ПРОТОКОЛ № 7

Дата
ТЕМА: ЛАБОРАТОРНА ДІАГНОСТИКА ТА ХОЛЕРИ І БАКТЕРІАЛЬНОЇ ДИЗЕНТЕРІЇ.

Мета заняття: вивчити біологічні властивості вібріонів і шигел та методи лабораторної

діагностики холери і бактеріальної дизентерії.

Питання для обговорення

1. Характеристика збудників дизентерії: класифікація, біологічні властивості, антигенна будова, фактори
патогенності. Механізм і шляхи передачі шигельозів. Мікробіологічна діагностика захворювань,
обумовлених шигелами.
3. Загальна характеристика представників родини вібріонів. Роль факторів навколишнього середовища у
передачі холери.
4. Збудники холери. Класифікація. Біологічні властивості. Антигенна структура. Фактори патогенності.
Механізм і шляхи передачі холери. Мікробіологічна діагностика холери.

1. Охарактеризуйте таксономічне положення збудників бактеріальної дизентерії. Замалюйте

в протокол їх морфологію.
Шигельоз Холера
Родина Enterobacteriaceae Родина Vibrionaceae
Рід Shigella Рід Vibrio
1. S.dysenteriae Вид V.cholerae
2. S.flexneri Vibrio сholerae asiaticae
Вид Біовари
3. S.boydii Vibrio El-Tor
4. S.sonnei
Мікроскопічна
картина (забарвлення
за методом Грама)

2. Опишіть антигенну структуру шигел.Чотири види шигел поділяються приблизно на 40

сероварів. Усі шигели мають соматичний О-антиген, залежно від будови якого відбувається їх
диференціація на серовари, а S.flexneri усередині сероварів підрозділяється на підсеровари.
S.sonnei має антиген 1-ї фази, який є К-антигеном.

3. Опишіть значення токсинів шигел в патогенезі дизентерії.

Тип токсину Значення в патогенезі захворювання
Екзотоксин Екзотоксини, що мають термолабільність, виражений тропізм до нервової
системи і слизової оболонки кишок. Він складається з субодиниць, зв’язується з
глікопротеїновими рецепторами мембран на епітеліальних клітинах,
транспортується в клітину за допомогою енергозалежного механізму і пригнічує
синтез протеїнів шляхом каталітичної інактивації рибосомальної одиниці 60S.
Ендотоксин Речовина вуглеводно-ліпідно-протеїнової природи.

5. Охарактеризуйте антигенну структуру холерного вібріону?

Холерні вібріони мають термостабільні специфічні О-антигени і і термолабільні джгутикові Н-
антигени. За О-антигеном усі вібріони поділені на багато серогруп О1-О80. Холерний вібріон
відноситься до 01 серогрупи. О1-антиген складається з з окремих антигенних фракцій А, В.С.
Вкажіть, які серологічні групи викликають холеру.
Варіанти холерних вібріонів О1, О139 викликають захворюванння холерою.
Дайте визначення поняттю «неаглютинуючі вібріони (НАГ вібріони)». Яка роль НАГ-
вібріонів в патології людини?
НАГ – вібріон, що не аглютинується , це пов’язано з будовою його стінки.

5. Опишіть токсини збудника холери.

Тип токсину Значення в патогенезі захворювання
Екзотоксин Білковий екзотоксин(холероген), діє на ентероцити тонкого кишечнику,
спричиняючи ентерит з водянистими випорожненнями і зневоднення організму.
Ендотоксин Ліпополісахаридний комплекс, який звільняється тільки при руйнуванні вібріонів;
він також береучасть у механізмі розвитку хвороби.
6. Заповніть таблицю «Особливості епідеміології дизентерії та холери».
Джерело інфекції Механізм передачі Шлях передачі
Людина Фекально-оральний Контактно-побутовий
дизентерія

Заражена людина Фекально-оральний Контактно побутовий

холера

7. Вкажіть який матеріал від хворого та методи дослідження використовуються для

діагностики бактеріальної дизентерії та холери?
Метод дослідження
Бактеріологічний Серологічний
Поживні Матеріал для Серологічна
Захворювання Матеріал для дослідження
середовища дослідження реакція
Холера Випорожнення, блювота Середовище Випорожнення, РА, РПГА,
збагачення на блювота ІФА, РІФ
ЛМПА
(лужний МПА)
Дизентерія Фекалії Середовище Фекалії, блювота РНГА, РА
Мак-Конкі або
ШС,
селенітовий
бульйон,
помірноселект
ивний агар.
Назвіть методи експрес-діагностики холери. Який матеріал для дослідження
використовується при цьому? Яка мета даного дослідження
Дозволяє виявити холерний вібріон безпосередньо в матеріалі, який досліджується. Для цього
використовують РІФ.

Для швидкого виявлення холерного вібріону використовують також РОПГА з антитільним

еритроцитарним діагностикумом й ланцюгову полімеразну реакцію (ЛПР).

Обґрунтуйте доцільність застосування лужного середовища для виділення холерного

вібріона
Холерні вібріони – факуотативні анаероби, легко культівуються в аеробних умовах при 37
грдусах. До поживних середовищ невибагливі, але вимагають лужної реакції.

8. Вивчіть схему лабораторної діагностики холери і бактеріальної дизентерії.

2
 Мікробіологічні дослідження при дизентерії.

Екскременти (включаючи частинки слизу і гною), рідше блювотні маси, промивні води шлунка і кишечника, сеча

Бактеріологічний метод (до початку антибіотикотерапії)

Бактеріоскопія -
орієнтовний метод
Селективне средовище - Плоскірєва. Середовища збагачення - селенітовий
для вибору поживних
бульйон
середовищ,
діагностичної Дрібні прозорі Зростання колоній немає
цінності не має. безбарвні колонії
Середовища Плоскірєва і Ендо

Посів на середовище Олькельницького

Виявлення Аг шигел з Мікроскопія, (чиста культура)
використанням РНГА, визначення
РЗК, коаглютинаціїи. рухливості
Ідентифікація Серологічна:
1. Реакція слайд-аглютинації з
Біохімічна: сумішшю полівалентних сироваток
1. Пептолітичні проти видів Sh.flexneri і Sh.sonnei
Серодіагностика властивості (на МПБ) (зустрічаються найчастіше)
Проводиться рідко, тому 2. Сахаролітичні 2. Реакція слайд-аглютинації з
що титри антитіл невисокі. властивості (на моновалентною сироватками проти
Доцільна постановка РА, середовищі Гісса) ОСТАТОЧНА окремих видів.
ВІДПОВІДЬ 3. Експрес-метод: пряма і непряма
РНГА (особливо в парних
сироватках) починаючи з 5- РІФ.
8 дня захворювання.
Найбільше кількість
антитіл накопичується в Алергічні проби
сироватці до 2-3 тижня. Мають допоміжне значення. Алерген - дизентерін Цуверкалова (розчин білкових
фракцій Sh.flexneri і Sh.sonnei). Дає позитивний результат з 4-го дня захворювання.
Облік результатів через 24 години.

Мікробіологічні дослідження при холері.

Випорожнення, блювотні маси, промивні води шлунка і кишечника, жовч, - до початку антибіотикотерапії; за
епідпоказаннями - вода відкритих водойм, водопровідна вода, стічні води, їжа, змиви з предметів оточ. середовища

Бактеріоскопія: Бактеріологічний метод - у спец. лабораторіях

1. препарати фіксують
хімічним методом. Посів в 1% пептону воду (іноді з додаванням теллурита калію), лужної МПА, селективні
2. Забарвлення за Грамом - середовища - TCBS, рідше на середовища Аронсона, Монсурі
Гр "-" палички розташовані
у вигляді "зграйки риб".
3. РІФ з міченими 1. Визначення Лужний МПА (для отримання Круглі, гладкі, плоскі,
діагностичними О1 рухливості ізольованих колоній) блакитні, прозорі, S-
холерними сироватками 2. Мазок за Грамом форми, маслянисті колонії
3. Орієнтовна РА на
склі з О1
Постановка проби на
Експрес-методи: діагностичною
сироваткою
оксидазу
1. РІФ Посів на середовище Ресселя
(чиста культура)
2. Метод імобілізації
вібріонів під дією О1 Позитивний результат
сироватки (при 1. Визначення рухливості
дослідженні в 2. Мазок – за Грамом
РА на склі з О1 діагностичної сироваткою і 3. РА на склі з варіантоспецифічними
темнопольному мікроскопі варіантоспецифічними сироватками Огава, сироватками Огава, Інаба і Гікошіма
- припинення руху клітин і Інаба і Гікошіма 4. Визначення групи за Хейбергом
їх аглютинації) 5. Тести диференціації V.cholere і V. eltor
3. РНГА з анти
еритроцитарними Позитивний результат
діагностикумами Попередня відповідь ОСТАТОЧНА ВІДПОВІДЬ

Серодіагностика Має допоміжне значення. Використовують РЗК, розгорнуту РА, РНГА з еритроцитарними діагностикумами.
Найчастіше реакції ставляться в парних сироватках.

9. З якою метою проводиться вивчення антигенної структури холерного вібріону?

Вивчення антигенної структури холерного вібріону проводиться для визначення
типоспецифічного О-антигену(існує 139 серологічних груп), та групового джгутикового антигену
На підставі яких властивостей V.cholerae визначають варіанти збудника в реакціях серотипування:
Огава включає АВ компоненти.
Інаба включає АС компоненти
3
Гікошіма включає АВС компоненти, є поєднанням двох попередніх сероварів.

10. За якими ознаками холерні вібріони 01 серогрупи розподіляють на біовари? Заповніть таблицю.
Ознака V.cholerae, cholerae V.cholerae, eltor
Чутливість до класичного монофага + -
Чутливість до монофага Ель-Тор - +
САМР- тест - +
Чутливість до поліміксину(50 ОД) + -
Гемоліз еритроцитів барана - +
Гексаміновий тест - +

11. За допомогою яких серологічних реакцій з сироваткою крові хворого можна встановити
(підтвердити) діагноз бактеріальної дизентерії:
Для цього можна використовувати реакції непрямої гемаглютинації.

13. Вкажіть антибактеріальні препарати, які використовуються для лікування:

бактеріальної дизентерії антибіотики тетрациклінового, фторхінолонового ряду, котрімоксазол,
ампіцилін, цефалоспорин.
Холери - хворі приймають еритроміцин, тетрациклін, метациклін, доксациклін або левоміцетин
не менше 5 днів. Також для лікування використовують бактеріофаг орального застосування –
інтесті-бактеріофаг рідкий, що включає суміш стерильних фільтратів фаголізатів шигел Флекснера
1, 2, 3, 4, 6 сероварів.

14. Які антибактеріальні препарати застосовуються для профілактики в осередку холери

Особи, які були у тісному контакті з хворими на холеру, підлягають екстреній профілактиці
тетрацикліном. З цією метою дають по 0, 3 г прапарату 3 рази на день протягом 4 діб.
Назвіть препарати, які використовуються для профілактики бактеріальної дизентерії
Неспецифічна профілактика зводиться до дотримання санітарно-гігієнічних правил приготування,
зберігання та реалізації харчових продуктів, водопостачання; дотримання правил особистої
гігієни.
Які препарати використовують для специфічної профілактики холери.
Лікують хворих еритроміцином, тетрацикліном, метацикліном, доксацикліном або левоміцетином
протягом не менше 5 днів.

15. Вирішити тести та обґрунтувати надану відповідь.

1 У пацієнта, який захворів 3 дні тому і скаржиться на Бактеріологічне дослідження калу, що
підвищену температуру 38°С, біль у животі, часті рідкі дасть змогу виділити чисту культуру
випорожнення, присутність крові в калі, лікар клінічно
діагностував бактеріальну дизентерію. Який метод
мікроорганізмів, визначити їх біохімічні
мікробіологічної діагностики доцільно застосувати в властивості та встановити антигенну
даному випадку і який матеріал треба взяти від хворого для структуру.
підтвердження діагнозу?
1 Бактеріоскопічний, кал
2 Бактеріоскопичний, кров
3 Бактеріологічний, сеча
4 Серологічний, кров
5 Бактеріологічний, кал
2 Для вирішення питання ретроспективної діагностики Реакція непрямої (пасивної)
перенесеної бактеріальної дизентерії було призначено гемаглютинації (РНГА), допомагає
проведення серологічного дослідження сироватки крові з
метою встановлення титру антитіл до шигел. Яку з
виявити антигени шигел у Якщо

4
 перерахованих реакцій доцільно використовувати для людина хвора на шигельоз, то
цього? еритроцити склеюються антитілами і
1 З'язування комплементу
2 Преципітації
опускаються на дно пробірки у вигляді
3 Гемолизу пластівців.
4 Пасивної гемаглютинації
5 Бактеріолизу
3 При бактеріологічному дослідженні випорожнень хворого Для визначення видової приналежності
на кишкову інфекцію була виділена Shigella sonnei. Яку з шигел використовують реакцію
перерахованих серологічних реакцій було застосовано для
ідентифікації виділеної чистої культури?
аглютинації з видовими сироватками.
1 Реакція аглютинації
2 Реакція преципітації
3 Реакція зв’язування комплементу
4 Реакція нейтралізації
5 Реакція лізису
4 У бактеріологічну лабораторію районної СЕС доставили Холерний вібріон добре зростає на
воду із ставка, яка використовується у господарських цілях. лужних середовищах (1% лужний агар),
При бакпосіві води виділено чисту культуру холерного
вібріону. Яке поживне середовище було використано при
тому його слід використовувати для
цьому дослідженні? виділення чистої культури і
1 Лужний агар накопичення збудника.
2 МПБ
3 МПА
4 Агар Ендо
5 Агар Реселя
5 На 1% лужній пептонній воді після посіву в неї Швидке зростання колоній у вигляді
досліджуваного матеріалу (випорожнень) і 8 годинної ніжної блакитної плівки на елективному
інкубації в термостаті при 37 °С виявлено зростання у
вигляді ніжної блакитної плівки. Для збудника якого
середовищі – 1 % лужній пептонній
захворювання характерні такі культуральні властивості? воді, характерно для холерного
1 чуми вібріону.
2 черевного тифу
3 паратифу А
4 холери
5 дизентерії
6 Хворий був доставлений до лікарні зі скаргами на головний Для підтвердження діагнозу
біль, підвищену температуру, часті випорожнення, болі у «дизентерія» необхідно першочергово
животі з тенезмами. Лікар поставив клінічний діагноз
"дизентерія?" і направив досліджуваний матеріал
застосувати бактеріологічний метод
(випорожнення) до баклабораторії. Яким методом дослідження, що дозволяє виділити
діагностики лікар-бактеріолог повинен був підтвердити або чисту культуру збудника і, таким
спростувати клінічний діагноз? чином, підтвердити діагноз.
1 Бактериологічним
2 Біологічним
3 Бактеріоскопічним
4 Серологічним
5 Алергічним
7 При первинному посіві води на 1% пептони воду, через 6 Холерний вібріон добре зростає на
годин на поверхні середовища виявлено ріст – ніжна плівка. лужних (елективних) щільних
Для збудника якого захворювання характерні такі
культуральні властивості?
поживних середовищах (лужний МПА і
1 Збудника чуми 1% лужну пептонна вода), де через 6 -8
2 Збудника холери год збудник утворює колонії у вигляді
3 Збудника туберкульозу ніжної блакитної плівки.
4 Збудника дизентерії
5 Збудника псевдотуберкульозу
8 Від хворого з діагнозом дизентерія було виділено шигелу зі Шигела дизентерії здатна продукувати
здатністю продукувати екзотоксин. Про який вид шигел йде екзотоксин, який виділяється живими
мова?
1 Шигела дизентерії
шигелами і пошкоджує мембрани
2 Шигела Зоне клітин епітелію кишечника
3 Шигела Флекснера
5
 4 Шигела Бойда
5 Шигела Нью-Кастла
9 З калу і блювотних мас від хворого з підозрою на холеру Вид холерного вібріону допоможе
були виділені культури вібріонів. Проведення якої реакції встановити проведення аглютинації з с
дозволить визначити вид мікроба, що викликав це
захворювання?
холерними сироватками О-1, О-139 та
1 Аглютинації з сироватками, що містять О-антитіла RO.
2 Аглютинації з сироватками, що містять Н-антитіла.
3 Пасивної гемаглютинації з еритроцитарними
антигенними діагностикумами
4 Аглютинації Відаля
5 Преципітації
10 До інфекційного відділення госпіталізовано хворого зі Для експрес діагностики холери
скаргами на багаторазовий пронос та блювоту, біль у м'язах використовують пряму і непряму РІФ з
ніг, слабкість, запаморочення. Після огляду лікар виставив
попередній діагноз "холера". Як необхідно досліджувати
метою виявлення холерного вібріона у
матеріал від хворого для експрес діагнозу? досліджуваному матеріалі.
1 РА
2 Бактеріологічним методом
3 Серологічним методом
4 Біологчним методом
5 Пряма і непряма РІФ
11 З випорожнень хворого на гострий гастроентерит виділена Властивості збудника зростати на 1%
чиста культура рухливих дрібних, дещо зігнутих грам лужній пептонній воді з утворенням
негативних паличок, які впродовж 6 годин дають ріст на
лужній 1% пептонній воді у вигляді ніжної голубуватої
ніжної блакитної плівки, а також
плівки. Яким мікроорганізмам притаманні такі властивості? мікроскопічна картина, свідчать про
1 Спірохетам наявність у клінічному матеріалі
2 Клостридіям збудника холери.
3 Вібріонам
4 Бацилам
5 Спірилам
12 У хворого з типовою клінічною картиною дизентерії, Виявлення зростання антишигельозних
внаслідок раннього застосування антибіотиків, під час антитіл у реакції РПГА свідчить про
бактеріологічного дослідження випорожнень, шигели не
виявлені. Титр антишигельозних антитіл, в РПГА у парних
захворювання на дизентерію.
сироватках, у даного хворого виріс у 4 рази. Про що це
свідчить?
1 Підтверджує діагноз дизентерії
2 Виключає діагноз дизентерії
3 Переніс дизентерію раніше
4 Неспецифічна реакція
5 Вакцинальна реакція
13 З блювотних мас хворого на гострий гастроентерит виділені Належність данного збудника до Vibrio
Гр- дуже рухливі мікроорганізми у вигляді злегка зігнутих cholerae допоможе визначення їх
паличок. Які дослідження дозволять з‘ясувати, чи є
виділений мікроорганізм холерним вібріоном?
антигенних та біохімічних
1 Виявлення ферментів патогенності властивостей.
2 Визначення токсигенності у реакції преципітації
3 Визначення чутливості до антибіотиків
4 Зараження лабораторних тварин
5 Вивчення антигенних та біохімічних властивостей
14 У бактеріологічній лабораторії при дослідженні Визначити шигели у клінічному
випорожнень від хворого були виявлені грамнегативні, матеріалі за допомогою проведення
нерухомі лактозонегативні палички. Які із збудників
кишкових інфекцій можуть мати такі властивості ?
посіву на агар Кліглера; бактерії
1 Збудники черевного тифу ферментують тільки глюкозу, не
2 Збудники коліентириту утворюють газ при ферментації глюкози
3 Збудники холери і сірководень.
4 Збудники сальмонельозу
5 Збудники дизентерії
15 При вивченні властивостей виділеної від хворого культури S.dysenteriae продукує екзотоксини, що
шигел встановлено наявність екзотоксину. Для якого виду
6
 шигел характерна ця ознака? мають виражений тропізм до нервової
1 S.dysenteriae системи і слизової оболонки кишок.
2 S.flexneri
3 S.boydii
4 S.sonnei
5-
16 Визначення сероваріанту холерного вібріону дозволяє З підозрілими колоніями ставлять
ідентифікувати виділений штам та відслідковувати орієнтовну реакцію аглютинації на склі
епідемічну ситуацію. Як це проводиться?
1 РА з О-специфічною і типоспецифічними сироватками
з холерною специфічною О-
2 За Мурерджі сироваткою. Позитивна реакція
3 За Хейбергом аглютинації з холерної О-сироваткою у
4 За чутливістю до поліміксину поєднанні з типовими морфологічними і
5 За аглютинацією курячих еритроцитів культуральними властивостями є
підставою для видачі попередньої
позитивної відповіді.
17 У хворого з проносами та субфібрильною температурою Вуглеводи, шигели Зонне, ферментують
попередньо було поставлено діагноз "дизентерія". Виділена з утворенням кислоти та газу;
культура ферментувала глюкозу та манніт до кислоти та
газу, повільно розщеплювала лактозу та білок з утворенням
розщеплюють глюкозу і повільно
індолу. Який з видів збудників дизентерії характеризується ферментують лактозу та білок з
вказаними властивостями? утворенням індолу . Шигели редукують
1 S.sonnei нітрати у нітрити, не розріджують
2 S.boydiі желатину, не розщеплюють сечовину.
3 S.flexneri
4 S.dysenteriae
5 P.shigelloides
18 У 18-річної дівчини у сільському районі Індії розвинувся Холероген (екзотоксин) холерного
профузний пронос з втратою рідини до 8 літрів на добу. вібріону зв'язується зі специфічними
Який з наведених нижче мікроорганізмів може бути
збудником захворювання?
рецепторами ентероцитів, проникає
1 Campylobacter jejuni всередину клітин, порушує їх
2 Ентеропатогена Escherichia coli метаболізм, токсини холерного вібріона
3 Salmonella typhi активує ферменти аденілциклазу і
4 Shigella dysenteriae гуанідінциклазу. Виникає діарея, а
5 Vibrio cholerae
пізніше блювота. Рідина, що
виділяється з кишок, багата на іони
натрію, калію, хлору. Втрата ізотонічної
рідини з фекаліями і блювотою досягає
20л і більше, чого, як правило, не
спостерігається при кишкових
інфекціях іншої етіології.
19 В бактеріологічну лабораторію доставлене блювотиння Нефіксовані препарати «висяча крапля»
хворого з підозрою на холеру. З патологічного матеріалу та «роздавлена крапля» вивчаються за
приготовлений препарат "висяча крапля". Який метод
мікроскопії буде використаний для виявлення збудника по
допомогою темнопольної або фазово-
його рухливості? контрасної мікроскопії
1 Фазово-контрасна
2 Електронна
3 Імунна електронна
4 Люмінісцентна
5 Імерсіона