bao gồm từ khâu chuẩn bị cho đến khi thu hoạch, bao gồm
quá trình tăng trưởng của hạt giống, mở rộng quy mô và các giai
đoạn mô hình tăng trưởng vòng đời là quá trình lên men tiếp đến
là tách chất rắn của tế bào khỏi môi trường nuôi cấy, phá vỡ các
tế bào chủ đó để giải phóng sản phẩm chứa trong chúng và phân
lập sản phẩm thông qua việc loại bỏ mảnh vụn tế bào và các tạp
chất khác. Các công cụ được sử dụng để thực hiện các bước này
bao gồm máy ly tâm, máy phá vỡ tế bào và bộ vi lọc, sau khi
phá vỡ màng tế bào ta thu đc dd protein tinh khuyết từ đó chiết
xuất dịch ly giải đã đc làm trong nhờ sắc ký và lọc