Vol. 3, No. 5 and 6, P.

(49-61)A
‫ زﻫﻴﺮ ﺣﻤﻴﺪ ﻋﺒﻮد‬،‫ وﻓﺎء ﺻﺎدق ﻣﺤﺴﻦ أﻟﻮزﻧﻲ‬،‫ﻫﺪى ﻣﺤﻤﺪ ﻛﺎﻇﻢ ﺟﻮاد‬

‫تشخيص الفطريات والخمائر المعزولة من المرضى‬

‫المعتلين مناعيا بالطرق الكيموحيوية والجزيئية‬

‫ زهري محيد عبود‬،‫ وفاء صادق حمسن ألوزين‬،‫هدى حممد كاظم جواد‬
‫ العراق‬،‫ جامعة كربالء‬،‫ كلية العلوم‬،‫قسم علوم احلياة‬
2015 / Sep / 11 :‫ﺗاريﺦ اﻻسﺘالم‬
2016 / Dec / 11 :‫ﺗاريﺦ قبول النﴩ‬

Abstract
(50) samples were collected from skin infections to Immunodeficiency patients for the period
from 01/11/2014 until 01/04/2015 from patients in the city of Hussein Medical and who reviewed
the chemotherapy unit , clinic diabetes , The department of artificial kidney and burns unit and the
ages ranged from )1-80( years who was both sexes.
The results showed the presence of fungal growth in )20( skin swab as it the diabetic patients
more frequency fungal isolates where given 8 swabs as a result of fungal growth positive, followed
by the cancer patients, burns and patients with renal failure four isolates for each of them. Where
formed yeast Candida largest number that percent )50%( and more a repeated in patients with
burns ,as well as Aspergillus, followed by )40%(. And depending on the biochemical and genetic
diagnosis that Diagnosed has two types of Candida yeasts are the C.albicans by seven isolates and
C. parapsilosis by three isolates only.

Keywords
C. albicans, Candida, PCR, C. parapsilosis, Immunodeficiency patients

49 Quarterly Refereed Journal for Natural and Engineering science

‫‪Vol. 3, No. 5 and 6, P. (49-61)A‬‬
‫ﻫﺪى ﻣﺤﻤﺪ ﻛﺎﻇﻢ ﺟﻮاد‪ ،‬وﻓﺎء ﺻﺎدق ﻣﺤﺴﻦ أﻟﻮزﻧﻲ‪ ،‬زﻫﻴﺮ ﺣﻤﻴﺪ ﻋﺒﻮد‬

‫اخلالصة‬
‫تم مجع (‪)50‬عينة من االﲬاج اجللدية للمرﴇ املعتلني مناعي ًا للمدة من ‪ 1/11/2014‬ولغاية ‪1/4/2015‬‬
‫املراجعني ملدينة احلسني الطبية وﳑن راجعوا ردهة العالج الكيمياوي وعيادة السكري وقسم الكلية الصناعية‬
‫وردهة احلروق ‪ ،‬حيثرتاوحت اعامرهم من (‪ )1-80‬سنة ومن كال اجلنسني‪.‬‬
‫اﻇهرت النتائج احلالية وجود نمو فطري يف(‪ )20‬مسحة جلديةفقط اذ كان مرﴇ السكري اكثر تردد للعزالت‬
‫الفطرية حيث اعطت (‪)8‬مسحات نتيجة نمو فـطري موجب يلـيها يف ذلك مرﴇ الﴪطان واحلروق ومرﴇ‬
‫الفشل الكلوي بأربعة عزالت لكل منهم وشكلت ﲬائر املبيضات ‪ Candida‬العدد االكرب من نسبة العزل وبنسبة‬
‫(‪) 50 %‬والتي كانت االكثر تكرار لدى مرﴇ احلــــروق تالها فطر ‪ Aspergillus‬بنسبة (‪ . )40 %‬وباالعتامد‬
‫عىل التشخيص الكيموحيوي و الوراثي فقد عزل نوعــــني من ﲬــــائر املبيــــضات مها الـ‪ C.albicans‬بواقــــع‬
‫سبع عزالت والـ ‪ C. parapsilosis‬بواقع ثالث عزالت فقط ‪.‬‬

‫الكلﲈت املﻔﺘاﺣية‬
‫املرﴇ املعتلني مناعي ًا‪ ،‬ﲬــــائر املبيــــضات ‪ ، C.albicans‬ﲬــــائر املبيــــضات ‪C. parapsilosis‬‬

‫‪Quarterly Refereed Journal for Natural and Engineering science‬‬ ‫‪50‬‬

 ‫‪Vol. 3, No. 5 and 6, P. (49-61)A‬‬
‫ﻫﺪى ﻣﺤﻤﺪ ﻛﺎﻇﻢ ﺟﻮاد‪ ،‬وﻓﺎء ﺻﺎدق ﻣﺤﺴﻦ أﻟﻮزﻧﻲ‪ ،‬زﻫﻴﺮ ﺣﻤﻴﺪ ﻋﺒﻮد‬

‫املناعي (‪ )Immunconpramized patients‬وتــــــعد‬ ‫‪ .1‬املقدمة‬

‫تعد االﲬــاج اجللدية الفطرية أقل شيوع ًا وتنوع ًا من الفــــطريات بأحدى املشاكل الصحية املرافقة للــــمرﴇ املعتلني‬
‫االﲬاج اجللدية البكتريية‪ ،‬ومع ذلك فقد ازدادت كثري ًا اثناء مناعيا والتي قد هتدد حيــــــاة املــــريﺾ‪ ،‬وتعد االصـابة بداء‬
‫السنوات األخرية نسبة حــدوث األﲬاج اجللدية الناجـــمة املبـيضات (‪ )Candidiasis‬والرشاشـيات ( ‪)Aspergillosis‬‬
‫عن اإلصابة بالفــطريات ‪Mycoses‬ن]‪ [1‬وتؤدي الفطريات واملستخفيات (‪ )Cryptococcosis‬اكثر انتشارا بني‬
‫دور ًا مه ًام يف إحداث اﲬاج لﻺنسان وتسبب إصابات ﳐتلفة املرﴇ املعتلني مناعيا مقارنة بغريهم من املــرﴇ]‪. [1,4‬‬
‫ترتاوح من االلتهابات اجللدية السطحية إىل غزو األعضاء وقد زادت حــاالت االﲬــاج الفطرية االنتهازية يف اﻵونة‬
‫واألنسجة الداخلية يف جسم املضيف‪ ،‬وان هذه االﲬاج االخرية نتيجةلقدرة اخلامئر والفطريات االخرى ألحداث‬
‫عــادة ما حتــدث نتيجة لالنخفاﺽ يف دفــاعــات املضيف اﲬاج متعددة لﻺنسان من جهة وبالتزامن مع احلالة املناعية‬
‫الطبيعية أو التعرﺽ إىل النمو الكثيف للفطريات االنتهازية للمضيف و العوامل البيئية االخرى من جهة اخرى‪.‬‬
‫تعد ﲬــرية املبيضات ‪ Candida‬مــن اهـــم واكثر‬ ‫مسببة أمراﺽ ﳐتلفة للمضيف ]‪.[2‬‬
‫ومتـتلك الفطـريات القابلية عىل إحداث االﲬاج لﻺنسان الفطريات االنتهازية املمرضة التي تسبب اﲬــاج جلدية‬
‫بسبب قابليتها عىل النمو يف الدرجة احلرارية جلسم اإلنسان وجهازية المتالكها الكثري من عوامل الرضاوةمتكنها من‬
‫(‪ )37‬ﹾم وإنتاج ابواﻍ فطرية صغرية احلجم ﳑا يسهل دخوهلا غزو انسجة املضيف‪ ،‬وتعدمنالفطريات ثنائية الشكل التي هلا‬
‫ال عن القابلية عىل تكوين خيوط فطرية حقيقية (‪)True hyphae‬‬ ‫والتصاقها باخلاليا الطالئية ألنسجه املضيف فض ً‬
‫إنتاجها مواد مساعدة مثل السموم واإلنزيامت التي يمكنها أن وخيوط فطرية كاذبة (‪ [5,6] )Pseudo hyphae‬وتسبب‬
‫املبيضات أمراض ًا ﳐتلفة ولكنها أمراﺽ ﲪيدة نسبي ًا تصيب‬ ‫تتغلب عىل ميكانيكية الدفاع املناعي يف جسم املضيف ]‪.[3‬‬
‫تبدأ االﲬــاج الفـــطرية بشكل مفاجﺊ وتتطور بﴪعة الغشاء املخاطي أو اجللدي يف االنسان السليم‪ ،‬ولكنها قد‬
‫وتبقى ملدد طويلة وقد يكون بعضها مهدد ًا للحياة إذا ﱂ تكون مصدر ًا مه ًام لالﲬاج والوفاة يف املرﴇ الذين يعانون‬
‫يعالج يف املــــــراحل املبكرة من حــدوث اخلمج‪ ،‬ويعد من االعتالل املناعي بصورة خاصةوتسبب األنواع العائدة‬
‫السبب الرئيس يف زيــادة االﲬــاج الفطريات يف السنوات إىل جنس الـ ‪ ،Candida‬والس رّيام الـ ‪ C. albicans‬الذي‬
‫االخـــرية هــو تــزايــد اعـــداد املـــرﴇ املثبطني مناعيا مثل يعد من اكثر االنواع عزال من املرﴇ جمموعة من اإلصابات‬
‫مرضيالﴪطان (‪ )Cancers‬والسكري (‪ )Diabetes‬و تعرف بداء املب رّيضات (‪ ،)Candidiasis‬إذ يعد هذا النوع‬
‫الفشل الكلوي ( ‪ )Kidney failure‬واأليدز (‪ )AIDS‬املسبب الرئيس هلذا املرﺽ كام تعد الـ ‪ C. albicans‬من‬
‫وامــراﺽ االمناعة الذاتية‪ ،‬فضال عن األشخاص الذين املمرضات االنتهازية التي تتواجد بصورة طبيعية عند‬
‫يتلقون ادوية مضعفة اوكابحة للجهاز املناعي مثل مرﴇ األشــخاص االصحاء حيث توجد يف القنـــــــاة اهلضــــــمية‬
‫نقل األعــضــاء (‪ )Transplantation‬وغــريهــا من والفــــم و املــــهبل واجللد ]‪. [7,8,9‬‬
‫ويعرف االعتالل املناعي بانه احلالة التي تضعف فيها‬ ‫امــــــراﺽ االعتالل املناعي او االمراﺽ املضعفة للجهاز‬

‫‪51‬‬ ‫‪Quarterly Refereed Journal for Natural and Engineering science‬‬

‫‪Vol. 3, No. 5 and 6, P. (49-61)A‬‬
‫ﻫﺪى ﻣﺤﻤﺪ ﻛﺎﻇﻢ ﺟﻮاد‪ ،‬وﻓﺎء ﺻﺎدق ﻣﺤﺴﻦ أﻟﻮزﻧﻲ‪ ،‬زﻫﻴﺮ ﺣﻤﻴﺪ ﻋﺒﻮد‬

‫قدرة جهاز املناعة عىل مقاومة األمراﺽ او الدفاع عن اجلسم بسبب الوسط اليوريمي(‪ )Uremic milieu‬حيث ﳛصل‬
‫عند مهامجة االحياء املجهرية واخلاليا الغريبة‪ ،‬وحتدث تلك اخللل يف كال من املناعة اخللوية واخللطية‪ .‬ويتضمن اخللل‬
‫احلالة اما بسبب خلل او ضعف يف احد مكونات اجلهاز يف املناعة اخللوية قلة اعــداد اخلاليا اللمفاوية اضافة إىل‬
‫املناعي اخللوية (اخلاليا البلعمية واللمفاوية التائية والبائية) حدوث خلل يف كميات وأنشطة جمموعة اخلاليا اللمفاوي‬
‫واخللطية (املتمم واالجسام املضادة)‪ .‬وان هذا اخللل سيزيد التائية ‪ ،‬ولذلك تنخفﺾ استجابة اخلاليا اللمفاوية ملضادات‬
‫من حساسية املرﴇ لﻺصابة بتلك اخلامئر نتيجة لفقدان اجلينات املحفزة ‪ ،‬وضعف عملية البلعمة‪ ،‬اما اخللل الذي‬
‫العائل للعديد من الوسائل الدفاعية ‪ ،‬و ان االﲬاج اجللدية ﳛصل يف املناعة اخللطية يعود معظمها إىل ضعف يف وﻇيفة‬
‫ترتافق مع حدوث االعتالالت املناعية مثل امرﺽ نقص خاليا التائية املساعدة وذلك يؤثر عىل عملية إنتاج األجسام‬
‫املناعة (‪ )Immunodeficiency‬وأمراﺽ املناعة الذاتية املضادة ]‪ . [16‬وتظهر الكريات البيﺾ ضعف يف النشاط‬
‫((‪ Autoimmune‬وان املرﴇ الذين يعانون من امرﺽ يف املــرﴇ الذين يعانون من الفشل الكلوي حيث ان‬
‫االعتالل املناعي غالبا ما يكون اجللد لدﳞم غري طبيعي خاليا الدم البيضاء متعددة االنوية تفشل يف باهلجرة بشكل‬
‫ويصاب بعدد من االمراﺽ ]‪ [10,11‬كالﴚء الذي ﳛصل صحيح وتظهر خل ً‬
‫ال يف عملية البلعمة التي تكون سببا يف‬
‫ملرﴇ الﴪطان الذين خضعوا للعالج الكيمياوي والذي زيادة القابلية لاللتهابات يف املرﴇ الفشل الكلوي املزمن‬
‫يــؤدي إىل انخفاﺽ يف اعــداد الـ ‪ WBC‬وبذلك نالحﻆ ]‪ . [17‬و تنتج احلروق تغيريات يف نمط االستجابة املناعية‬
‫هبوط يف اجلهاز املناعي وتغاير يف العديد من املعايري املناعية للمريﺾ ومؤدية إىل ضعف يف االستجابة املناعية وتزيد‬
‫لدياملرﴇ الذين يتعاجلون كياموي ًا حيث ان خاليا الدم حساسية املرﴇ لالﲬاج ]‪ [18‬أن االستجابة املناعية األولية‬
‫البيﺾ تعتربمن اخلطوط الدفاعية االوىل يف مكافحة االﲬاج (‪ )Primary immune response‬التي تظهر حاالً بعد‬
‫وااللتهابات البكتريية والفطرية و ذلك يؤدي بــدوره إىل االصابة والتي يعقبها انخفاﺽ يف النشاط اخللوي املناعي‬
‫اإلصابة باملمرضات االنتهازية ]‪ [12‬وان اخللل يف هرمون دور مرتبط باحتامل زيــادة احلساسية للخمج بالعوامل‬
‫االنسولني ملرﴇ السكري املؤدي إىل ارتفاع نسبة السكر يف املسببة لألمراﺽ املتنوعة ]‪ ، [19‬وان اجلهاز املناعي العفوي‬
‫الدم يؤثر عىل اجلهاز املناعي ونشاطاته اذ يتميز مرﴇ السكري يستجيب حاالً عقب احلرق بتحفيز التفاعالت االلتهابية‬
‫بكوهنم اكثر حساسية لالصابات املخـتلفة وذلك نتيجة املوضعية واجلهازية للجسم‪ ،‬وان هذه االستجابة تساهم‬
‫لتحويـرات املناعية الكبرية التي يعـاين منها املصاب بمرﺽ يف تنشيط االستجابة املناعية التكيفية‪ ،‬وان التغيريات التي‬
‫السـكري ]‪ . [13,14,15‬ويعاين مرﴇ الفشل الكلوي يف حتصل يف املناعة التكيفية عقب حالة احلــروق تتمثل يف‬
‫املراحل النهائية من خلل يف اجلهاز املناعي ‪ ،‬وايضا ﳛصل انخفاﺽ العدد الكيل للخاليا التائية اثناء االسبوع االول‬
‫ضعف يف الدفاعات وزيادة حدوث االﲬاج وعىل الرغم من وخاصة يف حالة احلروق الشديدة‪ ،‬وبذلك تتأثر الوﻇائف‬
‫الية اخللل املناعي غري مفهومة بصورة كاملة ‪ ،‬ولكنها قد املناعية املعتمدة عىل اخلاليا التائية التي قد تكون مرتبطة‬
‫تتعلق باخللل الذي ﳛصل يف عملية األيﺾ والتغذية الناﲡة بانخفاﺽ انتاج احلركيات اخللوية و سـوف ينخفﺾ بعـد‬

‫‪Quarterly Refereed Journal for Natural and Engineering science‬‬ ‫‪52‬‬

 ‫‪Vol. 3, No. 5 and 6, P. (49-61)A‬‬
‫ﻫﺪى ﻣﺤﻤﺪ ﻛﺎﻇﻢ ﺟﻮاد‪ ،‬وﻓﺎء ﺻﺎدق ﻣﺤﺴﻦ أﻟﻮزﻧﻲ‪ ،‬زﻫﻴﺮ ﺣﻤﻴﺪ ﻋﺒﻮد‬

‫احلروق الشديدة انتاج الكلوبيولني املناعي ‪ Ig G‬استجابة (‪ )Needle‬إىل رشﳛة زجاجية نظيفة تم وضع عليها مسبق ًا‬
‫قطرة من صبغة الالكتوفينول الــزرقــاء(‪Lactophenol‬‬ ‫إىل املستضدات املعتمدة عىل اخلاليا التائية ]‪. [20‬‬
‫ونتيجة النتشار حاالت االﲬاج اجللدية الفطرية املرافقة ‪ )cotton blue‬ووضـــع غــطــاء الــرشﳛــة (‪Cover‬‬
‫حلاالت االعتالل املناعي لذا هدفت هذه الدراسة إىل بيان عالقة ‪،(slip‬عندها فحصـت حتت املجهر بقوة (‪ )X40‬ملالحظة‬
‫نوع املرﺽ املناعي املسؤول عن حالة االعتالل املناعي وحدة شكل اخلاليا املتربعمة للخمرية ( ‪)Budding cells‬‬
‫اخلمج اجللدي الفطري وذلك بعزل وتشخيص الفطريات وطريقة اتصاهلا ببعضها ]‪. [21‬‬
‫املسؤولة عن االﲬاج اجللدية الظاهرة يف املرﴇ معتيل اجلهاز‬
‫‪ .1.2‬اﻻخﺘبارات اخلاصة بﺘﺸﺨيﺺ ﲬرية ‪Candida‬‬ ‫املناعي وذلك بالطرق الكيموحيوية واجلزيئية‪.‬‬
‫‪ .1.1.2‬فﺤﺺ ﺗكوين أنبوﺏ اﻹنبات ‪Germ tube‬‬
‫‪formation test‬‬ ‫‪ .2‬ﻃراﺋﻖ العمل‬
‫وضع(‪)0.5‬مل من مصل االنسان يف انبوبة اختبار معقمة‬ ‫• مجع العينات‪ :‬تم مجع (‪ )50‬مسحة جلدية من (‪)50‬‬
‫مريﺾ يعانون من حالة االعتالل املناعي وهم املراجعون ولقحت بخمرية الـ ‪ ،Candida‬ثم حضن العالق بدرجة‬
‫ملدينة احلسني الطبية وباألخص من املراجعني لردهة العالج حرارة (‪)37‬م‪ º‬ملدة(‪ )3‬ساعات‪ ،‬بعد احلضن تم وضع قطرة‬
‫الكيمياوي وعيادة السكري وقسم الكلية الصناعية وردهة من هذا العالق عىل رشﳛة زجاجية ووضــع فوقها غطاء‬
‫احلــروق حيث تراوحت اعامرهم من (‪ )80-1‬سنة ومن الرشﳛة وفحصت حتت املجهر بقوة ‪ X40‬ملالحظة تكوين‬
‫كال اجلنسني‪ ،‬حيث تم مجع املسحات اجللدية وزراعتها أنبوب اإلنبات ]‪. [22‬‬
‫عىل االوساط الزرعية اخلاصة بالفطريات( وسط سابرويد‬
‫دكسرتوز اكار ووسط البطاطا دكسرتوز اكار املضاف له ‪ .2.1.2‬النمو عﲆ درجة ﺣرارة ‪45‬م‪º‬‬
‫‪Growth at a temperature of 45 º‬‬ ‫املضاد البكتريي الـ (‪ )Chloramphenicol‬و حضنت‬
‫تــم هــذا الفحص حسب طريقة ‪ Pinjon‬ومجاعته‬ ‫االطباق هوائي ًا يف احلاضنة ملدة من يومني إىل اربعة اسابيع‬
‫يف درجة حــرارة(‪ )28‬ﻡ‪.°‬ثم شخصت العزالت الفطرية (‪. [23] )1998‬‬
‫واخلامئر باالعتامد عىل الصفات الزرعية للمستعمرات‬
‫‪Urease test‬‬ ‫الفطرية النامية من حيث شكل املستعمرة‪ ،‬لوهنا و قطرها ‪ .3.1.2‬اخﺘبار انزيم اليوريز‬
‫تم هذا الفحص حسب طريقة ‪Collins‬ومجاعته (‪.[22])2004‬‬ ‫و رائحتها و لزوجتها و ارتفاعها عن سطح الوسط و شكل‬
‫حافة املستعمرة وغريها من الصفات األخــرى‪.‬وأجــري‬
‫الفحص املجهري للعزالت وذلك بنقل جزء من املستعمرة ‪ .4.1.2‬النمو عﲆ وسﻂ الكرومو اكار ‪CHROM agar‬‬
‫زرعت اخلامئر عىل وسط الكرومو اكار ]‪ [24‬وقراءة‬ ‫النامية عىل الوسط الصلب بوساطة الناقل (‪)Loop‬‬
‫بالنسبة للخامئر اما باقي الفطريات اخليطية فيكون باإلبرة نتائج الزرع من خالل التغاير اللوين و وفقا للجدول االيت‪:‬‬

‫‪53‬‬ ‫‪Quarterly Refereed Journal for Natural and Engineering science‬‬

‫‪Vol. 3, No. 5 and 6, P. (49-61)A‬‬
‫ﻫﺪى ﻣﺤﻤﺪ ﻛﺎﻇﻢ ﺟﻮاد‪ ،‬وﻓﺎء ﺻﺎدق ﻣﺤﺴﻦ أﻟﻮزﻧﻲ‪ ،‬زﻫﻴﺮ ﺣﻤﻴﺪ ﻋﺒﻮد‬

‫جدول رقم )‪ :(2‬خطوات ﺗقنية الـ )‪ (PCR‬اخلاصة باملبيضات‬ ‫جدول رقم )‪ :(1‬يبني نﺘاﺋﺞ الزرﻉ للﺨﲈﺋر عﲆ وسﻂ الكرومواكار من‬
‫خالل الﺘغاير اللوين‬
‫ﻋﺪﺩ‬ ‫ﺩﺭﺟﺔ‬
‫ﺍﻟﺰﻣﻦ‬ ‫ﺍﻟﺨﻄﻮﺍﺕ‬ ‫ﺕ‬ ‫ﺍﻟﻠﻮﻥ‬ ‫ﺍﻟﻌﺰﻟﺔ‬
‫ﺍﻟﺪﻭﺭﺍﺕ‬ ‫ﺍﻟﺤﺮﺍﺭﺓ‬
‫‪Initial Denatur-‬‬ ‫ﺍﻟﻠﻮﻥ ﺍﻻﺧﻀﺮ ﺍﻟﻔﺎﺗﺢ‬ ‫‪C.albicans‬‬
‫‪1‬‬ ‫‪ 4‬ﺩﻗﻴﻘﺔ‬ ‫‪ 94‬ﻡ‪°‬‬ ‫‪1‬‬
‫‪ation‬‬ ‫ﺍﻟﻠﻮﻥ ﺍﻻﺯﺭﻕ ﺍﻟﻤﻌﺪﻧﻲ‬ ‫‪C.tropicalis‬‬
‫‪ 30‬ﺛﺎﻧﻴﺔ‬ ‫‪ 94 Denaturation 2‬ﻡ‪°‬‬ ‫ﺍﻟﻠﻮﻥ ﺍﻻﺑﻴﺾ‬ ‫‪C.parapsilosis‬‬
‫ﺍﻟﻠﻮﻥ ﺍﻻﺭﺟﻮﺍﻧﻲ ﺍﻭ ﺍﻟﻮﺭﺩﻱ‬ ‫‪C.kruse ، C.gabratai‬‬
‫‪30‬‬ ‫‪ 30‬ﺛﺎﻧﻴﺔ‬ ‫‪ 55‬ﻡ‪°‬‬ ‫‪Annealing‬‬ ‫‪3‬‬

‫‪ 1‬ﺩﻗﻴﻘﺔ‬ ‫‪ 72‬ﻡ‪°‬‬ ‫‪Extension‬‬ ‫‪4‬‬ ‫‪ .2.2‬الﺘﺸﺨيﺺ باعﺘﲈد ﺗﻔاعل البلمرة الﺘسلسيل‬

‫‪1‬‬ ‫‪ 4‬ﺩﻗﻴﻘﺔ‬ ‫‪ 72 Final Extension‬ﻡ‪°‬‬ ‫‪5‬‬ ‫‪ .1.2.2‬اسﺘﺨالﺹ وﺗنقيةالـ ‪DNA‬‬
‫‪ 4‬ﻡ‪°‬‬ ‫‪ 6‬ﺩﺭﺟﺔ ﺣﺮﺍﺭﺓ ﺍﻟﺘﺒﺮﻳﺪ‬ ‫ﺍﺳﺘﺨﻠﺺ ‪ DNA‬ﺧﻤﻴﺮﺓ ﺍﻟﻤﺒﻴﻀﺎﺕ ‪Candidasp‬‬
‫‪ .3.2.2‬ﺗقييم نﺘاﺋﺞ البلمرة بالرتﺣيل الكﻬرباﺋي‪Gel-‬‬ ‫ﻭﻓﻘﺎ ﻟﺘﻌﻠﻴﻤﺎﺕ ﺍﻟﺸﺮﻛﺔ ‪ bio-basic‬ﺍﻟﻜﻨﺪﻳﺔ ‪.‬‬
‫‪: Electrophoresis‬‬
‫‪ -1‬وضع(‪ )100‬مل من الدراﺉ(‪ )TBE‬يف بيكر واضيف‬ ‫‪ .2.2.2‬ظروﻑ البلمرة ‪PCR Condition‬‬
‫لــتــضــخــيــم الـــيـــة(‪ )1.2‬غــم مــن مسحوق االكــــاروز ثــم اضــيــف إىل‬ ‫اســـتـــخـــدمـــت تــقــنــيــة (‪)PCR‬‬
‫الــــــــ(‪ )DNA‬املــســتــخــلــص مـــن الـــعـــزالت الــفــطــريــة املزيج السابق (‪ )10‬مايكروليرت من صبغة (‪Ethidium‬‬
‫بـــاســـتـــخـــدام الــــــــبــــــــادﺉ(‪ )ITS1‬الــــــذي تــتــابــعــه ‪ )bromide‬وبعدها سخن البكر إىل درجة الغليان بحيث‬
‫(‪ )5-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3‬وبطول تذوب مجيع مكوناته وبعدها ترك ليربد إىل درجة حرارة‬
‫(‪ )60-50‬م‪.O‬‬ ‫‪ )19( bp‬والبادﺉ (‪ )ITS4‬الذي تــتابـعه‬ ‫ا‬

‫( ‪ -2 )5-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3‬حرضت صفيحة اسناد االكاروز (‪ )Tray‬وثبت مشط‬

‫وبطول ‪ .)20( pb‬وتم سحب (‪ )0.8‬ميكروليرت من كل تكوين احلفر (‪ )Comb‬عىل بعد (‪)1‬سم من احد طريف‬ ‫ة‬

‫بــادﺉ مع اخــذ ‪( 1‬مايكروليرت) مــن (‪ )DNA‬اخلمرية الصفيحة ثم صب هــالم االكـــاروز يف الصفيحة وترك‬
‫وأضيف إىل خليط التفاعل(‪ )Master mix‬املجهز من ليتصلب ملدة (‪)30‬دقيقة‪.‬‬
‫رشكة(‪ )Promega‬واكمل احلجم إىل (‪ )20‬مايكروليرت ‪ -3‬نقل اهلــالم املتصلب إىل حــوﺽ الرتحيل الكهربائي‬
‫باملاء املقطر‪ ،‬مزجت املواد يف انبوبة (‪ )PCR‬وبعد االنتهاء (‪ )Electrophoresis tank‬وغطي بدراﺉ (‪ )TBE‬بارتفاع‬
‫من مجيع االضافات مزجت جيدا ونقلت إىل جهاز البلمـــرة (‪ )3‬ملم (حتى ينغمر سطح اهلالم) ثم يرفع مشط تكوين احلفر‪.‬‬
‫(‪ )PCR thermal cycler‬حيث تم تضبط اجلهاز كـــام يف ‪ -4‬وبعد انتهاء عملية بلمرة العينات ﲪلت (‪ )5‬مايكرو ليرت‬
‫من ناتج البلمرة لكل عينة يف حفر هالم االكازو املوضوع‬ ‫اجلدول اﻵيت‪:‬‬
‫يف حوﺽ الرتحيل وتركت احلفرة رقم واحــد للمعلمة‬

‫‪Quarterly Refereed Journal for Natural and Engineering science‬‬ ‫‪54‬‬

 ‫‪Vol. 3, No. 5 and 6, P. (49-61)A‬‬
‫ﻫﺪى ﻣﺤﻤﺪ ﻛﺎﻇﻢ ﺟﻮاد‪ ،‬وﻓﺎء ﺻﺎدق ﻣﺤﺴﻦ أﻟﻮزﻧﻲ‪ ،‬زﻫﻴﺮ ﺣﻤﻴﺪ ﻋﺒﻮد‬

‫اجلزيئية (ﲪلت احلفرة االوىل بـ(‪ )7‬مللرت) معلمة جزيئيا االعىل بني مرﴇ السكري بنسبة (‪ )40%‬وبواقع (‪)8‬‬
‫‪ M‬ووضعت يف ﻇــروف ترحيل (‪ )100‬فولت و (‪ )30‬عزالت مقارنة ببقية حاالت االعالل املناعي ثم كل من‬
‫دقيقة وربطت االقطاب بصورة مناسبة بحيث يربط القطب مرﴇ الﴪطان واحلــروق ومرﴇ الفشل الكلوي(‪)4‬‬
‫املوجب باملوجب املوجود بمجهز الطاقة جلهاز الرتحيل عزالت وبنسبة (‪ )20%‬لكل منهم و أﻇهرت جليا ان‬
‫ﲬائر املبيضات (‪)Candida‬حققت اعىل نسبة عزل‬ ‫الكهربائي والقطب السالب بالسالب ‪.‬‬
‫‪ -5‬اجريت عملية الرتحيل بفولتية مقدراها(‪ )100‬فولت وبواقع (‪ )10‬عــزالت وبنسبة (‪ )50%‬و(‪ )8‬عزالت‬
‫و ملدة (‪ )30‬دقيقة حلني وصول الصبغة الزرقاء إىل هناية مــن فطر (‪ )Aspergillus‬وبنسبة (‪ )40%‬وفطر‬
‫اهلالم ثم ايقاف عملية الرتحيل‪ ،‬بعدها تم فحص اهلالم (‪ )Penicillium‬بعزلتني وبنسبة (‪ )10%‬وباالعتامد‬
‫حتت االشعة فوق البنفسجية بطول موجي(‪ )320‬نانوميرت عىل التشـــخيص الوراثــــي فـــقد شخص نوعــــني من‬
‫و الكامريا املحمولة عىل جهاز الطيف الضوئي وصورت ﲬــــائر املبيــــضات مها الـ (‪ )C.albicans‬بواقــــع‬
‫سبـــع عزالت والـ (‪ )C. parapsilosis‬بواقع ثالث‬ ‫النتائج ووثقت ‪.‬‬
‫عزالت‪ .‬حيث تعود ثالث عزالت الـ (‪) C.albicans‬إىل‬ ‫‪ .3‬النﺘاﺋﺞ واملناقﺸة‬
‫اﻇهرت نتائج الدراسة احلالية وكام موضح يف اجلدول مرﴇ احلروق وعزلتني إىل مرﴇ السكري وعزلة واحدة‬
‫(‪ )3‬عزل بعﺾ االجناس الفطرية واخلامئر من املرﴇ لكل من مرﴇ الﴪطان والفشل الكلوي بينام تعود ﲬرية‬
‫معتيل اجلهاز املناعي فقد توزعت الــعــزالت الفطرية الـ(‪ )C. parapsilosis‬إىل مرﴇ احلروق والﴪطان‬
‫بني املــرﴇ املعتلني مناعيا حيث كانت نسبة االصابة والفشل الكلوي بعزلة واحدة لكل منهم‪.‬‬
‫جدول)‪ :(3‬ﺗردد العزﻻت الﻔطرية املعزولة من مرﴇ اﻻﲬاﺝ اﳉلدية معﺘيل اﳉﻬاز املناعي‪.‬‬

‫ﺍﻟﻌﺰﻻﺕ ﺍﻟﻔﻄﺮﻳﺔ‬ ‫ﻣﺠﺎﻣﻴﻊ ﺍﻟﺪﺭﺍﺳﺔ ﻣﻦ ﺍﻟﻤﺮﺿﻰ‬

‫ﻣﺠﻤﻮﻉ ﺍﻟﻔﻄﺮﻳﺎﺕ ﺍﻟﻤﻌﺰﻭﻟﺔ‬
‫‪Penicillium Aspergillus‬‬ ‫‪Candida‬‬ ‫ﻣﻌﺘﻠﻲ ﺍﻟﺠﻬﺎﺯ ﺍﻟﻤﻨﺎﻋﻲ‬

‫ﻣﺮﺿﻰ ﺍﻟﺴﺮﻃﺎﻥ‬
‫‪(20%) 4‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪2‬‬ ‫‪2‬‬
‫‪n =13‬‬
‫ﻣﺮﺿﻰ ﺍﻟﺴﻜﺮﻱ‬
‫‪(40%) 8‬‬ ‫‪2‬‬ ‫‪4‬‬ ‫‪2‬‬
‫‪n= 11‬‬
‫ﺍﻟﻔﺸﻞ ﺍﻟﻜﻠﻮﻱ‬
‫‪(20%) 4‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪2‬‬ ‫‪2‬‬
‫‪n =11‬‬
‫ﻣﺮﺿﻰ ﺍﻟﺤﺮﻭﻕ‬
‫‪(20%) 4‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪-‬‬ ‫‪4‬‬
‫‪n =15‬‬
‫ﺍﻟﻤﺠﻤﻮﻉ‬
‫‪20‬‬ ‫)‪2 (10%‬‬ ‫)‪8 (40%‬‬ ‫)‪10 (50%‬‬
‫‪n =50‬‬

‫‪55‬‬ ‫‪Quarterly Refereed Journal for Natural and Engineering science‬‬

‫‪Vol. 3, No. 5 and 6, P. (49-61)A‬‬
‫ﻫﺪى ﻣﺤﻤﺪ ﻛﺎﻇﻢ ﺟﻮاد‪ ،‬وﻓﺎء ﺻﺎدق ﻣﺤﺴﻦ أﻟﻮزﻧﻲ‪ ،‬زﻫﻴﺮ ﺣﻤﻴﺪ ﻋﺒﻮد‬

‫تقاربت نســـبة العـزل بالنسبة خلامئر املبيضات لدراسة ‪ ،)Rhodotorulaspp‬و(‪Saccharomyces spp‬‬

‫‪ Mohammadi‬ومجاعـــــته (‪ [25] )2015‬املعزولة من و ‪ )Alternariaspp‬بنسبة(‪ )4.1%‬لكل منهم‪ ،‬وأخريا‬
‫اﲬاج االﻇافر حيث ُعزلت ﲬرية (‪ )C.albicans‬بنـسبة جنس (‪ )Cladosporiumspp‬بنسبة (‪ ،)2.1%‬كام‬
‫(‪ )41.1%‬وﲬيـرة (‪)parapsilosis.C‬بنسبة (‪ )21.4%‬وجد ان ﲬرية الـ (‪ )C. albicans‬متثل الغالبية العظمى‬
‫و(‪)12.8%( )C. tropicalis‬و(‪ )9.4%()C. kefyr‬مــن عــزالت هــذه اخلــامئــر تالها الــنــوع (‪ )C.krusi‬و‬
‫باإلضافة إىل انواع اخرى‪ .‬كام ان (‪ )C. parapsilosis‬النوع(‪ .)C. parapsilosis‬إذ كان تأثري انخفاﺽ اعداد‬
‫لدﳞا قابلية إلنتاج طبقة ﳐاطية من مواد سكرية خارج خلوية خاليا الدم البيضاء وخصوصا اخلاليا العدلة (‪)Neutrophil‬‬
‫ولدﳞا قــدرة لاللتصاق وتكوين االغشية احليوية(‪ Bio‬نتيجة العالج الكيمياوي(‪ )Chemotheropy‬واضح ًا يف‬
‫‪ )film‬وهذا ما جيعلها اكثر عزال من جروح املرﴇ الذين زيادة حصول االﲬاج الفطرية وشمل هذا التأثري مجيع انواع‬
‫خيضعون لألدوات يف املستشفى من قسطرات وريدية وجهاز الﴪطانات‪ ،‬اي ان اخللل يف اجلهاز املناعي مهد حلصول‬
‫الديلزة الدموية ملرﴇ الغسل الكلوي كام يعترب احد االنواع اخلمج الفطري وكذلك لبقية االنواع من االعتالل املناعي‪.‬‬
‫التي تتواجد بصورة طبيعية يف اجلسم ضمن النسبة الطبيعية ختتلف نسبة حدوث االﲬاج اجللديــــــة من مكان إىل اخر‬
‫يف األشخاص األصحاء عىل اجللد واالﻇافر واالغشية باختالف الطبيعة اجلغرافية والثقافيــة واالقتصادية باإلضافة‬
‫إىل االختالفــــــــــات العرقيــــــــــــة (‪ ،)Races‬كام تتأثر‬ ‫املخاطية]‪. [26‬‬
‫اما جنس (‪ )Aspergillus‬فيعد من الفطريات إصابـــــة الفرد باالﲬاج اجللديـــة بعوامل كثرية منها عوامل‬
‫االنتهازية والتي تؤدي إىل امــراﺽ خطرية وجهازية يف خاصة بالفرد وتشمل عوامل مناعية وبيئية‪ ،‬وايضا ترجع إىل‬
‫حاالت االعتالل املناعي ‪ ،‬وقد شكرّل يف اﻵونة األخرية نسبة طبيعة اجلراثيم املسببة ووبائيتها يف ذلك املجتمع ]‪.[28‬‬
‫متزايدة من حاالت اإلصابات الفطرية يف مرﺽ الﴪطان ‪ .1.3‬ﺗﺸﺨيﺺ العزﻻت الﻔطرية ‪Diagnosis of‬‬
‫خصوص ًا يف حاالت(‪ )Acute leukemia‬حيث وصلت ‪fungal isolates‬‬
‫النسبة إىل (‪ )20-50%‬وكان (‪ )A.fumigutus‬هو اكثر ‪ .1.1.3‬الﺘﺸﺨيﺺ املﺨﺘﱪي والكيموﺣيوي ‪Diagnosis‬‬
‫‪and Biochemical laboratory‬‬ ‫فطر معزول ‪.‬‬
‫ويفدراسةاجريتمنقبلالشمري(‪[27])2003‬يفبغداد تم تشخيص االنواع الفطرية املعزولة بشكل اويل اعتامدا عىل‬
‫عىل األنواع الفطرية املصاحبة ملرﴇ الﴪطان وجد ان ﲬرية الصفات الزرعية للمستعمرات النامية عىل االوساط الزرعية‬
‫الـ (‪ )Candida spp‬شكلت النسبة العظمى من العزالت اخلاصة بالفطريات مثل شكل ولــون املستعمرة وكذلك‬
‫وقد بلغت نسبتها (‪ )66.7%‬تالها الفطر (‪ Aspergillus‬اعتامدا عىل عدد من االختبارات الكيموحيوية‪ .‬حيث ﻇهرت‬
‫‪ )spp‬بنسبه بلغت (‪)8.3%‬وكــام سجل انواع اخرى من مستعمرات ﲬرية املبيضات ‪ C.albicans‬النامية عىل وسط‬
‫الفطريات بنسب ﳐتلفة إذ متثلت بـ (‪ Cryptococcus‬السابرويد اكار (‪ )SDA‬بعد (‪ )24-48‬ساعة من احلضن‬
‫و(‪ Geotricumspp‬و يف درجة (‪ )30‬م‪ °‬والتي تتميز بشكلها الدائري ذات قطر‬ ‫‪ )spp‬بنسبة (‪)6.25%‬‬

‫‪Quarterly Refereed Journal for Natural and Engineering science‬‬ ‫‪56‬‬

 ‫‪Vol. 3, No. 5 and 6, P. (49-61)A‬‬
‫ﻫﺪى ﻣﺤﻤﺪ ﻛﺎﻇﻢ ﺟﻮاد‪ ،‬وﻓﺎء ﺻﺎدق ﻣﺤﺴﻦ أﻟﻮزﻧﻲ‪ ،‬زﻫﻴﺮ ﺣﻤﻴﺪ ﻋﺒﻮد‬

‫يرتاوح بني (‪ )3-0.5‬ملم وتكون كريمية اللون ناعمة وملساء النمو عىل وسط الكروم اكار (‪ ،)CHROMagar‬ويعتمد‬
‫و مرتفعة عن سطح الوسط رطبة أو ﳐاطية ذات حواف هذا االختبار عىل التغاير اللوين بني انواع املبيضات ﳑايسهل‬
‫عملية التميز بني االنواع املختلفة حيث انالية هذااالختبار‬ ‫حمددة‪ ،‬مع رائحة ﳑيزة كام مبني بالشكل (‪.)1‬‬
‫تعتمد عىل احتواء هــذا الوسط عىل مــواد اســاس مولدة‬
‫للون(‪)Chromogenic substrates‬والتي تتفاعل مع‬
‫االنزيامت املختلفة التي تفرزها انــواع املبيضات ﳑايؤدي‬
‫إىل انتاج مستعمرات ملونة وبالتايل ﳑكن تشخيص انواع‬
‫املبيضات باالعــتــامد عىل التـــغاير اللوين]‪[30,31,32,33‬‬
‫‪ .‬وقد اﻇهرت النتائج باالعتامد عىل وسط الكروم اكار اللون‬
‫االخرض املميز للنوع (‪ )C.albicans‬بينام ﻇهر الـ (‪C.‬‬
‫‪ )parapsilosis‬بالون االبيﺾ كام موضح يف الشكل (‪)2‬‬
‫ﺷكل)‪ :(1‬ﲬاﺋر املبيضات البيضاء )‪ (C.albicans‬النامية عﲆ وسﻂ )‪ (SDA‬و‬
‫ﲢﺖ درجة)‪ (30‬م‪ °‬وملدة )‪(48- 24‬ساعة‪.‬‬

‫وقد تبني من اجراء اختبار تكـوين انبوبة االنبات ان هلذه‬

‫اخلمرية القابلـية عىل تكوينه حيث يظهر بشكل بروز خيطي‬
‫رفيع وطويل من خاليا اخلمرية وبدون حواجـز او ختﴫات‬
‫‪ .‬ويعد فحص تكوين أنبوب اإلنبات من الفحوصات‬
‫ﺷكل)‪ :(2‬اخلﲈﺋر املبيضات عﲆ وسﻂ الكرومو أكار العزﻻت ‪1‬و‪ 2‬و‪8‬‬ ‫املهمة والسهلة و التي تستـخدم يف التشخيص الﴪيع‬
‫)‪ (C.parapsilosis‬و العزﻻت البقية ﺗعود ﺇﱃ ﲬرية )‪ (C.albicans‬نامية‬
‫ﲢﺖ درجة )‪ (30‬م‪°‬وملدة )‪ (24‬ساعة ‪.‬‬
‫خلمريةاملبيضات البيضاءوان قابلية تكوين االنبوبة اجلرثومية‬

‫وقد استنتج ‪ Baradkar‬ومجاعته (‪ [34] )2010‬إىل ان‬ ‫تعد من احد عوامل الرضاوة للمبيضات البيضاء ]‪.[6‬‬

‫ان مجيع عزالت املبيضات اعطت نتيجة سالبة لفحص انزيم استخدام هذا الوسط يعد طريقة سهلة وموثوقة لتشخيص‬
‫اليوريز (‪ )Urease test‬وذلك الن جنس املبيضات ضعيف اغلب االنـــواع الشــائعة للمبيـــضات وخاصــة (‪C.‬‬
‫التـحلل لليوريا عىل عكـس انواع جنس (‪ albicans )Cruptococcus‬و ‪ .C. glabrataparapsilosis C‬و‪C.‬‬
‫التي يعـــترب حملل قوي للـــيوريا ]‪ . [29‬وعند اجراء فحــص ‪)tropicalis‬وبحساسية كافية‪ ،‬ويمكن ان يستخدم هذا‬
‫النمــو عىل درجــة حرارة (‪)45‬م‪ °‬تبــني قـــدرة عـزالت الـ الوسط كوسط انتخايب لتشخيص املبارش لالنواع الﴪيرية‬
‫(‪)C.albicans‬عىل النمو بدرجة حـــرارة(‪ )45‬م‪ °‬خالل من املبيضات من خالل التغاير اللوين بني انواع املبيضات‬
‫املختلفة كام اصبح هذا الوسط بديال لوسط طحني الذرة‬ ‫يومني من احلضن مقارنة باالنواع االخرى للمبيضات‪.‬‬

‫ولتاكيد تشخيص املبيضات املعزوله من اجللد اجري فحص واختبار تكوين االنبوبة اجلرثومية وطــرق التشخيص‬

‫‪57‬‬ ‫‪Quarterly Refereed Journal for Natural and Engineering science‬‬

‫‪Vol. 3, No. 5 and 6, P. (49-61)A‬‬
‫ﻫﺪى ﻣﺤﻤﺪ ﻛﺎﻇﻢ ﺟﻮاد‪ ،‬وﻓﺎء ﺻﺎدق ﻣﺤﺴﻦ أﻟﻮزﻧﻲ‪ ،‬زﻫﻴﺮ ﺣﻤﻴﺪ ﻋﺒﻮد‬

‫الكيموحيوية التقليدية مثل ختمي ومتثيل السكريات‪،‬وعىل (‪ 1ITS‬و‪ ) ITS4‬يف(‪ )DNA‬ألنواع املبيضات لذا فأهنا‬
‫الرغم من ذلك اليمكن ان يكون بديال للطرق التقليدية تنتج قطع من(‪ )DNA‬ذات احجام ﳐتلفة باستخدام تفاعل‬
‫للتشخيص بل مكمل هلا‪ ،‬وذلك لكون حمدد يف تشخــيص البلمرة التسلسيل ومن خالل الشكل (‪ )3‬يتبني بان نــواتج‬
‫االنــواع الثــالثة (‪ C. albicans‬و‪ C. Tropicalis‬تفاعل البلمرة املتسلسل لنــــوع(‪ )C.albicans‬كانت‬
‫و ‪ )C.krusei‬بدرجة عالية من الدقة مقارنة مع التنوع ذات حــجم حوالـــي ‪ )550( bp‬بينام كان احلجم بالنسبة‬
‫اهلائل للمبيضات التي اخذت تربز كمسببات مرضية مهمة للنوع (‪)C.parapsilosis‬حوايل ‪ .)530( bp‬اي تم‬
‫احلصول عىل سبعة عزالت من(‪ )C.albicans‬وثالث‬ ‫وخصوصا يف مرﴇ االعتالل املناعي]‪. [35‬‬
‫تم تشخيص العفن (‪ )Aspergillus‬اعتامدا عىل لون عزالت من (‪.)C.parapsilosis‬‬
‫املستعمرات وشكلها اخلارجي وتركيبة خيوطها سواء‬
‫‪3000bp‬‬
‫‪1000bp‬‬ ‫كانت مقسمة او غري مقسمة ولألبواﻍ دور مهم يف تشخيص‬
‫‪500bp‬‬

‫‪100bp‬‬ ‫الفطريات من حيث الشكل واللون واملوقع حيث ﻇهرت‬

‫مستعمرات جنس(‪ )Aspergillus fumigatus‬النامية‬
‫ﺷكل)‪ :(3‬هالم اﻻكاروز لﻸنﲈﻁ الوراﺛية للﺨﲈﺋر ملنﺘﺞ البلمرة‬
‫عىل وسط(‪ )SDA‬مع املضاد احليوي الكلورمفنيكول بلون‬
‫‪ (550-530)bp‬باسﺘﺨدام الزوﺝ البادﺉ)‪ (ITS1/ITS4‬لعزﻻت اخلﲈﺋر‬
‫ﺣيث اﻥ العزﻻت )‪1‬و‪2‬و‪ ( 8‬ﺗعود لـ)‪(C.prapsilosis‬والعزﻻت البقية ﺗعود‬ ‫اخرض شاحب حماط من اخلارج باألبيﺾ‪.‬‬
‫لـ)‪ =M ،(C.albicans‬املعلمة اﳉزيﺌية‬
‫‪ (100)bp‬وﺫلﻚ بﻔولﺘية مقدارها )‪ (100‬فولﺖ‪.‬‬
‫‪ .2.1.3‬ﺗﺸﺨيﺺ اخلﲈﺋر باسﺘعﲈل الطرق اﳉزيﺌية‬
‫‪ Yeasts diagnosis by using molecular‬وجد الباحثني يف اﻵونــة األخــرية ان الفطريات ختتلف يف‬
‫أحجام منطقة(‪ )ITS‬من(‪ )DNA‬وان اجراء تفاعل البلمرة‬ ‫‪methods‬‬
‫تم اجراء التشخيص اجلزيئي جلنس املبيضات باالعتامد عىل مع البوادﺉ املخصصة للنوع الفطري يمكن ان تستهدف‬
‫تفاعل البلملرة املتسلسل لتاكيد التشخيص لعزالت املبيضات هذه املنطقة التي تضم ‪ )5.8( S‬و‪ )28( S‬من (‪)rDNAs‬‬
‫حيث اﻇهرت الدراسة احلالية القابلية العالية لتقنية تفاعل وكذلك ‪ )28( S )18( S‬من (‪ )rDNAs‬التي تؤدي إىل‬
‫البلمرة املتسلسل باالعتامد عىل البوادﺉ ( ‪ ) ITS1,ITS4‬تضــخيم منطقة (‪ ،)ITS‬وقد اعتـــربت هذه الطريقــة‬
‫لتضخيم منطقة(‪ )Internal transcribed spacer‬من الطـرق الســـريع والدقــيقة يف تشـــخيص ﲬـــائر‬
‫(‪ )ITS‬التي حتتوي عىل منطقة(‪ SrDNA- 5.8-ITS1‬املــــبيضات وبـاقل وقـت مـمكن‪[36] .‬‬
‫‪ )ITS2‬لعرشة عزالت من ﲬرية املبيضات و املعزولة من كام جاءت هذه النتائج مقاربة مع نتائج دراسة(‪)Harmal‬‬
‫اجللد بدقة وسعة عالية مقارنة مع الطرق التقليدية املتبعة فقد ومجاعته (‪ [37] )2012‬حيث استخدم الــزوج البادﺉ‬
‫الـــ( ‪ITS‬‬‫بينت النتائج وجود احجام تراوحت بني ‪ )530-550( bp‬العام (‪)ITS1/ITS4‬يف تضخيم منطــقة‬
‫وذلــك باالعتامد عىل االختالف يف االطــوال بني مناطق )ألنـــواع املبيضات (‪ C.albicans‬و‪C.glabrata‬‬
‫‪Quarterly Refereed Journal for Natural and Engineering science‬‬ ‫‪58‬‬

‫ زﻫﻴﺮ ﺣﻤﻴﺪ ﻋﺒﻮد‬،‫ وﻓﺎء ﺻﺎدق ﻣﺤﺴﻦ أﻟﻮزﻧﻲ‬،‫ﻫﺪى ﻣﺤﻤﺪ ﻛﺎﻇﻢ ﺟﻮاد‬
epidemiological trends. Clinical Infectious-
Diseases 43: 3-14, )2006(.
[5] Gordana,M.;Bojic,M.;Momir,M.;Svetlan
a,M.andGolocorbin,K.The importance of
genus Candida in human samples .114:79-
95, )2008(.
[6] Yang,Y.L. Virulence factors of Candida
species. J. Microbiol. Immunol . Infect.
Dec.,36)4(:223-8, )2003(.
[7] Senna, P.M.; da, S.W.J.andCury, A.A.
Denture disinfection bymicrowave energy:
Influence of Candida albicans biofilm.Ger-
odontology 29: 186-191, )2012(.
[8] Pfaller, M.A. and Diekema, D.J.
Epidemiology of invasivecandidiasis: A
persistent public health problem. Clin. Mi-
crobiol. Rev., 20: 133-163, )2007(.
[9] Calderone, R.A.; Fonz,i W.A. Virulence
factors of Candidaalbicans. Trends Micro-
biol 9: 327-335, )2001(.
[10] Buckley, R.H.Primary immunodeficiency
diseases due to defects in lymphocytes.
New England Journal of Medicine.343)18(:
1313 – 1324, )2000(.
[11] Braun-Falco, M.andRuzicka, T.Skin
manifestations in autoinflammatory
syndromes. J. Dtsch. Dermatol .Ges.9:232-
46, )2011(.
[12] Chessells, J. M.; Bailey, C.; Richards,
S. M. Intensification oftreatment and
survival in all children with lymphoblastic
Leukemia:result of U. K. medical Research
council trail UKALLX. Lancet;345 : 143-
148, )1995(.
[13] Laura, M.; Serkirk, C.and Darlen,
59 Quarterly Refereed Journal for Natural and Engineering science
Vol. 3, No. 5 and 6, P. (49-61)A
‫) اذ اعطت احجام‬C.tropicalis‫و‬C.prapsilosis‫و‬
‫)زوج قاعدي عىل‬520 ،515 ،870 ،530(‫تراوحت‬
‫ تعد هذه الطريقة من الطرق التشخيصية الﴪيعة‬.‫التوايل‬
‫التي يمكن ان تستعمل يف تشخيص اكثر من نوع واحد‬
‫ كام اكدت نتائج‬.[38]‫يف وقت واحد وتقلل من الوقت‬
‫) ومجاعته‬Farasat( ‫دراستنا احلالية الدراسة التي اجراها‬
‫[ ألنــواع املبيضات بتقنية البلمرة التسلسيل‬39] )2012(
‫التي تم عزهلا من املرﴇ الذين يستخدمون القسطرات والتي‬
)ITS( ‫) لتضخيم‬ITS4‫ ﻭ‬ITS1 (‫استخدمت البوادﺉ‬
)535( bp ) C.albicans( ‫حيث كانت احجام النوع‬
‫) باإلضافة لألنواع‬520( bp ‫)حوايل‬C.prapsilosis(‫و‬
)510( bp ‫ بحجم‬C.krusei ‫االخرى التي تم عزها وهي‬
)C.glabrata( ‫) و‬524( bp ‫)بحجم‬C.tropicalis(‫و‬
.)870( bp ‫بحجم‬
‫املﺼادر‬
[1] Limper,A. H., Knox,K. S.; Sarosi,G. A.;
Ampel,N. M.; Bennett,J. E.;Catanzaro, A.;
Davies,S. F.; Dismukes، W. E.; Hage, C.
A.; Marr, K.A.; Mody،C. H.; Perfect, J.
R. and Stevens, D. A.AnOfficial American
Thoracic Society Statement: Treatment
ofFungal Infections in Adult Pulmonary
and Critical Care Patients. Am. J .RespirCrit
Care Med. 183: 96–128, )2011(.
[2] Kauffman, C. A. Fungal infections in older
adults. Clin. Infect. Dis. 33)4(:550-5, )2001(.
[3] Virella, G. Microbiology and infectious
diseases. 3rd.Ed.Williams & Wilkins Comp.
USA. 343-7, )1997(.
[4] Michael, A. P.; Peter, G. P.AND John,
R. W. Invasive fungalpathogens: Current
Vol. 3, No. 5 and 6, P. (49-61)A
[20] Loomis, W.H.; Namiki, S.; Hoyt, D.B. and
Junger, W.G. Hyper-tonicity rescues Tcells
from suppression by trauma- induced anti-
inflammatory mediators. Am. J. physiol.
cell physiol., 281:840-848, )2001(.
[21] Baron, E. J. and Finegold, S. M.Diagnostic
Microbiology. 8th ed The C. V. Mosby
company, Baltimore, )1990(.
[22] Collins, C.H.;Lyne, J.M.G.andFalkinham
J.O.Microbiologicalmethods Eighth Edition
.Arnold.London, )2004(.
[23] Pinjon, E. Sullivan, D. Salkin, I. Shanley,
D. and Coleman, D. Simple, inexpensive,
reliable method for differentiation of
Candida dubliniensis from Candida albicas.
J.Clin. Microbiol., 36:2093-95, )1998(.
[24] H o r v a t h , L . L . ; H o s p e n t h a l , D . R . ;
Murray,C.K.and Dooley, D.P.Direct isola-
tion of Candida spp. From blood culture
on the chromogenic medium CHROMagar
Candida . J. Clin.Microbiol.,41:2629-2632,
)2003(.
[25] Mohammadi, R.; Badiee, P.; Badali,
H.; Abastabar, M.; Safa ,A.H.;Hadipour,
M.; Yazdani, H. and Heshmat, F. Use of
restriction fragment length polymorphism
to identify Candida species, related to
onychomycosis. Adv. Biomed. Res. 4: 95,
)2015(.
[26] Asbeck, E.C.V. Clemons, K.V.; Steven,
D. A.Candidaparapsilosis: a review of its
epidemiology, pathogenesis, clinical aspects,
typing andantimicrobial susceptibility .Crit.
Rev. Mic. 35)4(:283-309, )2009(.
‫ دراسة يف أنواع الفطريات‬.‫ حممد حسني مرشف‬،‫[ الشمري‬27]
‫ زﻫﻴﺮ ﺣﻤﻴﺪ ﻋﺒﻮد‬،‫ وﻓﺎء ﺻﺎدق ﻣﺤﺴﻦ أﻟﻮزﻧﻲ‬،‫ﻫﺪى ﻣﺤﻤﺪ ﻛﺎﻇﻢ ﺟﻮاد‬
C. Clinical concept of diseaseprocess.
Catherine AlbrighJakson. Publ. USA,
)2003(.
[14] Kelly, M.K.; Brown, J.K. &Thony,
Y.H. Neutrophil andmonocyte adherence
in diabetes mellitus, alkoholic cirrhosis,
uraemia and elderly patients. Int. Arch.
Allergy. Appl. Immunol, 78: 132-138,
)1985(.
[15] Naghibie, M. ; Smith, R.P. ; Baltch, A.
L. & Hammer, M.C.The effect of diabetes
mellitus on chemotaxic andbactericidal
activity of human polymorphonuclear
leucocytes. Diabetes Res. Clin. Pract., 4:
27-35, )1987(.
[16] Gandhi, B.V.; Bahadur, M.M.; Dodeja,
H.; Aggrwal, V.;Thamba, A.and Mali,
M.Systemic fungal infections in renal
diseases.J. Postgrad. Med .Vol 51 Suppl
1:30-36,)2005(.
[17] Sarabandi,A.; Shabestari,R.M;Farshi,A
;Tabibian,S;Dorgalaleh,A;Reykande,S.E;
Kia,S.H;Varmaghani,B.andRashidpanah،J.
International Journal of Medical Laboratory
,2)1(:21-24, )2015(.
[18] Noronha, S.A.A. C.;Noronha, S.M.R.;
Lanziani, L. E.;Ferreira, L.M.andGragnani,
A. Innate and adaptive immunity gene
expression of human keratinocytes cultured of
severe burn injury.ActaCirúrgicaBrasileira.
29 (3):60-67، (2014).
[19] Sheridan, R.L. Sepsis in pediatric burn
patients predisposition tosepsis . Pediatric
critical care medicine, 6)3(: 5112-5119,
)2005(.
Quarterly Refereed Journal for Natural and Engineering science 60

‫ زﻫﻴﺮ ﺣﻤﻴﺪ ﻋﺒﻮد‬،‫ وﻓﺎء ﺻﺎدق ﻣﺤﺴﻦ أﻟﻮزﻧﻲ‬،‫ﻫﺪى ﻣﺤﻤﺪ ﻛﺎﻇﻢ ﺟﻮاد‬
clinically important Candida species.H.Clin.
microbiol.32:1923-1929.)1994(.
[36] Fujita, S.I. ;Senda, Y.; Nakaguchi،S.
and Hashimoto, T. Multiplex PCR Using
Internal Transcribed Spacer 1 and 2 Regions
for Rapid Detection and Identification of
Yeast Strains. J. Clin. Microbiol.; 39 (10):
3617 – 3622, )2001(.
[37] Harmal, N.S.;Khodavadi, A.;Alsh,
M.A.;Jamal, F.;Sekawi, Z.;Peng, N.Kand
Chong, P.P.Simplex and triplex polymerase
chain reaction (PCR)for identification of
three medically important Candidaspecies.
African J.of Bioltechnology 11)65(:12895
-12902, )2012(.
[38] Alam, M.Z.; Alam, Q.; Fatani, A. J.;
Kamal, M. A.; Abuzenadah،A. M.;
Chaudhary, A.G .M and Haque،A.Candida
identification: a journey from conventional
to molecular methodsin medical mycology.
World J MicrobiolBiotechnol, 30 )5(:1437-
51, )2014(.
[39] Farasat, A. Ghahri, M. Mirhendi, h. and
Beiraghi, S. Identificat of Candida Species
Screened from Catherter Using Patients
with PCR-RELP Method. European J. Exp
.Bio, 2)3(:651-656, )2012(.
61 Quarterly Refereed Journal for Natural and Engineering science
Vol. 3, No. 5 and 6, P. (49-61)A
‫ كلية‬.‫ رسالة ماجستري‬.‫املصاحبة ملرﴇ الﴪطان يف بغداد‬
.)2003( ،‫جامعة بغداد‬. ‫العلوم‬
)Propolis( ‫تأثري مستخلص العكرب‬. ‫ إيامن مبدر‬،‫[ نايف‬28]
‫عىل نمو البكرتيا املوجبة لصبغة غرام املعزولة من االصابات‬
.)2011(،‫ جامعة بابل‬. ‫ كلية العلوم‬.‫ رسالة ماجستري‬.‫اجللدية‬
[29] Collee, J.G.; Fraser, A.G.; Mjarmion , B.P.
and Simmons, A. Mackie and McCartney
paractical medical microbiology .) 14th ed.(
Chrchill. Livingston . USA.)1996(.
[30] Peng, C.F; Lee, K.M.and Lee, S.H.
Characterization of twochromogenic media
of Candida ID 2 and CHROMagar Candida
for preliminary identification of yeasts. J.
Biomed Lab. Sci., 19)5(:63-8, )2007(.
[31] Murray, C.K.; Beckius, M.L.; Green،
J.A.; Hospenthal, D.R. Use of chromogenic
medium for the isolation of yeasts from
clinical specimens. J. Med. Microbiol.,54
)4(: 981 - 5, )2005(.
[32] Yucesoy, M.; Esen, N.and Yulung, N. Use
of chromogenic agar for the identification
of Candida albicans strains. Kobe. J .Med.
Sci., 47 )3(:161 - 7, )2001(.
[33] Yucesoy, M.and Marol, S.Performance of
CHROMagar Candidaand BIGGY agar for
identification of yeast species. Annals. Clin
.Microbiol Antimicrobiol, 2)6( :1-8, )2003(.
[34] Baradkar, V.P; Mathur, M.; Kumar, S.
Hichrom candida agar for identification
of Candida species.Indian. J.Pathol.
Microbiol;53:93 - 5, (2010).
[35] Odds, F.C.andBernaerts, R. CHROMagar
Candida, a newdifferential isolation
medium for presumptive identification of